Makè Kalite Cistanches Herba ki baze sou relasyon spectre-efè antioksidan

Résumé

Objektif: Pou etabli yon metòd rechèch pou makè yo kalite (Q-makè) nanCistanches Herba(CH) ki baze sou larelasyon spectre-efè antioksidan, bay yon baz pou etid la nan sibstans famasi li yo ak kontwòl kalite. Metòd: Ultra-wo pèfòmans likid chromatografi (UPLC) te itilize pou etabli anprent profilesfor 10 lots de CH. Yon modèl domaj oksidatif selil yo te etabli lè l sèvi avèk H2O2, ak kapasite antioksidan CH te detèmine ki baze sou konsantrasyon an demi-maksimòm inhibitor nan espès oksijèn reyaktif, osi byen ke nivo yo nan superoxidedismutase ak katalaz kòm endikatè farmakolojik. Relasyon spectre-efè a te konstwi atravè analiz eleman prensipal, analiz korelasyon Pearson, ak analiz regresyon pasyèl pi piti kare. Konpozan aktif yo te sibi validasyon famasi. Rezilta: Des anprent pou CH yo te etabli lè l sèvi avèk UPLC, idantifye 17 pik komen. Baze sou analiz korelasyon spectre-efè, nèf eleman yo te chwazi. Rezilta validasyon farmakolojik yo te endike ke asid jeniposidik, 8-asid epiloganik,echinakozid, lite,izoakteozid, epitubuloside Amontre aktivite antioksidan nan yon fason ki depann de konsantrasyon. Konklizyon: Etid sa a te eksplore Q-makè pou CH ki baze sou relasyon spectre-efè, bay enfòmasyon referans pou fondasyon sibstans famasi li yo ak amelyorasyon estanda kalite.

Mo kle:Cistanches Herba; Q-makè;relasyon spectre-efè; antioksidan

ÈTRÈ CISTANCHE ÒGANIC AK 30% ECHINACOSIDE AK 12% ACTEOSIDE POU FONKSYON REN

Cistanchese tij la chèch chèch ak fèy kal nan Cistanche deserticola YCMa oswa Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, yon plant ki fè pati genus Cistanche nan fanmi Orobanchiaceae. Li te premye anrejistre nan "Shen Nong's Materia Medica" epi li nan lis kòm premye klas [1]. Li se cho nan lanati, dous ak sale nan gou; li retounen nan meridyen ren yo ak gwo trip; li gen efè yo nan ren nouris Yang, ranplir sans ak san, mwatir trip yo ak laksatif, epi li se yon medikaman enpòtan pou tonifye ren an ak ranplir esans [2-3]. Wonyon yo magazen esans, ak esans ak san soti nan menm sous la. Si sans ak san yo ensufizant, li pral afekte aktivite lavi yo an jeneral nan kò imen an; mwèl ki pwodui esans yo estoke nan zo yo, epi sèvo a se lanmè mwèl la. Si esans nan ren an pa ase, zo yo ap pèdi nouriti yo epi sèvo a ap ensufizant, sa ki lakòz zo chanjman Dejeneratif tankou teksti ki lach, pèt dan, pèt memwa, demans, ak diminye fonksyon iminitè [4-6]. Cistanche deserticola gen glikozid phenylethanol, iridoid, lignan ak lòt konpozan estriktirèl, tankou echinaceaside, verbascoside, isorbascoside, asid jenipinik, ak 8-asid epistryanic. , tubulin A, elatriye [7]. Kontwòl kalite aktyèl la nan Cistanche deserticola nan edisyon 2020 "Farmakope Repiblik Pèp la nan Lachin" sèlman endike kontni an nan echinaceaside ak verbascoside, ki pa ka konplètman reflete karakteristik sa yo milti-konpozan ak milti-sib aksyon nan medikaman tradisyonèl Chinwa. , ki pa fezab nan kontwòl kalite li yo ak evalyasyon.

