Efè avantaje / favorab nan Quercetin sou manbràn yo nan SK-N-SH selil neroblastom Pati 2

Tanpri klike souoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

2.2.2. Aktivite antioksidan nan Quercetin

Pou teste efikasite quercetin nan pwoteje manbràn kont estrès oksidatif, yo te fè eksperyans nan ki modèl lipid manbràn yo te ekspoze a ozòn nan absans （Figi 4a） ak prezans quercetin nan yon konsantrasyon 6.25 μM (Figi 4b).

Anba enfliyans ozòn, kou tou de depandans yo, sa vle di, π{{0}}f(A) ak Cs-1=f(rn) chanje. Izotèm yo te jwenn pou gaye monokouch sou subfaz ki gen ozòn nan te karakterize pa yon pant ki pi piti ak yon chanjman nan direksyon ki pi ba valè A. Anplis, valè Cs-1 diminye anba enfliyans ozòn. Chanjman sa yo te pi gwo nan yon konsantrasyon ozòn apeprè 0.4 ppm.cintancheYon ogmantasyon plis nan konsantrasyon ozòn pa t ogmante chanjman nan karakteristik monokouch (Figi 4a ensèk).

Figi 4. Izotèm presyon sifas yo ak modil konpresibilite ki koresponn lan (anre) nan modèl lipid nan kouch neroblastom gaye sou subfaz la genyen konsantrasyon ki endike nan ozòn ki fonn nan tanpon. Isotherms: (a) nan absans antioksidan; (b) nan prezans quercetin （6.25 μM） ajoute nan tanpon ki gen ozòn lan.

Lè quercetin nan yon konsantrasyon 6.25 μM te entwodwi nan subfaz la, ozòn pa t 'siyifikativman afekte kou a nan izotèm r (A) la; sepandan, valè yo nan modil konpresyon an chanje nan prezans ozòn menm jan ak nan ka a nan absans quercetin (Figi 4b inset).

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Valè nimerik paramèt ki karakterize monokouch yo detèmine ki baze sou izotèm yo jwenn yo prezante nan Tablo 3.

Tablo 3. Paramèt andigman nan monokouch Alim ak Cs-I kalkile pou monokouch nan modèl la nan manbràn neuroblastoma gaye sou subfaz la genyen konsantrasyon yo endike nan ozòn fonn nan tanpon an nan absans la ak nan prezans quercetin (6.25 uM). Done reprezante mwayèn nan twa eksperyans ± SD. Diferan lèt endike diferans enpòtan (p Mwens oswa egal a 0.05).

Nan prezans ozòn, yo obsève yon ti rediksyon nan sifas la pou chak molekil (Alim) nan monokouch ki chaje anpil. Rediksyon maksimòm paramèt sa a se 3.2 pousan konpare ak kontwòl la (monokouch sou tanpon pi bon kalite). Paramèt Cs-I tou redwi, rive nan valè plato nan konsantrasyon ozòn pi wo pase 0.6 ppm O.Rediksyon maksimòm paramèt sa a rive nan 24 pousan an relasyon ak kontwòl la.

Lè quercetin nan yon konsantrasyon 6.25 uM prezan nan subfaz la, valè Alim (1-2 pousan) diminye yon ti kras, pandan y ap rediksyon nan Cs-1valè a se apeprè 27 pousan.

Nati chanjman Alim nan prezans ozòn ak ozòn nan konbinezon ak quercetin gen diferan kou. Nan yon konsantrasyon ozòn apeprè 0.3 ppm, nan absans quercetin la, Aim a diminye brid sou 88.3 A2. Lè sa a, li rive nan valè minimòm plato bay karakteristik S-fòm depandans (Figi 5a, pwen wouj). Nan prezans quercetin, gen yon ti kras lis diminisyon monotonik nan Alim, rive nan yon pi wo konsantrasyon ozòn yon plato nan apeprè 93.5 A2 (Figi 5a, pwen vèt).

Figi 5. Depandans zòn nan pou chak molekil sou konsantrasyon ozòn (a) ak depandans modil konpresyon sou konsantrasyon ozòn (b) pou manbràn neuroblastoma sou subfaz: San yo pa pwen quercetin-wouj; ak pwen quercetin-vèt. Liy pa prezante okenn modèl fizik, yo te matematikman ekipe epi yo te trase pou konvenyans nan swiv chanjman paramèt. Valè modil konpresyon maksimòm kouch yo chanje menm jan ak konsantrasyon ozòn pou tou de: Nan absans ak prezans quercetin (Figi 5b).

