Yon Vaksen Viris Grip Atenue Bivalan Pwoteje Kont Izolasyon Klinik H1N2 ak H3N2 ki derive nan kochon Pati 1

Résumé:

Viris grip A (IAV) ka lakòz yon maladi respiratwa ki trè kontajye pou anpil espès mamifè. Nan kochon, IAV yo lakòz gwo morbidite ak maladi mòtalite ki ba nan popilasyon sansib ki ka gen gwo enpak finansye ak pwodiksyon. Yo ka prezante tou opòtinite pou mitasyon ak reasòtiman jèn, ki pwodui tansyon grip ak potansyèl pandemi. Se poutèt sa, li trè enpòtan pou anpeche ak kontwole enfeksyon grip nan kochon, e prensipal fason pou fè sa se atravè vaksinasyon.

Grip A viris se yon maladi enfektye respiratwa komen, ki trè kontajye ak sansib a yon pakèt moun. Espesyalman pou moun ki gen sistèm iminitè febli, viris grip A ka lakòz pwoblèm sante ki pi grav. Se poutèt sa, li enpòtan anpil pou kenbe ase iminite pou anpeche enfeksyon viris grip A.

Sistèm iminitè kò nou an se premye liy defans kont viris ak bakteri ki anvayi kò a. Fonksyon debaz sistèm iminitè a se reziste envazyon patojèn atravè globil blan, lenfosit ak antikò, pou kenbe sante kò a. Se poutèt sa, bon fonksyon iminitè se yon mezi pwoteksyon enpòtan pou pwoteje nou kont divès maladi enfeksyon.

An menm tan an, kèk abitid k ap viv an sante ka ede tou ranfòse iminite. Tankou kenbe bon jan dòmi, fè egzèsis modere, yon rejim balanse, diminye estrès, ak sou sa. Abitid k ap viv sa yo ka ankouraje pwodiksyon an nan òmòn ak faktè iminitè nan kò a, fè sistèm iminitè nou an pi fò.

Anplis aksyon pozitif ou yo, ou ka ogmante iminite kò w tou lè w pran vaksen an. Kounye a, gen yon vaksen kont viris grip A, ki ka efektivman anpeche enfeksyon viris grip epi redwi risk pou maladi atravè vaksinasyon an. Espesyalman pou gwoup sansib tankou granmoun aje, timoun, ak fanm ansent, yo ta dwe peye plis atansyon sou vaksen an.

Li ta dwe remake ke iminite kò nou an pa estatik men chanje ak faktè tankou laj ak anviwònman. Se poutèt sa, nou bezwen toujou peye atansyon epi ajiste fòm nou an pou kenbe bon iminite.

An rezime, bon jan iminite se yon mwayen enpòtan pou anpeche enfeksyon viris grip A. Atravè ajisteman nan rejim sante tankou dòmi, fè egzèsis, ak rejim alimantè, ansanm ak vaksen, nou ka fè kò nou an pi an sante ak pi rezistan a atak viris. Li ka wè ke nou bezwen amelyore iminite. Cistanche ka siyifikativman amelyore iminite. Polisakarid yo nan vyann yo ka kontwole repons iminitè a nan sistèm iminitè imen an, amelyore kapasite nan estrès nan selil iminitè, ak amelyore efè a bakterisid nan selil iminitè yo.

Klike sou benefis cistanche tubulosa

Soutip IAV ki pi komen nan kochon atravè mond lan se H1N1, H1N2, ak H3N2; sepandan, divèsite jenetik viris sa yo ka varye anpil pa rejyon an. Nou te deja devlope yon vaksen viris bivalan ki depann de elastaz lè l sèvi avèk de izole viris grip pòsin Kanadyen A (swIAV), A/Swine/Alberta/SD0191/2016 (H1N2) [SD191] ak A/Swine/Saskatchewan/SD0069/2015 (H3N2). ) [SD69], ki te pwoteje kont tansyon homologue. Nan etid sa a, nou demontre ke vaksen sa a pwolonje pwoteksyon nan kochon nan plis aktyèl, derive ki pa omològ H1N2 ak H3N2 tansyon, A/Swine/MB/SD0467/2019 (H1N2) [SD467] ak A/Swine/AB/SD0435/ 2019 (H3N2) [SD435].

Vaksen an te pwovoke yon repons iminitè solid nan serom ak nan poumon ak redwi replikasyon viral ak patoloji nan poumon ki asosye ak tansyon sa yo. Se poutèt sa, vaksen bivalan sa a rete yon kandida solid ki ta benefisye mache vaksen kont grip pòsin nan Amerik di Nò.

Mo kle:

Grip; vaksen; kochon.

