Anastatin dérivés soulaje myokad ischemi-repèfizyon aksidan atravè pwopriyete antioksidan

Pou plis enfòmasyon, kontaktetina.xiang@wecistanche.com

Résumé:(±)-Anastatins A ak B yo se flavonoid izole nan Anastatica hierochuntica.Nan yon etid anvan, vennkat di-ak tri-ranplase dérivés roman anastatin yo te fèt ak aktivite antioksidan preliminè yo te evalye. Nan etid la kounye a, efè pwoteksyon myokad ischemi-reperfusion (I / R) ak kapasite antioksidan sistematik nan 24 dérivés yo te plis etidye. Konpoze 13 te pi pisan pami tout konpoze etidye yo, ki te ogmante siviv selil H9c2 a 80.82 pousan. Kapasite antioksidan nan konpoze 13 te evalye nan ferrik diminye pouvwa antioksidan, 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) radikal scavenging, ak 2,2-diphenyl{ {20}}esay picrylhydrazyl. Li te obsève ke konpoze 13 siyifikativman redwi zòn enfaktis ak amelyore chanjman istopatolojik ak elektwokadyogram nan rat ak blesi myokadI / R. Anplis, konpoze 13 diminye pousantaj flit laktat dehydrogenase serom, kreatin kinaz, ak malonyl dialdehyde ki soti nan tisi myokad rat yo ak ogmante nivo glutatyon ak aktivite superoksid dismutase apre yo.blesi myokad I/Rnan rat. Ansanm, nou konkli ke konpoze 13 te gen efè kadyopwotektif ki pisan kont blesi myokadI/R tou de nan vitro ak nan vivo akòz aktivite antioksidan vaste li yo.

Mo kle: flavonoid dérivés; selil H9c2; ipoksi / reoksijenasyon; efè cardioprotective

Klike la a pou jwenn plis enfòmasyon sou pwodwi

1. Entwodiksyon

Maladi ischemik kè (IHD) se yon kòz prensipal lanmò atravè lemond [1]. Restorasyon alè nan sikilasyon san ka efektivman amelyore rezilta klinik maladi a; sepandan, repèfizyon se pa san risk akòz limit domaj selilè ki te koze pa repèfizyon tèt li. Se poutèt sa, li trè enpòtan pou devlope estrateji terapetik efikas kont blesi myokad ischemi-reperfusion (I/R) [2]. Mekanis nan blesi myokad I/R trè konplike; li gen ladann apoptoz, estrès oksidatif [3], surcharge kalsyòm [4], ak enflamasyon [5].Estrès oksidatifka mennen nan apoptoz atravè divès chemen transduction siyal, ki gen ladan kinaz siyal-reglemante (ERK), c-Jun amino-tèminal kinaz (JNK), aktivasyon nan p53 (pwoteyin timè p53), ak variant p66shc. Anplis, pwodiksyon twòp espès oksijèn reyaktif (ROS) ka lakòz domaj irevokabl nan manbràn selilè ak molekil selilè, tankou ADN, asid nikleyik, pwoteyin, lipid, epi kòmanse reyaksyon chèn, plis domaje tisi myokad. Estrès oksidatif [6], ki te koze pa yon move balans ant fòmasyon radikal gratis ak ROS scavenging, jwe yon wòl enpòtan nan patojèn nan I / R aksidan I. Se poutèt sa, estrateji ki pwoteje myokad la soti nan estrès oksidatif yo trè konsidere nan jesyon an. nan blesi I/R myokad. Se poutèt sa, akòz kapasite potansyèl gratis radikal-scavenging yo, estrateji ki baze sou antioksidan yo benefisye nan jesyon an nan aksidan I / R.

