Aktivite gide izolasyon konpozisyon fenolik nan miray Anneslea Fragrans. Ak efè cytoprotective yo kont oksijene idwojèn pwovoke estrès oksidatif nan selil HepG2 Pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

2.7. Efè inhibition sou jenerasyon ROS intraselilè

Estrès oksidatif se yon kalite move balans ant oksidasyon ak antioksidasyon nan kò a [28]. Akimilasyon twòp nan ROS ka mennen nan estrès oksidatif ki ka lakòz domaj nan selil ak tisi tankou lipid, manbràn, ak ADN [29]. Antioksidan ki gen ladan polifenol ak flavonoid ka ede kò a diminye domaj sa yo ki te koze pa ROS. Anjeneral, H, O, lajman itilize pou pwovoke ROS entraselilè pwodiksyon dezòd ak afekte defans antioksidan nan selil [30]. Nan etid nou an, yo te chwazi H2O2 pou pwovoke akimilasyon an nòmal nan ROS intraselilè ak afekte defans antioksidan nan selil yo. Pou evalye efè inhibition sou jenerasyon ROS intraselilè nan selil HepG2 H, O2-pwovoke, nivo ROS entraselilè yo te teste pa sikometri koule. Yon ti tan, selil HepG2 yo te kiltive nan yon plak 6-byen (1 × selil 10 degre / pi). Apre enkubasyon pou 24 èdtan nan 50 ug / ml nan ekstrè diferan oswa 8 ug / mL nan Vc (gwoup pozitif), tout gwoup yo eksepte pou gwoup kontwòl la te pwovoke pa HO, pou 6 èdtan. Yo te teste ROSlevels yo nan chak konpoze (Figi 3). Rapò jenerasyon ROS a siyifikativman ogmante a 215.64±9.80 pousan nan H2O,-gwoup la trete konpare ak gwoup kontwòl la (100 pousan). Konpare ak gwoup H, O,-trete a, konpoze 2,5, ak 6 konsiderableman siprime pwodiksyon entraselilè ROS (p<0.05), and="" their="" inhibitory="" effect="" was="" equal="" to="" the="" vc="" group="" (figure="" 3).="" many="" phenolics="" have="" been="" proven="" to="" have="" a="" protective="" effect="" against="" intracellular="" ros="" by="" h2o2="" induction[31].="" additionally,="" compound="" 6="" displayed="" the="" strongest="" suppressive="" effect="" on="" intracellular="" ros="" production,="" which="" suggests="" that="" flavonoid="" compounds="" play="" a="" crucial="" role="" in="" inhibiting="" intracellular="" ros="">

2.8. Efè Cytoprotective kont H2O2-Apoptoz selil pwovoke

Apoptoz se yon fenomèn debaz byolojik nan selil, ki jwe yon wòl enpòtan nan mekanis regilasyon nan pwopagasyon selil yo, kwasans, ak mitasyon, ak estabilite nan anviwònman an entèn yo. Apoptoz, diferan de nekwoz, se yon kalite espesyal lanmò selil. Twoub pwosesis apoptotik la gen move efè sou kò a ak lakòz anpil maladi [32]. H2O2, kòm yon molekil siyal enpòtan, kontwole pwosesis pwopagasyon selil, kwasans, ak apoptoz [5]. Etid la kounye a mezire apoptoz H, O,-induit HepG2cells ak evalye efè cytoprotective nan konpoze 2, 5, ak 6. Apre trete selil HepG2 ak 1.0 mM H2O2, rapò a apoptoz te konsiderableman ogmante ( 57.20±1.97 pousan), konpare ak gwoup kontwòl la (9.10±0.62 pousan,p<0.05)(figure 4).="" the="" ratios="" of="" apoptotic="" cells="" in="" the="" treated="" groups="" of="" compounds="" 2,="" 5,="" and="" 6="" significantly="" decreased="" compared="" with="" the="" h2o2-treated="" group="" (model="" group,=""><0.05)(figure 4).="" moreover,="" compound="" 6="" had="" significant="" efficiency="" in="" protecting="" hepa-2="" cells="" from="" h2o2="" toxicity,="" and="" the="" cell="" apoptosis="" ratio="" of="" 6(10.56±1.15%)was="" lower="" than="" that="" of="" the="" vc="" group="" (positive="" control),="" which="" was="" equal="" to="" that="" of="" the="" control="" group(figure="" 4).="" meanwhile,="" compounds="" 2="" and="" 5="" showed="" a="" moderate="" cytoprotective="" effect="" with="" cell="" apoptosis="" ratios="" of="" 2(26.76±2.60%)="" and="" 5(27.64±0.83%).="" the="" differences="" in="" antioxidant="" capacity="" may="" be="" attributed="" to="" the="" number="" of="" phenolic="" hydroxyl="" moieties="" and="" the="" link="">

