Gossypitrin, yon flavonoid ki fèt natirèlman, diminye domaj newòn ak mitokondriyo ki soti nan fè: pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

2.5. Gos-Fe(I) Complexes Detection

Yon ipotèz ki posib pou eksplike rezilta ki anwo yo se ke Gos fòme yon konplèks tranzitwa ak Fe(ll) ki fasilite oksidasyon li pa oksijèn. Konplèks tranzisyon sa a te kapab delivre elektwon li yo pi fasil pase Fe()-sitrate, jenere yon konplèks ki pi estab ak Fe(Ill). Figi 6A montre yon spectre tipik nan Gos ak absòpsyon maksimòm nan 276, 332 ak 380 nm (liy nwa). Anplis de sa nan Fe () pwovoke yon bès konsantrasyon-depandan nan pik yo absòpsyon maksimòm ak aparans nan yon nouvo tou pre 500 nm (Figi 6A). Ensidan an nan yon etalaj nan spectre ki soti nan spectre Gos la te konfime pa prezans nan yon pwen isosbestic nan λiso=405 nm （gade pwen nwa）, ki endike yon ekilib chimik (konplexasyon) ant Gos gratis ak konplèks. Ankadreman an (Figi 6A) montre fòmasyon yon konplèks ak estekiometri 2:1 (Gos-fè). Metòd Jòb la te detèmine estekiometri a nan konplèks Gos-fè sa yo ki montre yon pwen kraze nan yon rapò molè 0.5.

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Plis prèv sou korelasyon ki genyen ant fè ak Gos te jwenn pa espektroskopi IR (Figi 6B). Pou Gos gratis la ak konplèks fè li yo, bande ki sitiye nan seri a nan 3000-4000 cm-te konsidere kòm etann nan idwojèn- gwoup idroksil lye akòz prezans molekil dlo. Mòd v(C{=O)detire Gos gratis la rive nan 1654 cm-I, ki te deplase nan direksyon 1636 cm-Iupon fòmasyon konplèks. Rezilta sa a sijere ke Fe(Ⅱ) gen rapò ak oksijèn kabònil [31]. Anplis, pwezans v(Fe-O) etann Vibwasyon nan 630 cm-I corroborate fòmasyon an fè-Gos konplèks, depi gratis Gos pa montre tankou yon bann.

Figi 6.(A)Efè Fe(II) sou spectre Gos UV-VIS (200-600 nm). Melanj enkubasyon ki gen 125 mM sikwoz, 65 mM KCl, 10 mM tanpon HEPES (pH 7.2), 2 mM sitrat, ak Gos 1.6 μM. Konsantrasyon Fe（I） soti anwo jouk anba tras yo te {{12 }}, 0.16, 0.32, 0.48, {{20}}.64,0.8,0.96, ak 1.12 μM.Inset∶ Konplo Jòb pou konplèks Gos-Fe（II） nan yon konsantrasyon total konstan 【Fe（D）】 plis 【Gos】=1.6 μM. Pwen nwa a endike pwen isosbestic la. Flèch anba ak anwo yo endike yon diminisyon ak ogmantasyon nan valè absorpsyon nan 380 ak 500 nm, respektivman. Eksperyans yo te fèt a 28 degre. Vitès eskanè a te 2nm/sA debaz te etabli ak melanj enkubasyon an plis 1.6 μM Fe（I）.（B）Espèk enfrawouj Gos ak Gos-Fe（I）. Egzanp tipik yo montre.

2.6. Gos Anpeche Fe(III) Rediksyon pa Ascorbate

Eta ferrik la fè pwomosyon pa Gos reprezante yon mekanis antioksidan plauzib paske li anpeche aktivite katalitik Fe (II). Men, Fe (III) ta ka toujou redwi ankò nan fòm fere li pa ajan rediksyon natirèl tankou ascorbate. Lèt la te kapab rechaje sistèm byolojik ak Fe(II), ki patisipe nan reyaksyon Fenton-Haber-Weiss, jenere radikal la trè reyaktif·OH. Pou egzamine posiblite sa yo, nou te itilize 1,10-phenanthroline pou mezire nivo fòmasyon Fe（II） nan yon solisyon Gos （100 μM）trete ak 2mM ascorbat ak diferan konsantrasyon Fe（II）（{{6} } μM）. Figi 7 montre ke absans Gos te pèmèt yon rediksyon maksimòm Fe(II) a Fe(II) (liy nwa ak yon pant 5.85×10-3); sepandan pwosesis sa a te ralanti pa prezans Gos (1-min enkubasyon, liy vèt), epi apre 5 min enkubasyon ak Gos, pousantaj rediksyon Fe(I) pa ascorbate diminye prèske 3 fwa (liy wouj). ak yon pant 2.04× 10-3). Rezilta sa a montre kapasite Gos pou anpeche rediksyon Fe() medyatè ascorbate pou Fe(I)

