Efè pwoteksyon nouvo dekoksyon Wenshen Shengjing sou andikap sentèz testostewòn ak apoptoz spermatogen
Mar 03, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
XIAOYAN PAN , XIYAN WANG , XUENAN WANG , WANSHENG ZHANG4 , ZHANXUAN SUN1 , XUAN XUAN LIANG , XUE ZHANG , WENJUN LI ak ZHIXIN LI
Résumé
Etid la prezan te vize envestige efè pwoteksyon potansyèl nouvo dekoksyon Wenshen Shengjing (nouvo WSSJD; ki gen ladan Cornu Cervi Nippon Parvum, Panax ginseng, Cynomorium solaryom,Cistanche deserticola, Radix Astragali, Epimedium brevicornum, ak Angelica Sinensis) sou andikap nan sentèz testostewòn ak apoptoz spermatogenic nan sourit. Yon total de 90 granmoun sourit gason Kunming yo te divize an 6 gwoup sa yo: Kontwòl (pa gen okenn entèvansyon), dimethylsulfoxide (DMSO; te resevwa sèlman DMSO), cyclosporine A (CSA), sitrat klomifèn (CC; CsA plis CC, 15 mg / kg). / jou), WSSJD (CsA plis WSSJD, brut dwòg 12 g/kg/jou) ak nouvo WSSJD (CsA plis nouvo WSSJD, brut dwòg 12 g/kg/jou). Tout sourit yo te trete pou 30 jou atravè gavaj oral. Apre sa, tèstikul yo te fiks ak tache ak ematoksilin ak eozin pou evalye devlopman epiteli seminifè. Teknik imunohistochimik yo te itilize pou detekte ekspresyon reseptè òmòn luteinizan (LHR) ak klivaj bò chèn P450 (P450scc) nan selil testikil Leydig yo. Anplis de sa, yo te detekte apoptoz nan selil spermatogenic nan tèstikul yo lè l sèvi avèk yon tès tèminal deoxynucleotidyl transferase medyatè dUTP nick-end etikèt, epi yo te itilize sitometri koule pou analize pousantaj siviv ak apoptoz bonè nan espèm nan epididim la. Konpare ak gwoup CsA ak CC, nouvo administrasyon WSSJD ogmante siyifikativman nivo testostewòn serik ak ekspresyon LHR ak P450scc nan selil testikil Leydig (P).<0.05), while="" the="" apoptosis="" of="" spermatogenic="" cells="" in="" the="" seminiferous="" tubules="" and="" early="" apoptosis="" of="" mature="" sperm="" were="" significantly="" decreased=""><0.05). these="" results="" suggest="" that="" new="" wssjd="" may="" ameliorate="" csa-induced="" spermatogenic="" damage="" in="" male="" mice="" by="" enhancing="" testosterone="" synthesis="" and="" the="" secretion="" of="" testicular="" leydig="" cells,="" and="" by="" reducing="" the="" apoptosis="" of="" spermatogenic="">
Entwodiksyon
Cyclosporine A (CSA) se yon ajan imunosuppressive souvan itilize ki vize espesifikman selil T yo epi ki anpeche sekresyon interleukin-2, epi ki ogmante dramatikman pousantaj siksè transplantasyon fwa, ren ak korn, ansanm ak pousantaj siviv. benefisyè yo (1-3). Sepandan, imunosuppresyon pwovoke pa alontèm CsA itilize ogmante siyifikativman risk pou maladi kadyovaskilè, enfeksyon, ak timè malfezan (4). Eid et al (5) te rapòte ke konsantrasyon ak mobilite nan espèm yo te negatif korelasyon ak konsantrasyon nan CsA serom nan moun ki resevwa transplantasyon ren gason, sijere ke CsA ka pwovoke malfonksyònman nan sistèm repwodiktif la nan moun ki resevwa gason. Anplis de sa, li te dokimante ke CsA ka responsab pou spermatogenesis andikape ak domaj nan sistèm repwodiktif gason an (6).
Etid anvan yo te demontre ke CsA diminye nivo testostewòn serik pa enfliyanse biosentèz testostewòn ak sekresyon nan tèstikul yo. Li et al (7) te obsève ke rat trete ak 40 mg / kg / jou CsA ekspoze nivo siyifikativman pi wo nan òmòn luteinizing (LH) ak nivo siyifikativman pi ba nan testostewòn nan serik la, ki mennen nan devlopman tèstikul pwoblèm. Ali et al (8) te rapòte ke tretman ak CsA diminye ekspresyon de reseptè LH (LHR) sou manbràn selil Leydig yo, ki imedyatman diminye sentèz testostewòn LH-medyatè ak sekresyon nan selil Leydig yo. Yon lòt etid pa Seethalakshmi et al (9) rapòte ke CsA diminye nivo testostewòn pa anpeche aktivite a nan 17 alfa-hydroxylase uncooperatively ak 17 -hydroxysteroid dehydrogenase aktivite konpetitif pandan byosentèz testostewòn, ak sit prensipal la pou anpèchman CsA te koupe adenosine siklik. eksitasyon monofosfat. Anplis de sa, rapò sa a endike ke diminye sekresyon testostewòn pwovoke pa CsA nan selil Leydig dirèkteman enfliyanse devlopman nan sistèm repwodiktif gason an ak antretyen nan kapasite repwodiktif. Seethalakshmi et al (10) enjekte testostewòn ekzojèn nan rat trete CsA pou ogmante nivo testostewòn andojèn. Li te obsève ke dòz yo ki wo nan testostewòn ekzojèn siyifikativman retabli pwa ògàn repwodiktif, nivo serik nan òmòn ki eksitan pileu (FSH), ak ogmante konte selil jèm, konsa endike ke CsA-pwovoke andikap nan spermatogenèse ka pasyèlman anpeche pa ekzojèn nan. administrasyon testostewòn (10). Sepandan, testostewòn ekzojèn yo te jwenn yo te ensifizan nan repare domaje tisi testikil, kòm sekresyon testostewòn ak spermatogenesis te toujou enfliyanse pa CsA, ak pousantaj segondè nan apoptoz yo te obsève nan espèm ak selil spermatogenic (10).