3. Materyèl ak Metòd

3.1. Pwodwi chimik ak reyaktif

Methanol, asetonitrile, ak asid fòmik pou segondè-pèfòmans likid chromatografi (HPLC) te nan klas HPLC ak achte nan Merck (Darmstadt, Almay). Solvang pou fè ekstraksyon echantiyon ki gen ladan etanòl, dichloromethane, ak n-butanol te nan klas analyse. Dlo deyonize yo te pirifye lè l sèvi avèk yon sistèm dlo ultrapur Milli-Q (Millipore, Bedford, Massachusetts, MA, USA) epi yo te anplwaye nan tout eksperyans yo. Konpoze fenolik estanda nan asid galik, rutin, Trolox, ak vitamin C yo te achte nan men Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd.(Chengdu, Lachin). Methylthiazol-2-yl{-25-diphenyl tetrazolyum bromur (MTT), Folin-Ciocalteu reagent, 2,2'-and-bis(3-ethylbenzene-thiazoline-6-sulfonic acid)( ABTS),2,2-difenil-1-picrylhydrazylradical (DPPH), 1,3,5-tri({2-piridil)-2,4,{{23 }}triazine (TPTZ), 2',7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA), ak FeSO4-7HOW te achte nan men Sigma-Aldrich (Shanghai, Lachin). Yo te jwenn espèk RMN yo lè l sèvi avèk espektwomèt Bruker AV-400, ak/oswa DRX-500. ESIMS spectre yo te anrejistre sou yon espektromètr Agilent 1290 UPLC/6540 Q-TOF.

Tanpri klike la a pou w konnen plis

3.2. Preparasyon echantiyon

Anneslea fragrans mi. fèy yo te ranmase nan vil Lincang nan peyi Lachin nan Jiyè 2020. Fèy yo te cheche nan yon chanm lonbraj jiskaske pwa konstan ak Lè sa a, yo te an poud ak yon moulen elektrik. Ekstraksyon ak fraksyon yo te fèt kòm metòd nou te rapòte deja ak yon ti modifikasyon [33]. Echantiyon an poud (1 0 0 g) te melanje ak 1000 mL nan 80 pousan akeuz etanòl sòlvan ak ultrasonicated nan yon beny netwayaj ultrasons nan 200 W twa fwa (0.5 h pou chak tan). Lè sa a, yo te kolekte sispansyon sonike ak santrifuje nan 1500 × g pou 10 min pa Eppendorf santrifujeur (TGL -20 B, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, Shanghai, Lachin). Supernatant konbine a te konsantre nan 50 degre pa yon evaporator rotary (Hei-VAP, Heidolph, Almay) ak plis seche pa yon vakyòm siye lyophilizer (Alpha 1-2 LD plis, Kris la, Almay). Ekstrè etanòl brit la (CE, 30 g) te re-sispann ak dlo ak sekans divize ak dichloromethane, acetate etil, ak solvang n-butanol twa fwa. Apre konsantrasyon ak lyofilizasyon, yo te jwenn fraksyon dichloromethane (DF), fraksyon etil acetate (EAF), yon fraksyon n-butanol (BF), ak fraksyon dlo rezidyèl (RWF) ki peze 3.2 g, 6.3g, 7.2 g, ak 8.2 g. , respektivman. Dapre aktivite yo antioksidan nan fraksyon diferan, BF a te chromatographed sou kolòn vè (30 mm × 400 mm) mouye-chaje ak 20 g (sèk résine) nan résine idrate D101 la chwazi. Volim kabann lan (BV) nan résine a te apeprè 40 mL. Apre yo fin rive nan saturation adsorptive, kolòn nan te premye lave pa dlo distile ak 4 × BV ak Lè sa a, eluye pa etanòl-dlo (0:100,20:80,50:50,80:20,100:0,v / y, chak 4 × BV), pou bay senk soufraksyon (BF-A rive nan E). Chak pati nan solisyon yo desorption te konsantre nan sechrès anba yon vakyòm. CE, kat fraksyon (DF, EAF, BF, ak RWF), ak senk soufraksyon (BF-A rive E) yo te estoke nan yon frijidè (-20 degre) pou plis eksperimantasyon.