Nan syans klinik, antioksidan yo itilize diminyeblesi myokad I/Ryo sitou divize an de kalite: anzim ak ki pa anzim. Anzim tankou katalaz ak glutatyon peroksidaz diminye konsantrasyon oksijene idwojèn pou anpeche domaj selilè; antioksidan ki pa anzimatik tankou vitamin E, Vitamin C, -karotèn, elatriye, febli repons estrès oksidatif nan tisi a pou diminye domaj tisi yo epi ankouraje reparasyon fonksyonèl. Sepandan, aplikasyon an nan tou de kounye a gen sèten limit. Gwo mas molekilè preparasyon anzim yo pa fezab nan absòpsyon [8]. Genyen tou sèten pwoblèm ak estabilite nan ki pa anzim yo, ki mennen nan estabilite pòv nan dwòg, kidonk yo fasil soksid [9].Flavonoid, kòm yon kalite antioksidan ki pa anzimatik, yo te rapòte yo posede yon varyete de pwopriyete ki pisan, ki gen ladan antioksidan, anti-kansè, antiapoptotik, ak pwoteksyon kadyovaskilè [10]. Yo anpeche fòmasyon nan oksid trè reyaktif ak anpéché reyaksyon oksidatif lè yo retire ROS, tankou radikal idwojèn ak peroksinitrit. Anastatins A ak B [11] se flavonoid ak aktivite epatoprotective. Anastasius A ak B yo se eleman aktif nan Anastatica hierochuntica (subtip Anastatica, fanmi Brassicaceae). Kounye a, gen anpil rapò sou sentèz chimik ak modifikasyon estriktirèl anastatin A ak B. An 2003, konpoze aktif ki soti nan Anastatica hierochuntica yo te izole epi yo te revele yo gen efè epatopwotektif kont sitotoksisite D-galactosamine-induit nan epatosit prensipal kiltive sourit. Nakashima ak Eman te montre tou ke konpoze yo fè egzèsis nan vitro antioksidan ak aktivite antikansè. Sepandan, efè famasi yo nan anastatin A ak B ak dérivés yo, osi byen ke pwosedi pou sentèz yo, rete klè. Se poutèt sa, nou vize fè sentèz anastatin A ak B ak kèk nan dérivés yo epi evalye yo pou aktivite antioksidan nan yon ipoksi /reoksijenasyon(H/R) modèl, ki efikas pou etidye myokad I/R aksidan [12].

Nan yon etid anvan, nou te sentetize anastatin A ak B ak analogu yo epi evalye kapasite antioksidan yo lè l sèvi avèk yon modèl kilti selil H2O2 (peroksid idwojèn)-pwovoke domaj oksidatif13. Rezilta anvan nou yo te montre ke anastatin A ak B gen aktivite epatoprotective ki pisan ki sanble yo gen rapò ak kapasite antioksidan yo.

Nan etid la prezan, anastatin A ak B ak 24 nan dérivés yo te sentèz ak evalye pou kapasite antioksidan lè l sèvi avèk diminye pouvwa ak tès radikal-scavenging. Anplis de sa, yo te itilize yon modèl selil H9c2 senp nan H / R ak yon modèl rat nan blesi myokad I / R pou evalye efè kardyopwotektif konpoze yo.

2. Rezilta yo

2.1.H/R Modèl Etablisman

Yo te evalye konsantrasyon Na2S, tretman O4 jan yo montre nan Figi 1A, epi to siviv selil H9c2 yo te redwi ak ogmante konsantrasyon Na2S2O4. Anba 4 mM Na, S, Oa, viabilite selil yo diminye a mwens pase 50 pousan (13.7,25, ak 43.4 pousan, respektivman nan tan reoksijenasyon 2,1 ak 0 h) , ak nivo rediksyon viabilite selil la te pi ba. Se poutèt sa, yo te itilize yon konsantrasyon 4 mM nan Na2S2O4 pou imite tretman ipoksik. Figi 1B montre ke 4 mM nan Na2S2O4 tretman pou 2 èdtan ki pa gen okenn reoxygenation (0 h) siyifikativman redwi viabilite selil, epi li rete fiks. Anba kondisyon 4 mM konsantrasyon NazS2O4 pou 2 èdtan nan imite ipoksi, 2 èdtan nan reoksijenasyon redwi pousantaj siviv selil a 17.37 pousan （Figi 1C）. Kòm montre klèman nan Figi 1D, 10 μM nan resveratrol ranvèse viabilite selil redwi ki te koze pa H / R, ki te pi pisan pase menm konsantrasyon nan asid galik (74.34 vs.60.44 pousan pou asid galik).

Kòm yon rezilta, modèl ipoksi/reoksijenasyon an te etabli lè l sèvi avèk Na2S, O4 nan yon konsantrasyon final 4 mM pou 2 èdtan nan miman ipoksi ki te swiv pa kilti a nan DMEM nòmal (modifikasyon Dulbecco nan mwayen Eagle a)/glikoz segondè imite aksidan reoxygenation. . Resveratrol nan yon konsantrasyon final 10 μM te itilize kòm yon kontwòl pozitif.

2.2. Anastatins ak Derioatioes yo amelyore rantabilite selil H9c2 ki sibi tretman H/R.

Premyèman, nou te egzamine efè anastatin A ak B (Figi 2A, B) ak dérivés yo sou viabilite selil H9c2 nan yon MTT(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1){{ 10}}, 5-di-phenytetrazoliumromide) tès [13]. Konpoze 20a, 21a, 22a, 20b, 22b, 20c, 20c ', 21c, 22c, 10, ak 11 pa t 'siyifikativman sitotoksik nan selil H9c2 (Figi 3A, B, Tablo S2). Anastatins A ak B, dérivés yo, ak resveratrol (kontwòl pozitif) ranvèse domaj selil ipoksi pwovoke (Figi 4). Nan gwoup modèl la, viabilite selil yo te diminye a 20.31 pousan, ki te ogmante a 82.68 pousan pa resveratrol, ak anastatin A ak konpoze 22b, 22c, 24b, 24c, 13, ak 14 ogmante pousantaj siviv selil la a plis pase 70 pousan ( 71.49,71.00,76.50, 73.24,77.57, 80.82, ak 77.13 pousan, respektivman). Se poutèt sa, konpoze 13 (Figi 2C) te gen efè pwoteksyon pi fò nan mitan dérivés anastatin yo soti nan aksidan H / R e li te itilize nan eksperyans ki vin apre yo.

