Anti-Aging -Klotho Gene-aktive echafodaj ankouraje repons gerizon rajenisman blesi nan selil souch imen adipoz ki sòti

3. Diskisyon

Etid sa a te vize envestige enpak fonksyonèl yon anti-aje -Klotho jèn aktive echafodaj sou ADSCs imen pou aplikasyon pou geri blesi amelyore. An jeneral, nou te jwenn ke echafodaj ki aktive jèn yo ofri deklanchman kontwole kapasite rejeneratif ADSC yo jan sa montre nan Figi.5. Espesyalman, echafodaj ki aktive jèn yo te amelyore tij ADSC yo atravè aktivasyon faktè transkripsyon Oct-4. Echafodaj ki aktive jèn la te ankouraje tou deklanchman bonè nan jèn anti-fibroz TGF- 3, yon faktè enpòtan pou kontwole gerizon ak sikatris redwi. Anplis de sa, ADSCs aktive yo te kontwole tanporèman anjojenèz andotelyal ak sipòte gerizon fibroblast derm atravè siyal parakrin. Nan direksyon pou spirasyon, ADSC yo te kontwole tou deklanchman repons pro-fibrotik nan fibroblasts po yo. Pandan se tan, ADSC yo sou echafodaj ki aktive jèn yo efektivman rejenere manbràn nan sousòl po lè yo amelyore depo laminin ak kolagen IV. Repons sa a te asosye plis ak redwi mak ki asosye -SMA ekspresyon pwoteyin ak amelyore kalitatif elastin matris depo. Etid nou an kolektivman detèmine ke la -Klotho jèn-aktiveCistancheposede gwo potansyèl pougeri blesie te kapabterapi avanse ki baze sou selil souch pou aplikasyon pou gerizon rajenisman.

Figi 5. Yon chema enpak fonksyonèl nan echafodaj aktive jèn B-Klotho sou ADSC imen pou aplikasyon pou geri blesi. Konklizyon kle etid sa a se (1) amelyorasyon tanporè nan pluripotans selil souch ak repons anti-fibrotik, (2) amelyore kontwòl parakrin nan direksyon anjojenèz, ak renovasyon kolagen an pro-fibrotic nan fibroblasts po epi finalman, (3) ogmante spirasyon nan manbràn nan sousòl ak kontwòl sou sikatris ki asosye proteinsexpressionDotted liy pou matris elastin implique amelyore depo kalitatif.

Klike La Pou Konnen Kijan CistancheEfè gerizon blesi

Nan estrateji gerizon blesi, yo aplike terapi jèn ki baze sou plasmid pou amelyore repons selilè yo jiskaske reparasyon blesi a fini.37]. Echafodaj aktive jèn nou an montre tou ke terapetik la -Klotho jèn réglementé passagèrement sou 14 jou. Ekspresyon siyifikativman amelyore (170-pliye) nan -Klotho mRNA nan jou 3 ta ka atribiye a pwomotè imedyat-bonè CMV la ki se li te ye pou amelyore aktivasyon transcriptional transgene kode la.38]. Sepandan, nan MSC yo, CMV a ta ka sibi ADN methylation oswa deacetylation histon ki ka diminye ekspresyon transgene la.39]. Anplis, plasmid yo jeneralman se epizòm ki pa repwodui, sa ki limite transfè transjèn nan divize selil yo, epi ki lakòz yon bès nan ekspresyon transjèn yo sou tan.40]. Prezans makè eterokromatik ki soti nan sekans bakteri nanplasmid te kapab plis reprime ekspresyon transjèn [41], an jeneral kontribye nan yon ekspresyon jèn pasajè.