3.3. Izolasyon Bio-Gide nan Konstitiyan Aktif

Anba konsèy tès antioksidan ak analiz HPLC, fraksyon antioksidan an te plis chromatographed pou izolasyon konpoze pi. An brèf, BF a te sibi yon kolòn idrate résine D101 pou bay senk subfraksyon (BF-A rive nan E). BF-C (1.5g) te sibi yon kolòn jèl silica, elisyon ak DCM/MeOH (15:1), epi apre sa yo te separe lè l sèvi avèk preparasyon TLC (DCM/MeOH, 10:1) pou jwenn konpoze 6 (118 mg). ) ak 7 (10 mg). BF-D (1.1 g) te sibi kolòn jèl silica (CHCl3/MeOH 10:1, 5:1) bay konpoze 1 (129 mg) ak 4 (15 mg). BF-E (1.2 g) te sibi kolòn jèl silica (CHCl3 / MeOH, 30:1, 10:1, 5:1) bay konpoze 1 (216 mg), 2 (135 mg), ak yon melanj. Lèt la te pirifye pa kolòn jèl silica (CHCl3 / MeOH). ,12:1)pou peye konpoze 3 (19 mg) ak 5 (15 mg) (Figi 5).

3.4.Estrikti elisidasyon konpoze 1-7

Dapre aktivite yo antioksidan nan fraksyon diferan, twa subfraksyon, BF-C rive E yo te soumèt nan kolòn kwomatografi. Nan fason sa a, fraksyon nan Bioaktivite-gide nan BF-C nan E mennen nan izolasyon an nan sèt konpoze fenolik endividyèl. Yo te idantifye estrikti yo kòm konfuzozid(1)[34], vaksinifolin (2)[34],1-[4-(-D-glucopyranosyloxy)-2-hydroxyphenyl]-3- (4-idwoksi-3-metoksifenil)-1-propanon (3) [35], (S)-naringenin-7-O- -D-glucopyranoside (4)[ 22],2',3,4,4'-tetrahydroxydihydrochalcone(5)[26], (epi)-catechin (6)[26], ak cornoside (7)[36](Figi 1B)pa analiz 1D -NMR ak ESI-MS done ak konparezon ak konpoze yo deja rapòte nan literati a. Pami yo, konpoze 3,4, ak 7 yo te izole nan plant sa a pou premye fwa.

Cistanche ka amelyore iminite

Confusoside (1). Fòmil molekilè a te plase kòm C21H24O, epi separasyon an te bay 129 mg zegwi jòn pal. 'IH NMR (500 MHz, DMSO-d6) ak ESI-MS (m/z 421 [M plis H]) done yo te idantik ak konpoze ki te deja rapòte nan literati a [34]. Idantifikasyon an te sipòte plis pa 13C NMR（125 MHz,DMSO-dg）∶δ204.4 （s,C=O),163.5(s,C-2'),163.3(s,C). -4'),155.5(s,C-4),132.6(d,C-6'),130.9(s,C-1),129.2(d,C -2, 6),115.0(d,C-3/C-5),114.4(s, C{-1'),108.3(d, C{{45} }'),103.4(d,C-1"),99.6(d,C{-3'),77.1(d,C{-5"),76.4(d,C{{{ 57}}"),73.1(d,C-2"),69.5(d,C4'),60.5(t,C-6'),39.8(t,C-),28.9( t, C-6).

