Yon 13-semèn etid toksisite subkwonik nan 2-(l-mentoksi) etanòl nan rat F344

Entwodiksyon

2-(1-mentoksi)etanòl (CAS No. 38618-23-4) se yon likid klè ak san koulè ak yon odè karakteristik epi li lajman itilize kòm yon ajan arom. Komite Ekspè Konjwen FAO/OMS sou Aditif Manje (JECFA) te evalye 2-(l-metoksi)etanòl kòm yon ajan aromatize, kategori kòm sibstans ki gen rapò estriktirèl ak mentol1. Dapre klas estriktirèl ajan arom yo, 2-(l-metoksi)etanòl yo te plase nan Klas I. Ozetazini ak Ewòp, nivo konsomasyon 2-(l-metoksi)etanòl pa imen yo te estime yo 12 ug/moun/jou ak 0.01 ug/moun/jou, respektivman, tou de pi ba pase papòt Klas I a 1,800 ug/moun/jou. Dapre estimasyon sa yo, yo konsidere ke 2-(1-mentoksi)etanòl ka pa prezante enkyetid sekirite pandan itilizasyon woutin kòm yon ajan arom.

cistanche tubulosa

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POU AMELIORE FONKSYON SEKSYÈL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

As part of the risk assessment, it has been revealed that 2-(1-menthoxy)ethanol was not mutagenic in the Ames test, and the only in vivo study performed to date was an oral acute toxicity study in male and female rats (LD50: >2,000 mg/kg pwa kò [BW])1. Malgre itilizasyon 2-({1-mentoksi)etanòl kòm yon ajan aromatize, gen anpil done ki disponib konsènan toksisite dòz repete konpoze sa a. Laboratwa nou an te mennen ankèt sou toksisite plizyè aditif manje, ki gen ladan ajan arom reprezantan ki nan chak kategori, nan modèl wonjè2–7. Pou klarifye pwofil toksikolojik la epi etabli yon nivo ki pa obsève efè negatif (NOAEL), nou te fè yon etid toksisite subkwonik 13-semèn nan 2-({1-mentoksi)etanòl, ki te yo administre oral F344 rat pa gavage.

Materyèl ak Metòd

Tès chimik

2-(1-mentoksi)etanòl (Lot No 5I0002, pite 99.9%) ki te pwodwi pa Takasago Int. Corp (Tokyo, Japon) te bay Divizyon Nòm ak Evalyasyon, Depatman Sekirite Manje, Ministè Sante, Travay ak Byennèt, Japon, ak sipò Japon Flavor & Fragrance Materials Association (Tokyo, Japon). Malgre ke sibstans tès la te bay kòm yon melanj de izomè optik (CAS No. 38618-23-4), li te konfime kòm l-enantiomer la (CAS No. 75443-64-0) pa manifakti a. Gavaj oral ak lwil mayi (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japon) kòm machin nan te chwazi kòm wout la nan administrasyon akòz ensolubilite akeuz ak volatilité nan 2-(1-mentoksi)etanòl. Solisyon 2-({1-mentoksi)etanòl yo te prepare chak jou, imedyatman anvan administrasyon an. Apre estoke pou 2 èdtan nan tanperati chanm, rapò rezidyèl 2-({1-mentoksi) etanòl nan 4, 40, ak 400 mg/mL solisyon yo te konfime kòm 96.8%, 99.8%, ak 96.5% , respektivman, pa gaz chromatography (Japon Enspeksyon Asosyasyon an manje ak manje endistri anviwònman, Tokyo, Japon).

Bèt eksperimantal

An total, 40 gason ak 40 fi rat ki patojèn espesifik (F344/DuCrlCrlj, 5 semèn) te achte nan men Charles River Laboratories Japan (Yokohama, Japon) epi yo te itilize apre aklimatasyon pou yon semèn. Pandan etid la, bèt yo te loje nan kaj polikarbonat ak kabann mou chip, kenbe nan yon chanm ak yon sistèm baryè kontwole sik la limyè / fè nwa (12 h), vantilasyon (pousantaj echanj lè a 18 fwa / h), tanperati ( 24 ± 1 degre), ak imidite relatif (55 ± 5%). Kalòj yo ak kabann chip yo te ranplase de fwa pa semèn. Chak bèt te gen aksè gratis nan dlo tiyo ak yon rejim fondamantal (CRF-1; Oriental Yeast, Tokyo, Japon). Nan kòmansman eksperyans lan, bèt yo te owaza atribye ba kat gwoup 10 rat gason ak fi chak, ki baze sou pwa kò yo mezire imedyatman anvan yo kòmanse tretman ak pwodui chimik tès la.