1. Entwodiksyon

Viris grip A (IAV) se yon patojèn enpòtan pou anpil espès, tankou kochon. Enfeksyon ka lakòz maladi respiratwa trè kontajye nan kochon [1]. Enfeksyon grip nan kochon mennen nan maladi grav ak mòtalite ki ba anpil, men pousantaj morbidite nan yon bann bèt ka rive nan 100 pousan [2].

Sa a lakòz pèt ekonomik pou kiltivatè yo akòz diminye pran pwa nan kochon ki enfekte diminye pèfòmans pwodiksyon, ak echèk repwodiktif nan simen [3,4].

Ko-enfeksyon nan grip ak lòt patojèn respiratwa kochon kapab tou mennen nan devlopman nan konplèks maladi respiratwa porsin, ak nan konsekans, ogmante mòtalite ak pèt ekonomik [5].

Anplis de sa, kochon yo sansib a enfeksyon ak IAV avyè ak imen ak IAV kochon (swIAV) akòz prezans tou de lyen galaktoz asid sialik avyè ak mamifè nan aparèy respiratwa yo [6].

Sa fè li posib pou reasòtiman rive lè ko-enfekte ak tansyon miltip, ki ta ka mennen nan pwodiksyon an nan nouvo tansyon ak potansyèl pandemi [4,7]. Kòm imen gen menm distribisyon lyezon galaktoz asid sialik nan tout aparèy respiratwa a, evènman debòde bi-direksyon posib ant imen ak kochon.

Premye ensidan li te ye nan sa a se te pandan pandemi grip 1918 lè IAV te prezante nan kochon nan men moun [8]. Liyaj sa a te rete estab nan popilasyon porsin yo jiska ane 1990 yo, lè souch H3N2 imen ak avyè yo te reyasòti ak liy H1N1 k ap sikile a pou pwodui souch doub ak trip H1N1, H1N2, ak H3N2 [8,9].

Kasèt triple reassortant gene (TRIG) ki fèk devlope te mennen nan yon peryòd divèsifikasyon rapid IAV nan kochon Nò Ameriken [10]. Kasèt TRIG sa a trè estab epi li fasilite ranplasman diferan konbinezon HA ak NA [5].

Depi 2005, anpil tansyon ak kasèt TRIG entèn sa a ki asosye ak jèn HA ak NA imen gaye nan twoupo kochon nan Etazini [9]. Pwochen evènman remakab la te fèt an 2009, lè yon souch H1N1 orijin kochon (H1N1pdm2009) te gaye sou moun, ki te mennen nan pandemi grip 2009 la [11]. Transmisyon moun-a-kochon (zoonoz ranvèse) nan pandemi imen H1N1 IAV (H1pdm) te anrejistre plizyè fwa nan kochon Nò Ameriken, ki te mennen nan etablisman an nan yon nouvo liy ak nouvo swIAVs reassortant [8,10,12].
An total, sèt klad antijenik H1 ak kat klad distenk viris H3 yo te anrejistre nan kochon Nò Ameriken [5]. Dènyèman, yon pwogram siveyans swIAV nan pwovens Lazi te idantifye yon viris genotip 4 (G4) reassortant Eurasian ki sanble ak avyè (EA), ak H1pdm ak jèn entèn trip reassortant.

Viris G4 sa a te mezire nan 10.4 pousan nan travayè kochon yo teste, epi li prezante makè potansyèl pandemi, ak kapasite pou transmèt bay moun ak diferan antijenisite nan viris imen ki sikile kounye a [7]. Se poutèt sa, li trè enpòtan pou anpeche ak kontwole enfeksyon grip nan kochon nan tou de yon endistri kochon ak pèspektiv sante piblik, e prensipal fason pou fè sa se atravè vaksinasyon [4].

Ozetazini, kalite vaksen ki pi komen an se viris inaktive antye (WIV), men yon vaksen vektè RNA ki eksprime HA ak yon vaksen NS1-twonke viris grip la atenue (LAIV) te apwouve tou [4] . Soutip IAV ki pi komen nan kochon atravè mond lan, enkli Amerik di Nò, se H1N1, H1N2, ak H3N2 [13].

Divèsite jenetik viris sa yo ka varye anpil pa rejyon an, sepandan, e gen diferans nan evolisyon jenetik swIAV nan Kanada ak USA, patikilyèman nan viris subtip H1 [12]. Siveyans nan Kanada ant 2009 ak 2016 te endike ke klad jenetik H1 ki te dominan nan USA a, H1g (1A.3.3.3) ak H1d-1 (1B.2.2), pa te detekte nan Kanada, ak Viris H1 nan Kanada te trè diferan de sa yo ki nan USA a [12].

Yo te idantifye yon nouvo klad H1 (H1a-3) nan Kanada ki te kòmanse nan Manitoba e ki te sibi kwasans rapid anvan yo te gaye atravè peyi a ak nan USA. Konsènan viris H3, yo te dokimante sis liy H3 nan kochon Ameriken (IV-A rive IV-F), e nan sa yo, yo te jwenn twa nan kochon Kanadyen (IV-B, IV-C, ak IV-E) [12 ].

