Aktivite blanchi nan konstitiyan izole nan kaka Trichosanthes la

Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Rongchao Zhang,1,2Xiuqin Hu,1Bo Zhang,1ZhenWang,1Chunxiang Hao,1 Jie Xin,1ak Qingmei Guo 2

Résumé: Blanchiman anKosmetik mache gen yon avni briyan, ak pi natirèl blanchi pwodwi nan medikaman tradisyonèl Chinwa yo te alwaysbeen yon otspo rechèch. Nan rechèch sa a, blanchi engredyan aktif nan medikaman Chinwa Trichosanthes kaka yo te izole ak pirifye pou premye fwa, ak li yo.blanchimanmekanis te klarifye. Metòd kwomatografik tankou jèl silica, ODS, ak HPLC yo te itilize pou izole ak pirifye yo. Selil B16 yo te itilize pou mezire aktivite antioksidan,tirozinazaktivite, ak aktivite melaninremoval. Yo te izole yon total de 20 konpoze, ki gen ladan p-hydroxybenzaldehyde (1), asid salisilik (2), asid vanilik (3), asid izovanilik (4), protocatechuate (5), asid trans-cinamik (6), {{9 }}asid koumarik (7), asid trans-ferulik (8), drechslerol-B (9), siklohexanol 3-palmitat (10), 5-acetoksimetil-2-furaldehyde (11), 5-hydroxymethylfurfural (12), diosmetin (13), apigenin (14), chrysoberyl (15), luteolin (16), 4′-hydroxyscutellarin (17), quercetin (18), 3′,{{31} }dihydroxy-7-(-D-glucopyranosyloxy)-4′-methoxy flavon (19), ak ciprofloxacin-7-O- -D-glucoside (20). Pami yo, konpoze 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ak 20 gen bon efè antioksidan reparasyon; konpoze 3, 4, 5, 6, ak 7 gen gwo anpèchman nwa; konpoze 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 13,14, 15, 16, 17, 18, 19, ak 20 gen aktivite inhibitor tirozin oksidaz evidan. 1e rezilta yo te mete fondasyon pou devlopman plis ak itilizasyon resous kaka Trichosanthes epi tou bay yon baz pou devlopman natirèl.blanchimanpwodui kosmetik.

Cistanche herbase yonengredyan blanchi natirèl.

1. Entwodiksyon

Trichosanthes kirilowii Maxim. se yon plant k ap grenpe kontinuèl nan fanmi Kucurbitaceae. Fwi li yo, grenn, kale, ak rasin yo tout souvan itilize kòm medikaman tradisyonèl Chinwa. Pou anpil tan, kaka Trichosanthes yo souvan jete nan pwodiksyon ak pwosesis Semen Trichosanthis ak Pericarpium Trichosanthis, sa ki lakòz fatra enpòtan. Kounye a, rapò sou kaka Trichosanthes yo sitou konsantre sou konparezon kontni sik la, asid amine, vitamin ak lòt eleman nitritif [1–4]. Pa gen okenn rapò sou konpozisyon chimik nan kaka Trichosanthes. 1Se poutèt sa, li nesesè etidye konstitiyan chimik yo nan kaka a sistematik.

An menm tan an, ak devlopman rapid nan ekonomi an, pwodui kosmetik yo se pa sèlman gwo-konsomasyon lifestyleproducts, men tou vin pi popilè "nesesite yo" pou fanm yo. Anpil liv medikaman klasik Chinwa oswa materiamedica te anrejistre ke kaka Trichosanthes gen fonksyon anblanchimanak efè retire rid [5–7]. 1e rezilta anvan nan gwoup rechèch nou an montre ke ekstrè dlo a nan kaka Trichosanthes te gen pi wotirozinazaktivite inhibitory, ak pousantaj inhibition tirozinaz la te apeprè 70 pousan. 1ekomenblanchimanajan vitamin C (VC) ak arbutin yo te itilize kòm sibstans kontwòl [8]. Li te preliminèman pwouve ke ekstrè nan kaka Trichosanthes te gen yon sèten efè blanchi pa anpeche aktivite a nan tirozinaz. 1Se poutèt sa, li se yon gwo siyifikasyon etidye konstitiyan yo chimik ak mekanis blanchi nan kaka Trichosanthes.