3. Diskisyon

Mekanis nan aksyon nan quercetin te etidye entansif pou anpil ane, men rezilta yo nan eksperyans yo souvan kontradiktwa ak endike ke nan kèk sikonstans, konpoze sa a se benefisye, ak nan lòt moun, favorab pou selil yo. Analiz etid ki disponib yo montre ke efè konpoze sa a sou selil yo gen rapò ak de aspè, sa vle di, entèraksyon li yo ak manbràn ak aktivite antioksidan. Sepandan, nan selil yo, li pa posib yo fè distenksyon ant de mòd sa yo nan aksyon quercetin ak evalyasyon an konvnab nan konpoze sa a kòm yon sibstans potansyèl, pa egzanp, ki gen aktivite antitumoral. Pou rezon sa a, eksperyans yo te planifye nan yon fason pou evalye nan yon fason kalitatif ak quantitative enfliyans nan konpoze sa a sou pwopriyete yo mekanik nan manbràn, osi byen ke aktivite antioksidan li yo nan sistèm nan modèl, ki elimine efè yo nan. aktivite lòt wout metabolik yo.

Ki baze sou eksperyans yo fè, li te konfime ke menm nan konsantrasyon ki pi ba yo (6.25 uM), quercetin modifye (jan sa endike nan ogmantasyon nan Alimvalue) monocouches modèl yo, imite pati nan lipid nan manbràn nan neuroblastoma selil yo. Li montre yon posibilite nan entèraksyon nan quercetin ak manbràn yo nan selil sa yo lè rive nan sèvo a, menm nan konsantrasyon ki ba. Sa a se yon enpòtans patikilye pou selil nève ki gen manbràn gen relativman gwo kantite lipid.

Cistanche ka amelyore iminite

Rapò apwoksimatif lipid-pwoteyin pou selil nève a se 80:20 pousan, e pou egzanp, pou manbràn eritrosit la, rapò sa a se 50:50 pousan [29]. Se tankou yon nivo nan lipid nan manbràn nan selil nè yo lye ak wòl nan selil sa yo nan transmèt siyal elektrik. An menm tan an, menm chanjman sibtil nan pwopriyete fizikochimik, tankou fleksibilite ak rèd, nan manbràn selilè a, ka siyifikativman deranje fonksyon sa a.

Potansyèl aksyon an transfere ansanm manbràn selil nève a grasa travay chanèl ion yo, ak Lè sa a, gras a aksyon ponp ion, potansyèl repo a retabli. Fonksyone apwopriye nan pwoteyin sa yo (an patikilye, detèmine pa fòm yo) se byen depann sou anviwònman an lipid. Anplis, chanjman nan pwopriyete yo mekanik nan manbràn nan ka deranje operasyon an nan chanèl ki gen mekanis gating depann jisteman sou pwopriyete yo mekanik nan manbràn an.

Tès sa yo konfime pa etid ki te montre ke efè quercetin sou manbràn selilè a gen rapò, inter alia, ak transpò Ca2 plis iyon ak / oswa Ca2 plis metabolis [30,31]. Kidonk, entwodiksyon de molekil quercetin nan anviwònman an nan manbràn (sitou nan selil nè) ka gen konsekans enpòtan sou fonksyone yo.

Pou tcheke si aksyon quercetin detèmine nan sistèm modèl jwe yon wòl benefisye oswa favorab nan selil yo, rezilta yo jwenn pou manbràn modèl yo te konpare ak efè a nan konpoze sa a sou selil neuroblastom antye. Pou selil SK-N-SH, yo te fè tès MTT la,Cistanche èkstre anti alzayme abay enfòmasyon sou viabilite selil selil yo ki an vire dirèkteman pwopòsyonèl ak anzim dehydrogenase mitokondriyo.

Rezilta yo jwenn yo te montre ke prezans nan quercetin nan konsantrasyon nan 100 ak 200uM ogmante kantite selil solid. Rezilta menm jan an te jwenn pa Bao et al. [32], mennen ankèt sou efè quercetin sou PC-12 selil yo. Leakage LDH nan anviwònman ekstraselilè a, ki bay enfòmasyon sou dezòd manbràn selilè a, te egzamine tou nan menm nivo quercetin yo. Rezilta yo jwenn yo te demontre ke manbràn selil yo teste yo pa te domaje nan kondisyon sa yo. Boots et al. [2], etidye efè quercetin sou selil epitelyal nan poumon, obsève rezilta menm jan an. Se poutèt sa, li ka konkli ke nan konsantrasyon sa yo, quercetin gen yon efè pozitif sou selil yo, ogmante Viabilite yo.