Yo nan lòd yo amelyore nivo kontwòl kalite medikaman tradisyonèl Chinwa ak optimize evalyasyon kalite medikaman tradisyonèl Chinwa, Akademisyen Liu Changxiao te pwopoze nouvo konsèp makè kalite (Q-marker) nan medikaman tradisyonèl Chinwa [8]. Pami yo, "efikasite" se eleman debaz nan "Senk Prensip yo" nan Q-marker [9] epi li se tou nwayo a nan evalyasyon an kalite medikaman tradisyonèl Chinwa.

Nan sans aktyèl sitiyasyon rechèch la nan korelasyon pòv ant estanda kalite ak efikasite dwòg, eksplore Q-makè nan medikaman tradisyonèl Chinwa ak etabli plis estanda kalite syantifik ak rezonab se nan gwo siyifikasyon amelyore kalite medikaman tradisyonèl Chinwa. Relasyon spectre-efè a se konekte pik kromatografi anprent medikaman tradisyonèl Chinwa ak done farmakodinamik espesifik pou jwenn sibstans ki efikas nan medikaman tradisyonèl Chinwa, kidonk reflete kalite nannan medikaman tradisyonèl Chinwa [10]. Etablisman an nan yon modèl matematik efikasite espèk ka klarifye QMarker a nan medikaman tradisyonèl Chinwa nan yon "vi holistic" pèspektiv, bay plis referans pou pita kontwòl kalite medikaman tradisyonèl Chinwa, fòmilasyon nan estanda kalite ak tès depistaj nan engredyan aktif. Etid sa a sèvi ak anprent dwèt konbine avèk pousantaj mwatye anpèchman nan espès oksijèn reyaktif (ROS IC50), sa ki nan superoksid dismutase (SOD) ak katalaz (CAT) pou etidye relasyon spectre-efè medikaman tradisyonèl Chinwa a, epi li itilize analiz eleman prensipal yo. (PCA) ), Pearson korelasyon analiz (PCC) ak pasyèl pi piti kare regression analiz (PLS) pou analize complète Q-makè Cistanche deserticola pou bay yon baz pou kontwòl kalite li.

1 materyèl

1.1 Egzanp

Cistanche deserticolate rekòlte nan Yutian County, Xinjiang ak Cistanche deserticola bon pratik agrikòl (GAP) baz plante nan Inner Mongoli. Li te idantifye pa chèchè Zhang Tiejun nan Tianjin Pharmaceutical Research Institute co, Ltd kòm Cistanche tubulosa (Schenk) Wight ak Cistanche deserticola.

YC Ma, yo montre enfòmasyon detaye nan Tablo 1.

1.2 Tès medikaman

Echinaceaside (nimewo pakèt: 111670-201907, pite: 91.8%) ak verbascoside (nimewo pakèt: 111530-201914, pite: 95.2%) tou de te achte nan men Enstiti Lachin nan kontwòl manje ak dwòg; izorescoside (nimewo pakèt: 61303-13 -7), salidroside (nimewo pakèt: 10338-51-9), 8-asid epistrychnoic (nimewo pakèt: 82509-41-9), asid jenipinik (nimewo pakèt: Z24A10X95926) , tuberosin B (nimewo pakèt: 112516-04-08), 2-acetyl eugenol glycoside (nimewo pakèt: 94492-24-7) yo te achte nan men Shanghai Yuanye Biotechnology Co., Ltd., pite Pi gran pase oswa egal a 98%; Cistanche glycoside A (nimewo pakèt: MUST -20062806, pite: 98.51%) ak vasculin A (nimewo pakèt: MUST19110102, pite: 98.57%) te achte nan men Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd.; chromatographically asetonitrile ak asid fòmik yo te achte nan men Tianjin Concord Technology Co, Ltd Konpayi; Pirifye dlo (Hangzhou Wahaha Group co, Ltd.). Vitamin E (VE, V8010, Beijing Solarbio Company);

Dimethyl sulfoxide (DMSO, D2660-100ML, Sigma Company, USA); CellTiter 96® AQueous yon sèl solisyon twous deteksyon pwopagasyon selil (G3580, Promega Company, USA); CAT deteksyon twous (S0051), SOD aktivite deteksyon twous S0101M) ak twous deteksyon ROS (S0033S) yo te achte nan men Shanghai Biyuntian Biotechnology co, Ltd.

