Èske glikozid total cistanche gen efè sou olfactif?

Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Efè a nan glikozid total cistanche sou rat olfactif ensheathing selil ak sekresyon yo nan faktè nerotwofik.

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Blesi nan mwal epinyè (SCI) se yon blesi grav nan santral lasistèm nève, ki reprezante {{0}}.2 pousan —0.5 pousan nan chòk total. Nan ka zo kase epinyè, 16 pousan — 40 pousan yo konplike pa aksidan mwal epinyè, souvan kite gwo andikap, ki mennen nan Difikilte nan lavi chak jou ki afekte kalite lavi pasyan yo, ak sa ki lakòz yon gwo fado nan fanmi an ak sosyete a.Olfactifselil ensheathing (OEC) se yon kalite espesyal nan lakòl nè. Selil Plasma ka imigre nan sèvo a akolfactifaxons nè yo epi yo ka sekrete anpil faktè kwasans tankou NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptide-Y, ak S-100. Akòz karakteristik sa yo nanolfactifensheathing selil yo, OEC yo konsidere kòm youn nan selil grenn pwomèt pou transplantasyon selil pou repare SCI. Kounye a, tretman SCI nan domèn medikaman reyabilitasyon se sitou ki baze sou reyabilitasyon konplè. Yo nan lòd yo jwenn yon metòd pi efikas, rechèch sa yo te fèt sou efè a nansistanchtotalglikozidsou OECs:

Cistanche total glycoside pou selil olfactif ensheathing

1 Materyèl ak metòd

1.1 Materyèl eksperimantal

Wistar rat (ki bay nan Sant Animal nan Inner Mongolia University);sistanchtotalglikozid, DMEM/F12 medyòm, serom ti towo bèf fetal (FCS), poly-D-lysine, arabinoside (Ara-C), tripsin, solisyon D -Hanks, lapen anti-p75NGFR (Santa Cruz), ELISA twous (Promega), enkibatè selilè (Thermo-HEPA Klas 100), mikwoskòp envès faz-kontras (Olympus CKX41, Japon), ultra-pwòp workbench (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Konpayi an, SW-CJ -2FD), anzim analizeur etikèt (Wellscan MKH), sitomèt koule, elatriye.

1.2 Metòd rechèch

1.2.1 Kilti OEC, pirifikasyon, ak idantifikasyon: rat Wistar yo te sakrifye pa dekapitasyon epi yo tranpe nan diven pou 5 minit. Zo bwa tèt antérieure a te ouvè pou ekspoze aolfactifanpoul. De laolfactifanpoul yo te konplètman retire anba yon mikwoskòp dissekting. Lave nan solisyon D-Hanks; koupe aolfactifanpoul ak sizo mikwochirijikal, ajoute 2ml 0.25 pousan pankreatin epi enkube a 37 degre pou 20 minit; ajoute D MEM/F12 kilti medyòm ki gen 10 pousan serom ti towo bèf nan yon tib santrifujeur 2ml Dijesyon te sispann nan mitan an; pipèt otobis la aspire tisi ki enkonplètman dijere a nan 800 rpm epi santrifuje pou 5 minit, jete supernatant la; finalman itilize mwayen an kondisyone (20 pousan FCS plis 20|i, mol/LForskolin plis 20|ig/mlBPE plis DMEM /F12) Fè li nan lx 107ml sispansyon sèl-selil, vaksinen li nan yon flacon kilti selil polylysine-kouvwi, kote li nan yon enkibatè 37 degre, 5 pousan CO2, ak Lè sa a, ajoute Ara-c Pirifikasyon te pote soti nan 36h. Sèvi ak lapen anti-p75E ak FITC ki make antikò kabrit anti-lapen IgG segondè pou idantifikasyon selil imunohistochimik ak obsèvasyon mikwoskòp fluoresans.

1.2.2 Sèvi ak MTT ak sikometri koule pou detèmine efè acistanche total glikozidsouolfactifensheathing selil: inokulasyon kiltive a ak pirifyeolfactifanvwaye selil yo nan yon 96-plak byen nan 1X106, epi ajoutecistanche total glikozid(Konsantrasyon aksyon yo se Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), mezire valè OD a epi mezire sikometri sikilasyon selilè apre 24 èdtan nan aksyon. Mete kanpe gwoup kontwòl akCistanche total glikoziddiferan gwoup konsantrasyon: Gwoup A (Gwoup Kontwòl): se mwayen kilti ki gen serom itilize kòm yon kontwòl negatif; Gwoup B (cistanche total glikozidgwoup konsantrasyon ba: lig / ml); Gwoup C (cistanche total glycosides mwayen konsantrasyon Gwoup: L10jxg/MK); Gwoup D (cistanche total glikozidGwoup konsantrasyon: 100|xg/mlo): 15 rat nan chak gwoup.

