Efè terapetik nan Cistanoside A sou metabolis zo nan sourit ovariectomized

1. Entwodiksyon

Osteyopowoz la, yon "asasen an silans" skelèt sistemik, te vin tounen yon gwo danje pou sante aflije plis pase 2000 milyon moun atravè lemond nan dènye ane yo. Li karakterize pa dansite mas zo ki ba (BMD) ak deteryorasyon mikwo-achitekti, ki sòti nan yon eksè de resorption zo sou fòmasyon zo epi, finalman, rezilta nan ka zo kase osteyoporotik. Sèjousi, idantifikasyon ajan pou bloke diferansyasyon osteyoklastik ak resorption se estrateji komen ak siksè pou devlopman dwòg ki ka geri pou maladi osteyopowoz la, e gen anpil ajan sentetik, ki gen ladan valerat estradiol ak sodyòm alendronate, ki ta ka.anpeche ak trete osteyopowoz la. Sepandan, dwòg yo pou maladi yo lwen ideyal; kèk nan dwòg sa yo ta ka ogmante risk pou andometri ak kansè nan tete epi tou gen yon degre nan efè segondè, tankou hypercalcemia, hypercalciuria, elatriye, ki limite aplikasyon klinik yo. Se poutèt sa, pou plis pase yon milenè, medikaman tradisyonèl Chinwa (TCM), espesyalman manjab TCM ak konpoze bioaktif izole ak fraksyon, yo te itilize anpil san danje epi efektivman nan peyi Azyatik yo anpeche ak trete divès maladi, ki gen ladan osteyopowoz la.

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOZA POU TRETE AK PREVENTION MALADI OSTEOPOROZ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Osteyopowoz la karakterize kòm resorption zo améliorée akòz ogmante osteoclastogenesis, ak pwosesis sa a enplike nan angajman monosit ematopoyetik nan precurseur osteoclast, ki fuse yo fòme osteoclast miltinucleated ki vize sit zo yo sibi renovasyon [4]. Aktivatè reseptè pou nikleyè faktè-κB ligand (RANKL), yon faktè kle ki sekrete nan osteoblasts, stimul diferansyasyon monosit nan osteoclasts [8,9]. Entèraksyon RANKL ak RANK reseptè li yo lakòz yon kaskad evènman intraselilè, ki gen ladan NF-κB, PI3K/Akt, ak kinaz kalsyòm/kalmodulin-depandan lè yo rekrite faktè ki asosye ak reseptè TNF pwoteyin siyal adaptè (TRAF6). Kòm yon rezilta, plizyè jèn makè ki gen rapò ak osteoclast, ki gen ladan TRAP, cathepsin K, ak DPD, yo regilasyon, ak pwosesis la nan resorption zo akselere.

Phenylethanoid glikozid yo karakterize pa asid sinnamik ak idwoksil fenil etil mwatye ki tache ak yon -glucopyranose (apioz, galaktoz, rhamnose, xylose, elatriye) atravè yon kosyon glikozidik, ki lajman distribiye nan plant medsin [10]. Cistanoside A (Cis A) se yon aktifphenylethanoid glikozidnan Cistanche deserticola YC Ma. Dapre dosye famakope Chinwa a, C. deserticola te tradisyonèlman itilize pou trete deficiency nan ren-yin, feblès nan misk, feblès lonbèr, elatriye, ak glikozid phenylethanoid yo se eleman prensipal yo bioaktif nan zèb sa a [11]. Ki baze sou teyori 'ren' TCM a, ren an ta ka gouvène sistèm zo a, ki vle di devlopman ak fonksyon zo yo depann de sans nan ren, ak sans sa a ren ka transfòme nan mwèl zo a pou nouri zo yo. ankouraje kwasans ak reparasyon nan kilè eskèlèt la ak ranfòse kilè eskèlèt la [12]. Kòm C. deserticola te kapab ranfòse ren an, nou te sipoze ke Cis A te kapab anpeche ak trete osteyopowoz la. Etid la prezan te Se poutèt sa fèt valide potansyèl la nanCis A nan anpeche maladi osteyopowoz lalè l sèvi avèk yon modèl sourit ovariectomized, ak fòmasyon zo ak makè resorption, osi byen ke mekanis potansyèl ki gen rapò yo te detèmine pou estime byoaktivite antiosteyopowotik nan ajan sa a.

