Antioksidan, anti-aje ak efè pwoteksyon ògàn nan total saponin soti nan Cistanche

Konklizyon: TSAT se yon bon jan kalite pwodwi natirèl ak pwopriyete antioksidan ak anti-aje ki ka soulaje domaj D-gal-induit aje nan rat.

Mo kle:Cistanche total saponin, D-galaktoz, antioksidan,anti-aje

Klike La a Pou Jwenn Sipleman Cistanche Pou Anti-aje

Entwodiksyon

Depi 21yèm syèk la, ak tandans mondyal la nan aje ak amelyorasyon nan estanda k ap viv atravè mond lan, pwoblèm sante ki te koze pa aje ak maladi ki gen rapò ak aje yo te vin de pli zan pli enpòtan.1 Se poutèt sa, ki jan yo kenbe sante a nan granmoun aje ak retade la. ensidan aje ak maladi ki gen rapò ak aje vin tounen yon sijè rechèch popilè. Aje se yon pwosesis dejeneratif fizyolojik irevokabl ak konplèks ki fèt nan tout pati nan kò a, ki mennen nan deteryorasyon estriktirèl ak fonksyonèl nan tisi ak ògàn yo ak ogmante risk pou yo divès maladi kwonik, tankou tansyon wo, dyabèt, maladi neurodegenerative, ak melanoz po. .2 Plizyè rapò te montre ke teyori radikal gratis aje a, youn nan teyori ki pi popilè yo, ka eksplike domaj nan òganis la ki te koze pa pwosesis aje a.3 Pandan metabolis aerobic, espès oksijèn reyaktif (ROS) yo pwodui nan selil yo, ki gen ladan oksijèn singlet (1 O2), anyon superoksid (•O2-), radikal idroksil (HO•), ak oksijene idwojèn (H2O2).4,5 Yon fwa radikal sa yo gratis, ki gen ladan elektwon ki pa pè ak trè reyaktif, yo pwodwi an plis, yo dirèkteman mennen nan estrès oksidatif ak repons pro-enflamatwa, ki te swiv pa dezekilib redox, ki mennen nan peroksidasyon pwoteyin ak lipid, osi byen ke mitokondriyo ak domaj ADN, finalman mennen nan fonksyon selil ak tisi chanje ak kondisyon patolojik akselere aje. .6,7 Enteresan, sistèm natirèl antioksidan andojèn egziste nan sistèm imen an / mamifè, tankou sa yo ki enplike SOD, CAT ak GSH-Px, osi byen ke antioksidan ki pa anzimatik tankou asid ascorbic ak karotenoid, ki fèt pou kenbe yon balans apwopriye ant radikal gratis. ak antioksidan.8,9 Men, sistèm defans antioksidan an pa ase pou anpeche konplètman domaj oksidatif ki te koze pa depase radikal gratis, ak sipleman ak antioksidan ka omwen diminye limit la nan aje ak domaj oksidatif ki gen rapò.10 Konpare ak antioksidan natirèl, sentetik. antioksidan (egzanp, BHT ak BHA) yo te montre yo lakòz dezòd andokrin, maladi repwodiktif e menm kanserojèn nan itilizasyon alontèm.11,12 Se poutèt sa, rechèch la pou natirèl, san danje epi efikas gratis radikal gratis se yon gwo enpòtans pou sante moun. pwoteksyon.

Cistanche se yon espès plant ki gen menm jan ak Aralia elata (Miq.) Seem.13 Li distribye lajman nan mòn Qinba nan lwès Lachin e li se yon plant medsin ak manjab. Ekstrè jape rasin Cistanche yo te itilize depi lontan nan Lachin kòm yon medikaman popilè pou tretman dyabèt, ak prensipal engredyan aktif li se triterpene saponin.14 Li te montre yo gen antioksidan, antihyperglycaemic ak antihyperlipidaemic efè.14-16 Anpil etid yo te montre. ke saponin triterpene tankou asiaticoside B, madecassoside ak parkside A ka reyaji ak radikal gratis epi anpeche plis devlopman nan reyaksyon chèn radikal gratis, kidonk egzèse efè anti-oksidan. saponin, osi byen ke bon kapasite antioksidan kont peroksidasyon lipid nan mikrosòm fwa rat, e li te montre yo gen efè antioksidan siperyè ginseng, Schisandra ak lòt saponin.14,15 Anplis de sa, TSAT tou atenye domaj nan fwa D-gal-induit nan aje. rat atravè efè antioksidan li yo.19 Plis etid relasyon estrikti-efè sijere ke diferans estriktirèl yo tankou kategori a ak sekans nan chèn oligosakarid nan C-3 nan saponin sa yo jwe yon wòl enpòtan an tèm de dyabèt melitus ki gen rapò ak. aktivite antioksidan ak antiglikasyon.20