Dezyèm aspè enpòtan nan mekanis aksyon quercetin gen rapò ak pwopriyete antioksidan li yo. Pou evalye efè ki asosye polifenol etidye a, yo te fè eksperyans nan ki te tcheke si quercetin jwe yon wòl pwoteksyon nan selil ki ekspoze a estrès oksidatif. Estrès oksidatif te pwodwi pa entwodwi H, O2 nan anviwònman selil la.Cistanche pou amelyore memwaKòm demontre nan etid sa a, oksijene idwojèn lakòz mòtalite selil enpòtan, eksprime kòm domaj nan mitokondri yo.

Lè selil SK-N-SH yo te kiltive pou 3 èdtan nan yon mwayen ki gen 3 ak 5 mM H2O2, viabilite selil la diminye a apeprè 44 pousan nan selil ki pa trete (MTT esè). Etid yo te montre ke 24 h pretreatment nan selil ak quercetin lakòz yon ogmantasyon nan kantite selil k ap viv an relasyon ak selil trete ak H2O2. Suematsu et al. [13] rapòte efè menm jan an.

Nou menm tou nou mezire nivo MDA, ki se yon biomarker nan estrès oksidatif kòm yon pwodwi final nan peroksidasyon lipid [33]. Selil pretreatman ak gwo konsantrasyon quercetin, ki te swiv pa adisyon oksijene idwojèn, te lakòz yon ti ogmantasyon nan kontni MDA an konparezon ak selil ekspoze a HO, pou kont li. Sa a ka paske quercetin (nan pi wo konsantrasyon) kapab tou sibi deklanchman oksid-rediksyon epi yo dwe yon sijè nan monte bisiklèt redox, jenere espès oksijèn entracellularly reyaktif [34].

Pa te gen okenn chanjman enpòtan nan destriksyon manbràn (jan sa endike nan nivo LDH ki pa chanje) nan selil trete ak quercetin ak H2O2 konpare ak ka a lè selil yo te ekspoze a estrès oksidatif sèlman. Se poutèt sa, li ka konkli ke malgre yon ogmantasyon nan peroksidasyon lipid (nan gwo konsantrasyon quercetin), sa a pa t 'siyifikatif ase yo detwi manbràn yo ak deranje kontinwite yo.

Obsèvasyon yo te jwenn pou sistèm natif natal la te konfwonte ak sa yo te resevwa pou yon sistèm modèl kote li posib kontwole egzakteman tou de konsantrasyon quercetin ak nivo estrès. Li te tcheke ki jan pati nan lipid nan manbràn neuroblastoma a rezistan a estrès oksidatif. Kondisyon estrès yo te kreye pa entwodwi ozòn nan tanpon an, kote ozòn nan anviwònman dlo a sibi reyaksyon dekonpozisyon fòme radikal oksidatif, pami lòt radikal idwoksil ak radikal anion superoksid [35]. Melanj yo jwenn nan espès oksijèn reyaktif yo koresponn ak sa yo ki natirèlman nan selil yo, akòz move balans nan twoub estati redox [36-38].

Anba enfliyans estrès, fòm izotèm chanje, sa ki endike yon diminisyon siyifikatif nan zòn nan pou chak molekil sèl nan monokouch la ki chaje anpil. Chanjman sa yo te fèt akòz oksidasyon lyezon enstore nan chenn asid gra yo. Efè sa a te ogmante ak ogmantasyon nan konsantrasyon ozòn nan apeprè {{0}}.3 ppm, ak Lè sa a, paramèt izotèm sa a te rete nan menm nivo malgre ogmantasyon nan ROS. Sa vle di ke nan yon konsantrasyon ozòn nan apeprè 0.3 ppm, tout asid gra enstore ki prezan nan monokouch la te soksid (nan modèl la neuroblastoma, kantite total asid gra enstore te 52 pousan).

Monokouch oksidize gen rèd sibstansyèl,cistanche nan Chinwajan sa reprezante pa valè Cs-1 (pi gwo valè paramèt sa a, se pi gwo rèd kouch la). Nan prezans quercetin, menm nan yon konsantrasyon ki ba （6.25 μM）, modifikasyon yo nan manbràn ki ekspoze a ozòn, jan yo wè pa chanjman nan valè Alim, yo te siyifikativman redwi (Figi 5a), ki pwouve aktivite antioksidan nan konpoze sa a. . Li se vo anyen, sepandan, ke byenke quercetin scavenged radikal yo, pwoteje asid gra enstore yo kont oksidasyon, li pa t 'ranvèse chanjman ki fèt nan rèd manbràn (Figi 5b).