2. Rezilta ak Diskisyon

2.1. Rezilta yo

2.1.1. Efè Cis A sou tès koube twa pwen zo yo

Pou analize si tretman ak Cis A fè zo a pi fò, nou sibi femur nan tès la koube twa pwen. Jan yo montre nan Figi 1, chaj maksimòm ki te aplike lè zo a kase te 21.5% ak 22.0% pi wo nan bèt yo trete ak 20 mg/kg ak 80 mg/. kg Cis A, respektivman, konpare ak bèt nan gwoup la ovariectomized (OVX) (p <0.05). Pandan se tan, tretman ak Cis A tou amelyore rèd zo a; tout sourit Cis A-trete yo te montre siyifikativman ogmante rèd ak done 121.0 ± 12.1 (p <0.05), 124.1 ± 16.2 (p <0.05) ak 127.7 ± 9.6 (p <0.01), respektivman, lè yo konpare ak 102.2 ± 10.7 sourit OVX yo. Rezilta yo endike ke fòs nan zo ogmante nan sourit OVX yo trete ak Cis A te akòz yon kantite lajan ogmante nan zo ak yon amelyorasyon nan bon jan kalite zo.

2.1.2. Efè Cis A sou Microarchitecture zo

Twa dimansyon trabecular zo mikrochitekti sourit mezire pa mikwo-CT (Figi 2 ak Tablo 1) entwitif montre ke sourit yo nan gwoup la OVX prezante yon rediksyon remakab nan zòn nan trabecular ak nimewo trabecular lè yo konpare ak gwoup la sham, ki endike ke ovariectomy. ka pwovoke yon diminisyon remakab nan dansite mas zo (BMD, -46%), kontni mineral zo (BMC, -66%), kontni mineral tisi (TMC, -85%), fraksyon volim zo (BVF, -82%), nimewo trabecular (Tb. N, -76%) ak yon ogmantasyon nan separasyon trabecular (Tb. Sp, +80%) san okenn modifikasyon nan dansite mineral total tisi (TMD) ak epesè trabecular (Tb. Th) apre a. operasyon nan 12 semèn. Sepandan, sourit OVX yo trete ak Cis A te lakòz yon ogmantasyon depann de dòz la nan BMD (+43% ~ 57%), BMC (+65% ~ 73%), TMC (+83% ~). 90%), BVF (+80% ~ 88%), pi gwo rediksyon nan Tb. Sp (-79% ~ 88%) ak plis amelyore Tb. N (+73% ~ 82%) konpare ak gwoup OVX la. TMD te sanble pa te enfliyanse pa ovariectomy a men li te siyifikativman ogmante pa tretman ak estradiol valerate (EV).

2.1.3. Efè Cis A sou tou de fòmasyon zo ak makè resorption

Efè Cis A sou makè resorption zo yo, ki gen ladan TRAP, DPD, kathepsin K endèks fòmasyon zo ALP, ak zo Gla-pwoteyin (BGP), yo montre nan Figi 3. Apre 12 semèn nan operasyon ovariectomy, aktivite yo nan TRAP, DPD. , ak cathepsin K nan gwoup la OVX yo te ogmante siyifikativman, espesyalman DPD, ki te ogmante pa prèske 55.6%; TRAP ak cathepsin K te ogmante pa 43.5% ak 38.1%, respektivman, an konparezon ak gwoup la simulation. Cis A, administre oralman pou 12 semèn, demontre yon potansyèl remakab nan anpeche tout makè resorption zo yo mansyone anwo a, espesyalman gwo dòz (80 mg/kg) ki montre yon efè enpòtan sou siprime aktivite DPD. pa 45.0%, TRAP pa 49.0% ak kathepsin K pa 44.0%, respektivman (p <0.01), an konparezon ak la. Gwoup OVX (Figi 3). Malgre ke yon tandans ogmante nan aktivite ALP ak BGP te demontre nan gwoup la OVX, pa gen okenn chanjman estatistik enpòtan yo te obsève. Sepandan, yo te obsève yon amelyorasyon siyifikatif nan aktivite ALP nan gwoup ki ba ak segondè-Cis A-trete an konparezon ak gwoup la fo (p <0.01).