Etidye konsepsyon

Nan yon etid preliminè {{0}}jou ki evalye 2-({1-mentoksi) etanòl yo te administre nan dòz 0, 200, 400, ak 800 mg/kg BW/ jou, pwa absoli ak relatif fwa yo te siyifikativman ogmante nan tout gwoup trete nan tou de sèks (done yo pa montre). Dapre rezilta sa yo, nou te chwazi 2-(1-mentoksi) dòz etanòl 0, 15, 60, ak 250 mg/kg BW/jou pou yo administre tou de rat gason ak fi nan {{. 13}}semèn etid toksisite.

Kondisyon jeneral yo ak mòtalite yo te evalye chak jou. Pwa kò, osi byen ke kantite apwovizyone ak rejim alimantè rezidyèl, yo te mezire yon fwa chak semèn pandan peryòd eksperimantal la. Tout rat yo te jene lannwit lan lè yo fini tretman an, epi yo te kolekte echantiyon san pou ematoloji ak byochimik serom nan aorta nan vant anba anestezi rale gwo lè l sèvi avèk isoflurane. Konsepsyon etid la te pa Gid pou Deziyasyon pou Aditif Manje ak Revizyon Nòm pou Itilizasyon Aditif Manje nan Japon (1996) ak apwouve pa Komite Swen Animal ak Itilizasyon Enstiti Nasyonal Syans Sante, Japon.

Ematoloji ak byochimik serom

Paramèt ematolojik sa yo te analize lè l sèvi avèk analizè ematoloji otomatik ProCyte Dx (IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, USA): konte globil blan (WBC), konte globil wouj (RBC), konsantrasyon emoglobin (HGB), ematokrit (HCT), volim corpuscular (MCV), emoglobin corpuscular (MCH), konsantrasyon emoglobin corpuscular (MCHC), konte plakèt (PLT), ak selil lekozit diferans, ki gen ladan netrofil (Neut), lenfosit (Lymph), monosit (Mono), eozinofil. (Eosino), ak basophils (Baso). Oriental Yeast te fè analiz byochimik serik pou paramèt sa yo: total pwoteyin (TP), albumin (Alb), albumin/globulin rapò (A/G), bilirubin total (Bil), glikoz, kolestewòl total (T-Chol), trigliserid (TG), nitwojèn ure (BUN), kreyatinin (Cre), kalsyòm (Ca), fosfò inòganik (IP), sodyòm (Na), potasyòm (K), klò (Cl), aspartat aminotransferaz (AST), alanin aminotransferaz. (ALT), fosfataz alkalin (ALP), ak -glutamil transpeptidase (-GTP).

Pwa ògàn ak evalyasyon istopatolojik

Yo te fè yon nekropsi konplè pou tout bèt yo, epi yo te peze sèvo, timis, poumon, kè, larat, fwa, glann adrenal, ren, tèstikul ak òvèj. Ògàn sa yo, osi byen ke tisi ki soti nan mwal epinyè a, nè trigeminal, glann pitwitè, kavite nen, glann saliv, lang, èzofaj, trachea, aorta, glann tiwoyid, glann paratiwoyid, pankreyas, lestomak, ti ak gwo trip, submandibular ak mezenterik. nœuds lenfatik, vajen, matris, blad pipi, glann pwostat, vesik seminal, epididim, femoral ak sternum ak mwèl zo, vètebral, misk skelèt, nè syatik, po, ak glann mamè, yo te fiks nan 10% fòmalin net-tanpon; Lè sa a, yo te prepare seksyon ki gen ladann parafine epi yo tache ak ematoksilin ak eozin pou egzamen istopatolojik. Testatik yo ak je ak glann Harderyen yo te fikse nan fiksatif Bouin a ak solisyon Davidson a, respektivman. Tisi zo yo, ki gen ladan kavite nan nen, vètebral, sternum, ak femur, yo te dekalsifye lè l sèvi avèk yon melanj de 10% asid fòmik ak 10% fòmalin tanpon pou jiska 2 semèn. Yo te fè evalyasyon istopatolojik pou tout tisi yo te jwenn nan bèt nan gwoup kontwòl la ak gwoup la te administre pi gwo dòz la sof si yo te obsève nenpòt blesi ki gen rapò ak tretman an.

cistanche tubulosa

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POU AMELIORE IMINITE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Imunohistochimi pou 2u-globulin