Kidonk, li te montre kercetin montre yon aksyon antioksidan, men prezans sèlman li ant molekil lipid enfliyanse (detèmine) paramèt yo nan lavè a, sa vle di, malgre pwoteksyon nan chèn asid gra kont oksidasyon, rèd manbràn nan diminye anpil (Cs- Mwen valè apeprè 25 pousan pi ba konpare ak kontwòl la).

Rezilta sa yo endike ke li se chanjman nan manbràn ki se faktè prensipal la nan efè selilè ki soti nan prezans nan quercetin. Sepandan, konsekans chanjman sa a (modifikasyon siyal, transpò) varye selon kantite molekil polifenol, konpozisyon inisyal manbràn lan, ak fonksyon selil la. Sa a eksplike poukisa, nan diferan sikonstans ak nan etid diferan, quercetin montre yon efè pwoteksyon, pandan ke nan lòt moun byen opoze an.

Nan yon sitiyasyon nan gwo estrès oksidatif, efè antioksidan ede selil la pa pwoteje eleman li yo kont domaj. Sepandan, si manbràn yo siyifikativman modifye lè yo lokalize konpoze sa a nan anviwònman yo, sa ki lakòz distribisyon an nan siyal oswa transpò wout pa chanje rèd manbràn, sa ka mennen nan efè favorab. Li ta dwe sonje tou ke anpil pwosesis nan yon selil pran plas an menm tan, tou de sa yo ki gen rapò ak manbràn ak sa yo ki jenere estrès oksidatif. Efè a ki ka obsève ak mezire pa detèmine nivo a nan endikatè espesifik se toujou total. Pakonsekan, gen sitiyasyon kote efè quercetin pèrsu kòm favorab ak favorab.

4. Materyèl ak Metòd

4.1.Materyèl

Konpozisyon modèl pati lipid manbràn selil neuroblastoma yo te etabli dapre travay otè [39-41]. Fosfolipid: 1-oleoyl-2-palmitoyl-sn-glycerol-3-fosfokolin;1-hexacosanoyl-d4-2-hydroxy-sn-glycerol-3-fosfokolin; 1,2-dioleoyl-sn-glycerol-3-fosfokolin; L- -fosfatidiletanolamin (sèvo); sphingomyelin (sèvo)-(Avanti Polar Lipids Inc., Alabaster, AL, USA). Kolestewòl te achte (Sigma-Aldrich, Darmstadt, Almay). Rapò fosfolipid ak kolestewòl te 79 pousan a 21 pousan. Rapò asid gra satire ak enstore te 48 pousan a 52 pousan.

Solvang yo (klowofòm, etanòl) nan pite chimik-Poch (Gliwice, Polòy); dlo frèch deyonize ki te pwodwi pa HLP 5 Hydrolab (Straszyn, Polòy). Yo te achte mwayen kilti, serom, ak antibyotik nan CytoGen GmbH. Reyaktif chimik yo itilize nan eksperyans yo te jwenn nan Sigma Aldrich.

4.2.Kilti Selil

Liy selil neuroblastom imen SK-N-SH (Koleksyon Ewopeyen an nan kilti selil otantifye (ECACC) te kiltive nan 10 pousan serom fetal bovine (FBS) nan Dulbecco a modifye Eagle Medium (DMEM), konplete ak 0.01 pousan penisilin. -streptomycin nan 37 degre nan yon atmosfè imidite, ki gen 5 pousan CO2.

4.3. Mezi Viabilite Selil (MTT Assay)

Selil yo te simen nan yon plak {{0}}byen nan yon dansite 1×104 selil pou chak pi nan yon volim 0.1 mL. Selil yo te trete pou 24 èdtan ak divès kalite konsantrasyon nan quercetin (3.75-200 μM）. Apre tan sa a, 3 mM ak 5 mM oksijene idwojèn te ajoute pou 3 èdtan. Akòz mank de diferans ki genyen ant efè yo nan HO2 at3 ak 5 μM konsantrasyon, pou etid estatistik, yo te trete kòm tretman yo menm ak dekri kòm 3-5 uM H2O2 tretman.

Apre sa, 50μL MTT（3-【4,5-dimethylthiazol-2-yl】-2,5 diphenyl tetrazolium bromur) solisyon (solisyon stock esteril 5 mg/mL) te ajoute nan selil yo ak enkubasyon pou 2 èdtan nan 37 degre nan yon atmosfè imidite 5 pousan CO. Lè sa a, 0.4 mL dimethyl sulfoxide (DMSO) te ajoute nan chak pi epi kenbe pou 10 min. Apre santrifugasyon, yo te mezire dansite optik supernatant la nan 570 nm lè l sèvi avèk yon lektè plak mikrolit (BioTek Instruments, VT, USA).