Vacciniifolin (2) te jwenn kòm jòn poud amorphe (153 mg) ak asiyen yon fòmil molekilè nan C2H24O1o.'H NMR (500 MHz, DMSO-dg) ak ESI-MS (m/z 437 [M). plis H]) done yo te menm jan ak done yo te rapòte anvan [34]. Idantifikasyon an te sipòte plis pa 13CNMR（125 MHz,DMSO-de）∶δ204.4 （s, C=O）,163.5（s, C-2'）,163.3 (s, C{ {21}}),145.0(s, C-3),143.3(s, C-4),132.6(d, C-6),131.7(s, C{{33) }}),118.9(d, C-6),115.8(d, C-2),115.4(d, C{-5),114.4(s, C-1 '), 108.3(d, C-5'),103.4(d, C{-1'),99.6(d,C{-3'),77.1(d, C{{57 }}"),76.4(d,C-3'),73.1(d,C-2"),69.5(d,C{-4'),60.5(t,C{ {69}}'),39.4(t,Ca),29.1(t, C-6).

{{0}}[4-(-D-Glucopyranosyloxy)-2-idroksifenil]-3-({4-idwoksi-3-metoksifenil){{8 }} propanone (3). Yo te jwenn konpoze an kòm zegwi san koulè (19mg), epi yo te plase fòmil molekilè a kòm C22H2O10.'H NMR(400 MHz, DMSO-d6) ak ESI-MS (m/z451 [M plis H]* ) done yo dakò ak literati a [35]. Idantifikasyon an te sipòte plis pa 13CNMR（100 MHz,DMSO-d）∶δ204.5（s,C=O）,163.5（s,C-2'）,163.3（s,C{ {31}}'）,147.4（s,C-3),144.6(s,C-4),132.6(d,C-6),131.6(s,C{{{ 43}}),120.4(d,C-6),115.2 (d,C-5),114.5(s,C-1'), 112.6(d,C{{55 }}),108.3(d,C-5'), 103.3 (d,C{-1"),99.5 (d,C{-3'),77.0(d,C{{{ 67}}'),76.3(d, C-3"), 73.0(d,C-2"),69.5(d,C{-4'),60.5(t,C -6'),55.5(q,C-OCH3),39.5(t,C-),29.4(t,C-6).