1.3 Enstriman

Waters H-class-PDA ultra-wo pèfòmans likid chromatograph (Waters Company, USA); Balans elektwonik Sartorius BT25S (Konpayi Sartorius, Almay); H1650 gwo vitès Desktop santrifujeur (Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd.); SpectraMax M5

Lektè Microplate (Meigu Molecular Instrument Co., Ltd.); WYS-41XDY mikwoskòp byolojik (Tianjin Micro-Instrument Optical Instrument Co., Ltd.).

1.4 selil

Selil ren anbriyon imen HEK 293 selil yo te itilize nan eksperyans sa a epi yo te achte nan bank selil Chinwa Akademi Syans yo.

2 metòd

2.1 Etablisman kat anprent

2.1.1 Preparasyon solisyon tès la: Peze 2 g materyèl medsin Cistanche deserticola, ajoute 10 fwa kantite dlo, chalè ak rflu 3 fwa, 1 èdtan chak fwa, santrifuje a 1.0 ×105r·min-1 pou 15 min (reyon santrifujeur se 300 mm), Konbine supernatant yo epi konsantre pou fè yon solisyon stock ak yon konsantrasyon mas 100 mg·mL-1, delye li 10 fwa, epi filtre li atravè yon manbràn filtre mikwopore 0.22 µm pou jwenn li.

2.1.2 Preparasyon solisyon referans melanje

Pran 8-asid epistrychnic, salidroside, echinaceaside, cistanche glycoside A, asid jenipinik, verbascoside, anthocyanoside A, isorbascoside, ak 2'-acetyl eugenol. Yo te mezire sibstans referans glikozid ak angiozid B nan kantite ki apwopriye epi yo te peze avèk presizyon. Ajoute 50% solisyon metanòl pou fonn epi prepare yon solisyon sibstans referans melanje ak yon konsantrasyon mas 20 µg·mL–1.

2.1.3 Kondisyon kwomatografik

ACQUITY UPLC®BEH C18 kolòn (100 mm × 2.1 mm, 1.7 µm); faz mobil se acetonitrile (A) ~ 0.1% solisyon asid fòmik (B), pwogram elisyon gradyan (0 ~ 6 min, 5% ~ 8% A; 6 ~ 10 min, 8% ~ 15%A). 10 ~ 13 min, 15% ~ 19% A, 13 ~ 20 min, 19% ~ 25%A); longèdonn deteksyon se 237 nm; to koule se 0.4 mL·min -1; tanperati kolòn se 40 degre; volim piki a se 3 µL.

2.1.4 Seleksyon pik referans

Nan chromatogram ultra-pèfòmans likid chromatografi (UPLC) nan Cistanche deserticola, pik la ak pi gwo rapò zòn nan pik, modere tan retansyon ak bon separasyon te chwazi kòm pik referans nan spectre anprent.

2.1.5 Revizyon metodolojik

Tès presizyon: Pran echantiyon T1 a epi prepare solisyon tès la dapre metòd anba 2.1.1. Enjekte echantiyon an 6 fwa kontinyèlman epi anrejistre anprent dwèt la. Rezilta yo montre ke zòn nan pik relatif RSD nan chak pik se 0.10% ~ 4.61%, ak tan an retansyon relatif RSD Li se 0.08% ~ 1.32%, ki endike ke enstriman an gen bon. presizyon.