D-gal se yon pwodiktè aje eksperimantal souvan itilize. Ogmante kantite prèv sijere ke fenotip ki gen rapò ak aje tankou twòp fòmasyon radikal gratis, malfonksyònman mantal, diminye repons iminitè ak blesi nan ògàn yo ka obsève anba eksitasyon D-gal alontèm.21 Konpòtman, administrasyon D-gal mennen nan defisi nan espasyal. ak memwa rekonesans nan rat, jan yo demontre pa move pèfòmans an tèm de difikilte pou jwenn platfòm sib ak yon kantite redui fwa travèse platfòm sib nan yon eksperyans labirent dlo Morris.22 Se poutèt sa, yo te itilize eksitasyon D-gal kwonik pou etidye aje òganis. ak pèt memwa ki gen rapò ak aje, move balans redox ak aksidan ògàn.

Sou baz etid anvan yo sou aktivite byolojik TSAT, gen rezon pou kwè ke plant medsin ak dyetetik sa a gen potansyèl konsiderab pou aplikasyon nan domèn anti-aje. Sepandan, gen yon sèl etid sou scavenging nan vitro nan radikal gratis pa ekstrè saponin triterpenoid sa a, ak lòt karakterizasyon fizyolojik ki enpòtan nan scavenging radikal gratis yo manke. Anplis de sa, konesans sou efè pwoteksyon TSAT kont pèt memwa, move balans redox ak blesi ògàn nan yon modèl D-gal-pwovoke aje subegi limite. Se poutèt sa, etid sa a konsolide pwopriyete antioksidan TSAT nan vitro lè yo retire DPPH, ABTS, HO•, •O2- ak anpeche aktivite tirozinaz. Anplis, eksperyans konpòtman, mezi paramèt estrès oksidatif, ak kondisyon istopatolojik nan ògàn pi gwo nan rat yo te evalye pou bay plis enfòmasyon sou kapasite TSAT pou amelyore D-gal-induit subegi oksidatif ak aje domaj, konsolide pwopriyete antisipe famasi li yo.

Materyèl ak Metòd

Jape rasin Cistanche te ranmase nan mòn Qinba, pwovens Shaanxi, Lachin, epi doktè Jitao Wang (Shaanxi University of Chinese Medicine) te idantifye botanikman. Yon echantiyon bon (SUCM, No 20201003) te depoze nan èrbyòm nan Shaanxi University of Chinese Medicine. Tarasaponin IV

DPPH (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), ABTS (Maclin Biochemical Co., Ltd, Shanghai, Lachin), tirozinaz djondjon (Yuan Ye Biotechnology Co., Ltd, Shanghai, Lachin), L{{1} }, 4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) ak D-gal (Yuan Ye Biotechnology Co, Ltd, Shanghai, Lachin) yo te achte. Anion superoksid (nimewo atik: A052-1-1), radikal gratis idwoksil (nimewo atik: A018-1-1), BCA (nimewo atik: A045-4-2), SOD (nimewo atik: A{{ 8}}), GSH-Px (nimewo atik: A005-1-1), CAT (nimewo atik: A007-1-1), MDA (nimewo atik: A003-1-2), T-AOC ( Nimewo atik: A015-2-1), AST (nimewo atik: C010-2-1) ak ALT (nimewo atik: C009-2-1) yo te jwenn twous tès nan Nanjing JianCheng Bioengineering Institute (Nanjing, Lachin) . Tout pwodwi chimik yo ak lòt reyaktif yo te itilize yo te klas analyse.

Jape rasin cistanche a te lave ak dlo distile doub, seche ak kraze nan 60 degre. Anvan eksperyans lan, yo te mete poud lan nan yon kote ki fre ak sèk. Poud lan (3 kg) te ekstrè ak 70 pousan etanòl pou twa fwa anba rflu. Solisyon yo te konbine epi supernatant la te jwenn pa santrifujasyon gwo vitès ak filtraj. Sipènatant la te pirifye pa chaje nan yon kolòn résine makropore HPD300 ak Lè sa a, eluye ak etanòl 70 pousan. Solisyon ki te elite ak 70 pousan etanòl te evapore pou bay yon rezidi (356 g) apre yo fin retire sòlvan nan vacuo. Sede TSAT la te 11.87 pousan (w/w) epi yo te konsève nan yon frijidè pou plis itilize.

