Efè benefisye nan total Phenylethanoid glikozid fraksyon izole nan Cistanche Deserticola sou mikrostruktur zo nan rat ovariectomized

1. Entwodiksyon

Osteyopowoz postmenopoz, kote 1 nan 3 fanm ki gen plis pase 50 ane ap soufri, ap vin tounen yon danje sante prensipal ki aflije plis pase 200 milyon fanm nan tout mond lan [1]. Nan menopoz, n bès nan nivo estwojèn anjeneral mennen nan yon resorption zo depase ki te koze pa osteoclastogenesis ranfòse; Lè sa a, balans ki genyen ant fòmasyon zo osteoblast-induit ak resorption zo osteoclast-induit deranje, ak akselere aresorption zofinalman te lakòz maladi osteyopowoz la e menm ka zo kase anch oswa kolòn vètebral [2]. Yo te kwè ke diferansyasyon nan osteoclast la te deklanche lè reseptè activator nan faktè nikleyè kappa B (RANK) mare nan RANKL, ligand nan RANK. Sepandan, konbinezon RANK ak RANKL pa ka aktive sòf si faktè 6 ki asosye ak reseptè faktè necrosis pwoteyin timè (TRAF6) ansanm nan li [3], ki te swiv pa eksitasyon nan chemen yo siyal en ki gen ladan PI3K / AKT ak NF-κB. Finalman, ekspresyon faktè nikleyè selil T aktive c2 (NFAT2) ak c-Fos yo te kontwole [4] pou modile diferansyasyon osteoclast la ak resorption zo. Kidonk, yo te kwè faktè ak regilatè ki dirèkteman oswa endirèkteman ki gen rapò ak aktivasyon ak diferansyasyon osteoclast kòm objektif enpòtan pou anpeche pèt zo. Genyen tout bon kèk klinik ak sentetik òmòn terapi ranplasman dwòg tankou estradiol valerate ki efikas nan tretman osteyopowoz la apre menopoz. Malerezman, kèk nan sa yo ogmante risk pou kansè grav tankou kansè nan tete ak andomètr [5], ki limite aplikasyon klinik yo. Se poutèt sa, li nesesè yo chwazi lòt altènativ ak tou de efikasite ak efè segondè minim. Medikaman tradisyonèl Chinwa (TCM), osi byen ke konpoze bioaktif izole yo ak fraksyon [6-9], yo te pwouve efikas sou divès maladi ki gen ladan osteyopowoz postmenopoz. Pami konpozan ak fraksyon bioaktif sa yo, yo te kwè konpoze phenylethanoid glycoside (PhG) ki gen yon efikasite potansyèl kòm ajan pwomèt pou tretman osteyopowoz la [10-12]. Estrikti PhG yo konpoze de aglycone asid cinnamic, yon gwoup idwoksil fenil etil ki konbine avèk -glucopyranose, apiose, galaktoz, rhamnose, oswa xylose atravè yon kosyon glikozidik. Yo lajman egziste nan espès medsin nan genus Cistanche [13]. Cistanche deserticola YC Ma se yon TCM ofisyèl ki anrejistre nan famakope Chinwa, epi anplis ke yo te yon TCM enpòtan [14], C .deserticola se tou yon zèb tonik antiaging ak kèk efè segondè ki te devlope nan likè medsin ak likid nitrisyonèl apwouve pa. Administrasyon Eta Manje ak Medikaman. Ki baze sou dosye famakope Chinwa a, C. deserticola te tradisyonèlman itilize pa natif natal pou jere pwoblèm defisyans esans ren tankou feblès nan misk ak feblès lonbèr, ak konpoze glikozid fenilethanoid ki gen ladan.echinacosideak acteoside yo se eleman prensipal byoaktif nan zèb sa a. Dapre teyori TCM nan "ren-gouvène-zo", sistèm zo a gouvène pa sans ren [15], ak pwoblèm ki gen rapò ak zo tankou maladi osteyopowoz la ta ka refè pa remèd fèy oswa konpoze posede aktivite a nan nouri sans nan ren. Se poutèt sa, nou te ipotèz ke fraksyon total phenylethanoid glikozid izole nan C. deserticola, omwen an pati, te benefisye nan tretman osteyopowoz la. Se poutèt sa, eksperyans aktyèl la te envante pou valide ipotèz nou an lè l sèvi avèk yon modèl rat ovariectomized (OVX); Anplis makè resorpsyon ak fòmasyon zo yo ki dwe estime, endèks antioksidasyon an ansanm ak RANKL/RANK/TRAF6- pwovoke chemen siyal PI3K/AKT ak NF-κB yo te anplwaye tou pou mennen ankèt sou mekanis prensipal byoaktivite antiosteyopowotik la. .