Youn nan avni yo pouswiv nan tretman an nan blesi difisil-a-geri se aplikasyon an nan echafodaj bioaktif selil-semans. Youn nan rezon se kapasite yo pou ankouraje reparasyon rapid blesi. Selil metabolik aktif nan grèf la sekrete faktè parakrin epi yo sibi diferansyasyon, òkestre evènman konplèks siyal yo nan anviwònman blesi a.42]. Selil souch yo, an patikilye, gen yon kapasite inik pou santi stimul ekstèn ak modile repons yo pou retabli omeyostazi.43]. Sepandan, selil souch yo pèdi tij yo lè yo elaji nan vitro pou jenere gwo nimewo selil pou grèf la. Etid nou an montre ke stemness la ka amelyore tanporèman lè l sèvi avèk yon echafodaj aktive jèn ki pote yon jèn anti-aje. -Klotho. Espesyalman, nou te note ke echafodaj ki aktive jèn anti-aje a amelyore ekspresyon jèn stemness Oct-4 nan ADSC yo. Oct-4 se youn nan faktè kle transkripsyon nan selil souch anbriyon yo epi li esansyèl pou devlopman anbriyon kontwole [44]. Nan ADSC yo, aktivasyon jèn Oct-4 la ka ankouraje pwopagasyon ak diferansyasyon potansyèl yo [45]. Kidonk, ekspresyon an ogmante nan Oct-4 ka fasilite diferansyasyon rapid nan ADSC yo sou echafodaj jèn yo aktive nan selil lame yo epi ede nan pwosesis gerizon an.

Lè nou te obsève deklanchman jèn Oct-4 nan ADSC yo, nou te evalye puisans anjyojenik ADSC yo. Angiogenesis enpòtan anpil pou entegrasyon efikas grèf la ak tisi lame a.46]. Selil nan grèf la deklanche anjyogenesis atravè sekresyon faktè parakrin. Angiogenesis se tou yon evènman enpòtan pou devlopman tisi granulasyon ak aktivite li diminye kòm tisi granulasyon an matirite.47]. Limitasyon pwograme aktivite anjyojenik sa a nan etap pita gerizon an esansyèl pou kontwole sikatris ak ipè granulasyon ki ka anpeche re-epitelizasyon.48]. Konklizyon nou an montre tou ke ADSC yo sou echafodaj ki aktive jèn yo ka amelyore pouse andotelyal epi kontwole kwasans yo atravè siyal parakrin. Anplis de sa, ogmantasyon enpòtan nan aktivite metabolik selil andothelial yo ak pouse an repons a jou 3 CM demontre potansyèl echafodaj ki aktive jèn ki chaje ak ADSC yo pou entegre ak tisi lame a rapidman. Anplis, itilizasyon selil souch CM se yon apwòch san selil ki souvan adopte pou amelyore kalite gerizon blesi.49]. Kòm yon limit, nou rekonèt ke granmoun selil andothelial po yo ta sèvi yon modèl selil pi bon pou etidye anjyogenesis; sepandan, kenbe konsistans ak etid anvan nou yo ak HUVEC yo te lajman aksepte kòm kandida selil "lò-estanda" la [50], nou te adopte tès anjyogenesis HUVECs.

Yon ogmantasyon nan aktivite renovasyon fibroblast se yon karakteristik jeneral nan spirasyon tisi granulasyon.51]. Pandan etap sa a, matris kolagen III yo piti piti ranplase pa fib kolagen I ki pi fò.51]. Fib kolagen an Lè sa a, ankouraje kontraksyon blesi [52], ak kontraksyon blesi se endispansab pou fèmen blesi konplè [53]. Sepandan, yon ogmantasyon agresif soutni nan depo kolagen I ka ogmante fòmasyon sikatris.54]. Kontwole sikatris enpòtan paske li ka anpeche devlopman lòt anèks po tankou folikulèr cheve, glann sebase, ak glann swe, pou egzanp, nan blesi boule.54]. Konklizyon nou an demontre ke CM ki gen laj (jou 14) ki soti nan gwoup echafodaj aktive jèn yo te kapab kontwole ekspresyon kolagen an pro-fibrotic I nan fibroblasts po granmoun. Efè kontwole sa a sou fibroblasts yo te fèt san plis enfliyans sou migrasyon fifibroblast la oswa ekspresyon kolagen III anti-fibrotik yo anrapò ak gwoup echafodaj san jèn yo. Se poutèt sa, nou sijere ke echafodaj aktive jèn ADSCs-chaje ka ofri pi bon kontwòl nan limite sikatris nan vivo atravè ekspresyon kolagen mwen kontwole. Li et al., yo te montre tou ke ADSCs CM yo ka redwi anpil ekspresyon kolagen an I nan fibroblasts ki sòti nan mak ipètrofik.55]. Yon lòt etid pa Wang et al., te demontre yon rediksyon menm jan an nan ekspresyon kolagen an I nan fibroblasts keloid ki sòti [1].56], kolektivman demontre potansyèl anti-fibrotik nan CM ADSC yo.

