Efè anti-aje nan Ribes Meriri anthocyanins sou selil tij neral ak aje Pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

Nar sekou sans sekou nan 23M-NSC

R. Meyer antocyanins yo rich nan anpil kalite flavonoid ak eleman byoaktif [1,3-5]. Pou detèmine ki eleman nan R. Meyer antocyanins jwe yon wòl enpòtan nan anti-aje, nou fè yon analiz metabolik nan R. Meyer anthocyanins. Nou revele ke Nar ka yon metabolèt enpòtan flavonoid paske chemen an flavonoid te trè anrichi nan R. Meyer antoloji (Tab siplemantè 1). Pou detèmine efè anti-sans nan Nar, divès kalite konsantrasyon (0, 1.7,3.4,6.8,13.6, ak 27.2 μg / mL)te aplike nan 23M-NSCs ak CCK-8 atake yo te itilize pou mennen ankèt sou vizibilite selil. Kòm Figi Siplemantè 3 montre, 6.8 μg / mL Nar tretman ogmante vizibilite selil pa 150%. Pou plis eksplore efè anti-sans nan Nar, 23M-NSC yo te trete ak Nar, ak endikatè ki gen rapò ak laj yo Te Lè sa a, detekte.itilizasyon esperidinNan 23M-NSCs trete ak 6.8 μg / mL Nar, p16nk4a ekspresyon MRNA te redwi (Figi 3A). Nar tou te longe telomeres yo nan MNSC kiltirèl ak ogmante sentèz ADN (Figi 3B,3C). Pou plis eksplore efè yo nan Nar sou pwopagasyon selil, nou fè iminofilyatè tach nan Ki67, ki se yon antijèn nikleyè nan selil mitotik ki eksprime nan tout sik selil a, eksepte nan G0 [19,27]. Tretman ak Nar amelyore pwopagasyon selil, jan sa mezire pa nimewo ogmante nan selil Ki67-pozitif (Figi 3D, 3E). Apre sa, nou menm tou nou detekte potansyèl diferansyasyon nan NSCs nan ewonn. Vreman vre, 6.8ug / mL Nar tretman tou ogmante kantite selil MAP2-pozitif (Figi 3F, 3G). Rezilta sa yo toujou demontre ke Nar ka ranvèse sans 23M-NSC.

Figi 2. Ribes Meyer antocyanins amelyore memwa sourit ak kapasite aprantisaj pa ogmante selil tij neral (NSCs). (A) Tan yo pran yo jwenn platfòm la. (B) Tan yo pran premye rive nan platfòm la. (C) vle di vitès pou jwenn platfòm la. (D) Distans swam anvan ou jwenn platfòm la. (E. F) Trètman avèk R.pèdi anpi cistanchechak antocyanin ogmante nimewo nerosfè ak gwosè konpare ak kontwòl yo. (G) Neurospheres ot 50-100 um nan gwosè yo te ogmante nan nimewo pa R. Meyer tretman antocyanin nan mitan. Done yo prezante kòm vle di ±SD nan twa eksperyans endepandan. *p<><0.01, and=""><0.0001 compared="" with="" untreated="" cells."n"="" indicates="" the="" number="" of="" animals="" in="" each="" experimental="">

Figi 3. Efè naringenin (Naringenin(Nar) sou sans nan selil tij neral (MNCs). (A) p16k4a mRNA ekspresyon MRNA te mezire pa QRT-PCR nan 23M-NSCs avèk yo ak san tretman nan 6.8 ug / mL Nar pou 48 h. (B) distribisyon faz selilè nan 23M-NSCs trete ak Nar pou 48 h ak selil kontwòl. (C) Longè temwen relatif la nan 23M-NSCs ogmante siyifikativman ak tretman Nar, (D) Immunofluorescence Ki67 trete nan misk trete ak Nar pou 48 h, ak etikèt nikleyè DAPI, (E) Quantifikasyon nan (D), (F), jaden Reprezantan nan MAP2 ak GFAPimunofluoresans trete nan mnSC kiltirèl apre kontwòl ak tretman Nar. (G) Kalifikasyon nan (F). Done yo prezante kòm vle di± SD nan twa eksperyans endepandan. *p<>< 0.01,="" and="">< 0.0001="" compared="" with="" untreated="">