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Materyèl Plant ak Preparasyon.

Yo te ranmase yon total de 30 kg tij Cistanche deserticola YC Ma nan Konte Yongning nan mwa septanm 2015 ak kowòdone 106.026597 ak 38.262816, Pwovens Ningxia, Lachin. Doktè Lin Dong (Depatman Pharmacognosy, Ningxia Medical University) te idantifye zèb la, epi yo te konsève yon echantiyon korespondan (#201509{01) nan Depatman an. Analiz famasetik. Premyerman, 30.0 kg an poud C. deserticola te ekstrè lè w itilize metòd rflu ak 70% etanòl kòm sòlvan; rapò a nan materyèl ak sòlvan yo te fikse kòm 1: 10, ak tan an rflu te 2 èdtan pou 3 fwa. Lè sa a, tout filtraj yo te konbine ak kondanse anba presyon redwi nan 60 degre C. Dezyèmman, AB-8 kolòn résine makroporous yo te itilize pou separasyon an preliminè, ak diferan rapò etanòl nan dlo (0%, 20%, 30%, 40%, 50%, ak 60%, chak 60 L) yo te anplwaye pou eluting. Twazyèmman, 40% ak 50% eliyan yo te konbine ak pirifye plis lè yo itilize repete AB-8 kolòn résine makropore ak eluyan yo nan 0%, 20%, 30%, 40%, ak 50% etanòl nan dlo, ak chak eluent te 12 L. Finalman, yo te kolekte 40% fraksyon ak kondanse anba presyon redwi pou jwenn 150 g jòn pal sediman phenylethanoid glycoside fraksyon nan C. deserticola (CDP, sede a te 0.5%). Pou eksperyans nan vivo, 0.5% CMC-Na sòlvan yo te anplwaye pou fonn CDP; administrasyon oral bay bèt yo te mete kòm 1 mL / 100 g nan pwa kò; pou analiz in vitro Western blot, CDP te fonn ak DMSO ak Lè sa a, dilye ak DMEM jwenn konsantrasyon final yo nan 0.1 mg / mL, 0.01 mg / mL, ak 0.001 mg / mL. 

NATIRÈL CISTANCHE èkstre pou kwasans zoFENYLETHANOID GLYCOSIDE 75% ECHINACOSIDE 30% ACTEOSIDE 12%

2.2. Pwodwi chimik ak Solvang.

Estradiol valerate (EV) te soti nan Delpharm Lille SAS, Lafrans; alkalin fosfataz (ALP), zo gla-pwoteyin (BGP), tartrate ki reziste fosfataz asid (TRAP), ak deoxypyridinoline (DPD) twous ELISA crosslink soti nan Xinyu Biological Engineering Co Ltd, Shanghai, Lachin, 201605; malondialdehyde (MDA, 20181221), super oksid dismutase (SOD, 20121218), ak glutatyon (GSH, 20181221) twous reyaktif nan Institute of Nanjing Jiancheng Byolojik Jeni, Nanjing, Lachin; lntact parathormone (l-PTH, NEWASHE7UZ), kalsitonin (2L9ISN7AIU), ak reseptè alfa ki gen rapò ak estwojèn (ERR , Y3AY8QEWB3) crosslink ELISA twous ki soti nan Elabscience Biotechnology Co Ltd, Wuhan, Lachin; kathepsin K ELISA reyaktif twous ki soti nan BioVision, Amerik, 1l300141; antikò prensipal RANKL (GR3193842-5), RANK (AA02113656), TRAF6 (2), c-Fos (AG12059411), NFAT2 (AO11015648), NF-κB p65 (AH04138226), PI3 alpha kinase (p86052) , AKT 1 (AF05173234), -aktin (17AV0411), ak antikò segondè nan refor peroksidaz-konjige kabrit anti lapen IgG soti nan ZSGB-BIO, Lachin, 136080; total BCA pro tein assay kit ak twous komèsyal la pou deteksyon fòmasyon oste oclast ak serom fetis bovin ak mwayen Dulbecco modifye Eagle's (DMEM) ki soti nan HyClone, Logan, UT, USA; fliyorid polivinilidèn (PVDF) manbràn ki soti nan Millipore Life Sciences, Billerica, MA, USA; penisilin ak streptomycin soti nan Gibco, Rockville, MD, USA. Tout lòt ajan chimik yo te itilize yo te nan klas AR.