Wenshen Shengjing Decoction (WSSJD) konsiste de 15 medikaman èrbal, sitou ki gen ladan Cornu Cervi Nippon Parvum, Panax ginseng, Cynomorium solaryom,Cistanche deserticola, Radix Astragali, Epimedium brevicorneum, ak Angelica Sinensis (11). WSSJD te demontre pou soulaje cyclophosphamide-induit spermatogenic apoptosis (11). Pou amelyore plis efè terapetik WSSJD, etid prezan an te devlope yon nouvo WSSJD ki baze sou mekanis domaj nan tisi testikil CsA-induit pa ajiste dòz konpozan WSSJD yo. Etid famasi modèn yo te demontre ke velours antler nan WSSJD ka fonksyone kòm yon òmòn sèks (12); Radix Astragali ka amelyore pwopagasyon ak rezèv eleman nitritif selil Sertoli tèstikul yo (13), ak Panax ginseng ka diminye nivo ipèoksid testikil yo ak anpeche apoptoz spermatogenic (14). Medikaman ki mansyone anwo yo ka ogmante fonksyon ren yo epi ranfòse devlopman selil spermatogenic yo (12-14). Clomifene citrate (CC) te demontre pou egzèse yon efè terapetik sou sterilite gason nan etid klinik anvan yo (15,16). Anplis de sa, CC te asosye ak testostewòn amelyore ak paramèt espèm oswa dechaj, ak mekanis pwoteksyon CC yo ka sanble ak sa yo ki nan WSSJD (15,16). Anplis de sa, nan yon etid pa Wang et al (17), CC te itilize kòm yon kontwòl tretman pou mennen ankèt sou efè medikaman Chinwa Shengjing la sou twoub spermatogenèse nan sourit. Ki baze sou sa a, CC te itilize kòm yon kontwòl pozitif nan etid la prezan.
Nan etid la prezan, yo te envestige mekanis ki kache efè pwoteksyon nouvo WSSJD nan tisi testikil yo pou detèmine efikasite terapetik medikaman modifye a. Elisid mekanis pwoteksyon an ka bay yon baz pou itilize nouvo WSSJD nan amelyore domaj spermatogenic CsA-induit.
Efè Cistanche deserticola: Anpechedomaj spermatogenic
Materyèl ak metòd
Bèt. Yon total de 90 sourit gason Kunming (8-semèn-fin vye granmoun; 35-40 g) te bay pa Changchun Institute of Byological Products Co., Ltd. (Changchun, Lachin). Etid prezan an te fèt ak apwobasyon Komite Etik Jilin Medical University (Changchun, Lachin). Sourit yo te loje nan 21±3˚C ak 55-65 pousan imidite relatif anba yon sik fènwa-limyè 12 h. Sourit yo te bay aksè gratis nan yon rejim estanda sourit laboratwa ak dlo esteril.
Preparasyon pou WSSJD. 15 konpozan medikaman Chinwa WSSJD, ki gen ladan Cornu Cervi Nippon Parvum, Panax ginseng, Cynomorium solaryom,Cistanche deserticola, Radix Astragali, Epimedium brevicornum, ak Angelica Sinensis (11), yo te achte nan men Tongrentang (Beijing, Lachin). Materyèl sa yo te dekokte dapre metòd tradisyonèl Chinwa dekoksyon medsin (18). An brèf, engredyan yo te peze dapre resèt la, epi yo te ajoute yon total de 250 ml dlo distile pou plonje remèd fèy yo. Remèd fèy yo te tranpe pou 30 minit epi imedyatman chofe. Remèd fèy yo te premye bouyi pou 10 minit ak Lè sa a, chalè a te redwi a yon mitone pou 20 minit. Apre 30 minit nan chofaj, yo te dekoksyon likid la separe ak remèd fèy yo, ki te plis dekokte ak 200 ml dlo distile nan 80˚C pou yon lòt 30 minit. Pwosesis sa a te repete epi volim final likid dekoksyon an te filtre nan 4-5 kouch twal gaz. Te likid la tou prese soti nan remèd fèy yo nan dekoksyon an filtre. Apre sa, dekoksyon an te chofe a 80˚C nan yon beny dlo pou 6-7 èdtan jiskaske konsantrasyon an rive nan 2 g dwòg brit/ml, epi dekoksyon an te estoke nan 4˚C anvan ou itilize. Nouvo WSSJD te prepare ki baze sou fòmilasyon WSSJD ak ti ajisteman nan dòz Panax ginseng, Cynomorium solaryom, Radix Astragali, ak Epimedium brevicornum. Metòd dekoksyon an te menm jan ak WSSJD. nouvo WSSJD ki gen ladan sa ki annapre yo: Panax ginseng, 6 g; Cynomorium solaryòm, 9 g; Radix Astragali, 12 g; Epimedium brevicornum, 6 g; Cornu Cervi Nippon Parvum, 1 g;Cistanche deserticola, 9 g; Angelica Sinensis, 6 g; Flatstem Milkvetch Grenn, 9 g; Rhizoma Dioscoreae, 15 g; Gwo tèt Atractylodes Rhizome, 6 g; Ligusticum wallichii, 3 g; Radix Paeoniae Alba, 6 g; Cinnamomum cassia, 1 g; Costustoot, 1.5 g, ak Fructus Foeniculi, 3 g.
