Konstriksyon Vaksen Lactobacillus Casei Recombinant nan PEDV ak repons iminitè li yo nan sourit

Résumé

Jan nou koumanse: Dyare epidemi porsin (PED) se yon maladi kontajye entesten ki te koze pa viris dyare epidemi porsin (PEDV) ki karakterize pa vomisman, dyare, anoreksi, ak dezidratasyon, ki te lakòz gwo pèt ekonomik atravè mond lan. Kounye a, iminite vaksen an se toujou metòd ki pi efikas pou kontwole pwopagasyon PED yo. Nan etid sa a, nou te konstwi yon nouvo souch recombinant L. casei-OMP16-PEDVS ki eksprime pwoteyin PEDVS nan PEDV ak pwoteyin OMP16 nan souch Brucella abortus. Pou konnen iminojenisite recombinant L. casei-OMP16-PEDVS kandida vaksen an, yo te konpare li ak BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21-OMP{{ 9}} PEDVS, ak BL21-PEDVS pwoteyin recombinant.

Rezilta yo: Rezilta yo te montre ke nou te kapab detekte pi wo nivo IgG, antikò netralize, IL-4, IL-10, ak INF- nan serom ak IgA nan poupou L. casei-OMP16- Sourit vaksinen PEDVS, ki endike ke vaksen kandida L. casei-OMP16-PEDVS te kapab pwovoke pi wo nivo iminite umoral, iminite selilè, ak iminite mukozal.

Konklizyon: Se poutèt sa, L. casei-OMP16-PEDVS se yon vaksen kandida pwomèt pou prevansyon enfeksyon PEDV.

Mo kle: PEDV, vaksen Lactobacillus casei, PEDV S pwoteyin, OMP16, repons iminitè

benefis cistanche pou gason-ranfòse sistèm iminitè

Entwodiksyon

Dyare epidemi porsin (PED) koze pa viris dyare epidemi porsin (PEDV) ak sentòm tankou dyare, vomisman, anoreksi, dezidratasyon, ak pèdi pwa nan porsele [1, 2]. Kochon tout laj ka enfekte ak sentòm diferan epi to mòtalite nan porsele yo rive jiska 100% [3], sa ki te mennen nan gwo pèt ekonomik atravè mond lan. Pou kontwole pwopagasyon PEDV, pifò kalite vaksen yo konstwi, tankou vaksen inaktif ak idroksid aliminyòm, vaksen bivalan inaktif vote Transmissible Gastroanteritis Viris (TGEV), ak vaksen PEDV, ak vaksen PEDV atenue [4]. Malgre ke vaksen sa yo jwe yon wòl enpòtan nan kontwole PED yo, yo tout gen defo yo. Vaksen inaktive pa ka aktive repons iminitè selilè, vaksen atenue pa trè an sekirite, epi yo pa ka pwovoke ase pwodiksyon antikò IgA espesifik viris nan repons iminitè mukozal yo. Se poutèt sa, li nesesè ak ijan pou devlope yon nouvo vaksen pou kontwole PED yo.

Lactobacillus casei souvan konsidere kòm yon kalite sistèm vektè ki an sekirite pou livrezon vize nan antijèn nan vaksen oral, ak efè benefisye sou sante moun ak bèt [5]. Pandan se tan, li ka itilize kòm yon sistèm livrezon kontwole repons selil T-helper la epi ankouraje sekresyon IgA espesifik pou iminite mukozal [6]. Nan lòt men an, vaksen recombinant Lactobacillus casei a pi fasil pou administre, mwens chans pou reyaksyon ipèsansibilite, epi li pi pri-efikas konpare ak vaksen tradisyonèl yo. Dapre rapò yo, vaksen recombinant Lactobacillus casei yo te itilize avèk siksè nan prevansyon ak kontwòl papillomavirus imen, nemoni Streptococcus, ak Escherichia coli [7-9]. Genyen tou kèk tantativ menm jan an nan konsepsyon vaksen PED. Chèchè yo te jwenn ke yon souch Lactococcus lactis recombinant ki eksprime yon varyant jèn dyare viris epidemi porsin S1 te kapab pwovoke nivo segondè IL-4 ak IFN- nan sourit iminize [10]. Vaksen anti-PEDV ki baze sou Lactobacillus casei ki eksprime peptide microfold ki vize selil Co1 kole ak antijèn COE PEDV te kapab tou pwovoke yon repons iminitè efikas [11]. Pou amelyore efikasite vaksen PEDV la. Nan etid sa a, nou konstwi yon nouvo vaksen recombinant Lactobacillus casei nan PED, ki ka ankouraje pi fò repons iminitè mukozal, imè, ak selilè kont enfeksyon PEDV atravè administrasyon oral. PEDV, yon manm nan fanmi coronaviridae, konsiste de kat pwoteyin estriktirèl ki genyen 150-220 kDa glycosylated Spike (S) pwoteyin, 20-30 kDa manbràn (M) pwoteyin, 7 kDa anvlòp (E) pwoteyin, 58 kDa. pwoteyin nukleokapsid (N) [12]. La, pwoteyin S la ka divize an domèn S1 (1-735 asid amine) ak S2 (736-dènye asid amine) [13], ak pwoteyin S1 a gen ladan rejyon ki reseptè-obligatwa a ak prensipal epitop netralize yo [ 14]. Adjuvant vaksen aji kòm yon imunomodulateur epi li ka pwovoke ak amelyore repons iminitè kont antijèn ko-delivre. Pwoteyin OMP16 nan souch Brucella abortus te verifye aktive selil dendritik nan vivo, pwovoke yon repons iminitè th1, e li te yon vaksen pwomèt pwòp tèt ou-adjuvant [15-17]. Se poutèt sa, pwoteyin OMP16 la te antre nan vaksen rekombinan ka Lacto bacillus nan etid nou an. Jiskaprezan, kèk etid sou Lactobacillus casei re recombinant vaksen PEDV yo te rapòte. Se poutèt sa, etid sa a gen pou objaktif pou konstwi yon nouvo vaksen oral kandida Lactobacillus casei, ki ka bay pi bon iminite umoral, iminite selilè, ak iminite mukozal pou anpeche pwopagasyon PED.