Tanpri klike la a pou konnen plis

Nar amelyore memwa ak koyisyon nan aje

Nivo mantal refize ak aje, ak tretman anti-aje ka amelyore nivo mantal [11, 28]. Pou verifye efè anti-aje yo nan Nar nan Vivo, nou enjekte 20 mg / kg Nar nan ki gen laj C57BL / 6 mis(12 mwa) nan venn nan ke. Tès MWM a te itilize pou egzamine memwa espasyal ak mantal nan mis la.mikwonize fraksyon flavonoid 1000 mgPlis pase 5 jou nan fòmasyon repete, tan an pran pou Nar-trete mis aje jwenn platfòm la piti piti diminye konpare ak gwoup la kontwòl (Figi 4A). Rezilta tès yo revele ke tan an te pran premye rive nan platfòm la te redwi (Figi 4B), pandan y ap tan an te pase nan zòn nan platfòm te ogmante (Figi 4C). Anplis de sa, Nar-trete mis aje yo te obsève nan zòn nan platfòm nan yon frekans ki pi wo pase gwoup la kontwòl (Figi 4D). Ansanm, rezilta sa yo sijere ke Nar ka amelyore memwa espasyal ak kapasite mantal nan laj.

RNA sekans analiz de Nar-trete san soti nan laj aje

Pou mennen ankèt sou mekanis anti-aje yo, nou analize pwofil la ekspresyon jenetik nan Nar-trete san soti nan aje lè l sèvi avèk RNA-seq). Rezilta yo devwale 1,961 diferans eksprime jèn (DEG). Anjeneral, Nar downregulated ekspresyon jenere, epi sèlman yon ti kantite jèn yo te moute-reglemante konpare ak gwoup la kontwòl ki pa trete (Figi 5A, 5B). Anplis de sa, chemen siyal enpòtan ki gen rapò ak aje yo te degregle, espesyalman sa yo ki nan chemen an siyal TNF (Figi 5C).oteflavonoidRezilta sa yo vle di ke Nar afekte chemen siyal TNF la, konsa pwofondman enfliyanse fonksyon an nan TNF-a, ki enplike nan andikap ki gen rapò ak mantal [29,30]. Se poutèt sa, nou egzamine nivo TNF-α nan plasma a nan mitan. Rezilta ki soti nan d immunosorbent assays (ELISA) enzyme-lye

Figi 4. Naringenin (Nar) amelyore memwa ak kapasite aprantisaj nan aje. (A) Latansi a chape nan mitan nar-trete te pi kout konpare ak gwoup kontwòl la. (B) Tan pran premye rive nan platfòm la te pi kout nan Nar-trete mis pase nan gwoup la kontwòl. (C) Dire tan pase nan zòn nan platfòm. (D) Frekans pou yo te obsève nan zòn nan platfòm pou Nar-trete mis konpare ak gwoup la kontwòl. Done yo prezante kòm vle di ±SD nan twa eksperyans endepandan.*P<>< 0.01,=""><0.0001 compared="" with="" the="" control="" group.“n”="" indicates="" the="" number="" of="" animals="" used="" for="" each="" experimental="" group.="" revealed="" that="" nar="" treatment="" led="" to="" the="" downregulation="" of="" plasma="" tnf-a="" levels="" (figure="" 5d).="" we="" also="" examined="" pl6ink4agene="" expression="" in="" the="" hippocampus="" of="" mice="" and="" demonstrated="" that="" nar="" treatment="" downregulates="" pl6ink4amrna="" expression(figure="">