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOZA POU PREVENTION MALADI OSTEOPOROZ 75% ECH 30% ACT 12%

2.1.4. Efè Cis A sou nivo ekspresyon pwoteyin TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG ak RANKL

Analiz Western blot te revele ke konpare ak gwoup la simulation, nivo pwoteyin TRAF6, NF-κB, ak RANKL nan gwoup OVX la te siyifikativman ogmante (p < 0.0 5), pandan y ap OPG, PI3K, ak Akt te siyifikativman diminye (Figi 4). Cis A (20 mg / kg oswa 80 mg / kg) siyifikativman downregulated ekspresyon TRAF6 (p <0.05), ki te swiv pa ekspresyon RANKL la te diminye ak OPG ogmante, ki vle di rapò a OPG / RANKL te upregulated. Kontinwe, kaskad siyal yo nan NF-κB yo te downregulated ak PI3K / Akt te upregulated pa tretman Cis A (p <0.05).

2.2. Diskisyon

Bay limit yo nan opsyon ki ka geri aktyèl pou maladi osteyopowoz la, gen yon bezwen pou altènativ soti nan manje oswa plant natirèl manjab medsin. Kòm yon pati nan efò kontinyèl nou pou dekouvri ajan antiosteyopowotik efikas nan TCM, nou te jwenn yon seri ekstrè, fraksyon, ak konpoze ki genyen efè a nan pwopriyete antiosteyopowotik [13,14]. Cistanche deserticola se yon TCM klasik enpòtan, ki te jwenn yon pwofil sekirite favorab [15] ak gwo fonksyon medsin pou tretman defisyans ren, elatriye [16]. Dapre teyori a nan TCM, TCM ki posede efè dinamize ren yo te anjeneralitilize pou trete osteyopowoz la; phenylethanoid glikozid yo se eleman prensipal byoaktif nan zèb sa a, kidonk vle di saglikozid feniletanoidki genyen nan C. deserticola ka posede yon pwopriyete antiosteyopowotik. Li te pwouve ke C. deserticola ekstrè ta ka siyifikativman anpeche rediksyon nan BMD ak anpeche deteryorasyon nan mikrochitekti trabecular ki te koze pa OVX [17]. Nan eksperyans nan vitro, li te ogmante tou siyifikativman ALP, pwoteyin morfogenetik zo -2, ak osteopontin mRNA, osi byen ke mineralizasyon zo nan osteoblast kiltive [18]. Echinacoside, yon eleman prensipal byoaktif nan C. deserticola ofisyèlman anrejistre nan famakope Chinwa a [11], ekspoze aktivite antiosteyopowotik ak yon dòz segondè nan 30 ~ 270 mg / kg pwa kò / jou [19], ak plis rezilta in vitro te montre ke li te kapab ankouraje rejenerasyon zo lè yo ogmante rasyon OPG/RANKL nan selil MC3T3-E1 Subclone 14 [20]. Cis A se te youn nan glikozid phenylethanol izole nan C. deserticola, ak plizyè rapò revele ke konpoze sa a posede aktivite antioksidatif [21] ak pwopriyete anti-enflamatwa [22,23]. Yon papye ki fèk pibliye te dekouvri ke Cis A te montre aktivite pwoteksyon sou tou de CCl4 ak epatotoksisite alkòl-pwovoke nan sourit, epi li te montre tou yon pwopriyete pwoteksyon sou domaj etanòl-pwovoke nan epatosit prensipal kiltive sourit nan vitro [24]. Nan etid nou an, rezilta yo te montre ke Cis A te posede aktivite antiosteyopowotik nan yon dòz ki ba (20 ~ 80 mg / kg pwa kò / jou) lè l sèvi avèk yon modèl sourit ovariectomized, ak byoaktivite sa a te egzèse pa downregulating nivo a nan TRAF6, siprime. ekspresyon an nan RANKL ak NF-κB ak eksitan OPG, PI3K ak Akt, ki vle di efè a terapetik nan Cis A nan sourit OVX te atravè mekanis nan TRAF6-medyatè NF-kappaB inactivation ak deklanchman PI3K/Akt.