Konsantrasyon ekstrè dwòg brit yo te detèmine jan sa a: Pwa materyèl brit / volim final la. Metòd kalkil sa a lajman itilize nan etid medikaman tradisyonèl Chinwa (19-21). Administrasyon dwòg. Sourit yo te owaza divize an 6 gwoup (15 sourit pou chak gwoup) epi yo te administre ak medikaman intragastrik. Gwoup yo te jan sa a: Kontwòl (nòmal saline); dimethylsulfoxide (DMSO); CsA; CC; WSSJD; ak nouvo WSSJD. Sourit nan CsA, CC, WSSJD, ak nouvo gwoup WSSJD yo te enjekte intraperitoneally (ip) ak 15 mg / kg / jou CsA (Shanxi Powerdone Pharmaceutics Co., Ltd., Datong, Lachin) pou 30 jou, jan sa dekri deja (8). ). Sourit nan gwoup kontwòl ak DMSO yo te sibi yon piki ip chak jou ak yon volim egal nan saline nòmal oswa sòlvan DMSO, respektivman, pandan tout 30-jou peryòd eksperimantal la. Konsantrasyon an nan DMSO dilye nan saline nòmal te 3.25 pousan (v / v). Gwoup CC la te administre ak 21.6 mg/kg/jou CC (GKH Pharmaceutical, Ltd., Guangzhou, Lachin) jan sa dekri deja (13), ki te tou dilye nan 3.25 pousan (v/v) DMSO (pH {{14} }.2). Sourit nan gwoup WSSJD ak nouvo WSSJD yo te administre ak 12 g dwòg brit / kg / jou nan WSSJD ak nouvo WSSJD, respektivman.Tach ematoksilin ak eozin (H&E). Testatik sourit yo te rekòlte epi imedyatman fikse nan 4 pousan paraformaldehyde (pH =7.2) nan tanperati chanm pou 24 èdtan, ki te swiv pa dezidratasyon etanòl, tretman xylene yo retire etanòl la, sir entegrasyon, ak seksyon. Seksyon istolojik (5 µm) yo te jwenn lè l sèvi avèk yon mikrotom rotary. Sa yo te apoze sou glisad vè pou H & E tach. Seksyon tèstikul yo te obsève lè l sèvi avèk mikwoskospi istopatolojik rekò pou evalye devlopman tib seminifè yo epi jwenn done istometrik. Devlopman tib seminifè yo te evalye lè l sèvi avèk sistèm nòt Johnsen (22).
ELISA. Nan 3 jou 0 tretman an, sourit yo te anestezi ak 10 pousan idrat chloral (Shanghai Guoyao Chemical Reagent Co., Ltd) nan 0.004 ml / g nan pwa kò ip anvan eutanasia ak CO2. Yo te rekòlte san kòf la epi yo te separe serom nan epi estoke nan -20˚C. Yon ti tan, san yo te kolekte nan 1.5-ml tib epi estoke nan 4˚C lannwit lan. Lè sa a, yo te santrifuje tib la nan 1,300 xg nan 4˚C pou 6 min epi yo te kolekte serom la. ELISA twous (Shanghai Elisa Biotech Co., Ltd., Shanghai, Lachin) yo te itilize pou detèmine kontni serik testostewòn (cat. No. EIA-2380) ak LH (kat. No. EIA-2385 ) selon pwotokòl manifakti a. Dansite optik (OD) te detèmine lè l sèvi avèk yon lektè microplate Modèl 680 (Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules, CA, USA), ak nivo testostewòn ak LH yo te detèmine ki baze sou koub estanda a.
Imunohistochimi. Tisi testikil yo te fikse nan fòmaldeyid 4 pousan nan tanperati chanm pou 24 èdtan epi yo te entegre nan parafine. Seksyon parafin yo te koupe an seksyon 5 µm epi yo te imedyatman deparafine. Rekipere antijèn yo te reyalize nan enkubasyon seksyon nan 0.01 M tanpon sitrat (pH=6.0) nan 95-98˚C pou 5 min. Seksyon yo te imedyatman bloke ak 5 pousan albumin serom bovin (Sigma-Aldrich; Merck KGaA, Darmstadt, Almay; A3675) nan tanperati chanm pou 1 èdtan. Apre bloke, seksyon yo te enkube ak antikò poliklonal lapen kont LHR (chat No. L6792; Sigma-Aldrich; Merck KGaA; 1:200) oswa P450 side-chain clivage (P450scc; cat. No. ab75497; Abcam, Cambridge, UK). ; 1:200) nan 4˚C lannwit lan nan fè nwa. Metòd konplèks streptavidin-biotin (SABC) te itilize pou detekte ekspresyon LHR ak P450scc lè l sèvi avèk yon twous SABC (SA2010; Boster Biological Technology, Pleasanton, CA, USA), dapre pwotokòl manifakti a. Pou tisi yo izole nan sourit kontwòl negatif, yo te ranplase antikò prensipal la ak PBS. Selil Leydig ak tach jòn oswa mawon sou manbràn oswa plasma yo te konsidere kòm selil LHR-pozitif. Yo te jwenn senk glisad nan chak echantiyon ak senk jaden nan zòn tisi Leydig yo te chwazi o aza epi yo te evalye anba yon mikwoskòp fliyoresan (agrandisman, x400). Yo te jwenn OD an mwayèn nan selil pozitif nan zòn tisi Leydig yo lè l sèvi avèk lojisyèl Image-Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USA). Ekspresyon LHR ak P450scc yo te pwopòsyonèl ak valè OD yo, ak pi wo valè OD ki reprezante pi wo ekspresyon pwoteyin.
Tèminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-medyatè dUTP nick-end labeling (TUNEL) tès. Testik sourit yo te diseke, entegre nan sir, epi seksyone. Lè sa a, seksyon yo (5-µm epè) te tache lè l sèvi avèk twous tès TUNEL la (MK1024; Boster Biological Technology), dapre pwotokòl manifakti a. An brèf, tisi tèstikul ki soti nan kontwòl (nòmal saline), DMSO, CsA, CC, WSSJD, ak nouvo gwoup WSSJD yo te tache lè l sèvi avèk yon dilution 1:100 nan antikò digoxin ki make biotin pou 30 minit nan 37˚C. Tache tisi epitelyal entèrstisyal rat (bay nan twous la) te itilize kòm yon kontwòl pozitif, ak echantiyon enkubasyon ak PBS olye pou yo antikò digoxin ki make biotin yo te itilize kòm yon kontwòl negatif. Yo te evalye frekans selil TUNEL-pozitif ki montre tach nikleyè vèt lè l sèvi avèk yon mikwoskòp konfokal lazè. Yo te evalye yon total de 10 jaden o aza anba gwo agrandisman (x400) ak selil pozitif yo te konte. Yo te kalkile kantite mwayèn selil pozitif pou chak jaden.
Propidium yodide (PI) oswa Annexin V-fluorescein isothiocyanate (FITC) tach ak analiz sikometri koule. Epididymis cauda yo te rekòlte sakrifis sa a epi epidèm la koupe ak yon lam pou libere espèm nan epididim nan 2 ml PBS a 37˚C pou jwenn sispansyon epididim. Sispansyon yo te imedyatman enkube a 37˚C pou 10 minit pou pèmèt espèm yo naje deyò. Agrégation de espèm yo te jete ak echantiyon espèm ki rete yo te izole ak resuspend nan PBS bay yon konsantrasyon nan 106 selil / ml. Apoptoz espèm yo te analize lè l sèvi avèk yon twous deteksyon Annexin V-FITC Apoptosis (Nanjing KeyGen Biotech Co., Ltd., Nanjing, Lachin), dapre pwotokòl manifakti a. An brèf, 1 ml sispansyon espèm yo te tache ak 10 µl PI oswa ak 500 µl tanpon obligatwa ak 5 µl Annexin V-FITC nan fè nwa a pou 10 min nan tanperati chanm. Selil yo te imedyatman analize pa Epics XL flow cytometry (Beckman Coulter, Inc.) ak lè l sèvi avèk yon TetraONE™ System (6915050; Beckman Coulter, Inc.). Selil nan premye etap yo nan apoptoz yo te idantifye pa tach pozitif Annexin V ak selil nekrotik yo te idantifye pa tach PI-pozitif.
Analiz estatistik. Analiz done yo te fèt ak lojisyèl SPSS 13.0 (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA) epi yo te eksprime kòm mwayen plis oswa ± devyasyon estanda jan sa endike a. Diferans ant gwoup yo te evalye pou siyifikasyon lè l sèvi avèk yon analiz yon sèl nan divèjans ki te swiv pa tès post hoc Tukey a. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Cistanche deserticola
Rezilta yo
Efè nouvo WSSJD sou devlopman tib seminifè testikil yo. Pou mennen ankèt sou efè pwoteksyon potansyèl nouvo WSSJD sou devlopman tibil seminifè tèstikul sourit yo, yo te konpare mòfoloji tèstikul sourit H&E-tache anba mikwoskòp limyè. Tibul yo seminifè nan sourit ki soti nan gwoup CsA ak CC yo te montre kontraksyon nan plizyer la tubul, diminye dyamèt tubul ak kouch redwi nan epithelium seminifè testikil konpare ak kontwòl la. Anplis de sa, selil spermatogenic ekspoze yon aranjman dezòdone, kantite selil spermatogenic te redwi ak kèk espèm matirite yo te vizib nan lumèn nan (figi 1). Nan sourit ki soti nan DMSO, WSSJD, ak nouvo gwoup WSSJD yo, plis kouch epiteli testikil seminifèr yo te vizib epi yo te fwontyè a tubul seminifèr entegre san kontraksyon oswa efondreman (Fig. 1). Nòt Johnsen yo pa t diferan anpil ant gwoup DMSO ak gwoup kontwòl yo, oswa ant gwoup CC ak DMSO. Sepandan, nòt Johnsen te siyifikativman diminye nan gwoup CsA ak gwoup WSSJD konpare ak gwoup kontwòl la, e nòt WSSJD ak nouvo gwoup WSSJD yo te ogmante anpil konpare ak gwoup CC oswa CsA (P).<0.05; table="" i).="" these="" results="" indicated="" that="" new="" wssjd="" and="" wssjd="" promoted="" the="" development="" of="" seminiferous="" epithelium="" following="" csa="">
Efè nouvo WSSJD sou testostewòn serik ak LH. Nivo testostewòn ak LH nan serik la te imedyatman mezire. Nivo serik testostewòn ak LH pa te afekte apre administrasyon DMSO. Kontrèman, testostewòn serik te siyifikativman downregulated, ak LH te siyifikativman upregulated nan CsA-trete sourit, parapò ak kontwòl (P).<0.05; fig.="" 2),="" and="" new="" wssjd="" administration="" significantly="" restored="" testosterone="" to="" near="" control="" levels=""><0.05; fig.="" 2).="" for="" serum="" lh,="" the="" protective="" effects="" of="" wssjd="" were="" similar="" to="" that="" of="" cc;="" however,="" new="" wssjd="" decreased="" serum="" testosterone="" to="" a="" significantly="" lower="" level="" than="" that="" observed="" with="" cc="" and="" wssjd=""><0.05; fig.="" 2),="" suggesting="" a="" superior="" protective="" effect="" of="" new="" wssjd="" over="" cc="" or="">