2.3. Konpoze 13 soulaje domaj selil H/R-induit ak estrès oksidatif

Yo nan lòd yo eksplore kapasite nan antioksidan nan konpoze an, twaestrès oksidatifendikatè, LDH (lactate dehydrogenase), GSH (L-Glutathione), ak SOD (superoxide dismutase), yo te chwazi pou evalye kapasite antioksidan konpoze yo. LDH se anzim sitoplasmik ki estab ki prezan nan selil myokad yo, ki rapidman lage soti nan yon selil nan yon mwayen kilti selil sou blesi manbràn selil myokad. Plis blesi a grav, se pi wo nivo LDH nan mwayen kilti a. Figi 5A te demontre ke 2 h nan ipoksi ki te swiv pa 2 h nan reoksijenasyon ogmante siyifikativman lage LDH (478.98 U/L kont 55.84 U/Lin gwoup la vid,p<0.001), which="" was="" inhibited="" by="" resveratrol="" (284.07="" u/l="" vs.="" the="" model="" group=""><0.01) and="" compound="" 13(276.61="" u/l="" vs.the="" model="" group,=""><0.001).gsh can="" act="" as="" a="" hydrogen="" donor="" for="" glutathione="" catalase="" (cat),="" eliminating="" o2-="" and="" its="" derivatives="" in="" the="" organism,="" thereby="" cells="" are="" protected="" from="" oxidant="" damage.="" additionally,="" sod="" can="" catalyze="" the="" disproportionation="" of="" superoxide="" anions="" and="" protect="" cells="" from="" damage.="" as="" shown="" in="" figure="" 5b,="" c,="" compound="" 13="" significantly="" increased="" gsh="" release="" and="" sod="" activity=""><0.01）. it="" increased="" gsh="" level="" to="" 39.93="" μmol/gprot="" which="" was="" higher="" than="" the="" level="" in="" the="" model="" group="" （18.2="" μmol/gprot）="" but="" slightly="" lower="" than="" that="" in="" the="" resveratrol="" group.="" additionally,="" it="" reversed="" h/r-induced="" reduction="" in="" sod="" activity="" by="" increasing="" sodlevel="" from="" 12.00="" u/mgprot="" to="" 22.98="" u/mgprot.="" these="" findings="" demonstrate="" that="" compound="" 13="" has="" a="" protective="" effect="" on="" h9c2="" cells="" subjected="" to="" h/r="">

2.4.Kapasite antioksidan nan konpoze 13

Vitamin C(Vc) was used as an antioxidant control in order to evaluate the antioxidant effects of resveratrol and compound 13 intuitively. FRAP assay was used to evaluate the reducing power of the compound that can transfer ions from Fe3+ into Fe2+ to determine the antioxidant capacity of compounds. The results of the experiment showed that the reducing power of compound 13 was 354.80 mg/mmol, significantly stronger than the values obtained for the positive control Vc (127.47 mg/mmol) and resveratrol (261.91 mg/mmol) (Figure 6A).ABTS (2'-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate)and DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) are stable free radicals insolvent, but when a radical scavenger is added to the solvent, the result is a reduction in the number of free radicals and the degree of reduction in the number of free radicals is directly proportional to the antioxidant capacity. Figure 6B, C show the ABTS and DPPH radical scavenging abilities of compound 13. The results indicate that compound 13 had the strongest scavenging activity on ABTS and DPPH with EC50 values of 1.38 and 0.07 mM, respectively. The antioxidant capacities of the compounds tested in all three antioxidant assays followed the same trend: compound 13>resveratrol. Se poutèt sa, kapasite antioksidan nan konpoze 13 ka pi wo pase sa yo ki nan lòt antioksidan tipik.