(S)-Naringenin-7-O- -D-glucopyranoside (4) te gen fòmil molekilè C21H2.O10, ki te jwenn kòm 15 mg poud blan. IH RMN (500 MHz, DMSO-dg) ak ESI-MS (m/z 435 [M plis H] plis) done yo te dakò ak travay anvan an [22]. Idantifikasyon an te sipòte plis pa 13C RMN（125 MHz, DMSO-d）∶δ197.2 （s, C-4）,165.3（s, C-7), 165.2 (s, C{{25 }}), 162.9 (s, C-9), 157.9 (s, C{-4'), 128.6 (s, C{-1'), 128.4 (d, C{{37 }}',6'),115.2 (d, C-3'/C-5'),1{{110}}3.2 (s,C{-10 ),99.6(d,C{-1'),96.5(d,C{-6),95.4(d,C{-8),78.7(d,C{-2) ,77.0(d, C{{6{{240}}}}"),76.3 (d,C{-3'),73.0(d,C{{ 66}}"), 69.5 (d,C-4'),60.5(t,C-6'),42.0(t,C{-3). 2'3,4,A'-Tetrahydroxydihydrochalcone (5) posede fòmil molekilè a kòm C15H4O5 ak separe (15 mg) kòm poud blan.'H NMR (400 MHz, DMSO-dg) ak ESI-MS (m/z 275 [ M plis H] plis) done yo te konsistan avèk sa yo rapòte nan literati a [26]. Idantifikasyon an te sipòte plis pa 13C NMR（125 MHz, DMSO-d6）∶δ203.9 （s, C=O）,164.7(s,C-2'),164.2(s,C). -4'), 144.9 (s, C{-3), 143.3 (s, C{-4), 133.0 (d, C{-6), 131.8 (s, C{ {114}}),118.9 (d,C-6),115.7(d,C-2),115.4(d,C-5),112.5 (s,C{{126 }}),108.2(d,C-5'),102.4(d,C-3'),39.5(t, C-a2),29.2(t, CB). (Epi)-catechin (6) te izole kòm poud blan (118 mg) ak etabli fòmil la molekilè kòm CHO4.1H NMR (400 MHz, DMSO-dg) ak ESI-MS (m/z 291 [M plis H] plis )done yo te dakò byen ak sa yo rapòte nan literati a [26]. Idantifikasyon an te sipòte plis pa 13C NMR （125 MHz, DMSO-d6）∶δ156.4（s,C-7）,156.1（s, C-5）,155.3（s,C{{162 }}）,144.8(s,C-3'),144.8(s,C-4'),130.5(s,C-1'),118.4(d,C{{ 174}}'),115.0(d,C-5'),114.4(d,C-2'), 99.0(s,C-10),95.1(d,C{ {186}}),93.8(d, C-8),80.9(d, C-2),66.2 (d,C-3),27.8(t, C{{198 }}). Cornoside (7) te jwenn kòm solid amorphe (10mg) ak detèmine fòmil la molekilè kòm C1H20O8.'H NMR (500 MHz, DMSO-dg) ak ESI-MS (m/z317 [M plis H] plis) done koresponn ak la done pibliye [36]. Idantifikasyon an te sipòte plis pa 13CNMR（100 MHz,DMSO-dg）∶δ185.3（s, C-4）,153.3（d,C-2), 153.2 （d,C{{220 }}）,126.4（d, C-3）,126.4(d,C-5),102.8(d,C-1'),76.8(d,C{{232} }'),76.6(d,C-3'),73.3(d,C-2'),70.0(d,C-4),67.3(s, C{{244 }}), 63.8 (t, C-8), 61.0 (t, C{-6'), 39.7 (t, C{-7).

3.5.Detèminasyon nan fenolik total (TPC) ak kontni total flavonoid (TFC)

TPC ak TFC kat fraksyon (DF, EAE, BF, ak RWF) ak senk soufraksyon (BF-A rive E) yo te mezire dapre metòd nou te rapòte deja [37]. Pou TFC, yo te melanje 1.0 mL chak echantiyon (ak konsantrasyon an nan 1.0 mg/mL) ki fonn nan metanol ak 0.5 mL reyaktif Folin-Ciocalteu nan yon tib santrifij epi enkube pou 1 min. Lè sa a, 20 pousan solisyon Na2CO3 (m/o) (1.5 mL) ak dlo deyonize (7.0 mL) yo te ajoute nan tib la epi kenbe nan 70 degre nan yon beny dlo pou 10 min. Apre yo te fin refwadi nan tanperati chanm, 200 uL solisyon an te transfere nan yon 96-mikroplat byen epi absòbe a te detèmine nan 765 nm pa yon lektè Microplate SpectraMax M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).

Pou TFC, yo te melanje 1.2 mL nan echantiyon solisyon (ak konsantrasyon an nan 1.0mg/mL) ak 0.3 mL NaNO, (5 pousan m/o) ak 3.8 mL nan 7. 0 pousan etanòl akeuz epi enkube pou 8 min. Apre sa, 0.3 mL 10 pousan akeuz Al(NO3), 4 mL4 pousan akeuz NaOH, ak 0.4 mL 70 pousan akeuz etanòl te ajoute nan melanj lan. ak pèmèt yo reyaji nan tanperati chanm pou 30 min. Lè sa a, 200 μL nan solisyon an te transfere nan yon 96-microplate byen, pou ki absòbe a te mezire nan 510 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate. TFC ak TPC yo te eksprime kòm miligram ekivalan asid galik (mg GAE/gextract) ak ekivalan rutin pou chak gram ekstrè (mg RE/g ekstrè).