Nan rat gason, akimilasyon 2u-globulin nan ren an te egzamine pa analiz imunohistochimik nan seksyon parafine ki entegre. Pou rekipere antijèn, seksyon yo jwenn nan 5 rat nan chak gwoup yo te enkube ak proteinaz K (DAKO, Glostrup, Denmark) pou 1 minit nan tanperati chanm. Tout seksyon yo te benyen nan 3% H2O2 / methanol solisyon pou 10 min nan tanperati chanm pou inaktivasyon aktivite peroksidaz andojèn. Apre bloke reyaksyon ki pa espesifik ak 10% serom lapen nòmal, seksyon yo te enkube ak yon antikò prensipal pou 2uglobulin (dilye 1:400; anti-rat 2u-globulin antikò; R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) lannwit lan nan 4 degre 8. Vizyalizasyon nan lyezon antikò yo te fèt lè l sèvi avèk yon Twous VectaStain Elite ABC (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) ak 3,3′-diaminobenzidine. Tout seksyon yo te kontre ak ematoksilin.

Analiz estatistik

Divèjans nan valè done pou pwa kò pandan peryòd eksperimantal la, osi byen ke pou ematoloji, byochimik serom, ak pwa ògàn yo, yo te evalye pou omojeneite lè l sèvi avèk tès Bartlett la. Yon sèl-fason analiz de divèjans ak tès Kruskal-Wallis, respektivman, te anplwaye pou done omojèn ak etewojèn. Pou detèmine diferans estatistik enpòtan yo, yo te itilize tès konparezon miltip Dunnett pou konpare gwoup kontwòl ak tretman. Konparezon ensidans istopatolojik ak klas yo te analize lè yo itilize tès pwobabilite egzak Fisher a ak tès U Mann-Whitney a, respektivman. P valè de<0.05 were considered statistically significant.

Rezilta yo

Paramèt nan lavi, ematoloji, ak byochimik serom

Pa gen okenn siy klinik enpòtan yo te note pandan tout peryòd eksperimantal la, ak tout bèt yo te siviv jiskaske nekropsi pwograme a. Anplis de sa, pa gen okenn diferans enpòtan nan pwa kò ak konsomasyon manje chak jou yo te obsève nan rat gason ak fi (Fig. 1A ak B).

Done ematoloji ak byochimik serom yo montre nan Tablo 1 ak 2, respektivman. Analiz ematolojik revele siyifikativman diminye HGB, HCT, MCV, ak MCH ak ogmante PLT nan rat gason yo te administre 250 mg/kg BW/jou 2-(1-mentoksi)etanòl (Tablo 1). Nan byochimik serik, yo te note yon ogmantasyon enpòtan nan TP, T-Chol, ak Ca ak diminisyon nan Bil ak ALP nan gason nan gwoup 250 mg / kg (Tablo 2). Yo te note yon ogmantasyon siyifikatif nan Cre ak yon diminisyon nan A/G nan gason nan gwoup 60 ak 250 mg/kg. Nan fi yo, yo te anrejistre yon ogmantasyon siyifikatif nan Ca ak yon diminisyon nan ALP nan gwoup 60 ak 250 mg/kg, tandiske T-Chol ki wo ak redwi A/G, Bil, TG, AST, ak ALT yo te detekte nan 250 mg. /kg gwoup. Malgre ke yon ogmantasyon siyifikatif nan TG ak yon diminisyon nan Cl yo te obsève nan gason yo administre 60 mg / kg, mank de nenpòt relasyon dòz sijere ke diferans sa yo pa te asosye ak ekspoze a sibstans nan tès la.

Pwa ògàn yo

Done pou pwa ògàn yo rezime nan Tablo 3. Pwa absoli ak relatif fwa yo te ogmante siyifikativman nan tou de sèks nan gwoup 250 mg / kg (Tablo 3). Yon ogmantasyon siyifikatif nan pwa relatif fwa yo te obsève nan gason nan gwoup la 60 mg / kg. Nan gason, pwa ren absoli ak relatif yo te ogmante siyifikativman nan gwoup 60 ak 250 mg/kg. Nan gwoup gason an 250 mg / kg, yo te note yon ogmantasyon enpòtan nan pwa absoli ak relatif nan glann adrenal ak pwa relatif nan larat ak tèstikul yo.

