Efè Pwoteksyon Mikwozèl Selil Endothelial Progenitor sou blesi nan selil ren rat Ang II-induit
Mar 11, 2022
Résumé.Tansyon wo kwonik ka mennen nandomaj nan ren,ke yo rekonèt kòm nefropati ipèrtansif oswa nefroskleroz ipèrtansif. Plis konpreyansyon sou mekanis molekilè atravè ki nefropati ipèrtansif devlope se esansyèl pou dyagnostik ak tretman efikas. Etid prezan an te mennen ankèt sou mekanis kote selil progenitor endothelial (EPCs) repare prensipal rat.renselil (PRKs). ELISA, Cell Counting Kit-8 ak tès sikometri koule yo te itilize pou analize efè EPCs oswa EPC-MVs sou estrès oksidatif, enflamasyon, pwopagasyon selilè, apoptoz ak sik PRK pwovoke pa AngII. Yo te etabli yon modèl aksidan PRK lè l sèvi avèk anjyotansin II (Ang II). Apre Ang II endiksyon, pwopagasyon PRK te diminye, apoptoz te ogmante epi sik selil la te bloke nan faz G1 anvan yo te antre nan faz S la. Li te jwenn ke nivo yo nan espès oksijèn reyaktif ak malondialdehyde yo te ogmante, pandan y ap nivo yo nan glutatyon peroksidaz ak superoksid dismutase yo te diminye. Anplis, nivo sitokin enflamatwa IL-1, IL-6 ak TNF- yo te ogmante anpil. Kidonk, Ang II domaje PRKs pa estimile estrès oksidatif ak ankouraje repons enflamatwa a. Sepandan, lè PRK yo te ko-kilti ak EPCs, domaj Ang II pwovoke te siyifikativman redwi. Etid aktyèl la te kolekte microvesicles (MVs) yo sekrete pa EPC yo ak ko-kilti yo ak PRKs Ang II-induit, epi idantifye ke EPC-MVs kenbe efè pwoteksyon yo sou PRKs. An konklizyon, EPC yo pwoteje PRK kont domaj Ang II-induit atravè MV sekrete.
CISTANCHE AP AMELYORE MALADI REN/REN
Entwodiksyon
Tansyon wo se yon faktè risk pou ensidans maladi kadyovaskilè ak serebwo vaskilè, ak mòtalite ki asosye yo (1). Larenka lakòz tansyon wo epi yo se youn nan ògàn yo sib nan domaj tansyon wo (2). Kwonikmaladi ren(CKD) se youn nan pi gwo kòz ogmante mòtalite nan mitan moun ki gen tansyon wo atravè lemond nan de deseni ki sot pase yo (3,4). Se konsa, gen yon nesesite ijan ankouraje tretman an nan nefropati ipèrtansif ak etidye mekanis patolojik li yo. Etid anvan yo te montre ke anjyotansin II (Ang II) pwovoke domaj vaskilè ak te sèvi yon wòl kle nan maladi vaskilè atravè plizyè mekanis, tankou pwovoke apoptoz (5), arete sik selil (6), ogmante nivo espès oksijèn reyaktif (ROS) (. 7), ankouraje repons estrès oksidatif la nan ogmante sekresyon malondialdehyde (MDA), epi redwi sekresyon glutatyon peroksidaz (GSH-Px) ak superoksid dismutase (SOD) (8,9). Ang II tou ankouraje pwodiksyon faktè ki gen rapò ak enflamasyon, tankou IL-6, IL-1 ak TNF- (10-12). Se poutèt sa, Ang II-pwovoke domaj yo te itilize nan modèl tansyon wo nan vitro, ki gen ladan nan rat prensipalrenselil (PRKs) (13,14).