2.3. HPLC Quantification CDP.

Yo te itilize yon enstriman HPLC Agilent 1220 pou idantifye ak quantifier konpozisyon CDP. Kondisyon kwomatografi yo te jan sa a: kolòn C18 (TSK-GEL, 4.6.id × 25 0 mm, 5 μm); elisyon gradyan te genyen solvants A (asetonitrile) ak B (dlo ki gen 0.5% asid acetic) (0-10 min: 17-20% A; 10-30 min: 20-25% A; ak 30-40 min: 25-30% A); longèdonn deteksyon an te 333 nm; tanperati anbyen; to koule te 1.0 mL / min; volim piki echantiyon te 5 μL. Yo te idantifye uit konpoze PhG, sètadi, cistanoside F, echinacoside, 6′-acetylatteoside, cistanoside C, cistanoside A, acteoside, 2′-acetylatteoside, ak isoacteoside; lè l sèvi avèk sibstans referans korespondan yo ak yon metòd estanda ekstèn, sa ki pi wo a 8 PhG yo te quantifier pa analiz HPLC (Figi 1).

Figi 1: HPLC anprent CDP. Yo te jwenn uit konpoze phenylethanoid glikozid nan fraksyon sa a, epi yo te mezire kontni total yo kòm 50.7%. Konpoze yo ak kontni yo te jan sa a: (1) acteoside F (3.6%), (2) echinacoside (8.8%), (3) cistanoside A (5.0%), (4) acteoside (13.3%), (5) isoacteoside (3.3%), (6) acteoside C (3.6%), (7) 2′-acetylatteoside (9.9%), ak (8) 6′-acetylatteoside (3.2%).

2.4. Pwotokòl eksperimantal bèt.

Yon total de 6 0 fi adilt rat Sprague-Dawley ki gen laj 3 mwa te objektif nan sant tès bèt nan Ningxia Medical University, ak yon mwayèn pwa kò inisyal apeprè 234 ± 25 g. Rat yo te loje nan yon anviwònman estanda espesifik patojèn gratis pou aklimate pou 1 semèn. Lè sa a, tout rat yo te anestezi (idrat chloral, 100 mg / kg, ip) sèlman oswa sham ovariectomized (SHAM), oswa de ovè yo te tou de retire ak Lè sa a, owaza divize an 5 sougwoup: oralman trete ak machin (0.5% CMC-). Na) te etabli kòm gwoup modèl (OVX), estradiol valerate (1 mg/kg/jou) kòm gwoup pozitif (EV), ak 60, 120, ak 240 mg/kg/jou CDP ki ba (CDPL), gwoup dòz modere (CDPM), ak segondè (CDPH), respektivman. Tout rat yo te administre oralman chak jou epi yo te dire pou 3 mwa ak dòz la ajiste chak 2 semèn ki depann de chanjman nan pwa tout kò yo. Nan dènye jou eksperyans bèt la, 24-èdtan pipi yo te jwenn lè w itilize kaj metabolik yo; yo te kolekte serom nan atè femoral rat anestezi; femora dwat yo, tibya yo, ak tout ògàn yo te diseke epi estoke nan -80 degre C pou plis analiz. Eksperyans bèt ke nou te fè yo te apwouve pa Komite Enstitisyonèl Swen ak Itilizasyon Animal nan Ningxia Medical University.