Istopatoloji ak imunohistochimi

Done pou rezilta istopatolojik ak imunohistochimik yo rezime nan Tablo 4 ak 5, respektivman. Konklizyon istopatolojik revele ke frekans nan akimilasyon nan granules eozinofil (figi 2A-D), tubul basophilic, ak jete hyaline, osi byen ke enflamasyon entèrstisyal fokal nan ren an, yo te siyifikativman ogmante nan gwoup tretman tout gason lè yo konpare ak kontwòl la. gwoup (Tablo 4). Ki baze sou analiz imunohistochimik, rat gason trete ak sibstans ki sou tès la prezante yon ogmantasyon nan iminoreaktivite 2u-globulin nan selil epitelyal nan tubul proximal, demontre yon depandans dòz klè (Fig. 2E-H) (Tablo 5).

Nan nekropsi, yon rat gason nan gwoup 250 mg/kg te montre gwo elajisman nan ren dwat la akòz yon nefroblastom ki karakteristik istolojik. Malgre ke nefroblastoma pa komen nan pifò souch rat9, ka sa a te konsidere kòm aksidantèl, paske pa gen okenn lòt bèt ki te prezante blesi menm jan an. Anplis de sa, nan syans kanserojèn nan bouch, ensidans nefroblastom espontane nan rat gason F344/DuCrlCrlj te rapòte ant 0-2.0%10. Malgre ke plizyè blesi yo te detekte detanzantan nan lòt ògàn, pa gen okenn chanjman enpòtan ki depann de tretman nan ensidans la nan blesi sa yo te aparan.

Diskisyon

Jouk jounen jodi a, JECFA te evalye 24 ajan arom, ki gen ladan 2-({1-mentoksi) etanòl, kòm sibstans ki gen rapò ak mentol, epi yo tout nan lis "pa gen pwoblèm sekirite" nan nivo estime aktyèl yo. nan konsomasyon1, 11. 2-(1-Mentoksi)etanòl klase nan yon sougwoup alkòl alisiklik oswa etè epi li konsidere kòm prensipalman konjige ak asid glukuronik, ki te swiv pa eskresyon urin1. Malgre ke valè LD50 oral sibstans sa yo nan rat yo relativman wo, done ki soti nan etid toksisite repete-dòz rete limite. Yon etid toksisite 13-semèn repete dòz revele ke menthyl pyrrolidone carboxylate (CAS No. 68127-22-0), yon konpoze estriktirèl ki gen rapò ak mentol, ka asosye ak ogmante pwa relatif fwa ak ren nan gason ak fi. Wistar rat. Yo te obsève akimilasyon 2u-globulin nan tubul proximal rat gason tou nan yon dòz 1,111 mg / kg BW / jou, epi NOAEL la te detèmine kòm 109 mg / kg BW / jou1.

Nan etid toksisite subkwonik 13-semèn aktyèl la nan 2-(1-mentoksi)etanòl, pa gen okenn chanjman toksikolojik nan kondisyon jeneral, pwa kò, ak konsomasyon manje yo te obsève. Apre evalyasyon ematolojik, nou te obsève yon diminisyon nan HGB (96.6% nan valè mwayen kontwòl), HCT (96.3%), MCV (98.4%), ak MCH (98.2%) ak yon ogmantasyon nan PLT (111%) nan gason an. Gwoup 250 mg/kg, ki te konsidere kòm enfliyans toksikolojik nan tretman 2-({1-mentoksi)etanòl. Tou de absoli (115% nan tou de sèks) ak relatif (119% nan gason ak 111% nan fi) pwa fwa yo te ogmante siyifikativman nan tou de sèks nan gwoup yo 250 mg / kg. Malgre ke pa te gen okenn chanjman istopatolojik nan fwa a, ogmante nivo serik T-Chol (110% nan gason ak 121% nan fi) ak TP (105% nan gason) ak yon rediksyon nan TG (60.1% nan fi) nan 250 la. Gwoup mg/kg endike chanjman toksik ki asosye ak metabolis lipid ak sentèz pwoteyin nan fwa a. Diminye HGB ak MCH ak PLT ki wo, T-Chol, ak TP nan gason ak diminye TG ak ogmantasyon pwa absoli ak relatif fwa nan tou de sèks yo te detekte tou, ak siyifikasyon estatistik nan etid preliminè 28-jou a (done yo pa montre ), ki konfime ke sa yo chanje paramèt ematolojik ak serom byochimik, osi byen ke pwa fwa, pa t 'ensidan men efè tès ki gen rapò ak sibstans. Kontrèman, ogmantasyon siyifikatif nan pwa relatif fwa yo detekte nan gwoup gason 60 mg / kg nan etid prezan an pa te akonpaye pa yon ogmantasyon nan pwa absoli oswa chanjman nan paramèt byochimik ki gen rapò, sijere ke ogmantasyon sa a se te yon chanjman adaptasyon.