Sa a mete aksan sou enpòtans siveyans rejyonal yo ak konsyantizasyon sou sikilasyon tansyon yo enfòme pwogram vaksen efikas epi li endike ke vaksen ki fèt baze sou IAV sikile nan kochon Ameriken yo ka pa pwoteje kochon Kanadyen [12].

Anvan sa, yo te kreye yon vaksen bivalan ak de izole swIAV Kanadyen, A/Swine/Alberta/SD0191/2016 (H1N2) [SD191] ak A/Swine/Saskatchewan/SD0069/2015 (H3N2), ki se reprezantan H{{ 9}} gwoup antijenik ak yon nouvo gwoup antijenik H3 ki soti nan Lwès Kanada (gwoup kochon IV-E), respektivman [14]. Nouvo vaksen sa a se yon vaksen viris ki atenue vivan ki fèt ak fòm SD191 ak SD69, SD191−R342V ak SD69-K345V ki depann de elastaz. Etid yo te montre ke li te pwoteksyon kont tou de SD191 ak SD69, osi byen ke yon souch eterològ H1N2 A/Swine/Saskatchewan/SD0142/2015 (H1N2) ki te izole tou nan Lwès Kanada [14].

Depi lè sa a, tansyon swIAV k ap sikile yo kontinye ap flote. Izolasyon klinik ki pi resan nan kochon nan Lwès Kanada yo te kolekte epi izole nan echantiyon jaden nan Western College of Veterinary Medicine, University of Saskatchewan, Saskatoon, SK, Kanada. A/Swine/MB/SD0467/ 2019 (H1N2) [SD467] se yon manm gwoup antijenik H -3 men li gen senk sibstitisyon asid amine sou 54 sit antijenik H1 kle yo konpare ak SD191 [10,15, 16].

A/Swine/AB/SD0435/2019 (H3N2) [SD435] se yon manm gwoup IV-E a men li gen ladan l de sibstitisyon asid amine nan sis sit antijenik H3 kle yo [17].

Nan etid sa a, nou te evalye si LAIV ki depandan de elastaz bivalan ta kenbe tèt ak nouvo izole klinik yo, epi yo ka rapòte ke li pwoteje kochon lè yo te defye ak tansyon swIAV SD467 (H1N2) ak SD435 (H3N2) k ap sikile kounye a.
2. Materyèl ak Metòd

2.1. Selil ak viris

Madin-Darby canine kidney (MDCK) (ATCC, #CRL-2936) selil yo te konsève nan Minimal Essential Medium (MEM) (Sigma-Aldrich, M4655, St. Louis, MO, USA) ki gen 10 pousan serom fetal bovine. (FBS) (Thermo Fisher Scientific, Ottawa, ON, Kanada 16000-044), epi yo te kenbe nan yon enkibatè imidifye 5 pousan CO2 a 37 ◦C. A/Swine/Alberta/SD0435/2019 (H3N2) [SD435] ak A/Swine/Manitoba/SD0467/2019 (H1N2) [SD467] swIAV yo te izole nan echantiyon jaden nan Western College of Veterinary Medicine, University of Saskatoon, Saskatoon, Saskatoon. , SK, Kanada.

Viris vaksen SD191−R342V ak SD69- K345V yo te sove jan yo te dekri anvan an [14]. Tout viris yo te grandi nan selil MDCK nan prezans 0.2 pousan albumin serik bovin (BSA) (Sigma-Aldrich, A7030) ak swa 1 µg/mL L-[(toluèn{). {11}}sulfonamid)-2-fenil] etil chloromethyl ketone (TPCK)-tripsin (viris WT) oswa 0.5 µg/mL elastaz netrofil imen (viris ki depann de elastaz) (Sigma-Aldrich, E8140).

2.2. Animal Jijman Design

Yo te jwenn vennkat kochon swIAV-negatif ki gen kat semèn nan Prairie Swine Center Inc. (Saskatoon, SK, Kanada). Sa yo kochon yo te chwazi owaza epi divize an kat gwoup ak sèt kochon pou chak gwoup vaksen, ak senk kochon pou chak gwoup mock pran vaksen an.

Yo dekri devwa gwoup la nan Figi 1A.

Gwoup sa yo te loje nan chanm separe dapre gwoup vaksinasyon yo (gwoup A plis B ak C plis D yo te loje ansanm) epi yo te pèmèt yo aklimatize pandan sèt jou anvan enfeksyon. Nan senk semèn ki gen laj (jou 0) osi byen ke nan uit semèn ki gen laj (jou 21), kochon yo nan gwoup A ak B yo te pran vaksen intratracheally mock ak 4 mL MEM, pandan y ap gwoup C ak D yo te pran vaksen. ak yon vaksen bivalan ki genyen 1 × 106 PFU nan chak SD191−R342V ak SD69-K345V nan 4 mL MEM.