Tès repetibilite: Pran echantiyon T1 a epi prepare 6 echantiyon solisyon tès la an paralèl dapre metòd anba 2.1.1, epi enjekte echantiyon an kontinyèlman. Rezilta yo montre ke zòn pik relatif RSD nan chak pik kwomatografik se 1.35% ~ 4.80%, ak tan relatif retansyon RSD la se 0.10% ~ 1.80%, ki satisfè kondisyon ki nan anprent la epi montre ke repetibilite a. nan enstriman an bon.

Tès estabilite: Pran echantiyon T1 a epi prepare solisyon tès la dapre metòd anba 2.1.1, enjekte echantiyon pou fè tès nan 0, 2, 4, 8, ak 12 èdtan, epi anrejistre anprent dwèt la. RSD kalkile nan zòn pik relatif chak pik kwomatografik se 0.53% ~ 4.82%, ak RSD nan tan an retansyon relatif se 0.09% ~ 2.17%, ki satisfè kondisyon yo. nan anprent dwèt la epi li endike ke pwodwi tès la estab nan 12 èdtan.

2.2 Rechèch sou efè antioksidan Cistanche deserticola

2.2.1 Preparasyon nan likè manman Cistanche deserticola

Pran likè manman an anba atik 2.1.1, filtre ak esterilize li, epi delye li ak mwayen kilti nan konsantrasyon ki nesesè yo anvan ou itilize.

2.2.2 Cistanche deserticola ak kontwòl pozitif

Efè VE sou viabilite selil HEK 293 yo te etabli kòm gwoup nòmal (sispansyon selilè), gwoup administrasyon Cistanche deserticola (25, 50, 100, 200, 400 µg·mL–1), gwoup VE (20, 40, 60). , 80, 100 µmol·L–1), mete 6 pwi kopi pou chak konsantrasyon, kiltive pou 24 èdtan, ajoute 20 µL reyaktif sèl solisyon CellTiter 96® AQueous nan chak pi pou detekte viabilite selil, kontinye kiltive pandan 2 èdtan, epi sèvi ak yon lektè microplate pou detekte viabilite selil la nan 490 nm Yo te itilize valè absorbans (OD) chak pi pou kalkile pousantaj siviv selil la dapre fòmil (1). Pousantaj siviv (%)=(OD gwoup eksperimantal/OD gwoup vid) × 100% (1)

2.2.3 Cistanche deserticola sou endiksyon H2O2

Efè ROS sou selil HEK 293. Selil yo te divize an gwoup nòmal (sispansyon selil) ak gwoup administrasyon Cistanche deserticola (6.25, 12.5, 25, 50, 100 µg·mL-1 Cistanche deserticola ak 60 µm·L-1 H2O2), ak kiltive 24h. Swiv etap yo nan twous deteksyon ROS la pou operasyon ki vin apre yo, dirèkteman obsève tach selil la atravè yon mikwoskòp, epi sèvi ak yon lektè microplate pou detekte entansite fliyoresans chak gwoup. Anviwònman paramèt yo itilize yon longèdonn eksitasyon 488 nm ak yon longèdonn emisyon 525 nm. Eksperyans lan te repete twa fwa.

2.2.4 Cistanche deserticola pè

Efè H2O2 sou SOD nan selil HEK 293. Selil yo te divize an gwoup nòmal (sispansyon selil), gwoup modèl (60 µm·L-1 H2O2), gwoup VE (60 µm·L-1 VE ak 60 µm·L-1 H2O2), gwoup administrasyon Cistanche deserticola (100). µg·mL–1 Cistanche deserticola ak 60 µm·L–1 H2O2), kolekte selil yo apre 24 èdtan nan kilti, ajoute solisyon preparasyon echantiyon SOD pou lyse selil yo, epi santrifuje a 4 degre ak 12000 r·min {{22} } min (reyon santrifugasyon se 300 mm), pran supernatant la kòm echantiyon yo dwe teste, epi swiv etap yo nan twous deteksyon SOD la pou operasyon ki vin apre yo. Eksperyans lan te repete twa fwa.