2.5. Efè Anastatin Derivation 13 sou Myokad I/R Blesi nan rat

2.5.1.Efè konpoze 13 sou estrès oksidatif ak aktivite anzim antioksidan

Yo te evalye nivo blesi myokad pa detekte makè estrès oksidatif ak aktivite anzim antioksidan. Efè konpoze 13 sou aktivite MDA (malondialdehyde) nan tisi myokad, osi byen ke nivo LDH, CK (Kreatine Kinase), GSH, ak serom SOdin, yo te evalye. Jan yo montre nan Figi 7, aksidan I/R te lakòz yon ogmantasyon nan nivo LDH (Figi 7A) ak CK (Figi B) ak yon diminisyon enpòtan nan aktivite GSH (Figi 7C) ak SOD (Figi 7D) (p).<0.001). the="" level="" of="" mda(figure="" 7e)increases="" after="" i/r="" injury,="" which="" is="" a="" critical="" diagnostic="" marker="" of="" i/r="" injury.="" however,="" pretreatment="" with="" a="" positive="" control="" drug="" and="" different="" concentrations="" of="" compound="" 13="" significantly="" alleviated="" these="" injuries.="" ldh="" activity="" obtained="" for="" the="" i/r="" model="" group="" was="" 771.37="" u/ml,="" which="" was="" remarkably="" decreased="" to="" 416.129="" u/ml="" under="" resveratrol="" treatment.="" in="" the="" high-and="" low-dose="" 13="" groups,="" ldh="" activity="" decreased="" to="" 408.05="" and="" 462.81="" u/ml,="" respectively="" similar="" trends="" were="" observed="" for="" other="" myocardial="" injury="" markers,="" including="" the="" level="" of="" ck,="" gsh,="" sod,="" and="" mda="" release.="" these="" results="" indicated="" that="" compound="" 13="" exerted="" protective="" effects="" against="" oxidative="" stress-induced="" i/r="" injury="" in="" a="" dose-dependent="">

2.5.2. Efè Konpoze 13 sou Chanjman Elektwokardyogram (ECG) ak Batman kè

Chanjman tipik ECG(elektrokardyogram) ki te pwovoke pa blesi myokad I/R yo montre nan Figi 8. Konpare ak ECG nòmal (Figi 8A), blesi I/R myokad ka lakòz ORS (yon pati nan onn elektwokadografik la) ogmantasyon anplitid (Figi 8B); Vag QRS ak fizyon vag ST (Figi 8C); Segman ST (entèval ant onn S ak onn T) elevasyon (Figi 8D); ak envèsyon segman ST (Figi 8E). Apre 15 min nan ligasyon LAD, anplitid QRS te siyifikativman ogmante soti nan alantou 0.5 mV a 1.2 mV nan gwoup modèl la (Figi 9A), pandan y ap yon ogmantasyon anplitid QRS ki pi ba yo te obsève nan tout gwoup tretman yo (soti nan alantou 0.4 mV a 1,0.8, ak 0.6 mV pou resveratrol, dòz ki ba 13, ak gwo dòz 13 gwoup, respektivman) (Figi 9B-D ). Anplis de sa, yo te obsève yon tandans menm jan an nan ligasyon an nan 3 0 min. Pandan repèfizyon an, anplitid QRS la te kòmanse diminye; sepandan, vag QRS nan gwoup modèl la te rete pi wo a nan tout peryòd la. Apre 20 min nan repèfizyon, anplitid QRS nan gwoup modèl la redwi a apeprè {{30}}.8 mV, valè nan gwoup tretman an te apeprè 0.6, 0.5, 0.5 mV pou resveratrol la, dòz ki ba 13, ak gwo dòz 13 gwoup, respektivman. An jeneral, tretman resveratrol, dòz ki ba 13, ak dòz segondè 13, tout diminye ogmantasyon anplitid QRS patolojik konpare ak gwoup modèl la pandan tou de ischemi ak pwosesis repèfizyon byen bonè, ki ka atribiye a aktivite pwoteksyon myokad yo.

Ansanm ak siveyans ECG, chanjman yo nan batman kè yo te detekte byen. Jan yo montre nan Tablo S3, 30 min nan ligasyon redwi batman kè a dramatikman nan tout gwoup yo, pandan y ap pa gen okenn diferans enpòtan yo te detekte ant nenpòt nan gwoup tretman yo ak gwoup modèl yo. Apre 2 èdtan nan repèfizyon, batman kè ogmante men pa gen okenn chanjman enpòtan yo te jwenn nan mitan nenpòt nan gwoup yo.

2.5.3. Efè Konpoze 13 sou Zòn Enfakti ak Chanjman Istopatolojik

Pou evalye nivo blesi myokad la, yo te tache tisi kè yo ak TTC (klori 2,35-Triphenyltetrazolium) epi yo te detekte chanjman istopatolojik yo. Jan yo montre nan Figi 10, nan gwoup sham la, pa gen okenn chanjman yo te obsève nan myokad la apre tach TTC pandan y ap yon echèl apeprè 30 pousan nan zòn enfaktis blan yo te obsève nan gwoup I / R la. Nan gwoup resveratrol ak ti dòz 13 gwoup yo, zòn enfaktis yo te siyifikativman diminye a anviwon 10 pousan, epi zòn enfaktis la nan gwo dòz 13 gwoup yo te minimize a anviwon 5 pousan. Figi 10 montre rezilta egzamen HE (ematoksilin-eozin) tach: elajisman selil kadyak, manbràn ak nwayo ki pasyèlman fonn, ak enfiltrasyon selil enflamatwa yo te obsève nan seksyon tisi ki soti nan gwoup modèl la. Sepandan, pretreatman ak konpoze 13 siyifikativman soulaje chanjman istopatolojik sa yo. Rezilta yo nan TTC tach ak HE tach endike ke konpoze 13 ka diminye I / R-induit enfaktis myokad nan yon fason ki depann de dòz.