Figi 7. Gos inibit Fe(ⅢI)-rediksyon pa ascorbate nan absans mitokondri fwa rat. Kondisyon eksperimantal: 125 mM sikwoz, 65 mM KCl, 10 mM HEPES tanpon (pH7.2), 1 mM sitrat, Gos 100μM. Eksperyans yo te fèt a 28 degre. Ascorbate（4 mM） ak 5 mM 1,10-phenanthroline yo te ajoute apre 1 min oswa 5 min nan enkubasyon Gos-Fe(I). Liy yo reprezante twa tès yo.

2.7. Gos Pwoteje kont 2-Deoxyribose Oksidatif Degradasyon

Pou dokimante kapasite Gos pou aji preferansyèlman sou fè olye pou yo radikal gratis, yo te fè etid konpetisyon pou evalye efikasite Gos ak de·OH scavengers (DMSO ak salisilat) nan pwoteje 2.8 oswa 28 mM 2-deoxyribose soti nan fè. -medyatè domaj oksidatif (Figi 8). OH scavengers yo nan 20 mM pwoteje 28 mM 2-dezoksiriboz siyifikativman mwens pase 2.8 mM2-deoksiriboz (p<0.05), as="" expected.="" gos="" was="" equally="" effective="" in="" preventing="" oxidative="" degradation="" of="" both="" 2.8="" and="" 28="">

Figi 8.Efè Gos ak·OH scavengers dimethyl sulfoxide(DMSO) ak salisilat sou domaj oksidatif nan 2.8 oswa 28 mM 2-deoksiriboz pwovoke pa Fe (II)-EDTA plis ascorbate. Solisyon yo te enkube pou 30 minit nan 37 degre epi yo te genyen 10 mM tanpon fosfat (pH7.2), 2-desoksiriboz (2.8oswa 28 mM), 150 μM EDTA, ak 50 μM Fe（ⅢI） Reyaksyon yo te kòmanse pa adisyon nan ascorbate nan yon konsantrasyon final nan 2 mM. Ba yo montre vle di ± SD (n=3). Kontwòl yo genyen sèlman DMSO (0.001 pousan), ki se konsantrasyon nan sòlvan nan echantiyon Gos. Yo te itilize yon sèl-tailed t-tès la pou*p<0.05, n.s.,="">

3. Diskisyon

Fè a lage anba plizyè kondisyon neurodegenerative, ki gen ladan iskemik ak emoraji konjesyon serebral, pwovoke déréglementation nan omeyostazi fè nan sèvo, ki mennen nan fizyoloji nan blesi newolojik [4,32-34]. Nan nivo subselilè, andikap mitokondriyo sanble enplike nan lanmò newòn fè ki te medyatè [10,15, 35-38]. Prèv preklinik sipòte avantaj ki genyen nan itilize chelators fè, sitou deferoxamine mesylate, kont neurodegeneration ki gen ladan tout kalite konjesyon serebral [7,16]. Sepandan, gwo pri yo ak indisponibilite, ak pakèt efè negatif nan chelators fè klasik, te mennen nan itilize nan chelators natirèl pou jesyon fè nan dyshomeostasis [39,40].