Dis jou apre (jou 31), kochon yo te defye swa ak MEM (mock) oswa 1 × 106 PFU swa SD435-WT (H3N2) oswa SD467-WT (H1N2). Yo te kontwole kochon yo pandan senk jou apre defi, ak tanperati rektal yo te pran chak jou ak ti prelèvman nan nen yo te pran nan tou de twou nen yo nan jou 1, 3, ak 5. Yo te kolekte serom apre premye (jou 20) ak dezyèm (jou 30) vaksen pou serum viris netralizasyon (SVN) tès la ak tès imunosorban ki lye ak anzim (ELISA).

Nan jou 5 apre defi, tout kochon yo te imanite, epi poumon yo te ekstrè ak evalye pou prezans nan swIAV-karakteristik blesi brit. Yo te kolekte echantiyon tisi nan poumon tou pou izolasyon viris (Figi 1B).

2.3. Deklarasyon Etik

Tout pwosedi bèt yo te apwouve pa University Animal Care Committee (UACC) ak Animal Research Ethics Board (AREB) nan University of Saskatchewan. Pwotokòl sa a te apwouve nan dat 12 Novanm 2021 (Protokòl Itilizasyon Animal #20190064). Tout pwosedi yo te fèt dapre estanda Konsèy Kanadyen pou Swen Animal (CCAC) obligatwa nan Òganizasyon Vaksen ak Maladi Enfektye (VIDO), University of Saskatchewan, Saskatoon, SK, Kanada.

2.4. Pran echantiyon

Yo te mete ti prelèvman nen ki soti nan chak twou nen nan 1 mL MEM ki gen 1 × antibyotik antimikotik (Thermo Fisher Scientific, Ottawa, ON, Kanada, 15240-062) epi yo te jele nan -80 ◦C jiskaske qRT-PCR te fèt. Tout kochon yo te imanize pa administrasyon venn nan etanòl (240 mg / mL sodyòm pentobarbital; 2 mL pou chak 4.5 kg). Lè yo fin fè Etanazi, yo te retire poumon yo an total pou detèmine tou de pousantaj vyolèt-wouj, blesi fèm ak nemoni.

Pousantaj yo te detèmine dapre pwa lòb nan poumon ak volim nan poumon tout antye [18]. Echantiyon poumon yo te pran tou nan lob dwat apical, kadyak ak dyafragmatik pou titrasyon viral. Echantiyon poumon sa yo te melanje nan volim egal nan 10 pousan w / v MEM ki gen 1 × antibyotik-antimikotik pou titration.

Figi 1. Gwoup kochon ak konsepsyon esè pou evalye efikasite pwoteksyon LAIV bivalan kont nouvo izole klinik yo. Kochon (n=5 pou gwoup MEM/MEM ak n=7 pou gwoup bivalan/bivalan) yo te pran vaksen entratracheal ak 4 mL MEM oswa vaksen bivalan ki konpoze de 1 × 106 PFU. nan chak SD191−R342V ak SD69-K345V nan jou 0 ak 21.

Nan jou 31, kochon yo te defye intratracheally ak MEM oswa 1 × 106 PFU nan swa SD435 (H3N2) oswa SD467 (H1N2). (A) Orè vaksen an, defi, ak pran echantiyon pou esè bèt sa a. Vennkat kochon swIAV-negatif ki gen kat semèn te pèmèt yo aklimate pandan sèt jou anvan enfeksyon. Nan senk semèn ki gen laj (jou 0) osi byen ke nan uit semèn ki gen laj (jou 21), kochon yo nan gwoup A ak B yo te pran vaksen intratracheally mock ak 4 mL MEM, pandan y ap gwoup C ak D yo te pran vaksen ak yon vaksen bivalan. ki gen 1 × 106 PFU nan chak SD191−R342V ak SD69-K345V nan 4 mL MEM.

Dis jou apre (jou 31), kochon yo te defye swa ak MEM (mock) oswa 1 × 106 PFU swa SD435-WT (H3N2) oswa SD467-WT (H1N2). Yo te kontwole kochon yo pandan senk jou apre defi, ak tanperati rektal yo te pran chak jou epi yo te pran prelèvman nan nen yo nan tou de twou nen yo nan jou 1, 3, ak 5.

Serom yo te kolekte apre premye (jou 20) ak dezyèm (jou 30) vaksen an. Nan jou 5 apre defi (jou 36) tout kochon yo te imanize, epi yo te ekstrè poumon yo pou evalyasyon. (B) Kreye ak BioRender.com.

For more information:1950477648nn@gmail.com