Lablanchimanmekanis ka rezime asinhibit sentèz la nan melanin ak akselere transfè melanin. 1e pwosesis fòmasyon melanin inmelanocytes se jan sa a:tirozinazoksidasyon tirozin nan polimorf BA (DOPA); Lè sa a, li soksid nan dopaquinone.Apre yon seri de reyaksyon metabolik, melanin pwodui.Tyrosinase se sèlman anzim ki limite pousantaj nan pwosesis reyaksyon an, ak aktivite li detèmine kantite melaninsynthesized. Lè aktivite tirozinaz ogmante, melaninsentèz ogmante; lè aktivite tirozinaz anpeche, sentèz melanin diminye [9]. 1e sant aktif nan tirozinaz gen yon sit doub aktif kòb kwiv mete, ak chak ion kòb kwiv mete konbine avèk 3 résidus histidine ak 1 oswa 2 valences respektivman. Se poutèt sa, rediksyon an ak efè antioksidan ka kominike avèk atòm kwiv la sou sit aktif oftyrosinase la oswa diminye entèmedyè a nan pwosesis sentèz melanin pou anpeche fòmasyon melanin [10, 11]. Anplis de sa, anpeche transfè maturemelanocytes nan keratinosit ka jwe tou yon wòl nan blanchi.

Teknoloji kilti selil yo itilize pou detèmine efè ablanchimanengredyan aktif soutirozinazaktivite ak pwodiksyon melanin nan melanosit nan vitro. 1e liy selil melanom sourit (selil B16) sòti nan selil po melanom sourit, ak estrikti debaz li yo, espesyalman konsènan sentèz melanin, se fondamantalman menm jan ak selil melanom nòmal imen. Piske li trè difisil pou kiltive selil melanom po prensipal imen an, modèl sourit la ka itilize kòm yon selil tès pou detèminasyon.blanchimanengredyan aktif. Se poutèt sa, selil B16 yo te itilize pou mezire aktivite antioksidan, aktivite tirozinaz ak aktivite melaninremoval, epi yo te detèmine konpozan aktif blanchiman yo ak mekanis ki gen rapò ak yo. 1 rezilta yo te mete fondasyon pou devlopman plis ak itilizasyon resous kaka Trichosanthes epi tou li bay baz pou devlopman pwodui kosmetik blanchi natirèl.

2. Eksperyans

2.1. Materyèl.

Trichosanthes trichosanthis te kolekte nan baz plante medikaman èrbal Hebao nan Pinyin, Jinan. 1e echantiyon yo te idantifye pa Pwofesè QingmeiGuo nan Shandong University of Traditional Chinese Medicine. Apre yo fin retire kale a ak grenn, yo te jwenn pati kaka nan fwi a. Apre friz-seche, kaka a te kraze, melanje, epi finalman mete nan yon desiccator pou plis itilize.

fre sistanchakechinacosideefè

2.2. Viabilite selilè.

Selil B-16 (selil melanom sourit) yo te achte nan men KeyGEN epi yo te kenbe yo nan mwayen DMEM ak 10 pousan serom fetal bovine (FBS), nan 37 degre nan yon atmosfè imidite ak 5 pousan CO2. 1en, B-16selil yo te simen nan 96-plak byen (10 × 104 selil/pi) pou 24 h enkubasyon.