Cistanche ka amelyore iminite a

Yo montre aksyon pwoteksyon Gos sou selil HT-22 yo ak mitokondri rat-sèvo ki enkube ak yon melanj fè/sittrat, kote nou jwenn gwo pwoteksyon kont domaj oksidatif fè. Selil ipokanp sourit HT-22 ki te ekspoze a surcharge fè (24 h) te montre ke viabilite diminye, ki te asosye byen ak dissipation potansyèl manbràn mitokondriyo bonè ak rediksyon ATP (Figi 2A-C, respektivman). Sa a sijere ke andikap mitokondriyo kontribye nan letali newòn. Vreman vre, nan kondisyon nou yo, omwen yon pòsyon nan Fe (II) Uploaded nan newòn espere rive nan òganèl yo, depi lanmò newòn fè-induit te anvan pa pèt la nan fonksyon mitokondriyo. Pakonsekan, li te montre ke surcharge fè pwovoke sourit ipokanp HT -22 selil lanmò ak fwagmantasyon mitokondriyo [41,42]. Menm jan an tou, ekspoze fè soutni ogmante nivo ROS mitokondriyo nan selil dopaminergic neuroblastoma SHSY5Y [43]. Anplis de sa, yo te verifye yon gwo kantite fè nan newòn ipokanp yo, osi byen ke domaj mitokondriyo, apre ekspoze a 100 uM fè fèr [36]. Isit la nou te obsève ke prezèvasyon Gos-induit nan viabilite nan newòn yo ipokanp ki afekte nan fè se pre relasyon ak konsèvasyon nan potansyèl manbràn mitokondriyo yo ak nivo ATP yo.

Menm jan ak selil entak, ekspoze dirèk mitokondriyo a fè fè fè pwovoke gwo anfle nan òganèl la, dissipation nan potansyèl manbràn, ak pèt la nan ATP (Figi 3A-C, respektivman). Nan anviwònman eksperimantal sa a, Gos te kapab pwoteje a. fè ki twò chaje mitokondri, ki te eksprime pa prezèvasyon paramèt ki mansyone anwo yo. Nan sans sa a, li te obsève ke mitokondriye chaje ak yon konsantrasyon micromolar nan fè sibi mitokondriyo pèmeyabilite tranzisyon pò ouvèti ak △Y dissipation nan yon fason ki sansib a chelation fè men pa depann sou aksyon antioksidan katalaz |44]. Enteresan, yo te rapòte antioksidan Mito-Tempo pou pwoteje kont domaj surcharge fè nan newòn ipokanp yo lè yo retire radikal anyon mitokondriyo superoksid la ak prezève entegrite mòfolojik mitokondriyo ak potansyèl manbràn [36]. Nou dènyèman te dekri efè antioksidan flavonoid sa a ak kapasite li pou pwoteje selil PC12 kont lanmò chimik ipoksi pwovoke [29], kote yo te konkli ke Gos pou retire radikal gratis ak kapasite antioksidan an pati patisipe nan pwoteksyon kont fè. HT-22 ak domaj mitokondriyo. Sepandan, efikasite amelyore Gos kont lipoperoksidasyon fè-medyatè kont tertbutyl hydroperoxide-medyatè lipoperoksidasyon (Figi 4A, B, respektivman) fòtman sijere ke kapasite fè-interaction li yo se mekanis prensipal la kont domaj fè-induit.

Pou karakterize entèraksyon Gos-Fe a plis, plizyè eksperyans san selil ak mitokondri yo te fèt. Nou te obsève ke lè polifenol te ko-enkube ak Fe (II), konsantrasyon nan iyon metal yo diminye, pandan y ap te gen yon ogmantasyon korespondan nan to konsomasyon oksijèn (Figi 5A-C). Efè sa yo sijere ke Gos retire Fe(II) nan konplèks citrate a, ak oksid li nan yon fòm ferrik nan yon pwosesis ki mande O2 kòm yon akseptè elèktron. Kontinwe, Gos ankouraje n bès nan konsantrasyon Fe (II) ki ka anpeche radikal yo idroksil atravè reyaksyon Fenton. Depi Gos-Fe(II)konplèks la pèmèt oksidasyon ajan rediksyon ki enpòtan tankou ascorbate, sa ki lakòz fòmasyon/rejenerasyon Fe(II), nou te kapab demontre ke Gos inibit rediksyon fe (II) ascorbate-medyatè. pou Fe(II).

Ipotèz ke Gos kominike fòtman ak fè te konfime tou grasa teknik espektroskopik, ak konfime rezilta anvan yo kote diferan etalaj de

Gos-fè estekiometri konplèks te karakterize pa espektroskopi mas iyonizasyon spin elèktron [45].