Youn nan konklizyon yo enpòtan ke nou te note ak aplikasyon an nan -Klotho jèn aktive echafodaj se rejenerasyon ranfòse nan manbràn sousòl la nan ADSC yo. Rejenerasyon manbràn sousòl la esansyèl pou spirasyon veso sangen yo ak re-epitelizasyon konplè.57,58]. Sa ki enpòtan, tandans nan ki pwoteyin yo laminin(2.1-pliye) ak kolagen IV (8.8-pliye) yo regilasyon plis endike ogmante spirasyon manbràn sousòl la nan gwoup echafodaj ki aktive jèn yo [59]. Anplis aji kòm yon faktè anti-aje [60], beta klotho fonksyon yo amelyore sansiblite nan faktè kwasans fibroblast (FGF) pa reseptè FGF [61]. Anplis de sa, yo te jwenn yon ogmantasyon nan siyal FGF ankouraje spirasyon manbràn sousòl atravè depo laminin ak kolagen IV.62]. Se poutèt sa, konsidere wòl beta klotho a kòm yon ko-reseptè nan FGF, ogmante spirasyon nan sousòl nan gwoup echafodaj jèn yo aktive potansyèlman medyatè pa yon ogmantasyon nan siyal FGF ADSC yo.

Eleman nan manbràn sousòl konsiderableman upregulated nan gwoup la echafodaj jèn aktive se pwoteyin nan kolagen IV. Pwoteyin kolagen IV la reprezante 50 pousan nan tout manbràn sousòl.63] epi li bay estabilite estriktirèl manbràn sousòl la [59]. Sepandan, aje redwi anpil ekspresyon kolagen IV nan junction po-epiderm la.58,64] ak mank de kolagen IV ka ankouraje patojèn mak [65]. Kidonk, rezilta nou yo sijere ke ogmante puisans rejenerasyon manbràn sousòl nan echafodaj ki aktive jèn ADSCs-chaje ka ede anpil nan gerizon amelyore nan pasyan ki gen laj. Lòt etid yo te montre tou ke ECM ki sòti nan tisi adipoz yo posede potansyèl terapetik fòmidab pou reparasyon po.66]. Anplis de sa, grèf tisi-enjenieri ki rich nan laminin ak kolagen IV se tou nan enterè pou reparasyon epithelium respiratwa.67]. 

Anplis de kontwòl pro-fibrotik nan direksyon pou fibroblast yo, etid nou an montre plis ke ADSC yo nan echafodaj aktive jèn yo eksprime tou yon 2-pliye ekspresyon pi ba nan pwoteyin ki asosye ak mak. -SMA [68]. Malgre ke nou pa t 'evalye enpak li nan vivo, rediksyon an nan lokal yo -SMA ekspresyon enpòtan anpil pou amelyore gerizon kalitatif [69]. Sèvi ak ajan fibrotik tankou bleomicin [70] ta ka yon fason yo evalye pi byen pwopriyete yo anti-fibrotic nan konstriksyon echafodaj ADSCs/jene aktive nan vitro; sepandan, konsantre nou an se te etabli potansyèl la terapetik pwovizwa nan konstriksyon an.