Efè nouvo WSSJD sou ekspresyon LHR ak P450scc. Ekspresyon P450scc ak LHR yo te evalye nan selil testikil Leydig pa imunohistochimi (figi 3 ak 4). Nan gwoup kontwòl la, LHR te eksprime sou manbràn eksteryè selil Leydig ant tib seminifèr yo (Fig. 3A), ak P450cc te eksprime nan sitoplasm nan selil Leydig testikil (Fig. 4A). Tretman DMSO pa te gen okenn efè enpòtan sou ekspresyon LHR ak P450scc. Kontrèman, tretman CsA siyifikativman diminye ekspresyon LHR ak P450scc konpare ak sourit kontwòl (P<0.05; figs.="" 3b="" and="" 4b).="" in="" turn,="" the="" expressions="" of="" lhr="" and="" p450scc="" were="" significantly="" increased="" by="" treatment="" with="" cc,="" wssjd,="" or="" new="" wssjd="" compared="" with="" the="" csa="" group=""><0.05; figs.="" 3b="" and="" 4b).="" in="" addition,="" levels="" of="" lhr="" and="" p450scc="" in="" testicular="" leydig="" cells="" were="" significantly="" higher="" in="" wssjd="" and="" new="" wssjd="" mice="" compared="" with="" cc="" mice=""><0.05; figs.="" 3b="" and="" 4b),="" and="" new="" wssjd="" induced="" a="" significantly="" greater="" upregulation="" than="" wssjd=""><0.05; figs.="" 3b="" and="">
Efè nouvo WSSJD sou apoptoz selil spermatogenic. Apoptoz nan selil spermatogenic nan tèstikul yo sourit te analize pa yon tès TUNEL. Nwayo selil apoptotik yo te obsève prensipalman nan spermatogonia ak spermatosit prensipal yo (figi 5A). Spermatogonia yo pi gwo pase spermatocytes epi yo sitiye pi pre manbràn nan sousòl (23). Tretman DMSO pa te gen okenn efè enpòtan sou kantite selil spermatogenic apoptotik nan tèstikul yo. Kontrèman, tretman ak CsA ogmante siyifikativman kantite selil spermatogenic apoptotik konpare ak gwoup kontwòl ak DMSO (P).<0.05; fig.="" 5b).="" in="" turn,="" administration="" of="" cc,="" wssjd,="" or="" new="" wssjd="" significantly="" reduced="" csa-induced="" apoptosis=""><0.05; fig.="" 5b).="" furthermore,="" the="" number="" of="" apoptotic="" testicular="" spermatogenic="" cells="" in="" the="" wssjd="" and="" new="" wssjd="" groups="" was="" significantly="" reduced="" compared="" with="" the="" cc="" group=""><0.05), and="" new="" wssjd="" was="" significantly="" more="" effective="" than="" wssjd=""><0.05; fig.="">
Efè nouvo WSSJD sou siviv ak apoptoz bonè nan espèm. Pou verifye efè pwoteksyon nouvo WSSJD kont apoptoz espèm CsA-induit, yo te detèmine siviv ak apoptoz bonè nan espèm nan epididim yo. Epididymal espèm yo te tache ak PI oswa Annexin V ak analize pa sikometri koule (figi 6 ak 7). Apre rezilta yo mansyone pi wo a, tretman CsA redwi siyifikativman pousantaj espèm vivan ak siyifikativman ogmante pousantaj espèm apoptotik bonè (P<0.05; figs.="" 6b="" and="" 7b),="" while="" dmso="" treatment="" had="" no="" effect.="" wssjd="" and="" new="" wssjd="" significantly="" increased="" the="" percentage="" of="" live="" sperm=""><0.05; fig.="" 6b)="" and="" reduced="" the="" percentage="" of="" early="" apoptosis="" sperm=""><0.05; fig.="" 7b)="" compared="" with="" csa="" treatment.="" the="" percentages="" of="" live="" and="" early="" apoptotic="" sperm="" in="" wssjd="" and="" cc="" mice="" did="" not="" differ="" significantly,="" while="" new="" wssjd="" induced="" a="" significantly="" greater="" increase="" in="" live="" sperm="" percentage="" compared="" with="" the="" cc="" group=""><0.05; fig.="" 6b)="" and="" significantly="" decreased="" the="" percentage="" of="" early="" apoptotic="" sperm="" compared="" with="" the="" cc="" and="" wssjd="" groups=""><0.05; fig.="">
Diskisyon
Li te deja dokimante ke itilizasyon alontèm nan CsA kòm yon ajan imunosuppressive afekte kapasite repwodiktif (6). Xu (24) rapòte ke mòfoloji a ak vitalite nan espèm nan pasyan trete ak CsA te siyifikativman pi ba pase sa yo ki nan yon gwoup ki pa trete, jan yo obsève nan echantiyon yo espèm oswa dechaj nan 26 moun k ap resevwa transplantasyon ren trete ak plizyè dòz CsA ak 12 volontè ki an sante. Li te tou obsève ke pousantaj defòmasyon tèt nan espèm yo te siyifikativman pi wo nan moun k ap resevwa CsA-trete (24). Rezilta sa yo sijere ke CsA te gen yon efè dòz-depandan sou paramèt espèm oswa dechaj. Se poutèt sa, syans yo garanti yo idantifye nouvo ajan famasi ki kapab soulaje domaj testikil CsA-induit ak amelyore kapasite repwodiktif gason apre transplantasyon ògàn.