Chinwa zèb cistanche plant-Antitumor

Materyèl ak metòd

Tansyon bakteri, viris, kondisyon kilti, plasmid, ak primè

Cistanche poud

Tansyon bakteri, plasmid, ak primè yo itilize nan etid sa a ki nan lis nan Tablo 1. Souch referans estanda nan Lactobacillus casei ATCC 393 te kiltive nan de Man Rogosa ak Sharpe (MRS) bouyon nan 37 degre [18]. BL21 (DE3) ak DH5 yo te kiltive nan mwayen Luria-Bertani (LB) nan 37 degre [19]. Lactobacil lus casei recombinant, BL21 (DE3), ak DH5 tansyon yo te kiltive nan mwayen ki koresponn lan ak antibyotik apwopriye, respektivman. Brucella abortus te grandi nan Tryptic Soy Broth (TSB) oswa Tryptic Soy Agar (TSA) mwayen (Difco Laboratories, Detroit, MI, USA) nan 37 degre. Selil Vero ki enfekte ak tansyon PEDV yo te kiltive nan DMEM (Gibco, Langley, VA, USA) siplemantè ak 10 ug / mL tripsin (Gibco, Langley, VA, USA) [20]. Plasmid pVE5523 ak pET28a (+) yo te vektè ekspresyon Lactobacillus casei ak Escherichia coli, respektivman.

Tablo 1 Karakteristik tansyon bakteri, plasmid, ak primè yo itilize nan etid sa a

Konstriksyon recombinant Lactobacillus casei ak tansyon BL21

Plasmid ekspresyon recombinant yo te konstwi baze sou plasmid yo ak primè nan Tablo 1. Okòmansman, sekans pasyèl jèn PEDV S (493-708 asid amine), sekans pasyèl jèn PEDV S '(493-708 asid amine), ak sekans pasyèl jèn Brucella abortus OMP16 (26-168 asid amine) yo te anplifye lè l sèvi avèk pè primè PEDVS-F1/R1, PEDVS-F2/R2, ak OMP16-F/R, respektivman. Ansuit, yo te itilize metòd ekstansyon sipèpoze nan OMP16 ak fragman PEDVS pou konstwi yon nouvo fragman OMP16-PEDVS ak polipèptid linker (GGGGGSGGGGGGGGGS) kole nan mitan an. Lè sa a, fragman PEDVS yo te antre nan plasmid pET28a ak anzim restriksyon EcoRI/XbaI pou jenere plasmid recombinant pET28a-PEDVS, epi nouvo fragman OMP16-PEDVS yo te antre nan plasmid pET28a ak pVE5523 ak EcoRI/XbaI ak SalI/Eco. anzim restriksyon pou jenere plasmid recombinant pET28a-OMP16-PEDVS ak pVE5523-OMP16-PEDVS, respektivman. Plasmid recombinant yo (pET28a-PEDVS, pET28a-OMP16-PEDVS, ak pVE5523-OMP{16-PEDVS) te transfòme nan BL21 (DE3) oswa Lactobacillus casei ATCC393 pa transfòmasyon oswa elektwoporasyon ki baze sou papye a rapòte [21].

Analiz ekspresyon pwoteyin pa Western blot

Ekspresyon pwoteyin souch BL21-pET28a-PEDVS, BL21- pET28a-OMP16-PEDVS, ak L. casei-pVE5523-OMP16- PEDVS yo te detekte baze sou metòd rapòte a ak kèk modifikasyon [21-23]. Souch recombinant BL21-pET28a-PEDVS ak BL21-pET28a OMP16-PEDVS yo te kiltive nan bouyon LB epi yo te itilize IPTG pou rekòlte pET28a-PEDVS ak pET28a-OMP{{22} } Pwoteyin PEDVS. Vektè vid la te itilize kòm yon kontwòl negatif. Apre liz selil ak santrifujasyon, yo te kolekte supernatant ak sediman an. Lè sa a, pwoteyin sib yo te pirifye lè l sèvi avèk kolòn Nickel kwomatografi afinite ki baze sou etid anvan an [24]. Pandan se tan, souch kiltirèl recombinant L. casei pVE5523-OMP{16-PEDVS la te rekòlte tou pa santrifujasyon nan 9000×g pou 10 min nan 4 degre. Apre sa, echantiyon yo ak tanpon loading sodyòm dodecyl sulfat (SDS) yo te bouyi 10 minit. Pwoteyin yo te separe pa 12% sodyòm dodecyl silfat-polyacrylamide jèl elektwoforèz (SDS-PAGE) ak Lè sa a, transfere nan manbràn PVDF (Millipore, Mississauga, ON, Kanada). Mem branes yo te bloke ak 5% lèt ekreme pou 2 èdtan nan 37 degre ak Lè sa a, enkube ak murin monoklonal anti-kò nan pwoteyin S lannwit lan nan 4 degre ak HRP konjige kabrit anti-sourit IgG (ABclonal, Wuhan, Lachin) pou 2 èdtan nan 37 degre. Gwoup pwoteyin yo te vizyalize lè l sèvi avèk Clarity™ Western ECL Blotting Substrate (Bio-Rad, Hercules, CA, USA).