2.5. Detèminasyon dansite mineral zo ak analiz Micro-CT.

Premyèman, yo te itilize yon machin absorptiometry radyografi doub enèji (Linè, USA) pou estime dansite mineral zo total nan femoral dwat chak rat; Dezyèmman, yo te itilize menm femoral la pou estime imaj 3D mikrochitekti zo trabekulèr lè w itilize yon aparèy eskanè mikwo-CT (GE, Amerik). Rezolisyon izotwòp la te fikse kòm 14 μm pou jwenn yon imaj ideyal 3D; rejyon enterè (ROI) te chwazi pa mete menm kowòdone yo nan plak kwasans femoral chak echantiyon; ak paramèt mòfometri zo yo ki gen ladan separasyon trabecular (Tb.Sp), nimewo trabecular (Tb.N), epesè trabecular (Tb.Th), kontni mineral zo (BMC), dansite mineral tisi (TMD), ak kontni mineral tisi (TMC). ) yo te jwenn nan analize ROI la.

Figi 2: Efè OVX ak 12 semèn tretman ak CDP oswa EV sou dansite mineral zo total nan femoral dwa rat yo evalye lè l sèvi avèk absòpsyon radyografi ki gen doub enèji (n=10 / gwoup). Done yo te prezante kòm mwayen ± SD; ∗p <0 05, ∗∗p <0 01, ak ∗∗∗p <0 001 kont gwoup OVX la; ###p < 0 001 kont gwoup SHAM la.

Figi 3: Mikwo-CT eskanè imaj mikwochitekti nan femoral dwat la nan rat trete CDP; foto yo montre yo te reprezante 4 rat diferan nan chak gwoup: (A) gwoup OVX; (B) gwoup SHAM; (C) gwoup EV; (D) gwoup CDPH; (E) gwoup CDPM; (F) gwoup CDPL. Paramèt yo mezire gen ladan yokontni mineral zo(BMC), tisi mineral kontni (TMC), tisi mineral dansite (TMD), separasyon trabecular (Tb.Sp), nimewo trabecular (Tb.N), ak epesè trabecular (Tb.Th). Rat OVX yo te eksprime yon rediksyon remakab nan zòn mikrochitekti ak nimewo trabecular la. Rat trete CDP ak rat trete EV an pati ranvèse konklizyon yo mansyone anwo a nan menm degre apre 12 semèn nan tretman an. Tout valè yo te prezante kòm mwayen ± SD. ∗p <0 05, ∗∗p <0 01, ak ∗∗∗p <0 001 kont gwoup OVX la; ###p < 0 001 kont gwoup SHAM la.

Figi 4: Efè OVX ak 12 semèn tretman ak CDP oswa EV sou pipi ak serom Ca ak P osi byen ke PTH ak kalsitonin nan rat (n=10 / gwoup). Tout done yo te eksprime kòm mwayen ± SD. ∗p <0 05, ∗∗p <0 01, ak ∗∗∗p <0 001 kont gwoup OVX la; # p < 0 05, ##p < 0 01, ak ###p < 0 001 kont gwoup SHAM la.

2.6. Serom ak pipi Biochimik essai.

Aktivite serik cathepsin K, TRAP, SOD, ak GSH, ansanm ak sa ki nan serik PTH, kalsitonin, ERR, MDA, BGP, ak pipi DPD, yo te detèmine pa anplwaye twous reyaktif korespondan yo dapre enstriksyon manifakti a, ak nivo fosfataz alkalin (ALP) ak sa ki nan serom ak pipi kalsyòm (Ca) ak fosfò (P) yo te estime pa anplwaye yon machin otomatik (Ciba-Corning 550 Diagnostics Corp., Oberlin, OH, USA).