Pou pasyan ki genfonksyon renandikap, domaj nan selil andotelyo ak diminye rejenerasyon ak reparasyon yo se kòz prensipal yo nan pèt la nan microvesicles peritubular (MVs) (15). Selil progenitor andothelial (EPCs) ki sòti nan mwèl zo ka ankouraje reparasyon andotelyal (16,17). Etid anvan yo te revele ke EPC yo ka amelyore rejenerasyon kadyovaskilè (18) ak kontwole anjyogenesis (19), osi byen ke egzèse efè terapetik sou egi.renblesi ischemi-reperfusion (20) ak nan pasyan ki gentransplantasyon ren(21). Sepandan, nan pi bon konesans nou an, efè EPC yo sou nefropati ipèrtansif pa te deja rapòte. Nou te sipoze ke EPC yo ka gen yon efè pwoteksyon kont nefropati ipètansif nanrenselil yo. MV yo sekrete kontinyèlman pa yon varyete selil nan kò a, tankou selil epitelyal, selil timè ak selil souch, epi yo egziste nan plizyè likid kò, tankou san, pipi, ak lèt, kote yo medyatè fonksyon byolojik (22). Prèv akimile te sijere ke efè pwoteksyon EPC yo asosye byen ak liberasyon MVs (23,24) Nan etid sa a, yo te egzamine aplikasyon potansyèl EPC-MVs pou tretman nefropati ipètansif pa envestige efè pwoteksyon ak mekanis. atravè EPC-MV yo pwoteje kont blesi PRK Ang II-induit, pou bay yon baz teyorik byolojik pou tretman nefropati ipèrtansif.
Mo kle:EPC-MVs, nefropati ipèrtansif, Ang II, ROS, MVs, enflamasyon, ren, ren
Materyèl ak metòd
Bèt.Yon total de 12 8-semèn gason Wistar-Kyoto (WKY) espesifik-patojèn san rat (pwa, 80-120 g) yo te jwenn nan Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (lisans non SCXK, Guangdong, 2015-0063). Yo te mete rat yo nan yon chanm ki gen yon tanperati ak imidite konstan (tanperati, 23±2˚C; imidite, 50±10 pousan), anba yon sik limyè/fè nwa 12-h ak aksè ad libitum nan manje estanda rat ak dlo nan. yon kaj polystyrène. Tout eksperyans bèt yo te apwouve pa Komite Swen ak Itilizasyon Animal nan Hainan Medical University (Haikou, Lachin; apwobasyon No HYLL-2021-053), epi yo te fèt dapre direktiv Enstiti Nasyonal Sante yo (25).
CISTANCHE AP AMELIORE FONKSYON REN/REN
Izolasyon ak kilti PRK yo.Rat WKY ki gen aksè gratis nan dlo te jene pou 12 èdtan anvan eksperyans lan. Sourit WKY yo te elimine lè l sèvi avèk yon piki entraperitoneal sodyòm pentobarbital (200 mg/kg pwa kò), apresarenyo te retire aseptik, ak pòsyon nan cortical nan larenyo te retire ak transplante'tèt nan yon ti bèkè. Larencortical te koupe an tisi fragman ~ 1 mm3, lave twa fwa ak PBS (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.), santrifuje nan 1,000 xg nan 25˚C pou 5 minit epi yo te jete surnatant la. Fragman tisi yo te ajoute nan kolagenaz tip I (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) nan yon konsantrasyon final 1 g/l, epi fragman tisi yo te osile ak dijere nan 37˚C pou 30 min. Apre filtraj nan yon ekran asye pur 200-may (0.075 mm), selil yo te separe pa Ficoll (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) santrifujasyon gradyan dansite (26). Apre santrifugasyon nan 1,000 xg nan 25˚C pou 2 min, yo te kolekte sispansyon entèmedyè a epi melanje ak mwayen MEM/F12 (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.), inoculé nan yon plak 6-puit. kiltive nan 37˚C anba 5 pousan CO2. Apre 24 èdtan, yo te retire mwayen an epi ranplase ak yon mwayen fre, epi li pa atache arenselil ak tisi yo te jete. Apre 48 èdtan, yo te retire mwayen an ankò, selil yo te lave de fwa ak PBS epi yo te endike kòm PRKs (27,28); prensipal la se te selil glomerular mesangial rat. PRK yo te kiltive pou twa jenerasyon epi yo te trete ak Ang II (1 µM; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) nan 37˚C pou 24 èdtan pou etabli PRK la.domaj renmodèl. Ang II-pwovoke enflamasyon nan ratrenselil epitelyal tubulaires te fèt jan Nair et al (29) te dekri deja.