Rezilta sa yo te pwouve efè pwoteksyon Gos kont domaj newòn fè-medyatè, pwobableman lè yo kominike avèk iyon fèr, sa ki anpeche patisipasyon li nan fòmasyon espès oksijèn reyaktif katalitik la. Anplis de sa, sa sijere fòmasyon yon konplèks transfè chaj pasajè ant Fe(Ⅱ) ak Gos, akselere oksidasyon Fe(II) ak fòmasyon nan yon konplèks Fe(III)-Gos ki pi estab ki pa ka patisipe nan faz pwopagasyon lipid. peroksidasyon. Anplis, yon ajan rediksyon biyolojik ki enpòtan tankou ascorbate pa t 'kapab diminye fè ferrik nan prezans Gos, limite yon karakteristik pro-oksidan nan sèten flavonoid ki enplike nan re-siklaj fereuz ion. [30]. Gos nan konsantrasyon micromolar te pi efikas pase scavengers klasik nan pre-venting fè-medyatè oksidasyon nan 2-deoxyribose. Sa a gwo efikasite yo ka atribiye a fòmasyon nan yon redox-aktif Gos-Fe(II)/() jan nou te deja obsève pou lòt moun polifenol ki amelyore pèfòmans yo kòm antioksidan sou entèraksyon yo ak fè nan diferan paradigm nan vitro nan domaj oksidatif. 22,46-48].

Li te etabli ke ajan chelating ki gen oksijèn kòm yon ligand (oxo ligand, O2-) ka chelate fè ak ankouraje oksidasyon nan Fe (I), estabilizasyon nan Fe (II), epi kidonk pwodui yon diminisyon nan potansyèl rediksyon li49]. Nan pH fizyolojik, katekòl fasilman fòme konplèks tèmodinamik ki estab ak fè fer, favorize pa konsantrasyon ki ba nan ligand yo. Prezans nan yon moyete katekol nan estrikti Gos la sijere yon mekanis entèraksyon ki sanble ak fè, ki ta ka eksplike pwoteksyon an reyalize kont domaj fè-pwovoke nan selil newòn ak mitokondri. Nan sans sa a, nou te deja demontre tou ke mangiferin ak guttiferone A ankouraje oksidasyon fè fèr ak anpeche rediksyon fè ferik [23,24, 26-28].

Kapasite Gos pou chelate fè ka tou pouse chemen siyal ki kontribye nan neropwoteksyon. Pa egzanp, prolyl hydroxylase domèn anzim (PHD), klasik Hypoxia Inducible Factor-lalpha(HIF-1o) hydroxylation-modifying anzim under normoxia, yo te idantifye kòm objektif kritik nan chelators fè ki klinikman benefisye nan anpil moun. maladi newolojik [50,51].Li konprann depi PHD depann sou fè divalan kòm yon faktè kouple [52]. Plizyè jèn ki te enplike nan neuroprotection yo reglemante pa HIF-la, tankou eNOS, VEGF, ak EPO [53]. Anplis, deklanchman HIF ki soti nan anpèchman PHD ta ka anpeche defisyans mitokondriyo ak apoptoz oksidatif estrès medyatè, poukont wòl li kòm yon faktè transkripsyon [54].

Ferroptosis, ki fèk karakterize lanmò selil reglemante depandan an fè a, yo te pwopoze kòm mekanis nan ki newòn yo ekspoze a domaj emorajik mouri [8]. Disfonksyon mitokondriyo dènyèman te gen rapò ak lanmò selil ferroptoz [55]. Se poutèt sa, anpèchman nan ferroptoz, ki sove fonksyon mitokondriyo soti nan domaj fè, ta ka tou yon mekanis plauzib pou neropwoteksyon kont fè-medyatè maladi newolojik pwoteje pa Gos, ki ta merite plis atansyon. Lòt rechèch sou efè prezime benefis Gos sou modèl bèt in vivo nan neurodegeneration ki asosye ak fè yo dwe fèt, yo nan lòd yo pwopoze flavonoid sa a kòm yon entèvansyon terapetik kont domaj tisi nan sèvo pwovoke pa déréglementation omeyostazi fè.