2.7. Analiz Western Blot.

Osteoclasts yo te pwovoke lè l sèvi avèk selil RAW 264.7 te ajoute ak macrophage koloni-stimulan faktè (MCSF) ak RANKL. Yon ti tan, 1 × 107 selil RAW 264.7 yo te kiltive nan yon plak 6-byen an prezans 30 ng/mL MCSF ak 25 ng/mL RANKL. Apre 6 jou nan endiksyon, yo te idantifye selil osteoclast ki gen matirite yo lè yo itilize metòd TRAP-tache ak twous ki koresponn lan, epi yo te trete ak CDP (0.1, 0.01, ak 0.001 mg/mL). , respektivman) pou 24 h; Lè sa a, selil yo te lysed ak yon tanpon liz ki gen 0.5 mmol phenylmethylsulfonyl fliyò, proteaz, ak inhibiteur fosfataz. Lè sa a, lisat la separe lè l sèvi avèk 10% SDS-PAGE epi yo transfere nan yon manbràn PVDF, ki te sonde ak AKT1, NF-κB-p65, RANKL, PI3K p85, RANK, NFAT2, TRAF6, c-Fos, ak -actin ( 1: 400) apre bloke ak 5% lèt san grès pou 2 èdtan. Menm manbràn yo te retire ak sonde ankò ak pi wo a 9 antikò ki koresponn yo, respektivman, ak Lè sa a, yo te detekte pa lojisyèl an Image Lab nan fen an. Eksperyans yo te repete twa fwa.

2.8. Analiz estatistik.

Tout done yo te jwenn nan eksperyans in vivo ak in vitro, ki dekri kòm mwayen ± SD, yo te analize lè l sèvi avèk yon sèl-fason ANOVA ki te swiv pa tès Dunnett a (SPSS 22.0 lojisyèl, SPSS, USA); p < 0 05 te estatistik enpòtan.

3. Rezilta yo

3.1. Konpozisyon chimik CDP.

Sèvi ak metòd HPLC, uitkonpoze phenylethanoid glikozidyo te jwenn nan fraksyon sa a, jan Figi 1 montre. Lè w itilize referans estanda ak yon metòd estanda ekstèn, yo te idantifye konpoze yo ak sa ki ladan yo jan sa a: (1) acteoside F (3.6%), (2) echinacoside (8.8%), (3)cistanosideA (5.0%), (4) akteozid (13.3%), (5) izoakteozid (3.3%), (6) akteozid C (3.6%), (7) 2′-acetylatteoside (9.9%) ), ak (8) 6′-acetylatteoside (3.2%). Kontni total uit konpozan sa yo te mezire kòm 50.7%.

NATIRÈL TIB CISTANCHE EXTRACTPOU KWAKSYON ZOFENYLETHANOID GLYCOSIDE 75% ECHINACOSIDE 30% ACTEOSIDE 12%

3.2. Efè CDP sou dansite mineral zo ak mikrochitekti Trabecula.

Figi 2 montre dansite mineral zo total rat yo nan diferan sougwoup. Yo te obsève yon tandans diminye kontni nan dansite mineral zo nan rat operasyon modèl OVX yo konpare ak rat gwoup SHAM la (p < {{ 1}}). Tout rat ki trete CDP te montre siyifikativman ogmante dansite mineral zo pa 11.2%, 12.0%, ak 10.7% (p <0 01), respektivman, an konparezon ak rat yo nan gwoup la modèl OVX. Anplis de sa, ki konsistan avèk done yo nan dansite mineral zo total, rekonstriksyon mikwo-CT, osi byen ke detèminasyon istomorfometrik nan femoral la, te montre ke rat yo nan gwoup la OVX te montre deteryorasyon evidan nan achitekti trabecular evidans nimewo a miyò ak zòn nan trabecula. osi byen ke ansibleman ogmante Tb.Sp lè yo konpare ak rat yo nan gwoup la SHAM. Tretman ak CDP anpeche deteryorasyon OVX-induit nan achitekti trabecular; jan Figi 3 montre, valè BMC, TMC, ak Tb.N yo te siyifikativman ogmante, ak zòn nan Tb.Sp te miyò diminye, pandan y ap valè yo nan TMD ak Tb.Th te sanble pa siyifikativman afekte pa operasyon an OVX ak nou an. Entèvansyon CDP.