2.3. Preparasyon nan ekstrè diferan.

Materyèl la anvan tout koreksyon nan thepulp nan Trichosanthes kirilowii te 4.5 kg. 1e kaka te tranpe nan 10 fwa kantite 95 pousan etanòl 3 fwa. 1eextracts yo te konbine ak konsantre nan apeprè 3.0 L. Ekstrè acetat anethyl yo te jwenn nan dispèse etanòl ekstrè nan 15 L dlo, ekstrè li ak acetate etil jiskaske ekstrè a te san koulè. Ekstrè 1e yo te konbine ak konsantre anba presyon redwi.

Ekstrè acetate etil la te melanje ak jèl silica (100-200 may) nan yon rapò 1: 2 (ekstrè: jèl silica, v/ v). 1esolvent te evapore, epi jèl la te rezève. 1e kolòn glasschromatography (8{{30}} mm × 1200 mm) te chaje ak 20{0-300 may silica jèl ak D101. rezin makropore, epi apre kolòn nan te elimine ak acetate etil, etè petwòl (10 pousan, 25 pousan, 50 pousan, 75 pousan, ak 100 pousan), ak metanol, acetate etil (5 pousan, 10 pousan, 25 pousan, 50 pousan). , 75 pousan , ak 100 pousan ), pou kolekte chak koule. Finalman, yo te kolekte chak fraksyon ak konfigirasyon nan konsantrasyon sa yo: 0.003125 mg/mL, 0.00625 mg/mL, 0.0125 mg/mL, 0.025 mg/mL, 0.05 mg/mL, 0.1 mg/mL, 0.25 mg/mL, 0.5 mg/mL mL, 1.0 mg/mL, ak 2.0 mg/mL, epi lè sa a itilize pou trete selil kiltive yo. Nan fen tretman an, yo te ajoute 20 μL nan solisyon MTT (5 mg / mL) nan chak byen. 1e selil yo te enkube pou 20 min nan 37 degre. Yo te jete 1 esupernatant, epi yo te ajoute 100 μL DMSO nan chak pi. 1e absorbans te mezire nan 490 nm. Yo te repete yon eksperyans 3 fwa. Yo te kalkile 1e pousantaj siviv jan sa a:

pousantaj sivivan=(gwoup eksperimantal gwoup vid)/(gwoup kontwòl -gwoup vid) × 100 pousan .

Yo te kalkile konsantrasyon optimal (C1) chak fraksyon dapre relasyon fonksyonèl ant pousantaj sivivan ak chak konsantrasyon fraksyon. C1 te dilye 2, 4, 6, ak 8 fwa pou jwenn konsantrasyon C2, C3, C4, ak C5, respektivman. 1e ekstrè diferan nan kaka a yo montre nan Tablo 1.

Tablo 1: Ekstrè polè nan kaka Trichosanthes ak konsantrasyon nan pi bon.

2.4. Eksperyans blanchiman

2.4.1. Tès antioksidan.

Yo te itilize yon tès MTT pou detèmine viabilite selil (MTT Kit, Kaiji Biyoloji). 1en, B-16 selil yo te simen nan 96-plak byen (10 × 104 selil/po) pou 24 èdtan epi yo te trete ak ekstrè diferan oswa konpoze pou 24 èdtan. Apre tretman an, yo te jete mwayen kilti a epi lave de fwa ak PBS. 1en, 0.05 pousan H2O2 te ajoute, epi selil yo te kiltive pou 4 èdtan. Apre sa, selil B-16 yo te enkube nan 20 µL solisyon MTT (5 mg/mL) nan 37 degre pou 4 èdtan. 1an, yo te retire surnatant kilti a, epi rezidi a te fonn nan 100 µL DMSO. 1e absorbans te detekte nan 490 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate (Tecan Trading AG). 1eesperyans yo te fèt an paralèl 3 fwa.