Mikwo-anviwònman espesifik tèstikul la ankouraje spermatogenèz, e konsa andikap nan estrikti ak fonksyon testikil ka mennen nan arestasyon spermatogenic (25). Monteiro et al(26) te trete rat Wistar ak CsA nan yon dòz 15 mg / kg pou chak jou pou 56 jou, epi li obsève yon pwopòsyon volumetrik ogmante nan tisi konjonktif ak diminye pwopòsyon volumetrik nan selil Leydig nan rat trete CsA. Li te tou obsève ke CsA te lakòz dejenerasyon epitelyal seminifè, sa ki lakòz vakuolizasyon selil Sertoli, spermatid nòmal wonn ak long, ak akimilasyon sitoplasm rezidyèl nan fwontyè epitelyal adjasan a lumèn nan (26). Nan etid la prezan, sourit Kunming yo te trete ak 15 mg / kg CsA chak jou pou 30 jou, ki mennen nan kontraksyon ak diminye dyamèt tubul yo seminifè, rediksyon nan kouch epitelyal yo seminifè, aranjman dezòdone nan selil yo seminifè, yon diminisyon nan matirite. espèm nan lumèn nan ak yon nòt Johnsen siyifikativman diminye.
Anplis de sa, tretman ak tretman CsA grav domaje estrikti testikil la. Etid la tou evalye efè pwoteksyon nouvo WSSJD, kòm yon medikaman Chinwa roman, sou tèstikul yo nan sourit CsA-trete. Li te obsève ke kouch epitelyal seminifè tèstikul yo ak aranjman selil seminifè yo te retabli apre tretman ak nouvo WSSJD. Anplis de sa, sourit nan nouvo gwoup WSSJD la te montre tibil seminifè entegre san yo pa kontraksyon oswa efondre epi yo te gen yon nòt Johnsen siyifikativman pi wo konpare ak sourit CsA-trete. Rezilta sa yo sigjere ke WSSJD siyifikativman repare CsA-induit domaj testikul, ki endike ke sa a konpoze medikaman èrbal ka yon tretman efikas nan prevansyon nan CsA-induit domaj testikil. Kit reparasyon selil sa a depann de nich ki nan epithelium la tou se yon kesyon enpòtan, ki ta dwe envestige nan pwochen etid yo.
Aks ipotalamik-pitwitè-testikil la sèvi yon wòl enpòtan nan règleman an nan aktivite jenital (27). Devlopman ak fonksyonalite ògàn jenital gason yo kontwole pa òmòn ki soti nan ipotalamus ak glann pitwitè (28). Krueger et al (29) te trete rat Sprague Dawley ak 25 mg/kg/jou CsA oswa 40 mg/kg/jou CsA pou 6 jou epi yo te obsève ke nivo serik LH ak FSH ogmante pa 2-4 pliye, pandan y ap ekspresyon P450scc. diminye a 30 pousan nan gwoup kontwòl la. Anplis de sa, nivo testostewòn serik yo te siyifikativman diminye nan sourit CsA-trete, sa ki lakòz spermatogenesis andikape (29). Nan etid la prezan, li te demontre ke tretman CsA siyifikativman diminye ekspresyon LHR nan selil Leydig yo. Malgre ke serik LH te ogmante, diminye ekspresyon nan LHR ka gen pwoblèm rekiperasyon LH-medyatè nan byosentèz testostewòn ak diminye ekspresyon nan P450scc, kòm anzim nan limite pousantaj nan byosentèz testostewòn (30), konsa afekte byosentèz testostewòn pa selil Leydig. Engredyan yo nouvo nan nouvo WSSJD, tankou pilose antler, montre efè ki sanble ak òmòn sèks (12), ki ka amelyore nivo testostewòn serik ak diminye nivo serik LH, kidonk ogmante ekspresyon LHR ak p450scc nan selil Leydig yo. Miyò, rezilta prezan yo endike ke nouvo WSSJD ankouraje byosentèz testostewòn ak sekresyon nan selil Leydig pou ankouraje spermatogenèz.