Figi 5: Efè OVX ak tretman 12-semèn ak CDP oswa EV sou aktivite serik TRAP, cathepsin K, DPD, ALP, ak BGP rat OVX (n=10/gwoup). Tout valè yo te prezante kòm mwayen ± SD. ∗p <0 05, ∗∗p <0 01, ak ∗∗∗p <0 001 kont gwoup OVX la; # p < 0 05, ##p < 0 01, ak ###p < 0 001 kont gwoup SHAM la.

3.3. Efè CDP sou pipi ak serom paramèt byochimik.

Kòm Figi 4 montre, yo te detekte tandans diminisyon enpòtan nan nivo urin P ak kontni serik nan kalsitonin nan rat nan gwoup modèl OVX, ki te prèske 30% ak 60% mwens pase rat SHAM yo (p < 0 001 ), respektivman, tandiske pa gen okenn tandans evidan ogmante oswa diminye nan nivo urin nan Ca ak serik Ca osi byen ke serom P ak serik PTH yo te obsève ant OVX ak gwoup SHAM. Tretman ak CDP te anpeche siyifikativman pèt serik P ak Ca nan rat OVX, sa ki evidan nan nivo serik P ak Ca miyò regilasyon (p <0 05) an konparezon ak rat yo nan gwoup modèl OVX la. Anplis de sa, yo te obsève tandans ogmante men ki pa estatistik enpòtan nan kalsitonin nan tou de gwoup ki ba ak gwo dòz CDP yo konpare ak gwoup modèl OVX la.

Figi 6: Efè OVX ak tretman 12-semèn ak CDP oswa EV sou ekspresyon ERR, pwa kò, ak pwa matris ak vajen rat (n=10/gwoup). Done yo prezante kòm mwayen ± SD. ∗p <0 05, ∗∗p <0 01, ak ∗∗∗p <0 001 kont gwoup OVX la; ###p < 0 001 kont gwoup SHAM la.

3.4. Efè CDP sou fòmasyon zo ak makè resorption zo yo.

Efè benefik CDP sou endèks fòmasyon zo ak anpèchman enfliyanseresorption zomakè yo te dekri nan Figi 5. Konsènan makè fòmasyon zo yo, nivo BGP serik yo te prèske pa enfliyanse pa operasyon an ovariectomized evidans chanjman ki pa enpòtan yo obsève nan tout gwoup trete, tandiske amelyorasyon estatistik enpòtan nan ALP serik yo te jwenn tou de nan ba (6). Dòz 0 mg/kg) ak modere (120 mg/kg) nan gwoup entèvansyon CDP lè yo konpare ak rat gwoup SHAM (p <0 01). Konsènan endèks resorption zo a, nivo serik cathepsin K ak DPD, osi byen ke TRAP nan rat nan gwoup modèl OVX la, yo te siyifikativman ogmante pa apeprè 75.0%, 41.4%, ak 21.0%, respektivman, an konparezon ak rat SHAM yo. , ak lè trete ak CDP, espesyalman dòz la ki ba nan 60 mg / kg, pwopriyete yo nan cathepsin K ak DPD kòm byen ke TRAP nan gwoup la modèl OVX yo te miyò inibit pa 67.3%, 41.4%, ak 25.9%, respektivman, kòm konpare ak rat yo nan gwoup modèl OVX la.

NATIRÈL TIB CISTANCHE POU KWAKSYON ZOFENYLETHANOID GLYCOSIDE 75% ECHINACOSIDE 30% ACTEOSIDE 12%

3.5. Efè CDP sou vajen an ak matris ak pwa tout kò.

Yo te obsève diferans ki pa enpòtan nan pwa inisyal tout kò rat yo anvan tretman an nan sis gwoup (Figi 6). Sepandan, operasyon ovariectomized la te mennen nan yon ogmantasyon siyifikatif nan pwa kò final rat nan gwoup modèl OVX la ki se prèske 36.0%, tandiske pwa mouye nan matris la ak nan vajen yo te bese drastikman pa prèske 9{{4} }.0% ak 60.0%, respektivman, konpare ak rat SHAM yo (p <0 001). Malgre ke kontni ERR pa montre okenn diferans enpòtan ant gwoup OVX ak gwoup SHAM, tout gwoup tretman ki gen ladan CDP ak EV ogmante nivo ERR siyifikativman. Anplis de sa, lè yo te trete ak EV, pi wo a te pran pwa tout kò yo ansanm ak pèt nan vajen ak pwa matris nan rat OVX yo te an pati ranvèse (p <0 001) ​​men yo pa afekte pa entèvansyon CDP.