2.4.2. Anpèchman pwodiksyon Melanin.

Pwodiksyon melanin te detèmine pa detekte selil kontni melanin pa piroliz NaOH [12]. Selil yo te simen nan 96-plak wellculture pou 24 èdtan nan yon dansite selil 10 × 104 selil/well.1en, selil yo te trete ak ekstrè diferan oswa konpoze pou 24 èdtan. Apre sa, yo te retire supernatant kilti selil la (300 µL), epi rezidi a te fonn nan NaOH (1 mL, 1.0 mol/L) pou 24 èdtan nan tanperati chanm. 1eabsorbance te mezire nan 475 nm, lè l sèvi avèk yon microplatereader (Tecan Trading AG). 1e eksperyans yo te fèt an paralèl ak 3 replike. 1e IC50 te detèmine pa lojisyèl GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., San Diego, Kalifòni), epi yo te itilize arbutin kòm yon kontwòl pozitif (IC50 =15.6 µL).

2.4.3. Detèminasyon Aktivite Tirozinaz.

Yo te retire supernatant kilti selil la, epi rezidi a te fonn nan Tritonx-100 (90 µL) aktirozinaz(10 µL, 1.0 mg/mL, Sigma, T3824 25ku). Apre melanje, yo te enkube melanj lan nan 37 degre pou 30 minit. 1e absorbans te mezire nan 475 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate (Tecan Trading AG). 1eesperyans yo te fèt an paralèl 3 fwa. 1e IC50 te detèmine pa lojisyèl GraphPad Prism 5 (GraphPadSoftware, Inc., San Diego, Kalifòni), epi yo te itilize arbutin kòm yon kontwòl pozitif (IC50 =15.6 µL).

2.5. Ekstraksyon ak Izolasyon. Ekstrè acetate etil la te fonn nan metanol, epi kolòn nan te chaje ak jèl silica may 200-300, ki te ekilibre pa etè petwòl. 1en, yon elisyon gradyan ki fòme ak petwòl ak acetate etil nan rapò 2:1, 1:1, ak 1:2; ethylacetate; etil acetate ak metanol nan rapò 2: 1, 1: 1, ak 1: 2; epi methanol te itilize ansanm ak TLC pou jwenn konpoze A (11.5 g), B (10.4 g), C (12.1 g), D (5.2 g), ak E (6.1 g).

A te separe pa chromatografi kolòn poliamid, lè l sèvi avèk dichloromethane ak metanol nan rapò 2:1, 1:1, ak 1:2 kòm sòlvan an elisyon. 1e eluate te kontwole pa TLC. Tach ki gen menm faktè retansyon (rf) yo te konbine, epi yo te jwenn A1 ak A2. 1en, A1 te prepare pa TLC, lè l sèvi avèk dichloromethane ak metanol nan yon rapò 1: 1 kòm ajan devlopman, epi pirifye plizyè fwa pa kolòn nan jèl. Finalman, konpoze 1 (17 mg) ak konpoze 2 (27 mg) yo te jwenn. A2 te pirifye pa chromatografi kolòn jèl silica, lè l sèvi avèk dichloromethaneand methanol kòm eluyan an nan rapò 1:1 ak 1: 2.Compound 3 (11 mg), konpoze 4 (12 mg), ak konpoze 5 (23 mg) yo te jwenn. B te separe pa ranvèse faz C18 chromatografi presyon mwayen (RP-C18), lè l sèvi avèk metanol, dlo nan yon elisyon gradyan jan sa a: 0 pousan, 10 pousan, 15 pousan, 20 pousan, 25 pousan, 30 pousan. 35 pousan , 40 pousan , 50 pousan , 75 pousan , 90 pousan ak 100 pousan . 1e to koule te 10 mL·min-1. Yo te konbine 1e fraksyon ak menm rf, epi yo te jwenn B1 ak B2. B1 te repete pirifye pa kolòn nan jèl, ak metanol kòm yon sòlvan elisyon. Konpoze (24 mg), 7 (21 mg), ak 8 (18 mg) yo te jwenn apre elisyon repete. B2 te pirifye pa kolòn nan jèl ak metanol, ak konpoze 9 (11 mg) te jwenn. C te separe pa RP-C18 ak eluye pa metanol ak dlo ak yon pousantaj koule nan 10 mL·min-1. 1e fraksyon koule ak menm rf yo te konbine, ak C1, C2, ak C3 yo te jwenn. C2 te separe pa kolòn jèl silica ak eluye pa acetate etil ak metanol, ak yon elisyon gradyan nan rapò 2: 1, 1: 1, ak 1: 2. C2 te pirifye pa preparasyon faz likid ekstraksyon, ak konpoze 11 (15 mg) ak 12. (14 mg) yo te jwenn.C3 te separe pa kolòn nan poliamid, eluye bymethanol ak dlo, ak pirifye pa HPLC. Konpoze 13 (34 mg), 14 (42 mg), ak 15 (38 mg) yo te jwenn. D te separe pa RP-C18 ak eluye ak metanol ak dlo.1e to koule te 10 mL·min-1. HPLC te jwenn konpoze 16 (36 mg), 17 (19 mg), ak 18 (37 mg). Konpoze 19 (29 mg) ak 20 (34 mg) yo te jwenn pa elisyon gradyan lè l sèvi avèk acetate etil ak metanol nan rapò 1:1 ak 1:2, ki te swiv pa 100 pousan metanol sou yon kolòn jèl silica.