3. Diskisyon

Vize sou aktivite antioksidan potansyèl anastatin A ak B, laboratwa nou an te fè sentetize 24 dérivés anastatin epi li te fè yon analiz preliminè sou sitotoksisite konpoze kont PC-12 ak aktivite sitopwoteksyon yo nan HO,-pwovoke domaj oksidatif [13] . Nan etid sa a, nou sitou te fè evalyasyon an pwofondè byolojik nan 13 nan 24 dérivés yo ak aktivite antioksidan ki pi fò.

Nan etid la prezan, yo te etabli blesi myokad I/R nan selil H9c2 atravè endiksyon ak tretman H/R. Rezilta yo nan etid la endike ke anastatin A ak B ak dérivés etidye yo amelyore viabilite nan selil H9c2 apre tretman H / R. Konpoze 13 yo te jwenn ki pi pisan nan mitan 26 konpoze yo etidye ak Se poutèt sa yo te chwazi pou plis evalyasyon. Aktivite LDH (yon makè blesi selil), SOD, ak GSH (makè estrès oksidatif) yo te detekte nan supernatant selil H9c2 apre tretman H/R. Nou te jwenn ke pretreatman ak konpoze tès yo siyifikativman diminye nivo LDH ak ogmante nivo SOD ak GSH nan selil yo. Kidonk, nou te ipotèz ke dérivés anastatin posede aktivite kardyopwotektif ki ka atribiye a kapasite yo nan siprime estrès oksidatif. Yo itilize tès DPPH ak ABTS pou evalye pouvwa radikal-scavenging konpoze an [14]. Kòm yon rezilta, konpoze 13 te gen gwo pouvwa antioksidan, epi li elimine ABTS ak DPPH nan valè EC50 ki ba, plis endike repwesyon estrès oksidatif. Ligasyon LAD se yon metòd komen yo itilize pou etabli modèl I/R myokad. Lè nou evalye anplitid QRS konplèks anvan iskemi, apre iskemi, ak apre repèfizyon, nou te jwenn ke pretreatman ak konpoze 13 ka soulaje aritmi ventrikulè siyifikativman pandan iskemi ak repèfizyon bonè. Anplis de sa, konpoze 13 afekte zòn enfaktis yo ak chanjman istopatolojik nan enfaktis myokad yo tou. Rezilta sa yo, ansanm ak konklizyon yo ki konpoze 13 siprime estrès oksidatif ak ogmante nivo yo nan anzim antioksidan nan serom rat nan yon fason ki depann de dòz, te montre ke konpoze 13 te gen yon efè ki pisan kont aksidan myokad.

An konklizyon, dérivés anastatin te gen kapasite antioksidan ki pisan, ak konpoze 13 ki montre aktivite antioksidan ki pi wo nan mitan konpoze tès yo. Mekanis ki responsab efè dérivés anastatin yo sou chemen siyal oksidatif ki gen rapò ak estrès toujou bezwen diskite. Astaxanthin (yon subtip nan karotenoid) ka elimine ROS ak plis soulaje aksidan ischemi / repafizyon [15]. Dwòg ki gen potansyèl pou anpeche jenerasyon ROS ta ka pwomèt nan maladi oksidatif ki gen rapò ak estrès [4] tankou terapi selilè ak maladi kadyovaskilè. Anplis de sa, ROS siprime endiksyon ipoksik faktè ipoksi-induzibl -1 (HF{-1) ekspresyon jèn sib, ki rapòte gen yon efè kadyopwotektif sou aksidan ischemi-reperfusion [16]. Nou sipoze ke ROS ak HIF-1 pwoteyin regilasyon ka jwe yon wòl enpòtan nan efè kadyopwotektif nan konpoze 13. Tournefolic acid B (TAB), ki sòti nan medikaman Chinwa èrbal, pwoteje kont blesi myokad I/R [17 ]. Etid la revele wòl enpòtan TAB nan estrès andoplasmik (ER), apoptoz, ak PI3K(phosphatidylinositol 3 kinase)/AKT(protein kinase B) chemen nan jesyon myokad I/R aksidan. Lòt chemen, tankou mitogen-activated protein kinase (MAPK) chemen an [18] ak AMPK (Adenosine 5'-monophosphate-activated protein kinase) chemen siyal [19], ka patisipe tou nan blesi myokad I/R. Se poutèt sa, pwochen etap la se kòmanse ak ROS ak HIF-1 pwoteyin regilasyon epi sèvi ak chemen TAB-medyatè yo eksplore mekanis yo pa ki 13 egzèse yon efè antioksidan ak pwoteje myokad I/R. Anplis, eksperyans yo nan nivo selil nan etid sa a ta dwe fèt tou nan liy selil imen.