3.6. Efè CDP sou nivo serom MDA, SOD, ak GSH.

Pa te gen okenn diferans estatistik enpòtan nan pwopriyete yo nan SOD serom ak GSH ant gwoup yo modèl SHAM ak OVX; jan Figi 7 dekri, yon tandans ogmante nan GSH ka obsève ant de gwoup ki anwo yo. Anplis de sa, nivo nan serik MDA te sevè upregulated pa prèske 50% nan rat yo nan gwoup la modèl OVX lè yo konpare ak rat yo SHAM. Aktivite SOD a pa te enfliyanse pa tretman CDP, tandiske pwopriyete GSH te siyifikativman amelyore pa entèvansyon CDP, ak CDP miyò diminye nivo MDA a pa 33.9% ak 42.4% nan dòz 60 ak 240 mg / kg, respektivman ( p < 0 001).

3.7. Efè CDP sou nivo ekspresyon pwoteyin yo.

Done nou yo, yo montre nan Figi 8, sijere ke tretman CDP siyifikativman diminye nivo pwoteyin TRAF6, RANK, ak RANKL konpare ak kontwòl la. Chemen siyal en ki gen ladan NF-κB yo te siprime, epi PI3K/AKT te ankouraje pa entèvansyon CDP, evidans ekspresyon de NF-κB-p65 downregulation, tandiske PI3K p85 ak AKT1 te upregulated. Kontinwe, ekspresyon NFAT2 te siyifikativman diminye, epi c Fos te ogmante apre tretman ak CDP nan yon konsantrasyon 0.001-0.1 mg/mL. Yon mekanis sijere yo dekri nan Figi 9, kote CDP desann nivo RANKL ak RANK, diminye kantite obligatwa ligand sa a ak reseptè li yo. Koneksyon an nan RANKL ak RANK te diminye plis pa downregulation nan TRAF6, ki te swiv pa repwesyon nan chemen yo en ki gen ladan chemen an NF-κB. Kontrèman, yo te ankouraje chemen siyal PI3K/AKT, ki finalman te mennen nan diminisyon ekspresyon NFAT2 ak yon ogmantasyon nan nivo c-Fos.

4. Diskisyon

Glikozid feniletanoidyo se eleman ki natirèlman idrosolubl ki egziste lajman nan wayòm plant medsin [11]. Jiskaprezan, konpoze glikozid phenylethanoid te atire pi plis ak plis chèchè akòz wòl evidan yo nan manyen divès maladi ak anomali imen [13]. Nimewo nan fraksyon byoaktif antiosteyopowotik ak konpoze, ki gen ladan polifenol ak glikozid feniletanoid, yo te idantifye ak izole nan plizyè douzèn remèd fèy natirèl [5, 10, 12, 16, 17]

Figi 8: Efè diferan konsantrasyon CDP sou ekspresyon pwoteyin TRAF6 (a), RANKL (b), RANK (c), PI3K (d), AKT (e), NF-κBIA (f), NFAT2 (g), ak c-Fos (h) (n=3/gwoup); ekspresyon an pwoteyin te nòmalize nan -aktin, ak done quantitative nan chak pwoteyin siyal yo te montre kòm pousantaj nan valè a nan kontwòl la. Done yo te dekri kòm mwayen an ± SD. ∗p <0 05, ∗∗p <0 01, ak ∗∗∗p <0 001 kont gwoup kontwòl la.