PRK yo te idantifye lè l sèvi avèk yon tès imunofluoresans (IF).Apre rense twa fwa ak PBS epi fikse ak 4 pousan paraformaldehyde nan 25˚C pou 1 èdtan, selil yo te enkube (25˚C) ak Triton X-100 pou 2 èdtan, ki te swiv pa 5 pousan BSA (Beijing). Solè Syans & Teknoloji Co., Ltd.) nan 25˚C pou 30 min. Lè sa a, PRK yo te enkube lannwit lan nan fènwa ak -aktin nan misk lis (-SMA; 1 µg/ml; cat. No. ab7817; Abcam) ak vimentin (1:250; Cat. No. ab92547; Abcam) nan 4˚C. Apre yo fin rense twa fwa ak PBS, selil yo te enkube ak Alexa Fluor® 488- (1:100; cat. No. ab150077; Abcam) oswa 647-labeled (1:200; Cat. No. ab150075; Abcam) nan 37. ˚C pou 1 h. Lè sa a, selil yo te tache ak DAPI (0.5 µg/ml; Beyotime Institute of Biotechnology) nan 25˚C pou 5 min. Finalman, imaj yo te kaptire lè l sèvi avèk yon mikwoskòp fliyoresan (agrandisman, x400; Leica Microsystems GmbH).
Kilti ak idantifikasyon EPC yo.Femoral rat la ak tibya yo te diseke epi yo te vide chak tib mwèl zo ak PBS esteril. Melanj ki te lakòz yo te santrifuje (1,000 xg; 25˚C; 15 min) epi patikil yo te re-sispann nan mwayen MEM/F12. Selil yo te izole pa Ficoll (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) santrifujasyon gradyan dansite (1,000 xg; 25˚C; 20 min) epi yo mete yo nan yon flacon kilti 25-cm2 kouvwi ak fibronectin (BD Biosciences). Selil yo te kenbe nan yon mwayen konplè nan kondisyon estanda (37˚C; 5 pousan CO2). Mwayen kilti a te chanje apre 4 jou, epi selil aderan yo te kiltive pou yon lòt 3 jou (30). Dil konplèks acetylated ba-dansite lipoprotein (Dil-Ac-LDL) tach (Beijing Solè Syans & Teknoloji co, Ltd) te itilize yo idantifye EPCs. Pou sistèm ko-kilti a, PRKs (1x104) yo te ajoute nan chanm ki pi ba a nan yon plak ko-kiltivasyon (Corning, Inc.) pou 24 èdtan ak Lè sa a, Ang II (1 µM) oswa 200 µl PBS ak EPCs (3x104) yo te. ajoute nan chanm anwo a ak enkubasyon nan 37˚C pou 24 èdtan anvan yo te fè plis analiz fonksyon selil yo. Lè tès depistaj PRK yo ak pi bon pwopòsyon EPC yo, pwopòsyon nimewo selil yo te 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 ak 1:7.
Preparasyon EPC-MVs. Yo te kiltive EPC yo pandan 7 jou jan sa te dekri anvan an (30), yo te lave de fwa ak PBS epi yo te mouri grangou nan serom pou 12 èdtan. Answit, yo te kolekte mwayen MEM/F12 ki gen EPC kiltive epi santrifuje nan 4˚C (1,000 xg; 15 min), epi yo te ekstrè supernatant nan 4˚C (100,000 xg; 60 min) pou koleksyon EPC-MV sekrete yo. Apre yo fin mete l nan résine epoksidik Pon 812 (Structure Probe, Inc.), yo te mete l nan 37˚C lannwit lan. Lè sa a, solisyon fiksasyon mikwoskòp elèktron (Wuhan Sèvis Teknoloji co, Ltd) te ajoute pou 4 èdtan, ak acetate iranyòm (2 pousan; Wuhan Sèvis Teknoloji co, Ltd.) ak sitrat plon (Wuhan Sèvis Teknoloji co, Ltd. ) yo te tache nan 25˚C pou 15 min. MV yo te konfime atravè mikwoskòp elèktron transmisyon. Nan sistèm ko-kilti a, yo te ajoute 50 µg/ml EPC-MVs (31) nan chanm anwo a nan yon plak tès Transwell, ak pak yo te ajoute nan chanm anba a jan yo dekri deja, ak enkubasyon pou 24 èdtan.
Esè pwopagasyon selilè.PRK yo te dijere ak trypsin, yo te inokule nan plak 96-well nan yon dansite nan 3x103 selil / pi ak kiltive pou 24 èdtan. Yo te mezire dansite optik la nan 450 nm lè l sèvi avèk 10 µl reyaktif pou konte selilè Kit-8 (CCK-8; Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.) nan 37˚C pou 60 minit, dapre enstriksyon manifakti a, pou evalye. pousantaj pwopagasyon selil yo.