2.2.5 Cistanche deserticola sou endiksyon H2O2

Efè CAT sou selil HEK 293 yo te trete dapre metòd 2.2.4 la epi yo te gwoupe yo an gwoup. Apre tretman an, ajoute solisyon lysis, santrifize nan 4 degre ak 12000 r·min-1 pou 10 min (reyon santrifujeur a se 300 mm), pran supernatant la, epi swiv etap sa yo nan twous deteksyon CAT la pou operasyon ki vin apre. . Eksperyans lan te repete twa fwa.

2.2.6 Analiz estatistik

Yo te itilize lojisyèl SPSS 26.0 pou analiz estatistik. Chak gwoup done yo te reprezante pa (±±(). Yo te fè analiz yon sèl-fason nan divèjans sou done ki konfòme yo ak distribisyon nòmal la. Si divèjans yo te egal, yo te itilize metòd diferans ki pi piti a. Si divèjans yo te inegal, yo te itilize metòd T3 Dunnett a GraphPad Prism 8 pou fè grafik, epi P<0.05 was considered as a statistically significant difference.

2.3 Spectrum-efè korelasyon analiz de Cistanche deserticola antioksidan

2.3.1 PCA Zòn pik yo nan pik komen yo nan 10 lo Cistanche deserticola ki te etabli anprent dwèt yo te nòmalize pa valè Z, epi yo te fè nan yon matris done lòd 10 × 17, ki te enpòte nan lojisyèl SPSS 26.0. pou PCA.

2.3.2 PCC

Yo te itilize SPSS 26.0 pou fè analiz bivarye pou etidye relasyon efikasite espèk ant anprent dwèt Cistanche deserticola ak antioksidan. Tès siyifikasyon yo te fèt lè l sèvi avèk yon tès de bò (T), ak P<0.05 as the standard for statistically significant differences.

2.3.3 PLS

Enpòte rezilta eksperimantal yo nan zòn pik ofisyèl Cistanche deserticola ak antioksidan nan lojisyèl SIMCA-P 14.1, mete zòn nan pik kòm varyab X a, epi mete endèks farmakodinamik la kòm varyab Y pou fè PLS.

2.4 Cistanche deserticola Q-marker aktivite antioksidan verifikasyon

2.4.1 Preparasyon nan solisyon an manman nan engredyan aktif. Peze avèk presizyon kantite asid jenipinik, 8-asid epistriknik, echinaceaside, verbascoside, isorebascoside, ak anthocyanoside A, epi ajoute DMSO pou fonn yo nan 10 mmol·L-1 solisyon referans.

2.4.2 Efè engredyan aktif sou sitotoksisite HEK 293.

Apre enkubasyon selil HEK 293 pou 24 èdtan, ajoute diferan konsantrasyon solisyon engredyan aktif anba 2.4.1 nan chak pi (0.781, 1.563, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 µmol·L–1). ) 100 µL, eksitasyon kontinyèl

Apre selil yo te enkube pou 24 èdtan, yo te ajoute reyaktif sèl solisyon CellTiter 96® AQueous pou detekte viabilite selil yo.

2.4.3 Efè domaj anti-oksidatif engredyan aktif sou H2O2-pwovoke selil HEK 293 yo.

Selil yo gwoupe jan sa a: gwoup nòmal, gwoup modèl, ak gwoup VE yo gwoupe dapre 2.2.4. Gwoup eksperimantal (0.781, 1.563, 3.125 µm·L-1 konpozisyon aktivite ak 60 µm·L-1 H2O2), kiltive pou 24 èdtan. Detèmine nivo ROS intraselilè, SOD ak kontni anzim CAT dapre metòd yo anba 2.2.3, 2.2.4 ak 2.2.5 respektivman.

Sèvis Sipò Wecistanche

Imèl:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Achte pou plis detay espesifikasyon:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-boutik