Yon lòt endikatè ke echafodaj ki aktive jèn ADSCs-chaje ka amelyore gerizon kalitatif se depo matris elastin fibre olye pou yo sekresyon patch extracellular nan gwoup echafodaj san jèn. Depozisyon elastin se youn nan aktivite prensipal yo ki mennen nan gerizon blesi fetis la.71]. Sepandan, po granmoun manke depozisyon elastin [71]. Kòm sa yo, tropoelastin, yon précurseur de elastin, souvan enkòpore nan echafodaj biomateryèl pou kontwole sikatris nan geri blesi.72]. Ansanm, rezilta nou yo vle di ke ADSC yo/ -Klotho jèn aktive echafodaj konstwi ka bay yon gwo repons anti-fibrotic nan vivo.

4. Materyèl ak Metòd

4.1. Preparasyon Echafodaj Gene-Aktive

Echafodaj ki aktive jèn yo te devlope lè l sèvi avèk yon pwosesis etap 2-. Premyèman, echafodaj solid ki mouye kolagen-chondroitin silfat yo te fabrike pa yon sispansyon friz-seche nan kolagen an tandon bovin tip 1 ak kondroitin -6-sulfat ki sòti nan Cartilage reken (Sigma, UK). Yo te itilize yon pwosesis sichaj/friz optimize ki fèt pou kreye porositë inifòm pou pwodui echafodaj yo.73]. Dapre pwotokòl pibliye nou an [74], echafodaj yo friz-seche yo te Lè sa a, dehydrothermally (DHT) trete nan 105.◦C anba vakyòm pou esterilizasyon ak amelyorasyon mekanik. Lè sa a, echafodaj esterilize yo te relye chimikman ak 14 mM N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride ak 5.5 mM N-Hydroxysuccinimide (2.5 molè rapò EDC/NHS) (Sigma, UK) solisyon pou plis amelyore estabilite mekanik la [75]. Lè sa a, echafodaj yo kwaze yo te lave ak PBS (Gibco, Paisley, UK) pou retire pwodwi chimik rezidyèl yo. Yon fwa echafodaj yo te pare, yo te prepare polyplexes nan yon rapò N/P10 (azòt ak rapò fosfat) lè yo melanje yon volim predetèmine nan solisyon polyethyleneimine branch (PEI) ak ADN plasmid (pDNA) kodaj pou jèn beta-Klotho imen an ( -Klotho), jwenn nan SinoBiological, Beijing, Lachin. Yo te chwazi rapò N/P10 ki baze sou etid anvan nou yo ki te jwenn ke polyplexes fòmile nan yon rapò N/P 10 te ka efektivman fòme ti, ki estab nanopartikul kasyonik ak plasmid ki gwo tankou GLuc (5.76 kb).21,23]. Anvan yo itilize, plasmid yo te dilye nan dlo san endotoksin pou jwenn yon konsantrasyon k ap travaynan 0.5µg/µL. Plasmid la gen cytomegalovirus imedya-bonè amelyore imen(CMV3) pwomotè ankouraje wo nivo ekspresyon ki estab ak pasajè nan kode lajèn nan selil mamifè yo.

Melanj plasmid la/PEI te pèmèt yo rezoud pou 30 minit pou tèt yo rasanble nan polyplexnanopartikul. Lè sa a, nanopartikil yo te tranpe-chaje sou echafodaj yo pa pipetevolim egal solisyon polyplex pou chak bò echafodaj la. Yon total de 2µg pDNA teitilize pou chak echafodaj pou devlope echafodaj aktive jèn yo.

4.2. Selil Seeding sou -Klotho Gene-aktive echafodaj

ADSC imen (iXCells Biotechnologies, San Diego, CA, USA) yo te elaji nan pasaj 4 nan mwayen kwasans ADSCs (Cat No. MD0003) konpayi an te founi. Yon total de 5× 105 ADSCs (2.5× 105 pou chak bò) yo te simen pou chak echafodaj san jèn (kontwòl,n = 3) oswa echafodaj aktive jèn (tès,n = 3). Apre yo fin kite selil yo rezoud pou apeprè 20 minit, yo te ajoute 2 mL nan medya transfeksyon OptiMEM (Gibco, UK), epi echafodaj selilyize yo te enkube nan 37.◦C pou 24 h. Apre enkubasyon 24 èdtan an, yo te transfere echafodaj selilize san jèn oswa aktive aktive nan nouvo 12-plak byen, epi yo te manje ak 2 mL mwayen kwasans ADSC yo. Lè sa a, chanjman medya yo te fèt chak 3-4 jou jiska jou 14 nan kolekte 1 mL nan medya yo kondisyone (CM) epi ranplase li ak volim egal nan medya fre. Tout CM yo te estoke nan−80 ◦C jiskaske analiz.