4. Materyèl ak Metòd

4.1.Kilti Selil

Rat cardiomyocyte H9c2 selil liy te achte nan Nanjing Kebai Biotechnology Konpayi (Nanjing, Lachin). Selil yo te kiltive nan DMEM/Gwo glikoz (Hyclone, USA) ak konplete ak 10 pousan FBS (Lanzhou Minhai Biological Engineering co.LTD, Lanzhou, Lachin) ak 1 pousan penisilin/streptomycin (Hyclone, Marlborough, MA, USA) nan yon imidite imidite. enkibatè a 37 degre ak 5 pousan CO2.

4.2. Selil Viabilite Essay

Vitabilite selil yo te mezire lè l sèvi avèk tès MTT la. Selil H9c2 yo te simen nan yon plak 96-byen nan 1 × 10* selil/pi pou 24 èdtan. Apre sa, selil yo te trete ak Anastatins A ak B, ak dérivés yo pou 48 èdtan oswa pretrete ak Anastatins A ak B, ak dérivés yo ki te swiv pa tretman H/R. Lè sa a, MTT a (20 μL/byen) te ajoute ak kiltive nan 37 degre pou 4 èdtan. Yo te mezire absorbans nan 578 nm lè l sèvi avèk yon lektè mikroplak (Tecan, Infinite 50). Vitabilite selil la nan gwoup vid la te konsidere kòm 100 pousan.

4.3. Hypoxia/Reoxygenation(H/R) Modèl ak Administrasyon Medikaman

4.3.1.H/R Modèl

NazS, O4 te itilize pou imite kondisyon ipoksik la, ki reyaji ak [20] oksijèn epi redwi tansyon oksijèn an. Yo te fè yon varyete sèt konsantrasyon 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, oswa 6 mM pou detèmine konsantrasyon optimal Na2S, O4. Pou chwazi pi bon tan ipoksi, kilti 0.5, 1,2, 3, oswa 4 èdtan yo te fèt apre tretman solisyon Na2S2O4. Kilti a anba nòmal DMEM / mwayen glikoz segondè pou 0, 1, 2, 3, oswa 4 èdtan te fèt pou imite tan reoxygenation [21].

4.3.2. Administrasyon Medikaman

Pou administrasyon dwòg, anastatin A ak B ak dérivés yo (estrikti chimik nan Tablo S1) yo te separe an de gwoup: anastatin A ak dérivés li yo, ak anastatin B ak dérivés li yo. Resveratrol, ki te rapòte ke gen yon efè cardioprotective atravè aktivite antioksidan li yo, yo te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Pou detèmine konsantrasyon kontwòl pozitif la, resveratrol ak yon lòt konpoze antioksidan, asid galik （3-100 μM）, yo te evalye lè l sèvi avèk yon tès MTT kote selil yo te trete pou 48 èdtan 【22】. An jeneral, selil H9c2 yo te pretreate ak anastatin A ak B ak dérivés yo (10 uM nan konsantrasyon final) osi byen ke 10 uM nan resveratrol pou 30 min anvan tretman H / R.

4.4.Evalyasyon kapasite antioksidan

4.4.1. Essay Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP).

Yo te fè tès FRAP la dapre metòd Oivuan 【23】. Yon total de 25 μL nan 1 pousan ferricyanide potasyòm K3Fe（CN）6 te pipete ak 10 μL nan konpoze 13, vitamin c (asid ascorbic, Vc), ak resveratrol (0.{{8} } mM) plis 1 × PBS (pH=6.6) yo te ajoute. Yo te kenbe melanj lan nan beny dlo 50 degre pou 20 minit ki te swiv pa rapid glas-refwadisman. Lè sa a, 25 μL nan 10 pousan asid trichloroacetic (TCA), 0.1 pousan klori ferrik (FeCl), ak dlo distile yo te ajoute nan sekans. Yo te transfere melanj lan nan yon plak 96-byen epi yo te analize absorbans la nan 650 nm. Yo te itilize solisyon Vc (20-200 ug/mL) pou konstwi yon koub estanda. Kapasite antioksidan yo te kalkile nan koub kalibrasyon lineyè a epi yo te reprezante kòm ekivalan Vc.