herba epimedium sagittatum sou po

3. Rezilta ak Diskisyon

3.1. Detèminasyon Ekstrè Aktif (E1–E11).

1e optimalconcentration (sètadi, C1) nan chak ekstrè te calculatedand yo montre nan tablo 1. 1e antioksidan eksperyans showsthat tout ekstrè gen efè reparasyon antioksidan, men comparedwith VC, efè a antioksidan nan chak gwoup se fèb. Aktivite antioksidan nan E1, E3, E4, E7, ak E11 diminye konsantrasyon nan ogmante, jan yo montre nan Figi 1. 1e tès melanininhibition te montre ke tout konpozan polè nan pulpof Trichosanthes kirilowii inibit sentèz melanin. An patikilye, to a anpèchman melanin te siyifikativman pi wo pou E2, E3, ak E4 pase sa yo ki nan arbutin nan kontwòl pozitif, jan yo montre nan Figi 2. 1e rezilta nantirozinazaktivite montre ke tout konpozan polè nan kaka Trichosanthes kirilowiiinhibited aktivite tirosinaz, ak tandans anpèchman an te sanble ak sa ki anpèchman melanin. 1e anpèchman nan aktivite tirozinaz te siyifikativman pi wo pou E2, E3, E4, ak E8 pase sa yo ki nan kontwòl pozitif la. An jeneral, ekstrè yo soti nan etè petwòl gen yon efè inhibition ki ba sou tyrosinase.1e ekstrè soti nan acetate etil gen yon efè segondè inhibition sou tirosinaz, espesyalman konpozan yo polè soti nan acetate etil. Ekstrè 1e ki soti nan n-butanol tou gen yon gwo efè inhibitory sou tirozinaz, jan yo montre nan Figi 3.

3.2. Izolasyon ak Idantifikasyon konpozan monomè yo.

20 konpoze yo te separe pa jèl silica ak kolòn chromatogram ODS kòm byen ke HPLC preparasyon. Sou baz analiz done NMR ak MS, estrikti yo te elucide.1e 20 konpoze yo montre nan Tablo 2, ak done espesifik monomè yo montre nan Apendis 1.