4.4.Essay Dega Mem1brane (Essay LDH)

Yo te itilize tès laktat dehydrogenase (LDH) kòm yon makè nan antye manbràn selilè.

Selil nan kantite 1× 1{{10}}* selil pou chak pui yo te simen nan yon plak 96-pou yo epi yo te enkube nan prezans quercetin （3.75-200 μM） pou 24 èdtan; Lè sa a, 3 mM ak 5 mM H2O, yo te ajoute pou 3 èdtan. Nan tib yo ki gen 0.5 mL nan 0.75 mM piruvat sodyòm ak 10 uL NADH (140 μM) (chofe nan 37C pou 10 min), yo te ajoute 150 μL nan surnatant ak enkube pou 30 min nan 37 degre. Lè sa a, 0.5 mL nan 2,4-dinitrophenylhydrazine te ajoute nan echantiyon an, epi apre 1 èdtan yo te mezire absòbe a nan 450 nm.

4.5. Detèminasyon peroksidasyon lipid (Konsantrasyon MDA)

Peroksidasyon lipid manbràn te estime pa reyaksyon asid thiobarbituric (TBA) ak malondialdehyde (MDA). Selil yo te simen nan {{0}}plak byen ki gen quercetin ak H, O2 (nan konsantrasyon ak tan ki dekri pi wo a) nan kantite 1 × 104 selil pou chak pi nan yon volim { {10}}.25 mL. Apre tretman an, echantiyon yo te kolekte epi santrifuje (1000×&,5min). Nan granules yo, 0.5 mL 0.5 pousan TCA te ajoute, vortexed pou 1 min, ak lysed nan soniting pou 5 min. Apre santrifijasyon nan 10,000 × g pou 10 min, yo te ajoute 0.4 mL nan supernatant nan 1.25 mL 20 pousan TCA a ak 0.5 pousan TBA ak chofe nan yon tèrmoblok sèk (100 degre) pou 30 min. Apre refwadisman, yo te mezire absorbans nan 532 nm lè l sèvi avèk koyefisyan extinksyon molè MDA ki egal a 155 M-1 cm-1.

4.6.Modèl manbràn

Ozonasyon tanpon. Tanpon fosfat (0.01 M, pH 7.4) te satire ak ozòn ki te pwodwi pa dèlko ozòn FM 500 (Grekos, Polòy). Konsantrasyon ozòn nan yon tanpon te detèmine dapre Bader ak Hoigne [42].

Izotèm Presyon Sifas.kwasans penis cistancheLangmuir trough (KSV, Fenlann) te itilize pou enskripsyon izotèm presyon sifas nan yon pousantaj konpresyon konstan ki koresponn ak vitès baryè 5 mm / min. Monokouch lipid te fòme lè yo gaye yon kantite lajan defini nan solisyon klowofòr lipid nan konsantrasyon 1 mg/mL sou subfaz ki konpoze de tanpon akeuz 0.01 M fosfat, pH 7.4 avèk oswa san quercetin, ak ak oswa san ozòn. Tansyon sifas yo te mezire ak yon plak Pt-Wilhelmy. Eksperyans yo te fèt nan 25 degre ±1 degre.

4.7. Analiz estatistik

Twa a sis analiz endepandan yo te fèt pou chak varyant teste ak mwayèn (± SD). Diferans enpòtan yo konpare ak kontwòl yo te estime pa eksplwate pwosedi SAS ANOVA. Analiz estatistik la te fèt pa tès miltip Duncan a, pran p<0.05. statistical="" tests="" were="" carried="" out="" using="" statistica="" 13.3(cracow,="">

Kontribisyon Otè: Konsepyalizasyon, BK, BD, ak ER-S.metodology, BKBD; lojisyèl, BK, BDvalidation, BK, BD, ER-S., ABwriting—preparasyon bouyon orijinal BK, BD, ER-S., ekri—revizyon ak koreksyon, BK, BD, ER-S., ABvisualization, BK, BDsupervision, BK, BD, ER-S., ABATout otè yo te li epi dakò ak vèsyon maniskri a pibliye.

Finansman:Rechèch sa a pa te resevwa okenn finansman ekstèn.

Deklarasyon Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl: Pa aplikab.

Deklarasyon Konsantman Enfòme: Pa aplikab.

Deklarasyon Disponibilite Done yo: Done yo genyen nan atik la. Konfli enterè: Otè yo pa deklare okenn konfli enterè.

Atik sa a soti nan Molecules 2021, 26, 4945. https://doi.org/10.3390/molecules26164945 https://www.mdpi.com/journal/molecules