CISTANCHE AP AMELIORE DOULÈ REN/REN
Esè apoptoz selilè.Yo te fè yon tès apoptoz selil lè l sèvi avèk yon twous deteksyon apoptoz Annexin V-FITC (BD Biosciences), dapre enstriksyon manifakti a. PRK yo te rekòlte, lave de fwa ak glas PBS (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) epi resispann nan 500 µl tanpon obligatwa. Lè sa a, PRK yo resuspende yo te enkube ak 5 µl Annexin V-FITC ak 5 µl PI nan fè nwa a pou 15 min nan 23±2˚C. Apoptoz selil yo te evalye lè l sèvi avèk flow cytometry (FCM; FACSCanto II; BD FACSChorus™ lojisyèl, vèsyon: 1.0; BD Biosciences).
EPC-MV ak PRK fizyon.Pou obsève si EPC-MV yo te kole ak PRK, EPC-MV yo te make ak yon lank fliyoresan lipid ki entegre nan manbràn (PKH26) anvan ko-enkubasyon. Yon ti tan, 50 µg/ml EPC-MV yo te konbine avèk 2 ml PKH26 (2x10-6 M; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) epi melanje nan 23±2˚C pou 5 min. Yo te ajoute melanj ki make nan 2 ml 1 pousan BSA (v) epi santrifuje nan 100,000 xg nan 4˚C pou 60 min, apresa rense ak PBS frèt. Yo te sispann presipite a nan 1 ml MEM/F12 mwayen, ajoute nan PRKs epi enkubate nan 37˚C pou 24 èdtan. Finalman, 1 µg/ml DAPI te ajoute pou tach nikleyè nan 25˚C pou 15 min. Imaj selil yo te akeri lè l sèvi avèk yon mikwoskòp fliyoresan (agrandisman, x400; Leica Microsystems GmbH).
Esè sik selilè.Yo te fè tès sik selil la lè l sèvi avèk twous deteksyon sik selil (BD Biosciences). Yo te rekòlte EPC oswa PRKs (1x106), yo te lave de fwa ak PBS epi yo te fikse nan 500 µl 70 pousan etanòl frèt pandan 2 èdtan nan 25˚C. Lè sa a, selil yo te lave de fwa ak PBS frèt ak enkubasyon nan PI (400 µl) ak RNase (100 µl) pou 30 min nan 37˚C nan fè nwa a. Siyal PI a te detekte lè l sèvi avèk FCM (FACSCanto II). Pousantaj selil yo nan faz G1, S ak G2 yo te konte ak konpare lè l sèvi avèk lojisyèl FlowJo (vèsyon 10.0.6; FlowJo LLC).
ROS mezi pa FCM.PRK yo te kiltive nan 60-70 pousan konfluyans ak rekòlte atravè tripsinizasyon. Tout selil yo te enkube ak 1.0 µM 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate pou 15 min nan 37˚C. Lè sa a, selil yo te lave de fwa ak PBS epi analize atravè FCM pou detekte ROS lè l sèvi avèk yon lazè 488 nm pou eksitasyon ak yon lazè 535 nm pou deteksyon.
ELISA.Apre santrifijasyon (1,000 xg; 25˚C; 5 min), yo te kolekte supernatant selil chak sougwoup pou analize nivo MDA, GSH-Px, SOD ak faktè enflamatwa IL-6, IL-. 1 ak TNF-. Yo te itilize twous sa yo dapre enstriksyon manifakti a: Twous tès mikwo MDA (no. cat. BC0020; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), twous tès GSH-Px (no. cat. BC1195; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), twous deteksyon aktivite SOD (cat. No. BC0170; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), rat IL-1 ELISA twous (cat. No. RLB{ {13}}; R&D Systems, Inc.), rat IL-6 Quantikine ELISA twous (cat. No. R6000B; R&D Systems, Inc.) ak rat TNF Quantikine ELISA twous (kat. No. RTA00; R&D Systems, Inc. ).