3.3. Validasyon analiz de konpoze efikas

3.3.1. Validasyon analiz de konpoze antioksidan.

E1, E2, E3, E4, ak E5 gen efè antioksidan. 1e prensipal konpoze ki izole nan eleman ki anwo yo se drechslerol-B (konpoze 9), cyclohexanol 3-palmitat (konpoze 10), 5-acetoxymethyl-2-furaldehyde (konpoze 11), 5-hydroxymethylfurfural ( konpoze 12), diosmetin (konpoze 13), apigenin (konpoze 14), chrysoberyl (konpoze 15), luteolin (konpoze 16), 4′-hydroxy-scutellarin (konpoze 17), quercetin (konpoze 18), 3′, {{ 25}}principal konpoze yo te glycosides, ki endike ke glycosideshave bon aktivite antioxydant. Asid fenolik, tankou 5-acetoxymethyl-2-furaldehyde (konpoze 11), 5-hydroxymethylfurfural (konpoze 12), diosmetin (konpoze 13), apigenin (konpoze 14), chrysoberyl (konpoze 15) ,luteolin (konpoze 16), 4′-hydroxyscutellarin (konpoze 17), quercetin (konpoze 18), ak 3′,5-dihydroxy-7-(-Dglucopyranosyloxy){-4′-methoxy flavon, tou gen bon aktivite antioksidan, akòz gwoup la idroksil fenolik ak lyezon doub enstore [26, 27]. 1e rezilta yo montre nan Figi 4.

Figi 4: Pousantaj siviv selil (pousan) eksperyans antioksidan diferan konpoze ki soti nan ekstrè Trichosanthes.

3.3.2. Validasyon analiz de Melanin anpèchman konpoze.

E11, E12, E13, E16, E17, ak E18 gen bon efè inhibition sou sentèz melanin. 1e prensipal konpoze izole nan eleman ki anwo yo montre nan Tablo 2. Dapre metòd la nan Seksyon 2.4.2, yo te detèmine efè a nan chak konpoze sou sentèz melanin. Chak konpoze te evalye nan konsantrasyon sa yo: 1000 µg/mL, 800 µg/mL, 400 µg/mL, 200 µg/mL, ak 100 µg/mL. Chak mezi yo te fèt an triple, epi yo te kalkile pousantaj anpèchman nan sentèz melanin.

Protocatechuate (konpoze 5), 5-acetoxymethyl-2-furaldehyde (konpoze 11), 5-hydroxymethylfurfural (konpoze 12), diosmetin (konpoze 13), p-hydroxybenzaldehyde (konpoze 1), asid salisilik (konpoze 2), asid vanilik (konpoze 3), asid izovanilik (konpoze 4), asid trans-cinnamic (konpoze 6), 4- asid koumarik (konpoze 7), apigenin (konpoze 14), chrysoberyl (konpoze 15). ), luteolin (konpoze 16), 4′-hydroxy scutellarin (konpoze 17), quercetin (konpoze 18), 3′,5-dihydroxy-7-(-D-glucopyranosyloxy)-4′ -methoxy flavone (konpoze 19), ofloxacin -7-O- -D-glucoside (konpoze 20) ka anpeche pwodiksyon melanin [28]. An patikilye, asid vanilik (konpoze 3), asid izovanilik (konpoze 4), protocatechuate (konpoze 5), asid trans-cinnamic (konpoze 6), ak 4- asid koumarik (konpoze 7) gen gwo anpèchman melanin. 1e rezilta yo montre nan Figi 5.

3.3.3. Verifikasyon ak analiz de konpoze ki anpeche aktivite Tyrosinase.

E2, E3, E4, E7, E8, ak E9 gen bon efè inhibitor soutirozinazaktivite. 1e prensipal konpoze ki izole nan eleman ki anwo yo montre nan Tablo 2. Dapre metòd ki prezante nan Seksyon 2.4.3, arbutin yo te itilize kòm kontwòl, ak konsantrasyon konpoze an te 1000 µg/mL, 800 µg/mL, 400 µg/mL. , 200 µg/mL, ak 100 µg/mL. Chak mezi te fèt 5 fwa, epi yo te kalkile pousantaj anpèchman nan tirozinaz. 1e rezilta yo montre nan Figi 6.