4.3. qRT-PCR analiz pou detèmine -Klotho Gene Overexpression ak Aktivasyon nan jèn fonksyonèl

Yo nan lòd yo detèmine règleman an pasajè nan jèn yo sib, selil yo te rekòlte nan jou 3 (bonè) ak 14 (an reta) apre simen sou echafodaj yo san jèn oswa aktive jèn yo. Selil yo te premye lysed lè l sèvi avèk Qiazol lysis reyaktif la (Qiagen, Germantown, MD, USA). Lè sa a, yo te ajoute klowofòn pou separe lysate selil la nan faz pwoteyin, ADN ak RNA. Sèvi ak RNeasy Twous la (Qiagen, Manchester, UK), yo te ekstrè RNA a, epi yo te detèmine bon jan kalite ak kantite yo lè l sèvi avèk yon lektè plak Multiskan Go (Thermo Scientific, UK) ak absorpsyon an mete nan 260 nm. Lè sa a, yo te retire ADN jenomik nan melanje RNA a ak yon tanpon jenomik ADN (Qiagen, Manchester, UK) ak chofaj a 42.◦C pou 2 min. Imedyatman, transkripsyon ranvèse te fèt pou prepare cDNA la. Kopi nan cDNA pou chak replike (n = 3) yo te chaje nan plak qRT-PCR yo epi apre sa yo te fè tès la lè l sèvi avèk primè yo ki nan Tablo a.1. Chanjman pliye nan ekspresyon mRNA an parapò ak selil yo sou echafodaj san jèn yo te kalkile lè l sèvi avèk 2 a.−∆∆CTmetòd soti nan mwayèn twa repitasyon pou chak gwoup. GAPDH imen (Hs_GAPDH_1_SG, Cat. No. QT00079247) te itilize kòm jèn nan antretyen.

4.4. Analiz biyoaktivite nan faktè sekrete soti nan ADSC yo sou -Klotho Gene-aktive echafodaj

4.4.1. Analiz Bioaktivite Pro-Angiogenic

4.4.2. Derm Fibroblasts Gerizon ak Matirite analiz

Apre tès anjyogenesis la, nou te envestige puisans CM a pou gerizon po lè nou te anplwaye yon tès grafouyen nan fibroblast imen granmoun (iXcells, Cat No. 10 HU-014). Pou etid sa a, nou espesyalman te chwazi CM ki gen laj soti nan jou 14 pou etidye enfliyans li sou fèmen fibroblast blesi pandan spirasyon. Yon total de 1× 104 selil/pi ki nan yon plak 96-byen yo te simen epi enkube lannwit lan nan mwayen kwasans fibroblast la. Nan denmen, yo te kreye yon blesi sou monokouch la lè yo grate orizontal yon pwent pipèt 200 uL atravè pi a. Lè sa a, monokouch la te rense ak PBS pou retire nenpòt debri ak manje ak CM la. Fèmti blesi yo te anrejistre ant 12-16 èdtan apre grafouyen an. Immunostaining te itilize pou etidye ekspresyon de pro-fibrotic Kolagen I (1:100, Novusbio, UK) Et anti-fibrotic Kolagen III (1:100, Novusbio, UK) nan fibroblasts yo. Fibroblast yo te counterstained ak rhodamine (1: 800, Abcam, UK) pou D F-aktin. Immunostaining te fèt jan sa dekri nan Seksyon4.5, ak eksepsyon de pwosesis tisi ak deparafinizasyon. Tou de HUVEC yo ak fibroblast yo te itilize nan pasaj 4.