Analiz estatistik.Tout eksperyans yo te repete twa fwa, epi tout done yo eksprime kòm mwayen an ± SD. Done yo te analize avèk vèsyon lojisyèl SPSS 21.0 (IBM Corp.). Diferans ki genyen ant plizyè gwoup yo te evalye lè l sèvi avèk ANOVA yon sèl-fason ak tès post hoc Dunnett la. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Rezilta yo
Identification of isolated EPCs and PRKs. The isolated EPCs were identified using Dil‑Ac‑LDL staining (Fig. 1A). Microscopic counting revealed that the degree of coincidence between red (Dil‑Ac‑LDL staining) and blue (nuclear staining with DAPI) fluorescence was >90 pousan, ki konfime ke EPC yo te izole avèk siksè. Yo te analize PRK izole atravè IF (vimentin/-SMA). Rezilta yo te demontre ke nivo ekspresyon vimentin/-SMA nan PRK yo te wo ak pozitif, sa ki sijere izolasyon siksè PRKs (Fig. 1B).
Pwopòsyon optimal nan EPC ak PRK.Yo te egzamine efè konbine diferan pwopòsyon PRKs/EPCs nan yon sistèm ko-kilti, epi yo te jwenn ke PRKs grandi nan yon rapò 1:3 PRKs/EPCs pa t gen ogmantasyon pousantaj pwopagasyon konpare ak PRKs grandi ak yon 2: 1, 1:1 oswa 1:2 rapò nan PRKs / EPCs (figi 1C). Anplis, ogmante pwopòsyon EPC yo (1:4, 1:5, 1:6 ak 1:7) te lakòz yon ogmantasyon siyifikatif nan pwopagasyon PRK konpare ak sa yo ki nan EPCs (1:3). Se poutèt sa, yo te chwazi yon rapò 1:3 PRKs/EPCs pou plis etid pou anpeche posib entèferans nan EPCs twòp nan eksperyans ki vin apre yo.
Efè ko-kilti EPC sou domaj Ang II-pwovoke.PRKs (1x104) te vaksinen 24 h davans nan lòj ki pi ba a nan yon plak Transwell. Chanm anwo a te genyen 200 µl PBS nan gwoup kontwòl la ak 200 µl EPCs (3x104) nan gwoup eksperimantal la. Pou modèldomaj nan ren,Yo te ajoute 1 µM Ang II nan lòj ki pi ba a. Apre 24 èdtan, yo te fè tès CCK-8 ak FCM pou mezire to pwopagasyon PRK yo. PRK ki te resevwa Ang II nan absans EPC te gen yon siyifikativman diminye (P<0.05) proliferation="" rate="" (fig.="" 1d),="" and="" increased="" apoptosis="" rate="" (fig.="" 1e)="" and="" cell="" cycle="" arrest="" in="" the="" g1="" phase="" (fig.="" 1f)="" compared="" with="" the="" control="" group,="" while="" prks="" co‑cultured="" with="" epcs="" receiving="" ang="" ii="" showed="" the="" reverse="" effects.="" these="" results="" indicated="" that="" co‑culture="" with="" epcs="" can="" reduce="" the="" damage="" induced="" by="" ang="" ii="" in="" a="" rat="">renmodèl selilè.
EPC yo pwoteje PRK kont domaj Ang II-pwovoke, nivo estrès oksidatif pwovoke pa Ang II nan PRKs ko-kilti ak EPC yo te egzamine. Rezilta yo nan tès FCM la te revele ke Ang II te ogmante anpil (P<0.05) the="" levels="" of="" ros="" in="" prks="" in="" the="" absence="" of="" epcs,="" while="" prks="" co‑cultured="" with="" epcs="" had="" comparatively="" lower="" ros="" levels="" (fig.="" 2a).="" similarly,="" the="" elisa="" results="" indicated="" that="" the="" levels="" of="" secreted="" mda="" (fig.="" 2b)="" were="" increased="" and="" gsh="" and="" sod="" (fig.="" 2c="" and="" d)="" levels="" were="" decreased="" in="" prks="" receiving="" ang="" ii,="" while="" prks="" receiving="" ang="" ii="" and="" co‑cultured="" with="" epcs="">
Figure 1. Recovery of PRKs by co‑culture with EPCs following injury induced by Ang II. (A) Confirmation of the isolation of EPCs via Dil‑Ac‑LDL staining. Magnification, x100. (B) Confirmation of the isolation of PRKs using an immunofluorescence assay. Magnification, x400. (C) CCK‑8 analysis of the effects of different proportions of co‑cultured EPCs on the proliferation of PRKs. NS P>0.05 vs PRKs:EPCs, 2:1 gwoup; *P<0.05 vs.="" prks:epcs,="" 2:1="" group.="" (d)="" cck‑8="" analysis="" of="" the="" effects="" of="" co‑cultured="" epcs="" on="" the="" proliferation="" rate="" of="" ang="" ii‑treated="" prks.="" fcm="" analysis="" of="" the="" effects="" of="" co‑cultured="" epcs="" on="" the="" (e)="" apoptosis="" and="" (f)="" cell="" cycle="" of="" ang="" ii‑treated="" prks.="" *=""><0.05 vs.="" control;="" #=""><0.05 vs.="" ang="" ii.="" ang="" ii,="" angiotensin="" ii;="" epcs,="" endothelial="" progenitor="" cells;="" prks,="" primary="" rat="">renselil; FCM, sikometri koule; CCK-8, Twous Konte Selil-8; Dil-Ac-LDL, Dil konplèks acetylated lipoprotein ba-dansite; OD, dansite optik; ‑SMA, ‑aktin nan misk lis; NS, pa enpòtan. rezilta opoze konsènan sekresyon anzim sa yo. Se poutèt sa, jenerasyon ROS la ka patisipe nan domaj selil Ang II-induit, epi yo ka amelyore pa ko-kilti ak EPC yo.