Cistanche ka anti-aje

DISKISYON

Aje ki asosye ak yon risk ogmante nan bès mantal kòm byen ke yon pèt nan aprantisaj ak kapasite memwa [22,23]. Pèt neral ak nerojèn ki gen pwoblèm yo se pre ki gen rapò ak laj ki asosye ak malfonksyònman nan sèvo [11-13]. Se konsa, ogmante kantite neurones ak amelyore nerojèn yo enpòtan pou tretman anti-aje. R. Meyer, yon plant ki rich nan flavonoid ak lòt sibstans byo-aktif [1, 3-6], gen anpil fonksyon ki poko dekri. Nan etid la kounye a, R. Meyer antoure pwopagasyon pwopagasyon NSC ak ogmante fòmasyon an nan neurosfè ak mòfoloji inifòm. R. Meyer tretman antoureursin tou amelyore fenomèn selilè a, ak diminye nivo nan ROS ak aje ki gen rapò ak P16nk4 ekspresyon jenere, ogmante faz sentèz ADN nan, ak longè temwen.plirizyen vitamin cAnplis, iminofliyans tach revele ke R Meyer antoure anthocyanins ankouraje fòmasyon nan ewonn. Rezilta sa yo sijere ke R. Meyer antocyanins gen efè anti-aje sou mNSC, epi yo ka tou dirèkteman ankouraje fòmasyon an nan ewonn nan vitro. Anplis de sa, bès mantal se prèske ki gen rapò ak aje [22, 23]. Rezilta MWM nou yo demontre ke administrasyon intragastrik nan R. Meyer antocyanins amelyore memwa espasyal ak kapasite aprantisaj nan aje, epi tou li ogmante

Figi 5. Faktè Necrosis Timè (TNF)- yon wòl esansyèl nan nakarenin (Naringenin (Naringenin)-medyatè efè anti-aje yo. (A) Rezime ekspresyon jèn nan san sourit, jan RNA-seq detèmine. (B) Chalè ki montre diferan jenetik (DEGS) nan san ant kontwòl ak mis Nar-trete. DEG yo te idantifye pa yon chanjman pliye nan >2.0 oswa<0.5. (c)bar="" graph="" showing="" the="" major="" correlated="" signaling="" pathways.="" (d)="" heatmap="" showing="" degs="" in="" the="" tnf="" signaling="" pathway="" (e)="" plasma="" tnf-a="" levels="" determined="" by="" enzyme-linked="" immunosorbent="" assay.="" (e)="" p16hka="" gene="" expression="" levels,="" as="" determined="" by="" qrt-pcr.="" data="" are="" presented="" as="" the="" mean="" ±="" sd="" of="" three="" independent=""><><><0.0001 compared="" with="" the="" control="" group.="" nsc="" and="" neuronal="" numbers="" in="" the="" hippocampus="" of="" aging="" mice.="" these="" results="" suggest="" that="" r.="" meyer="" anthocyanins="" may="" enhance="" cognitive="" function="" by="" increasing="" nsc="" proliferation="" and="">

Itilize nan analiz metabolik pou mennen ankèt sou konpozisyon espesifik nan R. Meyer antocyanins revele ke Nar ka yon metabolite enpòtan. Nar te deja rapòte bay sans selil miocardial [31], amelyore kapasite metabolik nan tras entesten an [32], ak fè egzèsis anti-enflamatwa [33]ak anti-kansè [34] efè. Sepandan, efè Nar sou NSC pandan aje yo rete enkoni. Pou eksplore efè anti-aje yo nan R. Meyer antoure, nou fè plis etid lè l sèvi avèk Nar. Tretman ak 6.8 ug / mL Nar ogmante vizibilite selil, redwi P16ink4a ekspresyon jenere, longè telomeres, ak ankouraje diferans NSC nan ewonn nan vitro. Pou plis evalye efè Nar sou pwopagasyon selil, nou te fè etid iminofilyab. Rezilta yo endike ke tretman Nar ogmante tou de kantite selil Ki67-pozitif ak pwopòsyon de selil MAP2-pozitif, sijere ke Nar ka ankouraje nerojèn. Anplis de sa, efè Nar sou aprantisaj ak memwa yo te evalye tou nan mitan aje. Rezilta tès MWM yo toujou demontre ke tretman Nar amelyore kwit espasyal nan aje. Enteresan, analiz RNA-seq revele ke Nar ka afekte sansasyon atravè chemen siyal TNF la, espesyalman pa degre TNF-yon ekspresyon nan san an nan mitan aje. ELISA atake tou ke tretman Nar redwi plasma TNF-yon nivo konpare ak kontwòl aje. TNF-a se yon faktè kle nan chemen an siyal TNF epi li se pre relasyon ak aje mantal. Fonksyon li yo gen ladan pwomosyon chanjman patolojik nan synapses ipokanp [29] ak anpèchman nan pwopagasyon selil precurseur [35]. Chanje nivo TNF yo asosye ak andikap mantal nan depresyon, eskizofreni, maladi bipolè, ak maladi Alzaymè a [30,36,37]. Plis espesyalman, TNF-a se moute nan pasyan ki gen maladi Alzaymè a [38].