Vaksinasyon ak koleksyon echantiyon

Yo te evalye iminogenisite recombinant vaksen Lactobacillus casei lè l sèvi avèk sourit BALB/c fi ki gen sis semèn (SPF) [10, 18], ki te achte nan sant bèt Shandong Agricultural University. Yon total de 50 sourit yo te divize owaza nan 5 gwoup ak 10 sourit nan chak gwoup. Sourit yo te iminize ak vaksen recombinant Lactobacillus casei ak pwoteyin pirifye (pET28a-PEDVS, pET28a OMP16-PEDVS, pET28a-OMP{16-PEDVS+Freund a adjuvant konplè), respektivman. Yo te fè pwotokòl vaksinasyon an dapre Tablo 2 epi yo te bay yon vaksinasyon rapèl apre 13 jou. Pou etid serolojik la, yo te kolekte serom sou 0, 14, ak 28 jou apre vaksinasyon (dpi) atravè pwensonaj venn ke epi estoke nan -20 degre jiskaske yo itilize. Poupou yo te kolekte 1 jou anvan vaksinasyon an ak chak fwa pou ranfòse. Pou deteksyon IgA, poupou yo te dilye (w / v) ak 0.05 M sodyòm EDTA nan rapò 1: 4 jis apre koleksyon epi yo enkube pou 14 èdtan nan 4 degre apre bon melanje. Sipènatant la te kolekte pa 12,000×g santrifujasyon epi konsève nan -20 degre jiskaske yo itilize. Nan 28 dpi; Twa sourit ki soti nan chak gwoup yo te sakrifye epi yo te trete trip la pou deteksyon IgA dapre otè ki dekri deja [10, 18, 23].

Analiz detèminasyon nivo antikò

Nivo IgG nan sera ak IgA nan poupou yo te mezire pa metòd ELISA ak kèk modifikasyon [18, 23]. Metòd yo te jan sa a: Plak polistirèn microtiter yo te kouvwi lannwit lan nan 4 degre ak 100 μL 10 ug/mL PEDVS pwoteyin, OMP16-PEDVS pwoteyin, oswa 100 μL recombinant L. casei-OMP16-souch PEDVS. . Apre yo fin bloke ak 5% lèt ekreme, echantiyon yo kolekte yo te seri dilye nan PBS, yo te ajoute an triple, epi yo te enkube nan 37 degre pou 1 èdtan. Lè sa a, yon HRP-konjige kabrit anti-sourit IgG oswa IgA antikò (Invi trogen, USA) te ajoute nan chak pi (1:5000) ak enkubasyon pou 1 èdtan nan 37 degre. Plak mikwotir polystyrène yo te lave 5 fwa pandan chak etap. Nan dènye, yo te ajoute 100 μL nan substra TMB (tetramethylbenzidine ak H2O2) nan chak pi epi yo te ajoute 50 μL nan solisyon sispann apre 10 minit. Valè OD yo nan 630 nm yo te mezire lè l sèvi avèk yon lektè plak multimode (EnVision).

Esè netralizasyon viris

Yo te egzamine tit antikò netralize PEDV nan sera dapre metòd yo ak kèk modifikasyon [25, 26]. Yon ti tan, serom murine a te inaktive chalè (56 degre pou 30 min) ak Lè sa a, seri de-pliye dilye nan 96 plak byen (Corning, USA) ak triple nan chak echantiyon. Lè sa a, yon volim egal nan 200 TCID50 / 50 μL tansyon PEDV yo te ajoute nan 96 plak byen ak enkubasyon pou 1 èdtan nan 37 degre. Yo te ajoute melanj lan nan nouvo plak 96 byen ki kouvwi ak monokouch selil Vero epi enkube pou 1 èdtan nan 37 degre. Lè sa a, selil yo te lave ak enkube nan mwayen antretyen an nan 37 degre nan 5% CO2. Apre 2 jou, yo te obsève efè cytopathic (CPE) lè l sèvi avèk yon mikwoskòp Envèse, epi konsantrasyon nan gwosè net te defini kòm konsantrasyon ki pi ba nan antikò nan serik la.

Tablo 2 Pwotokòl iminitè sourit BALB/c

Deteksyon cytokine

Pou detekte sekresyon sitokin yo, yo te jwenn supernatant nan sourit laboratwa yo (0, 14, ak 28 jou). Nivo sekrete IL-4, IL-10, ak IFN- yo te detèmine lè l sèvi avèk twous ELISA komèsyal (Elabscience Biotechnology Co., Ltd., Wuhan) dapre rekòmandasyon manifakti a, respektivman. Cytokine te quantifye nan diferan koub estanda ki te prepare nan reyaktif estanda yo bay nan twous yo respektivman epi yo te detekte valè dansite optik (OD) nan 450 nm nan chak plak lè l sèvi avèk yon lektè plak multimode (EnVision) [23, 27].