CSA-pwovoke estrès oksidatif ak domaj tèstikul pwovoke displazi nan espèm ak selil spermatogenic (31). Yo te rapòte ke tretman CsA alontèm domaje sistèm antioksidan nan tisi testikil bèt yo, ki mennen ale nan nivo diminye glutatyon, glutatyon peroksidaz, ak nivo oksijene idwojèn ak ogmante nivo dialdehyde malonik nan tèstikul yo (31). Se poutèt sa, nivo twòp nan espès oksijèn reyaktif nan tisi testikil yo pa ka elimine, ki mennen nan peroksidasyon nan lipid manbràn espèm, domaj ADN, ak diminye vitalite espèm. Nan etid la prezan, li te obsève ke tretman CsA siyifikativman ogmante rupture ADN ak pousantaj apoptotik nan selil spermatogenic nan tubul seminifèr. Pousantaj siviv espèm nan epididim la tou diminye, pandan y ap ogmante pousantaj espèm apoptotik bonè, sa ki endike ke aktivite spermatogenic tèstikul yo te domaje anpil. Türk et al (32) dokimante ke efè pwoteksyon asid ellagic sou domaj testikil CsA-induit te asosye ak estrès oksidatif nan rat gason. Nouvo WSSJD yo itilize nan etid prezan an gen divès kalite konpozan antioksidan, ki gen ladan medikaman èrbal Ginseng, ki te deja demontre siyifikativman diminye nivo ipèoksidan nan tèstikul yo (14).
Nan etid la prezan, efè nouvo WSSJD sou CsA-induit defisyans nan sentèz testostewòn ak apoptoz spermatogenic yo te envestige, epi li te obsève ke nouvo WSSJD siyifikativman diminye pousantaj yo apoptotik nan selil spermatogenic ak espèm, e konsa repare domaj nan testikil seminiferous la. epitelyòm. Mòfoloji tubul seminifè testikil ak apoptoz selil spermatogenic ak espèm yo te envestige lè l sèvi avèk istochimi ak sitometri koule. Malgre ke distribisyon sik selilè ak pwodiksyon espèm chak jou yo pa te envestige, yo pral konsantre nan syans nan lavni pa gwoup nou an.
WSSJD siyifikativman ogmante nivo testostewòn nan tèstikul yo ak diminye apoptoz nan selil spermatogenic ak espèm, ki efektivman repare domaj testikil CsA-induit. Rezilta sa yo endike ke nouvo WSSJD a ka yon ajan famasi itil nan tretman ak prevansyon domaj testikil CsA-induit.
Cistanche deserticola roorts antye
Referans
1. Pedersen M ak Seetharam A: Enfeksyon apre transplantasyon fwa ortotopik. J Clin Exp Hepatol 4: 347-360, 2014.
2. Vora GK ak Ciolino JB: Reyaksyon allograft kornye ki asosye ak enflamasyon nonocular. Chif J Ophthalmol 20: 29-31, 2014.
3. De Pasquale C, Veroux M, Indelicato L, Sinagra N, Giaquinta A, Fornaro M, Veroux P, ak Pistorio ML: Aspè psikopatolojik transplantasyon ren: Efikasite yon ekip miltidisiplinè. World J Transplant 4: 267-275, 2014.
4. El-Gowelli HM ak El-Mas MM: Central modulation nan tansyon wo siklosporin-induit. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 388: 351-361, 2015.
5. EidMM, Abdel-Hamid IA, SobhMA ak el-SaiedMA: Evalyasyon karakteristik mouvman espèm nan moun k ap resevwa transplantasyon ren ki pa fètil lè l sèvi avèk analiz enfòmatik. Int J Androl 19: 338-344, 1996.
6. Zahra A, Gholamreza N, Farokhi F, ak Shalizar Jalali A: Diminisyon nan andikap espèm cyclosporine-induit ak anbriotoksisite pa ekstrè akeuz fwi crataegus monogyna. Selil J 15: 198-205, 2013.
7. Li Z, Qiu J, LiJ, Zhao D, Chen G, ak Chen L: Efè alontèm konvèsyon soti nan cyclosporine rapamycin sou fonksyon testikil ak mòfoloji nan yon modèl transplantasyon rat. Transplant Proc 45: 763-769, 2013.
8. AliRB, KlouzA, Boubaker S, LakhalM ak BelkahiaC: Yon modèl bèt nan toksisite testikil pa cyclosporine: Evalyasyon ak pwoteksyon. Fundam Clin Pharmacol 23: 241-246, 2009.
9. Seethalakshmi L, Flores C, Malhotra RK, Pallas JD, Tharakan D, Khauli RB ak Menon M: Mekanis nan aksyon cyclosporine nan anpèchman nan byosintez testostewòn pa selil Leydig rat nan vitro. Transplantasyon 53: 190-195, 1992.
10. SeethalakshmiL, FloresC, CarboniAA ak Menon M: Antretyen quantitative spermatogenesis nan rat cyclosporine-trete pa administrasyon exogenous Propionate testostewòn. J Androl 11: 491-497, 1990.
11. Pan XY, Wang XY, Wang XN, Sun ZX, Wang D, Wang X, Yang YY ak Li ZX: Efè 'Wenshen Shengjing Decoction' sou apoptoz selil spermatogenic cyclophosphamide-induit ak dimethylation histone H3K9. Shanghai Zhong Yi Yao Za Zhi 48: 82-86, 2014 (An Chinwa).
12. Xu ZH, Li SF, Wang JY, Zhou R ak Tian SJ: Ekstraksyon òmòn sèks soti nan velours antler ak CO2 superkritik. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 32: 2000-2003, 2007 (An Chinwa).
