Yon esè ki pa owaza ki mennen ankèt sou enpak konsomasyon diri mawon sou mikrobyota zantray, atansyon, ak memwa travay kout tèm nan timoun ki gen laj lekòl Thai Pati 2

2.4. Kantitatif analiz de mikrobyota fekal

Echantiyon fekal yo te ranmase nan men timoun yo nan debaz, Semèn 4, 15, 56, ak 61, ak Semèn 71 nan resipyan esterilize epi yo te imedyatman jele nan -80 ◦C. Ekstraksyon ADN mikwòb ak mezi quantitative nan abondans absoli nan mikrobiotafe fekal te fèt jan sa dekri deja [29].

Relasyon ki genyen ant mezi quantitative ak memwa se yon sijè ki merite etid. Pou anpil pwoblèm nan lavi, pwoblèm memwa se souvan yo ki deranje moun, tankou lè yo pa kapab sonje bagay enpòtan, bliye lè randevou, elatriye. Nan moman sa a, metòd mezi quantitative ka ede nou konprann sitiyasyon an nan memwa epi fè amelyorasyon vize. .

Metòd mezi kantite ka quantifier memwa moun nan mwayen syantifik. Sou baz sa a, yo pwopoze kèk metòd espesifik ak efikas pou fòme memwa. Nan lavi chak jou, nou ka itilize tou metòd senp pou fòme memwa, tankou memorize mo, pwezi, elatriye. Sa yo se tout fason efikas pou devlope bon memwa.

An menm tan an, nou ka amelyore memwa tou nan tout aspè nan lavi. Pa egzanp, si nou vle sonje yon nouvo mo vokabilè, nou ka li plizyè fwa, ekri li plizyè fwa, oswa asosye li ak siyifikasyon li, pou memwa a pral pi pwofon.

Nan epòk eksplozyon enfòmasyon an, nou souvan santi nou akable pa enfòmasyon. Anpil fwa nou bezwen sonje anpil bagay, men nou pa konnen ki jan fè fas ak enfòmasyon sa yo. Nan moman sa a, nou ka itilize metòd mezi quantitative pou detèmine estati memwa nou an, epi antrene ak amelyore selon sitiyasyon espesifik. Atravè metòd memwa rezonab, nou ka efektivman amelyore memwa nou epi bay plis konvenyans pou lavi nou ak travay nou.

Nan ti bout tan, relasyon ki genyen ant mezi quantitative ak memwa se inséparabl. Nou bezwen sèvi ak metòd syantifik pou dekouvri kondisyon memwa nou yo, ak Lè sa a, fè fòmasyon efikas ki baze sou sitiyasyon espesifik. Mwen kwè ke toutotan nou antrene san pran souf, nou pral kapab ranfòse memwa nou ak amelyore kalite lavi nou. Li ka wè ke nou bezwen amelyore memwa, ak Cistanche deserticola ka siyifikativman amelyore memwa, paske Cistanche deserticola kapab tou kontwole balans nan nerotransmeteur, tankou ogmante nivo yo nan asetilkolin ak faktè kwasans. Sibstans sa yo trè enpòtan pou memwa ak aprantisaj. Anplis de sa, Vyann kapab tou amelyore sikilasyon san ak ankouraje livrezon oksijèn, sa ki ka asire ke sèvo a resevwa ase eleman nitritif ak enèji, kidonk amelyore vitalite nan sèvo ak andirans.

Klike sou konnen sipleman pou ranfòse memwa

Yon ti tan, yo te ekstrè ADN mikwòb jenomik nan echantiyon fekal lè l sèvi avèk innuPREP Stool DNA Kit (Analytik Jena Biometra, Jena, Almay), ak konsantrasyon ADN ak pite yo te detèmine lè l sèvi avèk Take 3Micro-Volume Plate (Biotek, Winooski, VT, USA).

Lè sa a, abondans absoli nan jèn rRNA microbiota16s te mezire atravè qPCR lè l sèvi avèk Real-Time Thermal CyclersCFX96 TouchTM (Bio-Rad, Singapore) ki baze sou primè espesifik yo montre nan Tablo S1.

Kondisyon qPCR yo ak estimasyon nimewo kopi mikrobyota yo te fèt apre pwotokòl anvan an [37]. Nimewo kopi Log10 16S rRNA pou chak gram fekal mouye prezante nan Done siplemantè nou an.