An rezime, etid nou an demontre ke R. Meyer antocyanins amelyore efè yo nan ki gen laj nan NSCs atravè Nar, ki degrese TNF-yon nivo nan vivo ak amelyore koyisyon nan aje. Kolektivman, rezilta nou yo bay yon estrateji roman pou devlopman nan tretman klinik, ki vize a pi gwo reyalizasyon nan valè medsin nan R.Meyer anthocyanins.

materyèl ak metòd

Bèt eksperimantal

Etid sa a te apwouve pa Komite Swen Animal Tongji ak fèt an akò ak direktiv enstitisyonèl yo. R. Meyer antouresin yo te administre intragastrically pou 2 mwa a 12-mwa konsève sou C57BL / 6 background. Nar te enjekte nan venn kado a pou 1 mwa a 12 mwa konsève sou C57BL / 6 background. Mis kontwòl yo te bay menm volim nan saline fosfat-afriken (PBS).

Preparasyon nan R. Meyer antoloji ak Nar

R. Meyer fwi (500 g)te omojèn lè l sèvi avèk yon omojèn tisi ak sispann nan 1 L methanol ki gen 0.1%hvdroloric asid. Ekstraksyon ultrason te fèt twa fwa pou 30 min nan tanperati chanm. Ekstrè yo te konbine, ak methanol la te konsantre anba presyon redwi jwenn ekstrè nan R Meyer. Ekstrè a te pirifye ak AB-8 macroporous résine pou ogmante kontni antocyanin.

Naringenin(C15H1205; MW:272.25; pite: ≥98%; HPLC klas) te achte nan Chengdu pouse Biyoteknoloji co Ltd.(Sichuan, Lachin) ak estoke nan 2 °C-8 °C nan yon anviwònman sèk san limyè. Konsantrasyon solisyon an stock te 100 mM nan sulfoxide dimetyl (DMSO). Konsantrasyon final DMSO a pa t 'depase 0.1%nan mwayen kilti a.

Neurosfè ak redaksyon diferan

NSC yo te sòti nan sourit la SVZ. Mice te sakrifye apre anestezi ak SVZ a te ak anpil atansyon diskite ak diskite nan selil sèl ak 0.4 U / mL doulè (Imogen, Alexandria, VA, USA; Cat No: LS003126). NSC yo te plake nan 10 asyèt cm ki gen 10 mL NSC Basal Medyòm ak 10 ng / mL EGF (PeproTech, Cranbury, NJ, USA; Chat No: AF-100-15) ak 10 ng / ml FGF (PeproTech, Cranbury, NJ, USA; Chat No: AF-100-18B). Neurosfè yo te pasaje chak 5 jou. NSC soti nan frèch dissociated pasaj-2 nerosfè yo te grenn sou laminin (Gibco, Gaithersburg, MD, USA; Chat No: 23017015)ak poly-L-ornithine hydromide (Poly-L; Sigma Aldrich, St Louis, MO, USA; Chat Non: P3655)-kouvwi glise vè nan NSCBasalMedium san sipleman diferansyasyon. Selil diferansye yo te iminosterab pou Tu1 (beta-tubulin II; Thermo Pechè Syantifik, Waltham, MA, USA; Chat No: 480011), MAP2 (Thermo Fisher Syantifik, Cat No: MA5-12826), ak pwoteyin asid glisman (GFAP; Thermo Pechè Syantifik, Cat No. PA5-16291), ak Lè sa a, kontrepann ak 4'6-diamidino-2-fenomèn (DAPI; Thermo Pechè Syantifik, Cat No: D1306). Slides yo te egzamine lè l sèvi avèk yon Olympus BX53 mikwoskòp (Olympus, Madison, WI, USA). Quantifikasyon nan TuJ1- ak selil pozitif MAP2-pozitif te fèt pa konte selil ki make soti nan twa eksperyans endepandan. Analiz estatistik te fèt lè l sèvi avèk yon tès t-tès san patipri.

Atik sa a ekstrè nan www.aging-us.com AGING 2020, Vol. 12, No 17