Li se byen li te ye ke ovariectomy ka lakòz osteyopowoz ak yon diminisyon evidan nan BMD, fòs byomekanik, bon jan kalite zo, ak mikrochitekti zo trabekulèr, ak chanjman ki anwo yo se an pati akòz defisi estwojèn [25]. Koulye a, nan prezan nan eksperyans nan vivo, etid nou an demontre ke osteyopowoz òvèj-pwovoke te lakòz yon rediksyon enpòtan nan fòs byomekanik ak paramèt estriktirèl trabekulèr, ki gen ladan BMD, BMC, TMC, ak Tb. N, ak ogmante Tb. Sp; ak tretman nan Cis A siyifikativman amelyore pwopriyete mekanik zo ki gen ladan chaj maksimòm ak rèd, amelyore BMD a, ak amelyore pi fò nan zo trabecular mikrochitekti paramèt estriktirèl yo an konparezon ak sourit yo nan gwoup la OVX, ki endike ke Cis A te efikas nan amelyore kalite zo yo. ak mikrochitekti trabekulèr nan sourit OVX.

Anplis total BMD la, tès koube twa pwen ak mezi mikrochitekti zo trabekilè te kapab dirèkteman fè dyagnostik osteyopowoz la, makè fòmasyon zo yo, ki gen ladan ALP ak BGP, ak endèks resorption zo a, ki gen ladan TRAP, DPD, ak cathepsin K, te tou anplwaye pou elicide mekanis antiosteyopowotik ki gen rapò ak Cis A. Nan etid nou an, aktivite ALP nan sourit gwoup OVX yo te demontre yon tandans ogmante ki pa enpòtan, ki endike yon ogmantasyon pousantaj woulman zo [26,27] nan osteyopowoz postmenopoz; segondè (80 mg / kg pwa kò / jou) ak ba (20 mg / kg pwa kò / jou) nan tretman Cis A te montre amelyorasyon siyifikatif sou aktivite ALP konpare ak gwoup la simulation, tandiske aktivite BGP te sanble pa dwe enfliyanse pa. ovariectomy a nan tout gwoup trete; TRAP, DPD, ak cathepsin K te ogmante siyifikativman nan gwoup OVX a, ak administrasyon Cis A miyò diminye tout twa makè resorption zo yo. Done ki anwo yo te implique ke Cis A te posede potansyèl aktivite antiosteyopowotik, e efè sa a te egzèse pa règleman metabolis zo, ki gen ladan tou de siprime resorption zo ak ogmante fòmasyon zo.