2.5. Analiz estatistik

Yo te egzamine distribisyon done atravè tès Shapiro-Wilk ak tès Levene (stats package version 4.0.3). Pake R ggplot2 te itilize pou vizyalizasyon done [38].Koreksyon p-valè Benjamin-Hochberg (BH) te aplike pou koreksyon tès miltip (valè q). Yo te detèmine siyifikasyon nan q < 0.05. Tout analiz estatistik yo te fèt nan vèsyon lojisyèl R 4.0.3 [39].

Diferans nan abondans absoli mwayèn nan mikrobyota zantray ant gwoup entèvansyon yo pou chak pwen tan yo te detèmine pa tès t oswa Wilcoxon ran sòm tès dapre nòmal distribisyon done yo.

Chanjman nan mikrobyota nan zantray ant pwen tan chak faz (nan matyè yo) yo te evalye lè l sèvi avèk tès t par pa oswa tès ran Wilcoxon siyen apre rezilta enpòtan nan ANOVA mezi repete yon sèl-fason oswa tès Friedman (p < 0 .05). ). Chanjman nan abondans absoli nan gutmicrobiota ant semèn yo te eksprime kòm log2 transfòme chanjman pliye (Log2FCs).

Relasyon ant abondans absoli mikrobyota zantray ak laj timoun ki gen laj lekòl yo te detèmine lè l sèvi avèk koyefisyan korelasyon Pearson oswa Spearman.

Asosyasyon ant mikrobyota zantray ak entèvansyon nan chak moman, ajisteman pou varyab demografik (laj, sèks, BMI z-score, mòd livrezon, dosye nesans, ak etnisite), yo te evalye atravè analiz multivarye permutasyonèl nan divèjans (PERMANOVA) lè l sèvi avèk fonksyon Adonis. . Pou mennen ankèt sou efè a nan entèvansyon atravè semèn yo nan chak faz, PERMANOVA te fèt lè l sèvi avèk patisipan yo kòm kouch epi ajiste pou kovaryè yo. Kondisyon pou omojeneite ki baze sou distans Euclidean te mezire ak fonksyon betadine.

Pèmitasyon te fèt nan 999 nan pake R vegan (2.6-2) [40]. Nou te detèmine plis enpak entèvansyon sou mikrobiota zantray lè l sèvi avèk analiz redundancy (RDA) pandan y ap ajiste pou kovaryè.

Tretman yo te itilize kòm varyab eksplikasyon kontrent, ak abondans absoli nan mikrobiota zantray yo te itilize kòm varyab repons. Siyifikasyon kontrent yo te evalye lè l sèvi avèk yon tès pèmitasyon ki sanble ak ANOVA (pèmitasyon=999). Yon seleksyon pa etap nan varyab eksplikasyon yo te fèt lè l sèvi avèk fonksyon etap la ki baze sou kritè AIC.

Rezilta kognitif ant gwoup entèvansyon yo pou chak semèn yo te konpare avèk Welch de echantiyon t-tès la oswa tès sòm ran Wilcoxon. Yon diferans nan pèfòmans mantal atravè semèn yo nan chak faz (nan matyè yo) te detèmine ak tès ran Wilcoxon siyen apre rezilta enpòtan nan tès la Friedman (p < 0.05).

Nou itilize RDA pou detèmine efè entèvansyon sou pèfòmans mantal timoun ki gen laj lekòl pandan n ap ajiste pou laj ak sèks yo. Efè timepoints yo sou abondans microbiota zantray yo te evalye tou atravè RDA lè l sèvi avèk patisipan yo kòm kouch.

Kondisyon RDA te kontinye jan sa dekri pi wo a. Pou detèmine relasyon ki genyen ant pèfòmans mantal ak mikrobiota zantray, nou te itilize koyefisyan rankkorrelasyon Spearman a.

Analiz miltip faktè (MFA) te fèt pou eksplore varyasyon nan mikrobyota zantray ki ta ka eksplike pa entèvansyon ak varyab lame (laj ak sèks) lè l sèvi avèk FactoMine R vèsyon 2.4 [41] ak vizyalize ak Factoextra vèsyon 1.0. 7 [42].

3. Rezilta yo

3.1. Karakteristik timoun ki gen laj lekòl

Apre kontwòl kalite done (Figi 1), nou analize rès 85 ak 57 timoun yo nan Faz I ak II, respektivman. Timoun nan debaz la te an mwayèn 7.02 ak 10.52 ane pou gwoup WR ak SLR, respektivman.