Analiz estatistik

Tout done yo te jwenn nan omwen twa eksperyans endepandan, ak rezilta yo te prezante kòm mwayen ± devyasyon estanda (SD). Yo te fè analiz estatistik la lè l sèvi avèk tès T de-ke ak analiz yon sèl nan Graph Pad Prism 7.0 (GraphPad Software Inc., USA). Diferans enpòtan an te defini kòm ∗ p < 0.05, ak divès degre diferans enpòtan yo te deziyen kòm ∗∗ p < 0.01, ∗∗∗ ak p < 0.001, respektivman.

Rezilta yo

Verifikasyon an nan rekombinan Lactobacillus casei ak tansyon BL21

Pou verifye plasmid recombinant konstwi yo, plasmid ekspresyon recombinant pET28a-PEDVS, pET28a-OMP16-PEDVS, ak pVE5523-OMP16-PEDVS yo te dijere lè l sèvi avèk anzim restriksyon NcoI/XhoI, ak rezilta dijesyon anzim yo te montre nan Fig. 1. Gwosè yo nan gwoup sib nan elektwoforetogram yo te menm jan ak rezilta yo espere ak rezilta sekans endike ke plasmid yo ekspresyon recombinant pa montre okenn mitasyon. Rezilta sa yo te endike siksè konstriksyon pET28a-PEDVS, pET28a OMP16-PEDVS, ak pVE5523-OMP{16-PEDVS plasmid recombinant. Rezilta Western blot te montre ke pwoteyin recombinant pET28a-OMP16-PEDVS ak pET28a-PEDVS yo te eksprime nan supernatant BL21-pET28a OMP16-PEDVS ak BL21- tansyon pET28a-PEDVS, respektivman. Pwoteyin pVE5523-OMP{16-PEDVS te verifye tou nan sipènatan kiltirèl souch L. casei-pVE5523- OMP16-PEDVS. Gwoup espesifik ki soti nan Fig. 2 te montre ke pwoteyin recombinant pET28a-OMP16- PEDVS, pVE5523-OMP16-PEDVS, ak pET28a-PEDVS yo tout te rekòlte avèk siksè (Fig. 2).

Fig. 1 Rezilta dijesyon anzim nan plasmid recombinant. A: Rezilta dijesyon anzim plasmid pVE5523-OMP16-PEDVS la. M: D8000 ADN Nechèl Marker; 1: pVE5523-OMP16-PEDVS plasmid. B: Rezilta dijesyon anzim pet28a-OMP16-PEDVS ak plasmid pET28a-PEDVS. M: D8000 ADN Nechèl Marker; 1: pet28a-OMP16-PEDVS plasmid; 2: plasmid pET28a-PEDVS

Nivo antikò IgG nan serom sourit vaksen ak vaksen kandida yo

Pou evalye iminojenisite espesifik kandida vaksen yo te pwodwi yo, yo te chwazi sourit BALB/c epi divize an 5 gwoup. Lè sa a, nivo IgG nan serom ak IgA nan poupou yo te mezire ak twous ELISA komèsyal yo. Rezilta yo te revele ke pa te gen okenn diferans sibstansyèl nan nivo IgG nan mitan gwoup yo pran vaksen yo ak prèske pa gen okenn antikò IgG yo te jwenn nan tout sourit anvan vaksinasyon. Sepandan, yo te jwenn diferans ki genyen apre premye vaksen an ak nivo antikò IgG nan serom nan 28 jou yo te pi wo pase sa yo nan 14 jou. Pami 5 sourit gwoup yo, sourit yo vaksinen ak L. casei-OMP16- PEDVS ak BL21-OMP16-PEDVS-F te montre menm jan ak pi wo iminojenisite. Se poutèt sa, L. casei-OMP16- PEDVS ak BL21-OMP16-PEDVS-F te kapab pwodui pi gwo iminojenisite, ki te swiv pa BL21-OMP16- PEDVS. ak BL21-PEDVS (figi 3).

benefis sipleman cistanche-ogmante iminite

Klike la a pou w wè pwodwi Cistanche Enhance Immunity

【Mande plis】 Imèl:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Nivo antikò IgA nan poupou sourit vaksen ak vaksen kandida yo

Pou evalye iminojenisite espesifik kandida vaksen yo te pwodwi yo, yo te evalye nivo antikò IgA nan poupou sourit yo tou. Rezilta yo te montre ke pa te gen okenn antikò espesyal anti-PEDVS IgA te egziste anvan vaksinasyon an. Sepandan, gwo kantite antikò IgA nan poupou sourit L. casei-OMP16-PEDVS iminize BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21-OMP{{7} }PEDVS, ak sourit gwoup BL21-PEDVS nan 14 jou apre vaksinasyon an. Nan 28 jou apre vaksinasyon an, nivo antikò IgA sourit L. casei-OMP16-PEDVS vaksinen yo te rive nan pi gwo maksimòm yo. Pandan se tan, nivo antikò IgA nan lòt twa gwoup yo pa t 'prezante yon ogmantasyon evidan. Se poutèt sa, vaksen kandida L. casei OMP16-PEDVS la kapab ankouraje pi wo nivo antikò nan sourit vaksen yo konpare ak BL21- OMP16-PEDVS-F, BL21-OMP{ {18}}PEDVS, ak BL21- PEDVS sourit vaksinen (figi 4).