3.6.Detèminasyon Aktivite Antioksidan

Aktivite antioksidan kat fraksyon (DF, EAF, BF, ak RWF) ak senk soufraksyon (BF-A rive nan E) yo te evalye nan yon konbinezon de DPPH ak ABTS analiz radikal scavenging ak tès FRAP ki baze sou metòd ki dekri nan etid anvan nou an. [33]. Pou tès DPPH, 50μL nan echantiyon solisyon an （50,10{0,200ug/mL) te melanje ak 0.2 mL solisyon DPPH (0.1 mmol/ L) nan yon 96-plak byen epi kite yo enkube pou 30 min. Yo te mezire absorpsyon an nan 517 nm ak lektè Microplate SpectraMax M5 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Pou ABTS, 25 μL nan solisyon echantiyon an (50, 100, 200 ug/mL) yo te ajoute nan 0.2mLABTSsolution (7 mmol). /L).Te melanj lan kenbe nan fè nwa a pou 6min, ak Lè sa a, yo te anrejistre absòbe a nan 734 nm. Pou FRAP, 20 μL solisyon echantiyon (50,100,200ug/mL) te melanje ak 0.18 mL nan reyaktif FRAP (7 mmol/). L). Apre enkubasyon pou 10 min nan fè nwa a 37 degre, yo te detèmine absorpsyon an nan 593 nm. Tout tès yo te fèt an triple. Rezilta valè DPPH, ABTS, ak FRAP yo te eksprime kòm ekivalan umol Trolox pou chak gram. ekstrè （μmol TE / g ekstrè）.

3.7.HPLC analiz

BF ak konpoze {{0}} yo te analize sou yon sistèm HPLC Agilent 1260 makonnen ak yon detektè etalaj dyod. Anvan analiz, yo te filtre solisyon echantiyon frèch la nan yon manbràn nilon 0.45 um. Separasyon an te fèt lè l sèvi avèk yon kolòn Reprosil-Pur Basic C18 (5 μm, 4.6 × 250 mm, Almay) kenbe nan 35 degre. Volim piki a te 5.0 μL, to koule a te 1.0 mL / min, ak longèdonn deteksyon an te mete nan 280 nm. Faz mobil yo te asidifye dlo ak 0.1 pousan asid fòmik (faz A) ak asetonitrile (faz B), elisyon gradyan lineyè a te fèt jan sa a: 0-3 min, 20 pousan B;3-10 min, 40 pousan B;10-15 min, 60 pousan B;15-20 min,100 pousan B.

3.8. Kilti Selil ak Viabilite Selil

Selil HepG2 kansè nan fwa moun yo te achte nan Kunming Cell Bank (Kunming, Lachin). Selil HepG2 yo te grandi nan DME siplemantè ak 1 pousan penisilin-streptomycin ak 10 pousan serom fetis bovin nan yon atmosfè 5 pousan CO, / 95 pousan lè a 37 degre.Lè selil yo te enkube nan yon dansite apwopriye (apeprè 80 pousan), yo te trete ak kontwòl pozitif (Vc) ak konpoze izole yo pou plis eksperyans.

Vitabilite selil yo te detèmine pa tès MTT pou evalye sitotoksisite chak echantiyon [29]. Selil yo nan yon dansite 1 × 104 selil pou chak pi yo te simen nan yon plak 96-byen epi yo te pèmèt yo enkubate pou 24 èdtan. Chak konpoze (ki prepare kòm kat dòz soti nan 50 a 200 ug/mL) te ajoute nan chak pi pou 20 èdtan. Lè sa a, selil yo te trete lè l sèvi avèk solisyon MTT ak yon konsantrasyon final nan 4 èdtan. Yo te retire mwayen an ak MTT, epi 200. Yo te ajoute μL nan DMSO a pou fonn formazan an. Yo te anrejistre absorpsyon an nan 570 nm pa yon lektè microplate. Rezilta yo te demontre ke chak konpoze pa te toksik nan selil HepG2 nan konsantrasyon yo teste yo.