Karakteristik debaz gwoup kontwòl ak entèvansyon yo te siyifikativman diferan pou laj (p <{{0}}.{0001), pwa (p <0.0001), wotè (p <0.0001), BMI z- nòt (p=0.03), ak kalite manje (p=0.02) (Tablo S2).
Yo te obsève yon modèl ki sanble tou atravè pwen tan etid yo, eksepte pou BMI, ki pa t diferan anpil ant gwoup yo nan Semèn 71 (Tablo S3-S7).

3.2. Efè Entèvansyon Diri Sinlek sou Mikwobyota zantray timoun ki gen laj lekòl yo

Lè nou konsidere chak nan pwen tan yo, pa te gen okenn diferans enpòtan nan abondans absoli nan mikrobyota zantray ant gwoup kontwòl (WR) ak gwoup entèvansyon Sinlek (SLR) nan premye faz entèvansyon (Faz I; debaz, Semèn 4, ak Semèn 15). ).

Konparezon miltivarye lè l sèvi avèk PERMANOVA (pa Marge) te montre tou ke entèvansyon an nan Faz I pa te gen okenn efè enpòtan sou chanjman nan mikrobiota zantray apre ajisteman pou varyab demografik (Fichiye Siplemantè S1).

Nou te detèmine plis yon asosyasyon ant abondans mikrobyota nan zantray ak laj epi nou te jwenn ke Lactobacillus te korelasyon negatif ak laj nan debaz la (korelasyon Pearson a; R {{0}} -0.24, p {{{ 3}}.026) ak Semèn 4 (korelasyon Pearson a; R=-0.3, p=0.002) (Figi 2b, d). Pou dezyèm faz entèvansyon an (Faz II), chanjman nan abondans mikwòb yo, sepandan, te make nan Semèn 61 ak 71. Abondans total bakteri (q=0.032) ak Firmicutes (q=0.032). ) yo te ogmante siyifikativman, tandiske nivo Gammaproteobacteria (q <0.0001) te siyifikativman diminye apre entèvansyon SLR nan Semèn 61 (Figi 2e-g).

Bakteri sa yo te siyifikativman asosye ak laj, kote abondans bakteri total (korelasyon Pearson a; R {{0}} -0.32, p=0.0 15) ak Firmicutes (korelasyon Pearson a; R=-0.32, p=0.014, Figi 2h) te diminye pandan laj ogmante, pandan ke abondans absoli Gammaproteobacteria te korelasyon pozitivman ak laj (korelasyon Pearson a; R { {11}}.62, p <0.0001, Figi 2i).

Nan Semèn 71, nivo Bacteroidetes te siyifikativman redwi nan gwoup SLR (q < 0.0001) (Figi 2j), epi abondans li yo te korelasyon pozitivman ak laj (korelasyon ran Spearman a; R { {4}}.57, p <0.0001, Figi 2l).

Lè nou konsidere chanjman ki fèt nan abondans mikrobyota nan zantray atravè semèn yo (nan sijè) nan gwoup kontwòl ak entèvansyon, nou obsève modèl menm jan an nan de gwoup patisipan yo. Gammaproteobacteria te sanble yo trè varye entèvansyon sa a: abondans li yo te siyifikativman diminye nan Semèn 4 ak Semèn 61 (Figi 3a, b, S1c, ak S2c, Fichye Siplemantè S2).

Nivo bakteri sa yo te parèt yo rebondi, sepandan, nan pwen final chak faz (Semèn 15 ak Semèn 71). Anplis, abondans Bacteroidetes pou gwoup SLR a te pi ba nan Semèn 71 konpare ak Semèn 56 ak 61 (Figi 3a ak S2e). Yon diminisyon gradyèl nan abondans de taxon mikwòb yo, sètadi, Ruminococcus ak Bacteroides, te obsève tou pandan Faz II, ak abondans yo te pi ba nan pwen final jijman an (Semèn 71) (Figi 3b ak S2f, g), kèlkeswa entèvansyon an.

Anplis de sa, nou te evalye si te gen diferans nan abondans nan mikrobyota zantray ant tretman yo ak atravè semèn yo lè l sèvi avèk patisipan yo kòm strat. abondans mikrobiota zantray (p < 0.05).