Fig. 2 Verifikasyon pwoteyin ekspresyon recombinant yo. M: makè pwoteyin; 1: pwoteyin sekretè fòm recombinant L. casei pVE5523-OMP16-PEDVS souch; 2: pwoteyin ki pirifye soti nan souch BL21- pET28a-OMP16-PEDVS; 3: pwoteyin ki pirifye ki soti nan souch BL21-pET28a-PEDVS

Nivo netralize antikò nan serom nan sourit vaksen yo

Pou evalye efè pwoteksyon kandida vaksen L. casei-OMP16-PEDVS, BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21- OMP16-PEDVS , ak BL21-PEDVS nan sourit, yo te mezire nivo antikò netralize yo. Rezilta yo te montre ke pa gen okenn antikò netralize te detekte anvan vaksinasyon an. Antikò netralize yo te detekte nan 14 jou apre vaksinasyon epi li te ogmante nan 14 jou apre vaksinasyon rapèl. Repons antikò nan sourit ki te resevwa L. casei-OMP16-PEDVS te genyen yon aktivite netralizasyon anti-PEDV pi fò pase sa nan sourit yo te administre oralman ak BL21-OMP16-PEDVS-F, BL. 21-OMP16-PEDVS, ak BL21-PEDVS. Se poutèt sa, vaksen kandida L. casei OMP16-PEDVS la kapab ankouraje pi wo nivo antikò netralize a, ki te swiv pa BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21- OMP{{ 24}}PEDVS, ak BL21-PEDVS (figi 5).

Nivo cytokine

Pou konpare nivo repons iminitè selilè L. casei-OMP16-PEDVS, BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21- OMP16-PEDVS, epi yo te detèmine sourit iminize BL21-PEDVS, IL- 4, IL-10, ak IFN-, respektivman. Rezilta yo te montre ke nivo cytokines IL-4, IL{-10, ak IFN- nan sera sourit yo te ba anpil epi yo pa t gen okenn diferans enpòtan anvan vaksinasyon an. Lè nou konsidere ke, chanjman ki sanble yo te obsève nan rezilta IL-4, IL-10, ak IFN-. Nan 14 jou apre vaksinasyon an, nivo IL-4, IL{-10, ak IFN- nan sourit L. casei-OMP16-PEDVS im vaksen yo te pi wo pase BL21- OMP16-PEDVS F, BL21-OMP16-PEDVS, ak BL21-PEDVS sourit vaksen yo. Nan 14 jou apre vaksinasyon rapèl la, yo te detekte yon nivo IL-4, IL{-10 ak IFN ki pi wo nan sourit L. casei-OMP16- PEDVS ki te pran vaksen an konpare ak nan lòt. twa gwoup. Se poutèt sa, vaksen kandida L. casei-OMP16-PEDVS te kapab ankouraje nivo ki pi wo IL{-4, IL{{-10, ak IFN-, ki te swiv pa BL21-OMP{{ 40}} PEDVS-F, BL21-OMP16-PEDVS, ak BL21-PEDVS (figi 6).

Fig. 3 Nivo antikò IgG nan vaksen kandida yo nan serom sourit vaksen yo. Yo te kolekte serom nan jou 0, 14, ak 28 jou anvan oswa apre vaksinasyon yo te egzamine atravè twous ELISA komèsyal yo, epi yo te mezire nan yon absòpsyon 450 nm. Ba yo reprezante mwayèn ± devyasyon estanda twa eksperyans endepandan. * p < 0.05, ** p < 0.01, ak **** p < 0.0001 reprezante ogmantasyon degre diferans enpòtan, respektivman, epi ns vle di pa gen okenn diferans enpòtan.