3.9.Anpèchman jenerasyon ROS nan selil H2O2-pwovoke HepG2

Selil HepG2 H, O,-induit yo te anplwaye pou detèmine efè inhibition sou pwodiksyon ROS [3]. Selil HepG2 yo (1.0×10 selil degre pou chak pui) yo te simen nan yon plak 6-byen epi yo te kiltive ansanm ak konpoze izole ak 50 ug/mL ak Vc（8ug/. mL). Apre enkubasyon pou 20 èdtan, yo te retire mwayen an, epi 2 μL H, O, (0.5 mM) te ajoute nan chak pi pou yon lòt 6 èdtan. Nan fen eksperyans la, selil yo te make ak 2 μL DCFH-DA (10 mM) nan fè nwa a 37 degre pou 20 min. Absorbans la te anrejistre pa sikometri koule (Guava fasil ankò 6-2L, Millipore, Billerica, Massachusetts, MA, USA).

3.10.Detèminasyon Apoptoz Selil

Efè pwoteksyon chak konpoze sou apoptoz H2O2-pwovoke nan selil HepG2 yo te detèmine lè l sèvi avèk yon twous apoptoz VFITC/PI anèks imen [38]. Selil HepG2 yo te pre-trete avèk oswa san konpoze izole pou 48 èdtan. Apre enkubasyon, yo te ajoute 100 μL nan tanpon la obligatwa nan selil yo, epi selil yo te reyaji nan fè nwa a ak 10 μL annexin V-FITC pou 5 min nan tanperati chanm ak ak 10 μL yodid propidium （PI） nan yon beny glas pou 5. min, successivement. Apoptoz selil yo te imedyatman analize lè l sèvi avèk sitometri koule.

3.11.Estatistik analiz

Tout eksperyans yo te fèt an triple. Tout valè yo eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (SD). Diferans ki genyen nan ak ant gwoup yo te analize lè l sèvi avèk yon analiz yon sèl-fason nan divèjans (ANOVA) ki te swiv pa tès Tukey a. Diferans lan te konsidere kòm estatistik enpòtan nan p<0.05. all="" analyses="" were="" performed="" using="" origin="" 2019b="" software="" (originlab,="" northampton,="" ma,="">

4. Konklizyon

Nan etid sa a, yo te fraksyon diferan fraksyon nan fèy A.fragrans, epi yo te analize TPC ak TFC yo. Anba izolasyon gide aktivite antioksidan, konpoze 1-7, ki gen ladan kat glikozid flavonoid (1-4) ak de flavonoid (5 ak 6), yo te izole ak idantifye nan fèy A. fragrans, ki sijere ke espès sa a rich. nan konpoze flavonoid. Konpoze 2, 5, ak 6 te montre aktivite antioksidan enpòtan nan DPPH, ABTS radikal scavenging, ak analiz FRAP. Anplis de sa, yo vizib anpeche domaj estrès oksidatif atravè yon diminisyon nan kontni ROS ak apoptoz selil nan H2O2-pwovoke selil HepG2. Dapre rezilta sa yo, konpoze polifenol, espesyalman flavonoid, gen kapasite antioksidan konsiderab akòz gwoup idroksil fenolik yo. Anplis de sa, konpoze 2, ki posede moyete glikozid la ak twa gwoup idroksil fenolik, se te eleman prensipal antioksidan ak kontni ki pi wo nan fèy A. fragrans. Konpoze 6 parèt pi bon aktivite antioksidan, ki ka yon gwo kontribisyon nan aktivite A.fragrans. Anplis de sa, ekstrè yo nan A.fragrans ta ka sèvi kòm yon sous natirèl posib nan antioksidan nan bwason pwomèt sante. Etid la sou konpoze ki soti nan fèy A. fragrans sijere ke sa yo ta ka sèvi kòm yon te antioksidan an sante pou trete domaj selil oksidatif estrès-induit epi yo ka sèvi kòm sipleman nitrisyonèl aplike nan endistri manje ak sante.

Atik sa a soti nan Molecules 2021, 26, 3690. https://doi.org/10.3390/molecules26123690 https://www.mdpi.com/journal/molecules