4.5. Immunoflfluoresans Imaging nan Pwoteyin Matris Ekstraselilè

Apre 14 jou nan kilti, yo te rekòlte echafodaj selilize san jèn oswa aktive jèn yo pou deteksyon depo matris lè l sèvi avèk imunofluoresans. Pwosesis echantiyon yo te fèt jan sa dekri deja. Yon ti tan, yo te premye lave echafodaj yo ak PBS epi yo te fikse nan 10 pousan fòmalin tanpon net pou 20 min. Lè sa a, echantiyon fiks yo te trete lè l sèvi avèk pwotokòl la estanda pou deparafinizasyon. Lè sa a, blòk yo te koupe an 7-µm tranch epè ak kolekte sou glisad chaje. Lè sa a, seksyon yo te deparafinize lè l sèvi avèk xylene ki te swiv pa reyidratasyon nan seksyon an ak diminye gradyan nan etanòl. Apre sa, selil yo te pèmeabilize ak 0.2 pousan Tween®20 (Sigma-Aldrich, Frans) solisyon nan PBS pou 30 min (10 min lave× 3) ak bloke lè l sèvi avèk 10 pousan NGS (Normal Goat Serum, Invitrogen, Rockford, IL, USA) / 5 pousan BSA / 0.3 M Glycine (prepare nan solisyon pèmeabilize) pou 1 èdtan. Apre bloke, glisad yo te rense nan PBS epi apre yo te enkube nan 4◦C lannwit lan ak antikò yo vize pwoteyin matris ki nan lis nan Tablo a2. Nan denmen, glisad yo te rense nan PBS twa fwa pou 2-3 minit chak pou retire nenpòt antikò prensipal ki pa lye. Apre sa, yo te enkube glisad yo nan swa Alexa 488-konjige kabrit anti-sourit IgG (A32723, Invitrogen, UK) oswa Alexa 594-konjige kabrit anti-lapen IgG (A11012, Invitrogen, UK) nan 1: 800 dilution nan tanperati chanm pou 1 h nan fè nwa a. Etap rense a te fèt tankou anvan ak counterstained pou nwayo lè l sèvi avèk mwayen aliye a ak DAPI (ab104139, Abcam, UK). Lè sa a, yo te imajine glisad yo lè l sèvi avèk yon mikwoskòp fliyoresan (Olympus BX43, Japon) nan 20.× objektif. Echantiyon enkubasyon ak sèlman antikò segondè yo te itilize kòm kontwòl.

Kantifikasyon imaj

Imaj] lojisyèl (Image, NIH, MD, USA) te itilize pou detèmine semi-kantitativman kantite pwoteyin eksprime. Pou chak makè, yo te premye detèmine yon valè papòt konstan atravè imaj preliminè nan divès seksyon. Sèvi ak valè papòt mete nan dansite entegre (tache zòn x vle di valè gri) nan imaj yo te detèmine ak Lè sa a, nòmalize nan kantite selil (DAPI konte) bay yon dènye dansite fluoresans vle di pou chak selil. Yo te kalkile yon mwayèn nan 8-10 imaj o aza pou chak kopi ak yon minimòm de twa kopi pou chak gwoup. Lè sa a, mwayèn yo te jwenn nan twa replike/gwoup yo te itilize pou mezire ekspresyon relatif ant gwoup yo.

4.6. Analiz estatistik

Tout rezilta yo eksprime kòm mwayen plis devyasyon estanda. Anjeneral yo te itilize tès t ki pa pè, de keu pou kalkile siyifikasyon estatistik ant gwoup yo, kote p < 0.05 te konsidere kòm enpòtan

Etid sa a te montre ke aanti-aje -Klotho jèn aktive cistancheofri kontwole deklanchman kapasite rejenerasyon ADSC yo. Konklizyon prensipal yo nan etid sa a se (1)amelyorasyon pasajè nan pluripotans selil souch ak repons anti-fibrotik, (2)amelyore kontwòl parakrin nan direksyon anjojenèz, ak pro-fibrotic renovasyon kolagen annan fibroblasts po, epi finalman, (3)ogmante spirasyon manbràn sousòl laak kontwòl sou ekspresyon pwoteyin ki asosye ak mak yo. Konklizyon, rezilta sa yo sijereke ADSC yo-chaje -Klotho jèn aktive echafodaj ka posede gwo potansyèl yontrete yon pakèt blesi po.