Dispèsyon (divèyans) ant gwoup yo ak yon modèl kontablite pou varyab demografik ak siyifikasyon estatistik yo rezime nan Fichye Siplemantè S3.Nou plis eksplore fòs nan asosyasyon ak varyasyon nan microbiota zantray eksplike pa entèvansyon an lè l sèvi avèk RDA. Diferans enpòtan yo te jwenn sèlman nan Faz II.

Abondans Gammaproteobacteria te plis anrichi nan gwoup kontwòl la (WR) pase nan gwoup SLR, pandan y ap pi wo bakteri total, Firmicutes, ak Bacteroidetes te asosye ak entèvansyon SLR nan Semèn 61 (RDA1 eksplike 30.58% nan divèjans total, R2adj {{5} }.29,p=0.001, Figi 3c). Pou Semèn 71, abondans Bacteroidetes te pi wo nan gwoup kontwòl la pase nan gwoup SLR (RDA1 eksplike 8.18% nan divèjans total la, R2adj=0.06,p=0.005, Figi 3d) .

Lè sa a, nou te kontinye ak yon seleksyon pa etap nan varyab eksplikasyon (entèvansyon ak varyab demografik) ki baze sou AIC la. Modèl la te revele ke sèlman entèvansyon an te eksplike siyifikativman varyasyon nan pwofil mikrobyota zantray timoun ki gen laj lekòl (q=0.035).

3.3. Pèfòmans kognitif ant Gwoup Kontwòl ak Entèvansyon

Nan Faz I, nou te jwenn diferans enpòtan ant gwoup kontwòl ak entèvansyon nan rezilta mantal yo. Gwoup SLR la te montre yon nòt ki pi wo nan tès blòk-tapping Corsi (ki rele MMG, jwèt matche memwa) ak pèfòmans jeneral (OVP) nan tès vijilans sikomotè (PVT-B), pandan tan reyaksyon (RT) ak echèk yo te pi ba pase kontwòl la. gwoup (Figi 4).

Nan Faz II, modèl pèfòmans mantal yo pa t chanje. Nou menm tou nou te konpare pèfòmans kognitif (nan matyè yo) atravè semèn yo nan chak faz epi nou te jwenn ke gwoup kontwòl la (Faz I) te fè pi byen sou echèk nan Semèn 15 konpare ak debaz la ak Semèn 4 (q=0.02) (Figi S3). RT te pi wo nan Semèn 15 konpare ak Semèn 4 (q=0.008), tandiske pa gen okenn diferans enpòtan nan MMG oswa OVP yo te detekte. MMG se sèl rezilta kognitif ki te siyifikativman pi wo pou gwoup SLR (Faz I) nan Semèn 15 konpare ak debaz (q=0.003) ak Semèn 4 (q=0.03) (Figi S4) .

Nan Faz II, pa te gen okenn diferans enpòtan atravè semèn yo nan nenpòt nan mezi pèfòmans mantal yo nan swa gwoup kontwòl oswa SLR. Anplis de sa, laj ak sèks yo te enkli tou nan RDA a, ak rezilta yo pa te montre okenn efè entèvansyon sou pèfòmans mantal timoun yo. nan nenpòt gwoup nan nenpòt nan pwen tan yo sou 71 semèn yo nan jijman an.

Sepandan, yo te jwenn ke laj yo dekri yon fason siyifikativ varyasyon rezilta mantal yo nan debaz (p=0.008), Semèn 4 (p=0}.005), ak Semèn 15 (p=0). .028) (Figi 5), pou ki laj te pozitivman korelasyon ak MMGand OVP. Pa gen okenn efè enpòtan ki te koze pa entèvansyon, laj, oswa sèks sou pèfòmans kognitif yo te jwenn nan Semèn 56, Semèn 61, oswa Semèn 71.

Lè w ap konsidere pwofil kognitif atravè semèn chak tretman nan chak faz, tou de semèn (p=0.001) ak sèks (p=0.001) dekri siyifikativman varyasyon nan pèfòmans mantal gwoup kontwòl la (Faz I) , pou ki sèks fi a ak Semèn 15 yo te pozitivman korelasyon ak MMG ak OVP (Figi S5a).