Diskisyon

Yon gwo epidemi PED ki te koze pa varyant PEDV te fèt nan mwa Oktòb 2010, ki te lakòz pèt ekonomik fòmidab nan Lachin ak nan tout mond lan [1]. Sepandan, tout vaksen tradisyonèl yo fèt baze sou souch klasik CV777 la ki pa ka bay ase pwoteksyon pou variant PEDV la [4]. Pou kontwole pwopagasyon PEDV epi redwi pèt ekonomik yo, yo fèt tou nouvo vaksen sou varyete PEDV. Kounye a, vaksen PEDV inaktive ak vaksen atenue souch Variant PEDV yo tout apwouve pa gouvènman Chinwa a e gen tout ekspozisyon pwomès kandida nan kontwole PED. Men, defo tou egziste nan de kalite nouvo vaksen yo. PEDV enfekte kochon atravè aparèy dijestif la epi li gen tropism tisi entesten. Se poutèt sa, iminite mukozal pi efikas pase iminite sistemik nan anpeche PEDV antre nan selil epitelyal entesten, ak vaksen yo dwe bay pwoteksyon mukozal efektivman nan aparèy la entesten. Se konsa, nan etid sa a, nou konstwi yon nouvo kalite vaksen ki ka ankouraje pi fò anti-PEDV-espesifik IgG ak IgA antikò. Lactobacillus casei gen pwopriyete potansyèl iminitè-modulatè kòm yon machin livrezon vaksen ak ekspresyon de konpoze byoaktif sou miray selil bakteri sa a ka ankouraje repons iminitè ki apwopriye [28, 29]. Li se lajman itilize pou eksprime plizyè antijèn heterol ogous nan papillomavirus imen, nemoni Streptococcus, ak Escherichia coli kòm vaksen nan modèl bèt, ki tout te montre ekselan iminojenisite [7-9]. Konpare ak vaksen an inaktive ak vaksen atenue, vaksen vektè Lactobacillus casei kapab tou ankouraje pi wo nivo IgA ak repons iminitè selilè. Etid yo montre ke premye liy defans IgA a nan trip la ta pi bon pase IgG nan pwoteje porsele kont enfeksyon PEDV [10, 30]. Se poutèt sa, li se pwomèt yo devlope yon kalite vaksen vektè Lactobacillus casei nan PED. Dapre rapò yo, pwoteyin S PEDV a ka divize an domèn S1 (1–735 asid amine) ak domèn S2 (736-dènye asid amine) [13], ak pwoteyin S1 gen ladan rejyon an reseptè-obligatwa ak la. prensipal epitop netralize [14]. Epitop netralize nwayo a (COE) ka pwovoke antikò netralize fò kont PEDV [31, 32]. Konbine avèk analiz antijenisite a, yo te chwazi yon sekans pasyèl nan jèn S1 (1477-2124 bp) pou konstwi plasmid recombinant la. Te chwazi ti fragman an te pwouve non sèlman gen bon jenisite iminitè, men tou kontribye nan ekspresyon an sekrete nan Lactobacillus casei. Nan lòt men an, Pasquevich te jwenn ke Brucella abortus ekstèn manbràn pwoteyin 16 te kapab aktive selil dendritik nan vivo, pwovoke yon repons iminitè th1, e li te yon pwomèt pwòp tèt ou-adjuvant vaksen kont bruseloz sistemik ak oral akeri [15]. Rechèch menm jan an ki unlipidated ekstèn manbràn pwoteyin omp16 soti nan Brucella spp. kòm yon adjuvant nen te kapab pwovoke yon repons iminitè th1 ak modile repons alèjik th2 nan pwoteyin lèt bèf tou te pwouve [16]. Se poutèt sa, yo te chwazi yon sekans pasyèl nan jèn omp16 pou konstwi plasmid recombinant pou amelyore fonksyon iminitè nan etid nou an. Pou konnen si vaksen nouvo Lactobacillus casei rekòmande a ta ka pwovoke repons iminitè umoral yo, yo te mezire IgG, IgA ak nivo antikò netralize yo. Nivo antikò IgG sourit vaksen vaksen recombinant L. casei-OMP16- PEDVS pa te gen okenn diferans enpòtan ak sourit vaksen vaksen BL21-OMP16-PEDVS-F re recombinant. Sepandan, IgA ak nivo antikò netralize yo te pi wo pase nan BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21-OMP16-PEDV S, ak BL{{47} }}PEDVS recombinant vaksen sourit imized. Rezilta yo te montre ke L. casei-OMP16-PEDVS te kapab pwovoke pi fò repons iminitè umoral, espesyalman nivo antikò IgA. Etid yo montre ke IgA se premye liy defans nan trip la epi li ta pi bon pase IgG nan pwoteje porsele kont enfeksyon PEDV [30]. Rechèch la te verifye tou rezilta ke vaksen recombinant L. casei-OMP16-PEDVS te kapab bay PEDV pi bon pwoteksyon iminolojik. Pou eksplore kalite repons iminitè a te pwovoke pa recombinant L. casei-OMP16-PEDVS, yo te detekte nivo IL{-4, IL{-10, ak IFN- pou evalye aktivite T. lenfosit. Dapre rapò a, IFN- jwe yon wòl enpòtan nan repons iminitè selilè ki te koze lè patojèn anvayi kò a, IL-4 jwe yon wòl enpòtan nan repons iminitè umoral la ak ankouraje tolerans iminitè ak iminite mukozal [33], IL -10 jwe wòl esansyèl nan batay kont enfeksyon mikwòb mikozal ak kenbe entegrite baryè mukozal nan trip la [34]. Pandan se tan, rezilta deteksyon cytokin yo te montre ke sourit yo vaksinen ak vaksen recombinant L. casei-OMP{16-PEDVS te kapab pwovoke ekspresyon pi fò nan IL-4, IL{-10, ak IFN-, ki te sipòte rezilta yo ke vaksen recombinant L. casei-OMP16-PEDVS te kapab pwovoke pi fò repons iminitè umoral, nivo antikò IgA, ak repons iminitè selilè, respektivman.

Fig. 5 Nivo antikò netralize vaksen kandida yo nan serom sourit vaksen yo. Serom yo te kolekte nan jou 0, 14, ak 28 jou anvan oswa apre vaksinasyon epi yo te egzamine pa tès netralizasyon. Ba yo reprezante mwayèn ± devyasyon estanda twa eksperyans endepandan. * p < 0.05, ** p < 0.01, ak **** p < 0.0001 reprezante ogmantasyon degre diferans enpòtan, respektivman, epi ns vle di pa gen okenn siyifikatif. diferans

Fig. 6 Deteksyon nivo cytokine nan serom sourit iminize yo. Serom yo te kolekte nan jou 0, 14, ak 28 jou anvan oswa apre vaksinasyon epi yo te egzamine avèk twous ELISA komèsyal yo. Valè absorpsyon an te mezire nan yon absòbe 450 nm pou IL-4 (a), IL-10 (b), ak IFN- (c), respektivman. Ba yo reprezante mwayèn ± devyasyon estanda twa eksperyans endepandan. * p < {{10}}.05, ** p < 0.01, ak **** p < 0.0001 reprezante ogmantasyon degre diferans enpòtan, respektivman

Konklizyon

An rezime, L. casei-OMP16-PEDVS, BL21-OMP16- PEDVS-F, BL21-OMP16-PEDVS, ak BL{{7 }}Vaksen kandida PEDVS yo te konstwi nan etid sa a. Pandan se tan, repons iminitè umoral la ak nivo repons iminitè selilè vaksen kandida sa yo nan sourit yo te evalye. Rezilta yo te montre ke sourit yo vaksinen ak L. casei-OMP16-PEDVS te kapab pwodui pi wo nivo IgG, IgA, antikò netralize, IL-4, IL- 10, ak INF- konpare ak sourit yo vaksinen ak BL21-OMP16-PEDVS-F, BL21-OMP16-PEDVS, ak BL21-PEDVS. Se poutèt sa, vaksen kandida recombinant L. casei OMP16-PEDVS la ka etabli baz pou devlopman yon vaksen recombinant mukozal san danje, efikas ak pratik pou prevansyon enfeksyon PEDV.