Kowòdinasyon ki genyen ant osteoblast ak osteoclast se yon faktè kritik nan antretyen nan entegrite skelèt. Osteoclasts, ki eksprime TRAP, tache ak sifas zo a atravè fòmasyon nan zòn sele aktin-bound, nan ki anzim pwoteolitik, tankou kathepsin K, yo lage, ki mennen nan fòmasyon nan twou resorption. Se RANKL ak OPG modulasyon nan osteoklastogenesis pa selil frelikè nan liy lan osteoblastik [28]. OPG se yon reseptè dekoy ki anpeche aktivasyon RANKL nan osteoklastogenèz, kidonk diminye resorption zo. RANKL, ki bay yon siyal enpòtan pou progenitors osteoclast, se yon molekil manbràn nan fanmi ligand faktè necrosis timè ki ankouraje fòmasyon osteoclasts. Yo kwè rapò nan ekspresyon OPG / RANKL se yon paramèt kle nan aktivite osteoclastogenic, ak kaskad siyal aktive pa RANKL gen ladan chemen NF-κB ak PI3K [29]. Enpòtans ki genyen nan chemen NF-κB nan osteoclastogenesis demontre pa lefèt ke sipresyon NF-κB nan sourit te lakòz absans osteoclast matirite [30]. TRAF6 te pwouve kòm yon sib pwomèt pou nouvo dwòg anti-osteyoporotik. Sourit TRAF6-defisyan ki montre osteoclastogenesis defo ak osteopetrosis grav konsa demontre enpòtans TRAF6 nan metabolis zo yo. Prèv émergentes montre yon fonksyon regilasyon kritik pou TRAF6 nan kaskad siyal RANKL / RANK-medyatè [4,31]. Done etid aktyèl la endike ke tretman Cis A sou sourit OVX yo te lakòz downregulation nan nivo ekspresyon pwoteyin TRAF6, diminye RANKL, ak ogmante ekspresyon OPG kidonk anpeche deklanchman RANKL nan en NF-κB ak aktive chemen siyal PI3K/Akt, Sigjere ke Cis A inibit diferansyasyon osteoclast pa TRAF6-medyatè NF-kappaB inaktivasyon ak aktivasyon PI3K / Akt ak ogmante rapò a OPG / RANKL, imedyatman anpeche osteoclastogenesis ak fè pwomosyon fòmasyon zo.

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POUAKTIVITE ANTIOSTEOPOROTICPHGS75% ECH 30% ACT 12%

3. Materyèl ak Metòd

3.1. Materyèl Plant, Preparasyon ak Detèminasyon

Tij Cistanche deserticolaYC Ma, pwofesè Xue-yan Fu idantifye nan Depatman Famasi, Ningxia Medical University, te kolekte nan mwa septanm 2 015 nan Konte Yongning, pwovens Ningxia, Lachin. Yo te konsève yon echantiyon bon (#20150901) nan èrbyòm depatman famasi a. Yon total de 30.0 kg nan tij lè sèk nan C. deserticola yo te rflu-extrait ak 70% etanòl (180 L, 3 × 2 h) 3 fwa. Filtrate yo te konbine epi yo te sibi yon kolòn résine macroporous (AB-8) ak yon sistèm sòlvan gradyan pa etap nan ogmante etanòl nan dlo (0%, 20% ak 60%, chak 60 L) bay twa fraksyon, Lè sa a, Sephadex LH -20 (Pharmacia Biotech Co., Uppsala, Syèd) ak semi-preparatif segondè-pèfòmans likid kromatografi (Agilent 1100, Agilent Technologies, Waldbronn, Almay) te pirifye 60% fraksyon nan plis ankò pou jwenn jòn pal. cistanoside A 4.5 g (Cis A; sede a te 0.015%). Estrikti a te elisid sitou pa analiz done NMR (Bruker Avance, 400 MHz, Almay) ak MS (Agilent 6540, Agilent Technologies), ki te konsistan avèk done yo rapòte [19]. Pite li yo te detèmine pa metòd nòmalizasyon zòn HPLC (Figi 5). Nan eksperyans bèt, ki baze sou eksperyans preliminè nou an, dòz la nan Cis A te 20-80 mg / kg / jou.