Timoun yo te fè pi byen nan MMG nan Semèn 15 nan gwoup la SLR (Faz I), pandan y ap fè sèks nan fi pozitivman korelasyon ak echèk ak RT (Figi S5b). Efè ajisteman tretman an pou laj ak sèks yo te evalye tou pou chak faz pandan y ap kontwole pou semèn nan (pwen tan). RDA te montre ke age te gen yon relasyon solid ak OVP ak MMG nan Faz I (Figi S6a), tandiske, nan Faz II, pèfòmans sou RT ak echèk te pi mal nan gwoup SLR a pase nan gwoup kontwòl la (Figi S6b).
An jeneral, laj ak pwen tan yo te plis asosye ak pèfòmans kognitif timoun ki gen laj lekòl pase entèvansyon an, epi efè entèvansyon an te sèlman obsève lè yo te limite echantiyon yo chak semèn nan Faz II apre yo fin ajiste pou laj ak sèks yo.

3.4. Asosyasyon ant Mikwobyota zantray ak pèfòmans kognitif timoun ki gen laj lekòl

Nou te jwenn korelasyon fèb ant mikrobiota zantray ak rezilta kognitif nan tout pwen entèvansyon an ki baze sou koyefisyan korelasyon Spearman yo. Plizyè asosyasyon te enpòtan (p <{{0}}.05), men se yon sèl asosyasyon, detekte nan semèn 4 pou gwoup SLR la (Roseburia vs. Lapses, rho=-0.40, q {{6 }}.04), te rete siyifikatif apre ajisteman pou konparezon miltip (Figi S7).

Kèk asosyasyon ki te apwoche siyifikatif yo te jwenn nan Semèn 56 ak Semèn 71. Asosyasyon yo te idantifye nan gwoup SLR nan Semèn 56 enkli Faecalibacterium–RT (rho=0.62, q=0.07). ), Prevotella–OVP(rho=-0.55, q {{{10}}.08), Gammaproteobacteria–OVP (rho=-0.58, q=0.07), ak Faecalibacterium–OVP (rho=-0.64, q=0.05). Nan Semèn 71, Faecalibacterium te korelasyon pozitivman ak RT nan gwoup kontwòl la (rho=0.62, q=0.07).

Kontablite pou laj ak sèks, plis analiz de asosyasyon ki genyen ant microbiota zantray ak pèfòmans mantal nan chak pwen lè yo te fèt lè l sèvi avèk yon MFA pou revele varyasyon ant pwofil endividyèl gwoup tretman yo (Fichiye Siplemantè S4).

Malgre ke varyasyon endividyèl yo te eksplike pa abondans nan mikrobyota nan Dim 1 nan tou de faz (p <0.0001), yo te note yon gwo separasyon ant gwoup kontwòl ak SLR yo nan Dim. 2 (Figi 6 ak 7). Pwofil kontras ant de gwoup sa yo te enfliyanse pa laj ak OVP, ki te pozitivman korelasyon ak Dim 2 (p <0.0001), tandiske tou de RT ak echèk yo te negatif korelasyon (p <0.0001).

Sepandan, Gammaproteobacteria te pi enfliyan nan dekri varyasyon endividyèl nan dimansyon sa a nan Semèn 61 (p <0.0001). Nivo bakteri sa a te pi ba nan gwoup SLR (kowòdone=-1.35, p <0.0001).

Malgre gwosè echantiyon inegal, MFA a te endike ke diferans nan pwofil timoun ki gen laj lekòl nan esè klinik ki pa randomized sa a te plis enfliyanse pa laj ak pèfòmans mantal pase pa mikrobiota zantray, sijere mwens kontribisyon pa entèvansyon an nan varyasyon endividyèl nan etid sa a.

4. Diskisyon

Etid nou an pa te obsève okenn chanjman enpòtan nan abondans absoli mikrobyota nan zantray apre premye faz entèvansyon diri Sinlek la nan timoun ki gen laj lekòl. Sepandan, diferans enpòtan ant gwoup yo te note nan Faz II (Semèn 61 ak 71) pou totalbacteria, Firmicutes, Bacteroidetes, ak Gammaproteobacteria.

Nou menm tou nou te obsève diferans enpòtan nan pèfòmans mantal ant gwoup kontwòl ak entèvansyon nan toude faz yo. Nou pa t 'jwenn yon korelasyon fò ant microbiota zantray ak pèfòmans kognitif nan nenpòt ki pwen.

Plis analiz te sigjere ke, nan kòwòt sa a, entèvansyon diri Sinlek pa t 'kontribye nan varyasyon nan mikrobyota nan zantray ak pwofil mantal timoun ki gen laj lekòl, kòm rezilta yo te enfliyanse prensipalman pa laj.

For more information:1950477648nn@gmail.com