kolòn grafik (4.6 ID×250 mm). Faz mobil la se acetonitrile (sòlvan A) ak 0.1 pousan asid fosfò solisyon akeuz (V/V) (sòlvan B). Pwogram gradyan an te jan sa a: 0–10 min, 5–20 pousan A; 10–25 min 20–28 pousan A; 25-35 min, 28-33 pousan A; 35-45 min, 33-38 pousan A; 45–55 min, 38–46 pousan A; 55-60 min, 46-60 pousan A; 60-70 min. 60–75 pousan A; 70-80 min, 75-45 pousan A; 80-90 min, 45-5 pousan A. Kondisyon fonksyònman enstriman an te yon tanperati 30 degre ak yon pousantaj koule 0.8 mL/min. Volim piki estanda ak echantiyon yo te 10 μL. Longèdonn deteksyon an se 203 nm. Anvan piki, tout echantiyon yo te pase nan yon filtè 0.22 μm. Apre matche ak estanda a, pik la detèmine pa tan an retansyon. Yo te itilize koub kalibrasyon lineyè estanda a pou quantification.

Aktivite antioksidan nan vitro

DPPH Assay Yo te yon ti kras modifye tès DPPH nan yon rapò anvan.23 Yon melanj de etanòl anidrid (100 μL), solisyon DPPH (100 μL, 0.2 mM) ak echantiyon (100 μL, 0.01). - 1 mg / L) te souke kouray epi kenbe (25 degre, 30 min) nan fè nwa a. VC te itilize kòm yon kontwòl pozitif Absòbsyon (517 nm) te mezire. Radi a DPPH

Yo te kalkile to kalifikasyon jan sa a:

kote A0 reprezante absòbe kontwòl negatif la (DPPH plis etanòl absoli); A1 reprezante sistèm tès ki genyen echantiyon an (DPPH plis TSAT); ak A2 se absòbe sistèm vid la (TSAT plis etanòl absoli). Yo te kalkile valè konsantrasyon anpèchman 50 pousan (IC50) nan to DPPH gratis radikal, ki reprezante kapasite antioksidan TSAT. Tout operasyon yo fèt an paralèl twa fwa.

ABTS plus Assay ABTS te detèmine ak metòd Rafique et al ak yon ti modifikasyon.24 Premyèman, yo te prepare yon seri solisyon TSAT (0.01–1 mg/mL). Yo te prepare yon solisyon ABTS 7 mM ak yon solisyon K2S2O8 2.45 mM. Apre yo te melanje nan menm volim, ABTS plus te jwenn nan reyaji (12-16 h) nan fè nwa a. ABTS plus te prepare a te dilye ak dlo distile doub nan yon absòbe 0.7 ± 0.05 nan 734 nm. Lè sa a, melanj lan nan 180 μL dilye ABTS plis solisyon ak 20 μL echantiyon yo te reyaji (25 degre, 10 min) nan fè nwa a. VC te itilize kòm kontwòl pozitif. Yo te mezire absorbans (734 nm). ABTS plis kapasite scavenging te kalkile pa fòmil sa a:

kote A0 reprezante absorbans kontwòl negatif la (ABTS plis plis dlo distile doub); A1 reprezante sistèm tès ki genyen echantiyon an (ABTS plis plis TSAT); ak A2 se absòbe sistèm vid la (TSAT plis doub dlo distile). Lè sa a, yo te kalkile valè IC50 ABTS plis to scavenging. Tout operasyon yo te fèt an paralèl twa fwa.

Detèminasyon Aktivite Anpèchman Tirozinaz Djondjon Yo te detèmine aktivite inhibitor Tirozinaz la dapre yon vèsyon yon ti kras amelyore nan metòd Morais et al.25 te rapòte deja. Yon seri 50 μL TSAT (0.01-1 mg / mL, nan 50 pousan DMSO) solisyon yo te ajoute nan sistèm reyaksyon an ki gen 100 μL nan tanpon PBS (0.1 M, pH 6.8) ak 50 μL tirozinaz (100 U / mL), respektivman, epi yo te reyaji nan 25 degre pou 15 min. . Lè sa a, 50 μL L L-DOPA (3.5 mM) solisyon te ajoute nan sistèm reyaksyon an ak enkubasyon nan 37 degre pou 10 min. Yo te detèmine absorpsyon an (475 nm). VC te itilize kòm kontwòl pozitif. Yo te kalkile aktivite anpèchman iof TSATpa fòmil sa a:

endike aktivite inhibitor tirozinaz TSAT. Tout operasyon yo te fèt an paralèl twa fwa.