1e rezilta yo montre ke diosmetin (konpoze 13), apigenin (konpoze 14), chrysoberyl (konpoze 15), luteolin (konpoze 16), 4′-hydroxyscutellarin (konpoze 17), quercetin (konpoze 18), 3′, {{10} }dihydroxy-7-(-D-glucopyranosyloxy)-4′-methoxy flavon (konpoze 19), ciprofloxacin -7-O- -D-glucoside (konpoze 20), p-hydroxybenzaldehyde (konpoze 1), asid salisilik (konpoze 2), asid vanilik (konpoze 3), asid izovanilik (konpoze 4), protocatechuate (konpoze 5), asid trans-cinnamic (konpoze 6), 4- asid koumarik (konpoze 7). ), ak asid trans-ferulik (konpoze 8) tout gen evidantirozinazaktivite inhibition.

Plant Cistanche inibit aktivite tirozinaz.

Klike sou foto a epi jwenn plis detay.

Konpoze Hydroxyl ranplase sou bag benzèn la, tankou p-hydroxybenzaldehyde (konpoze 1), asid salisilik (konpoze 2), asid vanilik (konpoze 3), asid izovanilik (konpoze 4), protocatechuate (konpoze 5), asid trans-cinamik ( konpoze 6), 4-asid koumarik (konpoze 7), asid trans-ferulik (konpoze 8), ak flavonoid, te montre yon gwo anpèchman tirozinaz, ak pousantaj anpèchman nan konpoze para-ranplase te siyifikativman pi wo pase sa a konpoze ofortho-ranplase. . Pou egzanp, aktivite inhibitory nan p-hydroxybenzaldehyde te siyifikativman pi wo pase sa ki nan asid salisilik, ak aktivite inhibitory of vanillic asid te siyifikativman pi wo pase sa yo ki nan asid isovanillica. Anplis, aktivite inhibition p-hydroxybenzaldehyde te siyifikativman pi wo pase salicylicacid, vanillic asid, isovanillic asid, ak protocatechuate. 1reason ka ke gwoup yo nukleofil alantou activecenter la nantirozinaz, tankou –SH, −NH2, ak –OH, okipe espas ki ozalantou sant aktif la epi konsa anpeche tirozin atake sant aktif la. Finalman, sentèz la ofmelanin te inibe [28]. 1e aktivite inhibition ofcompounds ki gen o-dihydroxy te pi fò pase sa yo ki nan para hydroxy konpoze, ak aktivite inhibitory ofprotocatechuate te siyifikativman pi wo pase sa yo ki nan vanillicacid. 1e pi wo a fenomèn egziste tou nan flavonoid. 1einhibitory to flavonoid ki gen 7 ak 4 'hydroxylgroups te siyifikativman pi wo pase si yo 7 ak 4' hydroxylgroups yo ranplase. Pa egzanp, aktivite inhibitor chrysoberyl te siyifikativman pi wo pase diosmetin, alòske aktivite inhibition diosmetin te pi wo pase 3′,5-dihydroxy-7-(-D-glucopyranosyloxy)-4 ′- flavon methoxy ak ciprofloxacin-7-O- -D-glukozid. Pousantaj flavonoid ki gen 3-idwoksi te enibitè yo te siyifikativman pi wo pase sa yo ki pa gen 3-idwoksi oswa si 3-idroksi a te ranplase. Pa egzanp, aktivite inhibition quercetin te siyifikativman pi wo pase 4′-hydroxyscutellarin, men aktivite inhibition 4′-hydroxyscutellarin te pi wo pase quercetin -3-o glucoside. Anplis de sa, aktivite inhibition nan koellin lave pi wo pase sa yo ki nan apigenin men pi ba pase sa yo ki nan luteolin. Li sigjere ke substituants B-bag yo, espesyalman gwoup hydroxyl, kapab amelyore atirozinazaktivite inhibitory, ak gwoup orthodihydroxy nan B-bag la te gen pi gwo aktivite inhibition [29].