1.2.3 Detèminasyon kontni faktè nerotwofik nan supernatant la pa ELISA: inokulasyon kiltive a ak pirifyeolfactifensheathing selil yo nan yon 6-plak byen nan 1x106, ajoutecistanche total glikozid(menm konsantrasyon an kòm pi wo a) apre 24 èdtan epi aji pou 24 èdtan, epi kolekte supernatant la separeman, Sove nan -80 Long. Kontni an nan faktè kwasans nè nan likid la te detèmine pa metòd la ELISA.

1.3 Analiz estatistik

Yo trete done yo nan etid sa a kòm done mezi, epi done yo jwenn yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda, epi yo itilize lojisyèl estatistik SPSS 11.0 pou analiz estatistik. Done yo jwenn yo analize pa analiz divèjans, ak P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 Rezilta

2.1 Efè a nansistanchglikozid total souolfactifensheathing selil yo

2.1.1 Methyl oxazolyl tetrazol metòd (MT) rezilta detèminasyon: Gwoup A: 0.617±0.149; Gwoup B: 0.589±0.147; Gwoup C: 0.761±0.138; Gwoup D: 0.732±0.234. Konparezon antCistanche total glikozid group (B) and Control group (A), P>0.05, diferans lan pa t enpòtan;Cistanche total glikozid10mg/ml, 100mg/ml gwoup konsantrasyon (C, D) konpare ak gwoup kontwòl (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Rezilta detèminasyon sikometri koule yo montre nan Figi 1. Konpare ak gwoup kontwòl la,cistanche total glikozidgwoup la te pi wo pase gwoup kontwòl la, ak pousantaj selil apoptotik te pi ba pase gwoup kontwòl la.

2.2 Rezilta tès imunosorban ki lye ak anzim (ELISA).

Rezilta tès yo te montre ke kontni an nan faktè neurotrophic glial-selil-liy ki sòti (GDNF): anvan dòz: 302.1±16.6 pg/ml, gwoup A: 340.5±13.2pg/ml; gwoup B: 333.2±23.6pg/ml; Gwoup C: 355.2±17.6pg/ml; Gwoup D; 379.2±15.3pg/ml. Konpare ak pre-administrasyon an, kontni an GDNF te siyifikativman ogmante; konpare ak gwoup kontwòl (A), kontni GDNF nanCistanche total glikozid100mg/ml konsantrasyon gwoup (D) te siyifikativman ogmante.

3 Diskisyon

Difikilte pou rejenerasyon axons se youn nan rezon prensipal poukisa li difisil pou refè apre blesi nan mwal epinyè. OEC yo gen yon wòl nan rejenerasyon axons newòn santral ke lòt kalite selil yo difisil pou ranplase. Nan dènye ane yo, rechèch la nanolfactifselil ensheathing te vin tounen yon kote ki cho.Olfactifselil ensheathing yo se yon kalite espesyal selil glial ki gen karakteristik selil Schwann ak astwosit. Yo soti nanolfactifmanbràn sousòl epi yo lajman distribiye sou sifas laolfactifmukoza,olfactifnè, akolfactifanpoul. Li gen kapasite pou divize ak rejenere pou lavi epi li ka akonpaye laolfactifaxons nè yo pou imigre nan sèvo a. Axons yo nanolfactifnè ka pase nan junction ant sistèm nève periferik la ak sistèm nève santral la chak 30-60 jou, re-grandi nanolfactifdjenn epi etabli koneksyon sinaptik4.Olfactifselil ensheathing yo ka sekrete anpil faktè kwasans tankou NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptide-Y, ak S-100. Etid yo montre ke faktè kwasans nè (NGF) ka anpeche newòn nwayo wouj epinyè soti nan atrofye ak ranfòse aparèy kortikospinal Sprout la ak ankouraje rejenerasyon nan nwayo wouj nwayo epinyè nè kòd la; tou de faktè nerotwofik ki sòti nan sèvo (BDNF) ak neurotrophin-3 (NT{-3) ka anpeche nwayo wouj apoptoz selil epinyè nan rat adilt ki gen blesi axotomize epi sove newòn ki mouri epi ankouraje rejenerasyon axonal P. An plis,olfactifselil ensheathing tou eksprime lòt faktè sou manbràn selilè yo, tankou faktè adezyon selil nève (N-CAM), ki patisipe nan adezyon selilè ak kwasans axon. Akòz karakteristik sa yo nanolfactifensheathing selil yo, OEC yo konsidere kòm youn nan selil grenn pwomèt pou transplantasyon selil pou repare SCI.