3.2. Pwodwi chimik ak Solvang

Sa ki annapre yo te itilize: twous ekstraksyon pwoteyin total ak twous quantization pwoteyin BCA (Ken Gen Biotech. Co. Ltd, Nanjing, Lachin), antikò prensipal TRAF6, NF-κB, PI3K, Akt, RANKL, OPG, -actin ak tubulin ( Cell Signaling Technology, Beverly, MA, USA), antikò segondè nan peroksidaz refor konjige kabrit anti-lapen IgG (ZSGB-BIO, Beijing, Lachin), estradiol valerate (1 mg, Delpharm Lille SAS, Paris, Frans), zo Gla -pwoteyin ak deoxypyridinoline crosslinks ELISA twous (Xinyu Byolojik Jeni Co Ltd, Shanghai, Lachin) ak kathepsin K ELISA twous la (Biovision, Mountain View, CA, USA). Tout lòt pwodwi chimik yo ak ajan byochimik yo te itilize yo te AR analyse-klas réactifs.

3.3. Eksperyans sou bèt

Swasant fi Kunming sourit, ki gen laj 8 semèn ak yon pwa kò de 26.0 ± 1.62 g, yo te achte nan Ningxia Medical University, ak 10 sourit yo te kenbe nan yon sèl kaj ak yon rejim laboratwa estanda. ak dlo tiyo anba yon kondisyon lè-kontwole (24.0 ± 0.5 ◦C, 45%–50% imidite ak 12 h/12 ​​h sik limyè-fè nwa). Apre yo te aklimate pou 1 semèn, yo te fè operasyon nan yon kondisyon aseptik, ak tout sourit yo te anestezi ak idrat chloral (100 mg / kg, ip); sourit yo ki te sijè a ekspoze operasyon san yo pa retire òvèj yo te gwoup la fo (n=10); lòt yo te sibi ovariectomy bilateral kòm gwoup OVX yo (n=50). Eksperyans bèt ki anwo yo te fèt dapre gid pou swen ak itilizasyon bèt laboratwa epi yo te apwouve pa Komite Bioetik nan Inivèsite Medikal Ningxia.

Apre yon lòt peryòd rekiperasyon {{{0}}semèn, 50 sourit OVX ki anwo yo te owaza e egalman divize an 5 gwoup: yo te trete oralman ak estradiol valerate (1 mg/kg/jou) kòm kontwòl pozitif (EV); ak 20, 40, ak 80 mg / kg / jou nan Cis A kòm gwoup dòz ki ba, modere ak segondè, respektivman; ak machin nan (0.5% Carboxymethylcellulose ()-Na) kòm gwoup la modèl (OVX). Tout sourit yo te administre oralman ak yon volim egal nan 1 mL / 100 g machin pwa kò, EV oswa Cis A, ki te kòmanse nan dezyèm semèn apre operasyon an ak te dire pou 12 semèn. Pwa kò yo te mezire chak de semèn, ak dòz la ajiste kòmsadwa. Apre dènye administrasyon oral la, echantiyon san yo te retire nan atè femoral sourit anestezi yo, yo te pèmèt yo kaye, ak santrifuje nan 3000 × g pou 10 min pou peye serom; femora dwat yo ak tibya yo te diseke. Tout echantiyon yo te estoke nan -80 ◦C pou plis evalyasyon mikrochitekti zo ak paramèt byochimik serom ki gen rapò ak osteyopowoz la.

3.4. Tès koube twa-pwen

Pwopriyete byomekanik nan femoral dwat la nan sourit la te detèmine lè l sèvi avèk yon aranjman twa-pwen koube. Jig koube a gen yon sipò ki gen fòm V pou an sekirite pwent distal ak proximal femoral la pandan tès la. Femoral la te pozisyone orizontal ak bò antérieure anlè, epi chaj la te aplike anba nan sant mitan-femur la. Distans ki genyen ant sipò yo te 8 mm. Zo yo te chaje ak yon vitès deplasman konstan 0.02 mm/s jiskaske echèk lè l sèvi avèk yon BOSE Testing Machine (3220) (Bose Corporation, Endura TEC Systems Group, Minnetonka, MN, USA). Koub chaj-deplasman yo te jwenn ak itilize pou kalkil pwopriyete estriktirèl ak materyèl, ki gen ladan chaj maksimòm, chaj pik, modil elastik, fòs flexural, elatriye.