13. Zhao LP, Xu Z, Zhang M, Sun HC ak Tang F: Efè Fructus Lycii ak Radix astragali sou fonksyon selil Sertoli nan tèstikul rat. Zhonghua Nan Ke Xue 13: 82-86, 2007 (An Chinwa).
14. Xu L, Liu XH, ak Zhang L: Efè ginsenosides total sou NO, NOS ak kapasite total antioksijèn nan tèstikul sourit la. Acta Academiae Medicinae CPAPF 5: 507-508, 2006 (An Chinwa).
15. Patel DP, Brant WO, Myers JB, Presson AP, Johnstone EB, Dorais JA, Aston KI, Carrell DT ak Hotaling JM: Sekirite ak efikasite nan sitrat klomifèn nan gason iperandrojèn ak subfertile. Int J Imppot Res 27: 221-224, 2015.
16. ElSheikh MG, Hosny MB, Elshenoufy A, Elghamrawi H, Fayad A ak Abdelrahman S: Konbinezon vitamin E ak sitrat klomifèn nan trete pasyan ki gen oligo idyopatik kòm azoospermi a: yon esè potentiels, owaza. Androloji 3: 864-867, 2015.
17. Wang R, Xu L, Zhang WX, Wu YF, Shi JH ak Zhang YX: Shengjing Granule: Yon medikaman Chinwa efikas pou twoub spermatogenic nan sourit. Zhonghua Nan Ke Xue 14: 1046-1049, 2008 (An Chinwa).
18. Fan BT: Chinese Medicine Pharmacy, Shanghai Syans ak Teknoloji Press 12: 62-68, 1997 (An Chinwa).
19. Zhang J, Li H, Lu L, Yan L, Yang X, Shi Z ak LiD: Fòmil Yiqi ak Yangyin amelyore blesi nan sistèm ematopoyetik ki pwovoke pa iradyasyon total kò a. J Radiat Res 58: 1-7, 2017.
20. Minami M, Konishi T, Jiang Z, Arai T ak Makino T: Efè Shin'iseihaito sou reyaksyon alèjik murin pwovoke pa sansibilizasyon nan nen. J Tradit Complement Med 6: 252-256, 2015.
21. Rong R, Li RR, Hou YB, Li J, Ding JX, Zhang CB, ak Yang Y: Mahuang-xixin-fuzi dekoksyon diminye enfeksyon grip yon viris nan sourit sendwòm defisyans ren-yang. J Ethnopharmacol 192: 217-224, 2016.
22. Johnsen SG: Testicular byopsi nòt konte-yon metòd pou anrejistreman nan spermatogenèse nan tèstikul imen: valè nòmal ak rezilta nan 335 gason ipogonadal. Òmòn 1: 2-25, 1970.
23. Mays-Hoopes LL, Bolen J, Riggs AD, ak Singer-Sam J: Preparasyon spermatogonia, spermatocytes, ak spermatid wonn pou analiz ekspresyon jèn lè l sèvi avèk klasman selil ki aktive fluoresans. Biol Reprod 53: 1003-1011, 1995.
24. Xu LG: Enfliyans cyclosporin A sou paramèt semans pasyan yo apre transplantasyon ren. J Clin Urol 20: 603-605, 2005.
25. Pintus E, Ros-Santaella JL, and Garde JJ: Beyond testis size: Links between spermatogenèse ak karakteristik espèm nan yon mamifè elvaj sezon an. PLoS One 10: e0139240, 2015.
26. Monteiro JC, Predes FS, Matta SL, ak Dolder H: Heteroperys aphrodisiaca perfusion diminye efè kolateral cyclosporine A sou tèstikul la. Anat Rec (Hoboken) 291: 809-817, 2008.
27. Oseko F, Remak S, Morikawa K, Endo J, Taniguchi A, ak Imura H: Enfliyans nan hyperprolactinemia kwonik pwovoke pa sulpiride sou aks ipotalamo-pitwitè-testikil nan gason nòmal. Fertil Steril 44: 106-111, 1985.
28. Wisniewski P, Romano RM, Kizys MM, Oliveira KC, Kasamatsu T, Giannocco G, Chiamolera MI, Dias-da-Silva MR, ak Romano MA: Ekspozisyon adilt nan bisfenol A (BPA) nan rat Wistar diminye kalite espèm ak dezòd. nan aks ipotalamik-pitwitè-testikil la. Toksikoloji 329: 1-9, 2015.
29. Krueger BA, Trakshel GM, Sluss PM, ak Maines MD: Siklosporin-medyatè depresyon nan reseptè òmòn luteinizing ak biosentèz heme nan tèstikul rat: Yon mekanis posib pou diminisyon nan testostewòn serik. Andokrinoloji 129: 2647-2654, 1991.
30. Nolan CJ ak Payne AH: Jenotip nan plas P450scc detèmine diferans ki genyen nan kantite pwoteyin P450scc ak pwodiksyon maksimòm testostewòn nan selil Leydig sourit yo. Mol Endocrinol 4: 1459-1464, 1990.
31. Türk G, Ateşşahin A, Sönmez M, Yüce A, ak Ceribaşi AO: Lycopene pwoteje kont cyclosporine A-pwovoke toksisite testikil nan rat. Theriogenology 67: 778-785, 2007. 32. Türk G, Sönmez M, Ceribaşi AO, Yüce A, ak Ateşşahin A: Atenuasyon nan siklosporin A-pwovoke domaj testikil ak spermatozoal ki asosye ak estrès oksidatif pa asid ellajik. Int Immunopharmacol 10: 177-182, 2010.