Cistanche tubulosa

NATIRÈL CISTANCHE TUBULOSA POU AMELIORE FONKSYON SEKSYÈL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Siyifikativman ogmante absoli (120%) ak relatif (118%) pwa nan glann adrenal nan gwoup gason an 250 mg / kg yo te konsidere yo dwe asosye ak chimik tès la. Anplis de sa, ogmante pwa absoli ak relatif nan glann adrenal nan tou de sèks te montre yon depandans klè dòz nan etid preliminè 28-jou a (done yo pa montre), ki endike asosyasyon an ak tretman chimik tès. Malgre ke ipèrtrofi adrenal yo te kapab lakòz estrès, pa te gen okenn rezilta sigjere nan estrès, tankou redwi pran pwa kò oswa atrofi timis la ak lòt ògàn lenfoyid, nan tou de etid yo prezan ak preliminè. Piske pa gen okenn chanjman istopatolojik nan glann adrenal la menm ak pwodiksyon glucocorticoid ki gen pwoblèm nan ka anpèchman anzim ki gen rapò ak steroidogenesis12, posiblite pou ogmante pwa glann adrenal la se yon rezilta toksik pa ka eskli. Kontrèman, ogmante pwa relatif nan larat la ak tèstikul nan gwoup gason an 250 mg / kg, pa obsève nan etid la preliminè, yo te konsidere kòm toksikolojik ensiyifyan akòz absans la nan blesi istopatolojik oswa siyifikativman ogmante pwa absoli. Menm jan an tou, byochimik serom revele yon diminisyon nan A / G ak yon ogmantasyon nan Ca nan tou de sèks, ki te konsidere kòm pa gen okenn siyifikasyon toksikolojik, konsidere pa gen okenn anomali yo te detekte nan paramèt ki gen rapò. Anplis de sa, diminye nivo Bil ak ALP nan tou de sèks ak diminye AST ak ALT nan fi yo te kontrèman ak efè toksik espere epi yo te konsidere pa gen sans.

Nefropati kwonik ki karakterize pa tib basofil, jete hyaline, ak enflamasyon entèrstisyal fokal yo te obsève ak siyifikasyon estatistik nan gason nan tout gwoup trete. Anplis de sa, ogmante Cre serom ak pwa ren absoli ak relatif yo te detekte nan gwoup gason yo 60 ak 250 mg / kg; chanjman sa yo pa te obsève nan gwoup tretman fi. Nan ka sa yo, degre nan akimilasyon nan granules eozinofil nan selil epitelyal proximal tubulaires te ogmante nan yon fason aparan dòz-depandan. Granules sa yo te konfime kòm 2u-globulin pa imunohistochimi, ki endike ensidan an nan nefropati 2u-globulin. 2u-Globulin ki mare ak sèten pwodui chimik, tankou d-limonèn, akimile nan lizozòm epi yo obsève nan tubul proximal yo kòm granul eozinofil oswa hyaline9. Akimilasyon sa a ka domaje selil epitelyal yo, ki mennen nan nefropati kwonik pwogresif ak fòmasyon timè konsekan9. Kidonk, byenke NOAEL pou 2-({1-mentoksi)etanòl ki asosye ak nefropati 2u-globulin nan ren rat gason yo pa te idantifye, yo rapòte kalite nefropati sa a espesifik pou rat gason epi kidonk li pa enpòtan pou moun. evalyasyon risk13. Yon risk ogmante nan ensifizans ren medyatè atravè mekanis ki gen rapò ak akimilasyon 2u-globulin se trè improbab, kòm pwoteyin sa a se absan nan imen14. Se poutèt sa, li te konsidere kòm rezonab pou eskli chanjman ki asosye ak nefropati kwonik obsève nan gason nan detèminasyon NOAEL la.

An konklizyon, etid toksisite subkwonik 13-semèn prezan an te demontre ke 250 mg/kg BW/jou 2-(1-mentoksi) tretman etanòl te lakòz chanjman toksik nan ematoloji, byochimik serik ak pwa ògàn yo. nan rat F344 gason ak fi. Dapre rezilta obsève yo, NOAEL 2-({1-mentoksi)etanòlte evalye kòm 60 mg / kg BW / jou pou tou de sèks.

cistanche tubulosa