4.4.2.ABTS Metòd

Aktivite radikal ABTS [24] te fèt dapre Sugahara et al. ak Re et al. ABTSsolution yo te dilye pou ajiste absorpsyon spectrophotometrically nan 650 nan 0.70±0.{02 nm, ak aktivite ABTSscavenging yo te mezire selon sa. fòmil sa a, E=((Akontrol-Ablank)-(A2 -A1)/(A control-Ablank))× 10, kote Kontwòl se absòbe reyaksyon kontwòl la ki genyen 130 μL ABTS. · plis solisyon k ap travay ak 5.5 μL echantiyon diluent （DMSO）, ak Ablank se absòbe 130μL sodyòm acetate tanpon ak 5.5 μL DMSO. A se absòbe 130 μL ABTS plis solisyon k ap travay (tanpon acetate sodyòm) ak 5.5 μL nan konpoze 13 (0.02-20 mM), ak Az se absòbe a nan 130μL tanpon acetate sodyòm ak 5.5 μL nan konpoze 13（ 0.02-20 mM）. Tout melanj yo te vortexed pou 30 s ak enkubasyon nan tanperati chanm pou 10 min ki te swiv pa mezire absòbe a nan 650 nm. ECs0 yo te kalkile lè l sèvi avèk relasyon lineyè ant konsantrasyon konpoze an ak pwobabilite ki genyen nan pousantaj anpèchman ABTS.

4.5. Iskemi-Reperfusion Modèl

4.5.1.Swen bèt

Rat Sprague Dawley (SD) yo te jwenn nan PLA Militè Akademi Syans Medikal Laboratwa Animal Center (Beijing, Lachin). Yo te aklimate senkant gason SD rat ki te peze soti nan {{0}} g pou yon semèn anba tanperati chanm nan 23± 1 degre ak yon sik limyè/fè nwa 12 èdtan epi yo te bay manje ak dlo. Rat yo te divize an senk gwoup: gwoup la vid (rat pa te resevwa okenn tretman men operasyon simulation), gwoup modèl la (rat te resevwa tretman machin ak operasyon MI / R), gwoup la resveratrol (rat te resevwa 200 mg / kg resveratrol ak MI / R). operasyon), gwoup la dòz ki ba 13 (rat te resevwa 100 mg / kg konpoze 13 ak operasyon MI / R), ak gwo dòz 13 gwoup la (rat te resevwa 200 mg / kg konpoze 13 ak operasyon MI / R). Konpoze yo te formul nan 0.5 pousan karboksimetil seluloz sodyòm ak dòz kòm yon sispansyon nan 1 mL / kg oralman yon fwa chak jou pandan sèt jou. Tout eksperyans bèt yo te fèt an akò ak Gid Enstiti Nasyonal Sante pou swen ak itilizasyon bèt laboratwa ak apwouve pa Komite Akademik Tianjin University of Syans ak Teknoloji.

4.5.2. Pwotokòl eksperimantal

Rat Sprague Dawley yo te anestezi ak 20 pousan urethane (0.8 mL/100 g) epi nou answit fè iskemi myokad pa ligasyon anteryè gòch (LAD). Kè a te ekspoze nan yon ensizyon thoracic gòch epi yo mete l sou yon 4-0 suture swa pou fè iskemi rejyonal pou 30 min nan iskemi ki te swiv pa 2 èdtan nan repèfizyon. Prèv iskemi myokad yo te konfime pa elevasyon segman ST ak ogmantasyon anplitid QRS. Pandan eksperyans la, rat yo te kenbe sou yon vantilatè DW3000 (Beijing Zhishu Duobao Byolojik Teknoloji Co Ltd, Beijing, Lachin). Yo te kontwole batman kè ak ECG atravè sistèm akizisyon siyal byolojik MD3000 (Beijing Zhishu Duobao Byolojik Teknoloji co Ltd, Beijing, Lachin). Apre siveyans pwosesis ischemi/reperfusion, rat yo te sakrifye epi yo te itilize echantiyon san ak omojene kè yo pou detekte blesi myokad lè l sèvi avèk twous komèsyal detektif.

4.5.3. TTC tach ak HE tach

Limit nan zòn ischemic la te quantifier pa triphenyl tetrazolyom klori (TTC) tach. Echantiyon kè yo te jele imedyatman nan {{0}} degre pou 10 min epi yo te fè senk tranch mens 1 a 2 mm. Lè sa a, yo te mete tranch yo nan 1 pousan tanpon TTCphosphate (pH =7.0) epi yo tache nan 37 degre pou 20 min, epi yo te fiks nan fòmalin. Imaj yo te jwenn lè l sèvi avèk yon kamera dijital, ak pousantaj nan zòn nan enfarkte (TTC-negatif) ak zòn nan risk (TTC-pozitif) yo te mezire lè l sèvi avèk lojisyèl ImageJ [25]. Pou tach HE, yo te retire zòn enfaktis la epi yo te fikse nan fòmaldeyid 10 pousan epi li te entegre nan parafine. Apre sa, tisi yo te tache ak HE (ematoksilin-eozin) epi yo te egzamine anba yon mikwoskòp limyè. Tianjin YiSheng Yuan Biotechnology Company (Tianjin, Lachin) te komisyone seksyon entegre dezidrate ak seksyon sele.