Konpozan chimik yo nanCistanchesitou gen ladan glikozid phenylethanoid, iridoid, konpozan temèt, lignans, polisakarid, ak alkaloid. Etid la te jwenn saCistancheak eleman chimik li yo gen efè neuroprotective. Deng et al. etidye efè tubulosa B sou apoptoz newòn SH-SY5Y pwovoke pa faktè nekroz timè (TNF). Rezilta yo te montre ke apre 100ug/ SH-SY5Y newòn yo apre 36 èdtan nan tretman TNF pa L te montre karakteristik tipik apoptoz, pandan y ap tretman an nan tubulin B pou 2 èdtan ta ka siyifikativman diminye apoptoz la pwovoke pa TNF. Anplis de sa, etid yo te montre tou ke glikozid phenylethanoid ka anpeche apoptoz nan selil rat serebeleu granules pa anpeche caspase -3 ak kaspase -8, ak kont nwa a sourit C57 ki te koze pa methyl phenyl tetrahydropyridine (MPTP). Domaj nan bon jan kalite newòn dopaminergic gen yon efè pwoteksyon. Se pa sèlman sa, menCistanchekapab tou soulaje domaj divès kalite tankou ischemi-reperfusion nan sistèm nève a. Eksperyans blesi ischemi nan sèvo sourit montre ke seri a enfaktis 24h ak 48h apre iskemi nan gwoup ischemi-reperfusion serebral la se 72.98 pousan ak 60.45 pousan an mwayèn. Kontrèman, lasistanchtotal glikozid gwo, mwayen, ak gwoup dòz ki ba (250.0mg·kg/j; 125.0mg·kg/j; 62.5mg·kg/j) respektivman ka fè sèvo sourit yo. apre serebral ischemi-reperfusion 24h Gwosè enfaktis la te redwi a 25.94 pousan, 25.81 pousan, ak 31.13 pousan, ak gwosè a enfaktis serebral te redwi a 22.14 pousan, 20.06 pousan, ak 22.27 pousan apre 48 èdtan. Te gen yon diferans enpòtan ant de la, ki montre yon efè inhibition enpòtan sou apoptoz newòn.

Nan etid sa a, diferan konsantrasyon nancistanche total glikozidyo te aplike nan OECs. Metòd MTT ak mezi sikometri koule konfime ke 10mg/ml100mg/mlcistanche total glikozidka ankouraje pwopagasyon deolfactifensheathing selil yo. Rezilta yo nan sitometri koule te montre sacistanche total glikozidka ankouraje pwopagasyon deolfactifensheathing selil Li sitou ankouraje pwopagasyon sik la G1 nanolfactifselil espèm ak siyifikativman diminye selil apoptotik. Se poutèt sa,Cistanche total glikozidka pa sèlman ankouraje pwopagasyon nanolfactifensheathing selil yo, men tou ogmante aktivite selil yo ak anpeche apoptoz yo. Anzim-lye tès imunosorbent pwouve saCistanche total glikozidka siyifikativman ankouraje sekresyon GDNF paolfactifensheathing selil yo. Rezilta ki anwo yo bay yon baz eksperimantal pou aplikasyon klinik laCistanche total glikozid.

Referans

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, et al. Faktè ki afekte kalite lavi pasyan ki gen blesi nan epinyè pandan reyabilitasyon [J]. Chinese Journal of Medsin Reyabilitasyon, 2009, 4 (24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Lamina pwòp akolfactifselil ensheathing towo bèf montre entegrasyon diferans ak migrasyon epi ankouraje axon deferans pouse nan mwal epinyè blese a [J]. J Neurosci,2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. selil ensheathing olfactif: wòl yo nan reparasyon sistèm nève santral [J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotans nan pirifye. transplantasyon selil fondamantal glikoz nanolfactifepitelyòm [J]. J Comp Neurol,2004, 46914):457—474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. BDNF-eksprime selil marostromal; sipòte kwasans axonal vaste nan sit d blesi nan mwal epinyè [J]. Exp Neurol, 2005,191(2):344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, et al. Efè pwoteksyon tubulosa B sou apoptoz TNF-induit nan selil newòn [J]. Acta Pharmacol Sin,2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.Phenylethanoidglikozidsoti nanCistanchessalsa anpéché apoptoz pwovoke pa 1-methyl-4- iyon fenilpiridinyòm nan newòn [J]. J Ethnopharmacol,2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Song L.Pu X, et al. Efè neropwotektif