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

Referans

1. Wang D, Fang L, S X. Dyare epidemi porsin nan Lachin. Viris Res. 2016; 226:7–13.

2. Sueyoshi M, Tsuda T, Yamazaki K, Yoshida K, Nakazawa M, Sato K, et al. Yon ankèt imunohistochimik nan dyare epidemi porsin. J Comp Pathol. 1995;113(1):59–67.

3. Solèy RQ, Cai RJ, Chen YQ, Liang PS, Song CXJEID. Epidemi dyare epidemi porsin nan porsele tete, Lachin. Emerg Enfekte Dis. 2012; 18(1):161–3.

4. Tong YE, Feng L, Li W. Devlopman yon vaksen bi-konbine atenue kont viris gastroanterit transmissible ak viris dyare epidemi porsin. Chin J Prev Vet Med. 1999;21(6):35–9.

5. Pouwels PH, Leer RJ, Boersma WJ. Potansyèl la nan Lactobacillus kòm yon konpayi asirans pou vaksen oral: devlopman ak preliminè karakterizasyon nan sistèm vektè pou livrezon vize nan antijèn. J Biotechnol. 1996;44(1–3):183.

6. Tsai YT, Cheng PC, Pan TM. Biotechnologie: Efè imunomodulateur bakteri asid laktik pou amelyore fonksyon iminitè ak benefis yo. Appl Microbiol Biotechnol. 2012;96(4):853–62.

7. Adachi K, Kawana K, Yokoyama T, Fujii T, Tomio A, Miura S, et al. Vaksen oral ak yon vaksen Lactobacillus casei ki eksprime papillomavirus imen (HPV) tip 16 E7 se yon estrateji efikas pou pwovoke lenfosit sitotoksik mukozal kont HPV16 E7. Vaksen. 2010;28(16):2810–7.

8. Campos IB, Darrieux M, Ferreira DM, Miyaji EN, Silva DA, Arêas APM, et al. Vaksinasyon nan nen nan sourit ak Lactobacillus casei eksprime Pwoteyin Pneumococcal Sifas A: endiksyon nan antikò, depo konpleman ak pwoteksyon pasyèl kont defi Streptococcus pneumoniae. Mikwòb Enfekte. 2008;10(5):481–8.

9. Wen LJ, Hou XL, Wang GH, Yu LY, Wei XM, Liu JK, et al. Vaksinasyon ak souch Lactobacillus casei recombinant ki pwodui K99, ak pwoteyin fimbrial K88 pwoteje sourit kont Enterotoxigenic Escherichia coli. Vaksen. 2012;30(22): 3339–49.

10. Guo M, Yi S, Guo Y, Zhang S, Niu J, Wang K, et al. Konstriksyon yon souch lactococcus lactis recombinant ki eksprime yon varyant viris dyare epidemi kochon S1 ak analiz iminojenisite li nan sourit. Imunol viral. 2019;32(3):144–50.

11. Wang X, Wang L, Zheng D. Vaksinasyon oral ak yon vaksen Lactobacillus casei ki baze sou anti-porcine epidemi dyare viris (PEDV) vaksen eksprime microfold selil-sib peptide Co1 fusion ak antijèn COE nan PEDV. J Appl Microbiol. 2017;124(2):368–78.

12. Duarte M, Tobler K, Bridgen A, Rasschaert D, Ackermann M, H L. Analiz sekans nan genòm viris dyare epidemi kochon an ant nucleocapsid ak jèn pwoteyin Spike revele yon ORF polimòfik. Viroloji. 1994;198(2):466.

13. Lee DK, Park CK, Kim SH, Lee C. Eterojenite nan jèn pwoteyin Spike nan viris dyare epidemi porsin izole nan Kore di. Viris Res. 2010;149(2): 175–82.

14. Solèy DB, Feng L, Shi HY, Chen JF, Liu SW, Chen HY, et al. Rejyon pwoteyin Spike (aa 636789) nan viris dyare epidemi porsin la esansyèl pou endiksyon antikò netralize. Acta Virol. 2007;51(3):149–56.

15. Pasquevich KA, Garcia Samartino C, Coria LM, Estein SM, Zwerdling A, Ibanez AE, et al. Mwatye pwoteyin nan pwoteyin manbràn ekstèn Brucella abortus 16 se yon nouvo modèl molekilè bakteri patojèn ki asosye ki aktive selil dendritik nan vivo, pwovoke yon repons iminitè Th1, epi li se yon vaksen pwomèt pwòp tèt ou-adjuvant kont bruseloz sistemik ak oral akeri. J Immunol. 2010;184(9):5200.

16. Ibanez AE, Smaldini P, Coria LM, Delpino MV, Pacífico LGG, Oliveira SC, et al. Pwoteyin manbràn ekstèn ki pa likide Omp16 (U-Omp16) ki soti nan Brucella spp. kòm adjuvant nan nen pwovoke yon repons iminitè Th1 ak modil repons alèjik Th2 a pwoteyin lèt bèf. PLoS Youn. 2013;8(7):e69438.