3.5. Analiz Micro-Computed Tomography

Femoral dwat yo nan tout sourit yo te netwaye nan tisi mou ki aderan yo, epi yo te detèmine mikrochitekti zo trabekilè nan metafizik femoral distal ki anwo a dwat pa yon eskanè mikwo-CT (eXplore Locus SP, GE Healthcare, London, ON, Kanada) ak rezolisyon izotwòp la mete sou 8 µm nan tout twa dimansyon espasyal. Rejyon enterè (ROI) te chwazi lè l sèvi avèk menm kowòdone yo nan plak kwasans femoral la. Paramèt mòfometrik zo yo, ki gen ladan BMD, kontni mineral zo (BMC), kontni mineral tisi (TMC), dansite mineral tisi (TMD), fraksyon volim zo (BVF), separasyon trabekulèr (Tb. Sp), nimewo trabecular (Tb. N). ) ak epesè trabekulèr (Tb. Th), yo te evalye atravè analiz ROI a lè l sèvi avèk lojisyèl analiz zo ABA.

3.6. Analiz paramèt byochimik yo

Aktivite serik alkalin fosfataz (ALP) te mezire sou yon analiz otomatik (Ciba-Corning 550 Diagnostics, Corp., Oberlin, OH, USA)); nivo serik DPD, BGP, ak kathepsin K yo te detèmine pa twous reyaktif korespondan yo, ak tartrate ki reziste fosfataz asid (TRAP) te analize dapre literati ki gen rapò a [32].

3.7. Analiz Western Blot

Nivo ekspresyon pwoteyin nan TRAF6, NF-κB PI3K, Akt, OPG, ak RANKL nan diferan gwoup yo te detekte pa analiz Western blot. Yon ti tan, pwoteyin nan te ekstrè soti nan tib dwat la nan sourit lè l sèvi avèk yon tanpon liz ki gen 0.5 mM fliyò fenilmetilsulfonil, proteaz, ak inhibiteur fosfataz. Lysates yo te santrifuje pou 10 min nan 12, 000 × g pou jwenn supernatant yo pou plis analiz. Konsantrasyon pwoteyin lysates yo te mezire lè l sèvi avèk yon tès quantification asid bicinchoninic. Pwoteyin (50-100 µg) yo te separe lè l sèvi avèk 10% SDS-PAGE, transfere nan yon manbràn polyvinylidene difluoride ak enkubasyon ak antikò monoklonal prensipal vize TRAF6, NF-κB RANKL, PI3K, Akt, OPG ak -actin (1:500). Yo te retire manbràn nan menm ak reprobed, ak siyal chemiluminescent detekte pa lojisyèl an Image Lab. -aktin oswa tubulin te sèvi kòm yon kontwòl entèn.

3.8. Analiz estatistik

Tout done yo te jwenn nan eksperyans bèt yo te analize lè l sèvi avèk yon analiz yon sèl nan divèjans ak tès Dennett a pa SPSS (Vèsyon 22.0, IBM SPSS Statistics, IBM Corp., Armonk, New York, NY, USA). ) lojisyèl; yon valè p < 0.05 te konsidere kòm estatistik enpòtan, ak tout rezilta yo te prezante kòm mwayèn ± SD.

4. Konklizyon

An rezime, Cis A,glikozid feniletanoid aktifizole nan C. deserticola, te montre yon aktivite antiosteyopowotik enpòtan sou sourit OVX, ak mekanis molekilè a ka gen rapò ak TRAF6-medyatè NF-kappaB inaktivasyon ak deklanchman PI3K/Akt, kidonk gen anpil chans yon ajan pwomèt pou tretman osteyopowoz la. maladi.

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POUAKTIVITE ANTIOSTEOPOROTICPHGS75% ECH 30% ACT 12%