resous, TOUT, FJO ak MBK; gerizon done, TOUT ak MBK; ekri — orijinal bouyon preparasyontion, TOUT; ekri—revizyon ak koreksyon, TOUT, FJO ak MBK; vizyalizasyon, TOUT; sipèvizyon,FJO ak MBK; administrasyon pwojè, MBK; akizisyon finansman, FJO ak MBK Tout otète li epi dakò ak vèsyon ki te pibliye maniskri a.

Konfli enterè:Otè yo deklare ke pa gen okenn konfli enterè ki egziste.

Referans

1. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB Inovasyon nan sistèm livrezon jèn ak faktè kwasans pou geri blesi dyabetik.J. Tissu Eng. Regen. Med.2018, 12, e296–e312. [CrossRef] [PubMed] 

2. Makrantonaki, E.; Wlaschek, M.; Scharffetter-Kochanek, K. Patojèn nan maladi geri blesi nan granmoun aje yo.JDDG J. Dtsch. Dermatol. Ges.2017, 15, 255–275. [CrossRef] [PubMed]

3. Ganguly, P.; El-Jawhari, JJ; Burska, AN; Ponchel, F.; Giannoudis, PV; Jones, EA analiz de aje in vivo nan mwèl zo imen selil stromal mesenchymal lè l sèvi avèk tès inite-fibroblast ki fòme koloni ak CD45lowCD271 plis fenotip la.Selil souch Int.2019, 2019, 5197983. [CrossRef] 

4. Westerweel, PE; Teraa, M.; Rafifii, S.; Jaspers, JE; Blan, IA; Hooper, AT; Verhaar, MC Enfimite mobilizasyon selil progenitor andothelial ak stroma mwèl zo disfonksyonèl nan dyabèt melitus.PLoS YONN2013, 8, e60357. [CrossRef] 

5. Murray, RZ; Lwès, ZE; Cowin, AJ; Farrugia, BL Devlopman ak itilizasyon biomateryèl kòm terapi geri blesi.Boule. Chòk2019, 

6. [CrossRef] [PubMed] 6. Ebrahimian, TG; Pouzoulet, F.; Squiban, C.; Buard, V.; André, M.; Kouzen, B.; Tamarat, R. Terapi selil ki baze sou selil stromal ki sòti nan tisi adipoz yo ankouraje gerizon blesi fizyolojik ak patolojik.Arterioscler. Tronc. Vasc. Biol.2009, 29, 503–510. [CrossRef] 

7. Wu, Y.; Chen, L.; Scott, PG; Tredget, EE Selil souch mezenchymal amelyore gerizon blesi atravè diferansyasyon ak anjojenèz.Selil souch2007, 25, 2648–2659. [CrossRef] [PubMed] 

8. Foubert, P.; Gonzalez, AD; Teodosescu, S.; Berard, F.; Doyle-Eisele, M.; Yekkala, K.; Fraser, JK Terapi selil rejeneratif ki sòti adipoz pou geri blesi boule: yon konparezon de metòd livrezon.Adv. Swen blesi2016, 5, 288–298. [CrossRef] [PubMed]

9. Assi, R.; Foster, TR; Li, H.; Stamati, K.; Bai, H.; Huang, Y.; Dardik, A. Akouchman de selil souch mesenchymal nan echafodaj biomimetic Enjenieri ankouraje gerizon maladi ilsè dyabetik.Regen. Med.2016, 11, 245–260. [CrossRef] [PubMed] 

10. Jiang, Y.; Chen, B.; Liu, Y.; Zhufu, Z.; Yan, X.; Hou, X.; Tan, Q. Efè echafodaj kolagen an ak selil fraksyon vaskilè stromal ki sòti adipoz sou geri blesi dyabetik: Yon etid nan yon modèl porsin dyabetik.Tissu Eng. Regen. Med.2013, 10, 192–199. [CrossRef] 