17. Pasquevich KA, Estein SM, Samartino CG, Zwerdling A, Coria LM, Barrionuevo P, et al. Iminite: Vaksinasyon ak recombinant espès Brucella pwoteyin manbràn ekstèn Omp16 oswa Omp19 nan adjuvant pwovoke espesifik CD4+ ak CD{8+ selil T ansanm ak pwoteksyon sistemik ak oral kont enfeksyon Brucella abortus. Enfekte Immun. 2009;77(1):436–45.

18. Ma S, Wang L, Huang X, Wang X, Chen S, Shi W, et al. Vaksen Lactobacillus recombinant oral ki vize selil microfold entesten yo ak selil dendritik pou bay epitop netralize nwayo viris dyare epidemi porsin. Faktori Mikwòb Selil. 2018;17(1):20.

19. Chu S, Zhang D, Wang D, Zhi Y, Zhou P. Ekspresyon eterològ ak karakterizasyon byochimik nan nitrat asimilasyon ak nitrite reduktaz revele adaptasyon ak potansyèl nan Bacillus megaterium NCT -2 nan tè salinizasyon segondè. Int J Biol Macromol. 2017;101:1019.

20. Guo N, Zhang B, Hu H, Ye S, Chen F, Li Z, et al. Caerin1.1 siprime kwasans viris dyare epidemi kochon an vitro atravè lyezon dirèk ak viris la. Viris. 2018;10:9.

21. Chen Z, Lin J, Ma C, Zhao S, She Q, Liang Y. Biotechnologie: karakterizasyon pMC11, yon plasmid ki gen orijin doub nan replikasyon izole nan Lactobacillus casei MCJ ak konstriksyon vektè navèt ak chak replicon. Appl Microbiol Biotechnol. 2014;98(13):5977.

22. Xiaona W, Li W, Xuewei H, Sunting M, Meiling Y, Wen S, et al. Akouchman oral nan probiotik ki eksprime peptide dendritik ki vize selil ki kole ak viris dyare epidemi porsin COE Antigen: Yon estrateji vaksen pwomèt kont PEDV. Viris. 2017;9(11):312.

23. Bhuyan AA, Memon AM, Bhuiyan AA, Zhonghua L, Zhang B, Ye S, et al. Konstriksyon rekombinan Lactobacillus casei eksprime pwoteyin BVDV E2 ak repons iminitè li nan sourit. J Biotechnol. 2018;270:51–60.

24. Noi NV, Chung YCJB, Ekipman B. Optimizasyon ekspresyon ak pirifikasyon nan domèn S1 recombinant nan pwoteyin epidemi porsin dyare viris Spike (PEDV- S1) nan Escherichia coli. Biotechnol Biotechnol Ekip. 2017;31(2):1–11.

25. Li C, Li W, Esesarte E, Guo H, Elzen P, Aarts E, et al. Domèn atachman selil nan pwoteyin Spike viris dyare epidemi porsin yo se sib kle nan antikò netralize. J Virol. 2017;91(12):1–16.

26. Wen Z, Xu Z, Zhou Q, Li W, Wu Y, Du Y, et al. Administrasyon oral nan mikwosfè ki kouvri ak PEDV te pwovoke iminite espesifik PEDV nan porsele sevre. Vaksen. 2019;09(014):161–6.

27. Gao Q, Zhao S, Qin T, Yin Y, Yang Q. Efè viris dyare epidemi porsin sou selil dendritik porsin monosit ki sòti ak selil dendritik entesten. Veterinè Microbiol. 2016;106:149–58.

28. Bonet MEB, Chaves AS, Mesón O. Aktivite imunomodulateur ak anti-enflamatwa pwovoke pa administrasyon oral nan yon souch probyotik nan lactobacillus casei. Enflamasyon. 2006;4(1):31–41.

29. Grangette C, Müller-Alouf H, Geoffroy MC, Goudercourt D, Turner M, Mercenier A. Pwoteksyon kont toksin tetanòs apre administrasyon intragastric de bakteri asid laktik recombinant: enpak souch viabilite ak pèsistans in vivo. Vaksen. 2002;20(27–28):3304–9.

30. Song DS, Oh JS, Kang BK, Yang JS, Moon HJ, Yoo HS, et al. Oral efikasite nan selil Vero atténué porcine epidemi dyare viris DR13 souch. Res Vet Sci. 2007;82(1):134–40.

31. Makadiya N, Brownlie R, Jan V, Berube N, Allan B, Gerdts V, et al. Domèn S1 nan viris dyare epidemi porsin Spike pwoteyin kòm yon antijèn vaksen. Virol J. 2016;13:1.

32. Chang SH, Bae JL, Kang TJ, Ju K, Chung GH, Lim CW, et al. Selil: Idantifikasyon rejyon epitop ki kapab pwovoke antikò netralize kont viris dyare epidemi kochon an. Mol selil. 2002;14(2): 295–9.

33. Sumi T, Fukushima A, Fukuda K, Kumagai N, Nishida T, Yagita H, et al. Kontribisyon diferans B7-1 ak B7-2 nan devlopman konjonktivit alèjik eksperimantal murin. Immunol Lett. 2007;108(1):62–7.

34. Xue M, Zhao J, Ying L, Fu F, Li L, Ma Y, et al. IL-22 siprime enfeksyon kowonaviris enterik porsin ak rotaviris lè li aktive chemen siyal STAT3 la. Antivir Res. 2017;142:68–75.