4.6. Spectrophotometric Komèsyal Twous

Twous komèsyal yo itilize nan rechèch sa a yo te achte nan men Beijing Solarbio Science & Technology Co Ltd.(Beijing, Lachin) ak Nanjing Jiancheng Bioengineering Company (Nanjing, Lachin).Nan serom nan rat ak supernatant selil, makè blesi myokad, laktat dehydrogenase (LDH). ), kreatin kinaz (CK), glutathione (GSH), ak aktivite superoxide dismutase (SOD) yo te evalye. Aktivite Malondialdehyde (MDA) yo te mezire lè l sèvi avèk omojene rat kè. Tout twous komèsyal yo te fèt swiv enstriksyon manifakti a.

4.7.Statistiques Pwosesis

Tout eksperyans yo te repete omwen twa fwa. Done eksperimantal yo te trete lè l sèvi avèk lojisyèl GraphPad Prism7, epi rezilta eksperimantal chak gwoup te eksprime kòm mwayen ± devyasyon estanda (x± s). Yo te itilize t-tès la pou konpare siyifikasyon estatistik ant gwoup yo. P<0.05 was="" recorded="" as="" statistically="">

Referans

1. Uzdensky, AB; Demyanenko, S. Istone asetilasyon, ak deacetylation nan konjesyon serebral ischemik. Regen neral. Res. 2021, 16, 1529–1530. [CrossRef] [PubMed]

2. Li, H.; Yin, A.; Cheng, Z.; Feng, M.; Zhang, H.; Xu, J.; Wang, F.; Qian, L. Atténuation nan chemen siyal anplifikasyon Na/K-ATPase/Src/ROS ak pNaktide amelyore blesi myokad ischemi-reperfusion. Ent. J. Biol. Macromol. 2018, 118, 1142–1148. [CrossRef] [PubMed]

3. Levin, RM; Xia, L.; Wei, W.; Schuler, C.; Leggett, RE; Lin, ADY Efè Ganoderma Lucidum kal-kase spor sou estrès oksidatif nan blad pipi lapen urin lè l sèvi avèk yon modèl in vivo nan ischemi/reperfusion. Mol. Selil. Byochim. 2017, 435, 25–35. [CrossRef] [PubMed]

4. Tan, Z.; Liu, H.; Chante, X.; Ling, Y.; Li, S.; Yan, Y.; Yan, J.; Wang, S.; Wang, X.; Chen, A. Honokiol apre-tretman amelyore myokad ischemi/repèfizyon aksidan pa amelyore eflux otofajik ak diminye pwodiksyon entraselilè ROS. Chem. Biol. Entèaksyon. 2019, 307, 82–90. [CrossRef] [PubMed]

5. Hausenloy, DJ; Yellon, DM Myokad ischemi-reperfusion blesi: Yon sib neglije terapetik. J. Clin. Investig. 2013, 123, 92–100. [CrossRef]

6. Yu, C.; Li, D.; Li, Z.; Yu, D.; Zhai, G. Efè sacubitril / valsartan sou enflamasyon ak estrès oksidatif nan modèl ensifizans kè doxorubicin-induit nan lapen. Acta Pharmaceut. 2021, 71, 473–484. [CrossRef]

7. Wang, Y.; Che, J.; Zhao, H.; Tang, J.; Shi, G. Platycodin D inibit estrès oksidatif ak apoptoz nan cardiomyocytes H9c2 apre aksidan ipoksi / reoxygenation. Byochim. Biophys. Res. Komin. 2018, 503, 3219–3224. [CrossRef]

8. Pavlovic, M.; BNáfrádi Rouster, P. Trè ki estab nanokonpoze anzim-imite nan aktivite antioksidan. J. Colloid Interface Sci. 2019, 543, 174–182. [CrossRef]

9. Qi, HZ; Wangi, WZ; Li, JY Antioksidatif sistèm Deinococcus radiodurans. Res. Microbiol. 2019, 171, 822–831. [CrossRef]

10. Shao, L.; Shao, Y.; Yuan, Y. Pinocembrin flavanone inibit viabilite selil nan PC-3 kansè pwostat imen lè li pwovoke apoptoz selilè, pwodiksyon ROS, ak arè sik selil. Acta Pharmaceut. 2021, 71, 669–678. [CrossRef]