Ang II kapab tou domaje selil yo lè yo ankouraje sekresyon sitokin enflamatwa, pandan y ap EPC yo ka anpeche enflamasyon (32). Apre sa, li te envestige si Ang II ankouraje sekresyon nan sitokin enflamatwa nan PRKs, epi si EPC yo ta ka egzèse wòl pwoteksyon yo lè yo anpeche sekresyon nan sitokin enflamatwa. Sekresyon IL-1, IL-6 ak TNF- te siyifikativman regilasyon nan PRKs pa adisyon Ang II. Kontrèman, nan PRK ki te kiltive ansanm ak EPC yo, nivo IL-1, IL-6 ak TNF- (Fig. 2E-G) te konparativman pi ba (P).<0.05) than="" those="" in="" prks="" cultured="" alone.="" therefore,="" the="" damage="" induced="" by="" ang="" ii="" in="" prks="" was="" also="" associated="" with="" pro‑inflammatory="" cytokines,="" and="" co‑culture="" with="" epcs="" exerted="" protective="" effects="" by="" reducing="" the="" secretion="" of="" these="">
Efè pwoteksyon EPC yo egzèse atravè MV yo.Mekanis yo atravè ki EPC yo egzèse efè pwoteksyon sou Ang II-induitrenselil yo te plis analize pa izole MVs soti nan EPCs (figi 3A). EPC-MV yo te make ak PKH26 epi yo te ajoute nan PRK ansanm ak Ang II nan yon plak Transwell, jan sa te dekri deja. Yo te detekte fliyoresans PKH26 nan sitoplasm PRKs (Fig. 3B), ki endike ke EPC-MVs te fusion ak PRKs. Lè sa a, li te jwenn ke Ang II-pwovoke diminye pousantaj pwopagasyon, ankouraje apoptoz ak arè sik nan faz G1, yo te inibit pa EPC-MVs (Fig. 3C-E). Menm jan ak PRK ki te kiltive ansanm ak EPC, PRK ki te grandi nan prezans EPC-MV epi ki te ekspoze a Ang II te diminye nivo ROS ak MDA (Fig. 4A ak B), ogmante nivo GSH ak SOD (Fig. 4C ak D). ak diminye sekresyon enflamatwa sitokin IL-1, IL-6 ak TNF- (Fig. 4E-G), konpare ak gwoup Ang II a.