11. Falanga, V.; Sabolinski, M. Yon konstwi po k ap viv bikouch (APLIGRAF®) akselere fèmti konplè nan maladi ilsè venn ki difisil pou geri.Reparasyon blesi Regen.1999, 7, 201–207. [CrossRef] 12. Hart, CE; Loewen-Rodriguez, A.; Lessem, J. Dermagraft: Itilize nan tretman blesi kwonik.Adv. Swen blesi.2012, 1, 138–141. [CrossRef] [PubMed] 13. Dinh, TL; Veves, A. Efikasite Apligraf nan tretman maladi ilsè pye dyabetik.Plast. Rekonstr. Surg.2006, 117, 152S–157S. [CrossRef] [PubMed]

14. Eaglstein, WH; Falanga, V. Jeni tisi ak devlopman Apligraf®, yon ekivalan po moun.Clin. La.1997, 19, 894–905. [CrossRef] 

15. Jiang, T.; Xu, G.; Wang, Q.; Yang, L.; Zheng, L.; Zhao, J.; Zhang, X. In vitro, ekspansyon andikape stemness de byen bonè pasaj mesenchymal souches cellules pou tretman Cartilage défauts.Lanmò selil Dis2017, 8, e2851. [CrossRef] [PubMed]

16. Liu, J.; Ding, Y.; Liu, Z.; Liang, X. Senesans nan Selil Stem Mesenchymal: Chanjman Fonksyonèl, Mekanis Molekilè, ak Estrateji rajenisman.Devan. selil Dev. Biol.2020, 8, 258. [CrossRef] [PubMed] 

17. Wang, W.; Xu, X.; Li, Z.; Lendlein, A.; Ma, N. Jeni jenetik selil souch mesenchymal pa livrezon jèn ki pa viral.Clin. Hemorheol. Microcirc.2014, 58, 19–48. [CrossRef] 

18. Deveza, L.; Choi, J.; Lee, J.; Huang, N.; Cooke, J.; Yang, F. Polymer-DNA Nanoparticle-induced CXCR4 Overexpression Amelyore Stem Cell Engraftment ak Tisi Rejenerasyon nan yon Modèl Ischemi Hindlimb sourit.Theranostics2016, 6, 1176–1189. [CrossRef] [PubMed] 

19. O'Brien, FJ Biomaterials & echafodaj pou jeni tisi.Mater. Jodi a2011, 14, 88–95. 20. Yannas, I.; Tzeranis, D.; Harley, B.; Se konsa, P. Byolojik aktif kolagen ki baze sou echafodaj: Avans nan pwosesis ak karakterizasyon.Philos. Trans. R. Soc. Yon Matematik. Phys. Eng. Sci.2010, 368, 2123–2139. [CrossRef] 

21. Laiva, AL; Raftery, RM; Keogh, MB; O'Brien, FJ Enpak pro-angiogenic SDF-1 echafodaj ki baze sou kolagen an aktive jèn nan anjojenèz souch selil yo.Ent. J. Pharm.2018, 544, 372–379. [CrossRef] [PubMed] 

22. Lackington, WA; Raftery, RM; O'Brien, FJ Efikasite in vitro nan yon kondit gid nè ki aktive jèn ki enkòpore nanopartikil PEI-pDNA ki pa viral ki pote jèn ki kode pou NGF, GDNF ak c-Jun.Acta Biomater.2018, 75, 115–128. [CrossRef] 

23. Tierney, EG; Duffy, GP; Hibbitts, AJ; Cryan, SA; O'Brien, FJ Devlopman matris ki pa viral aktive jèn pou rejenerasyon zo lè l sèvi avèk polyethyleneimine (PEI) ak echafodaj ki baze sou kolagen an.J. Kontwòl. Lage2012, 158, 304–311. [CrossRef] [PubMed] 24. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB SDF-1 echafodaj kolagen an aktive jèn kondwi diferansyasyon fonksyonèl nan selil Schwann imen pou aplikasyon pou geri blesi.Biotechnol. Bioeng.2021, 118, 725–736. [CrossRef] [PubMed]