Diskisyon
Dapre sa nou konnen, etid prezan an te demontre pou premye fwa ke EPC yo ka pwoteje PRK kont domaj selil Ang II-induit. Efè pwoteksyon sa a se, omwen an pati, medyatè pa MVs ke yo sekrete pa EPCs ak fuse ak PRKs pandan ko-kilti. Lè yo ajoute MV anrichi nan PRK ki ekspoze a Ang II, li te jwenn ke EPC-MVs pou kont li te kapab pwoteje PRK kont domaj Ang II-pwovoke lè yo anpeche estrès oksidatif ak enflamasyon. MV yo defini kòm nanodebri manbràn (0.05-1 µm) (33), epi yo koule soti nan sifas selil la apre deklanchman, estrès oswa apoptoz. Anplis de sa, MV yo ka sòti nan divès kalite selil, tankou plakèt, selil andotelyal, EPC ak globil blan (34,35). MV yo eksprime makè espesifik sifas selil yo, ki varye selon selil orijin yo ak fòmasyon yo epi yo ka fè efè anti-enflamatwa, antikoagulan ak anjyojenik (36). MV yo lage nan EPC yo ka pote enfòmasyon byolojik selil paran yo, epi konsa egzèse yon fonksyon menm jan an sou selil sib yo (33). Pou egzanp, EPC-MVs pwoteje cardiomyocytes soti nan ipètrofi Ang II-induit ak apoptoz (28), amelyore fonksyon andotelyal ak kapasite nan kontwole anjojenèz (37), ak soulaje malfonksyònman endothelial pwovoke pa estrès oksidatif (38). Sepandan, nan pi bon konesans nou an, efè EPC-MVs sou nefropati ipèrtansif pa te deja rapòte. Se poutèt sa, etid prezan an vize envestige efè pwoteksyon potansyèl EPCs ak EPC-MVs nanblesi selil ren.
Nan etid la prezan, yo te etabli yon modèl aksidan PRK pa pwovoke domaj ak Ang II. Konfòm ak rapò anvan yo (26,39), Ang II redwi pwopagasyon PRK, ogmante apoptoz ak arete sik selil la nan faz G1 anvan yo antre nan faz S la. Dapre makè sa yo ki gen rapò ak tansyon wo, li te konkli ke Ang II-induit PRK ipètansyon modèl la te etabli avèk siksè. Anplis de sa, li te detèmine ke ko-kilti ak EPC yo pwoteje PRK kont domaj Ang II-pwovoke. Apre ko-enkubasyon EPC yo ak PRK plis Ang II, nivo anzim estrès oksidatif ak faktè enflamatwa nan PRK yo te diminye. Kidonk, mekanis potansyèl yo atravè EPC yo egzèse efè pwoteksyon yo sou PRK yo ka enplike règleman an nan estrès oksidatif ak enflamasyon. Nan pi bon konesans nou an, etid aktyèl la demontre pou premye fwa ke EPC yo ka amelyore repons estrès oksidatif Ang II-induit ak enflamasyon nan PRKs.
EPCs efektivman pwotejefonksyon rennan CKD (40) ak sèvi yon gwo wòl nan kenbe entegrite vaskilè ak repare andotelyal blesi (15), osi byen ke diminye flit vaskilè, amelyore fonksyon ògàn ak ogmante pousantaj siviv nan sepsis (41). Prèv akimile sijere ke EPC yo ka egzèse yon wòl pwoteksyon atravè sekresyon MVs (37,42,43). Pou teste efè pwoteksyon EPC-MV yo nan PRK yo, yo te izole EPC-MV yo epi yo te make ak PKH26, epi apre sa yo te ko-enkube MVs ki make yo ak PRK plis Ang II. EPC-MV yo te kole ak PRK yo ak anpil anpeche repons estrès oksidatif ak enflamasyon Ang II pwovoke, ak rezilta sa yo sanble ak sa yo nan Fu et al (44). Efè inhibition EPC-MV yo sou nivo anzim estrès oksidatif yo te pi gran pase EPC yo poukont yo; sa a ka atribiye a MV yo prezan nan yon konsantrasyon ki pi wo nan PRK yo trete ak EPC-MVs pase nan sa yo ko-kilti ak EPCs. Konklizyon sa yo sijere ke efè pwoteksyon EPC yo sou PRK kont domaj selil Ang II-induit ka depann de MV sekrete. Yon limit nan etid prezan an se ke mekanis potansyèl yo atravè EPC-MV yo kontwole aks transdiksyon microRNAs / mRNAs / siyal yo pa te egzamine konplètman. Wòl ak mekanis atravè EPC-MV yo fè pwoteksyon kontdomaj nan renyo ta dwe evalye nan yon modèl bèt nan nefropati ipèrtansif, ki se yon direksyon pwomèt pou rechèch nan lavni. An konklizyon, etid prezan an demontre ke EPC yo ka pwoteje PRK kont estrès oksidatif Ang II-induit ak ogmante enflamasyon atravè sekresyon MVs. Sa a bay yon direksyon nouvo pou tretman nefropati ipèrtansif ak etabli yon modèl in vitro pou etidye.blesi nan ren.