C. deserticola se byen li te ye kòm "ginseng nan dezè a" ki implique pwofil sekirite sa a TCM manjab [18, 19]. Kòm yon zèb jeneral tonik ak manje sante natirèl ki depi lontan te itilize nan peyi Azyatik, C. deserticola te montre yon fonksyon benefik pou amelyorasyon nan fòs ren. Yo te jwenn ke TCM, tradisyonèlman itilize pou dinamize ak kenbe sans nan ren, te anjeneral itilize pou trete maladi osteyopowoz la, tou de nan vitro ak nan vivo done pibliye te pwouve aktivite a antiosteyopowotik nan C. deserticola [20-23], ak konstitiyan phenylethanoid glikozid ki gen ladan echinakozid ak acteoside se eleman prensipal byoaktif ki egziste nan plant medsin manjab sa a; tout sa ki sijere ke pa sèlman echinacoside ak acteoside tèt yo, men tou lòt konpozan phenylethanoid glikozid ki genyen nan C. deserticola yo te konsidere kòm responsab pou pwopriyete antiosteyopowotik zèb sa a. Nan etid prezan nou an, yo te itilize yon rezin macro poreux sekirite favorab pou izole ak anrichi fraksyon glikozid phenyletha noid soti nan C. deserticola, epi lè l sèvi avèk metòd HPLC a, uit eleman prensipal glikozid phenylethanoid, sètadi, acteoside F, echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside, acteoside C, 2′-acetylatteoside, ak 6′-acetylatteoside, yo te jwenn nan fraksyon izole pheny lethanoid glikozid, ak sa ki te genyen 3.6%, 8.8%, 5.0%, 13.3%, 3.3%, 3.6%, 9.9%, ak 3.2%, respektivman. Echinacoside, youn nan konpoze aktivite prensipal yo anrejistre nan C. deserticola [14], yo te pwouve yo posede aktivite antiosteyopowotik; sepandan, dòz la nan 270 mg / kg te tèlman wo li limite plis aplikasyon klinik li yo [24]. Nan eksperyans aktyèl yo, yo te itilize fraksyon total phenylethanoid glikozid ak yon dòz ki pi ba nan 60-240 mg/kg pwa kò/jou sou rat OVX, ak sa ki nan eleman idantifye yo te prèske 50% pi nan fraksyon sa a lè yo itilize. metòd HPLC.

Li te byen li te ye ke OVX ka lakòz maladi osteyopowoz la, epi yo te kwè yon rat OVX kòm yon modèl klasik ak apwopriye pou simulation osteyopowoz moun apre menopoz. An menm tan an, yo te obsève yon diminisyon siyifikatif nan dansite mineral zo a, mikrochitekti zo trabekilè, pwa mouye nan matris ak vajen, ak nivo estwojèn, osi byen ke amelyorasyon evidan nan resorption zo ak pwa kò, yo te obsève apre operasyon ovariectomy, ki te nan pati akòz pèt estwojèn [25]. Done nou yo, jiskaprezan, klèman demontre ke OVX tout bon pwovoke osteyopowoz postmenopoz epi li toujou akonpaye pa yon gwo bès nan bon jan kalite zo, mikrochitekti zo, ak pwa mouye nan matris ak vajen. Kòm EV se yon ajan ranplasman òmòn jeneral ki te itilize nan pratik klinik, li te itilize kòm yon kontwòl pozitif nan eksperyans in vivo nou an, ak pwa kò a te genyen ak pwa matris atrophied kòm byen ke dansite mineral zo deteryore ak mikrochitekti zo trabekulèr yo te. espere ranvèse pa sipleman EV. Diferan de kontwòl pozitif la, diminye pwa nan vajen ak matris, ansanm ak pwa kò tout rat yo te genyen nan gwoup modèl OVX la, pa t afekte pa tretman CDP, ki vle di ke CDP te kapab amelyore fòmasyon zo san yo pa pwovoke efè segondè yo. sou kò ak tisi òganik matris yo. Malgre ke nivo ERR yo te siyifikativman upregulated pa tretman CDP, li te jis tankou yon efè phytoestrogen ki pa gen okenn efè segondè sou tisi òganik matris ak vajen yo te obsève. Anplis de sa, tretman CDP siyifikativman ranfòse bon jan kalite a nan zo nan rat OVX ki te deteryore pa operasyon ovariectomy.

Anplis de sa, nivo P ak Ca nan urin ak serom rat OVX yo te itilize tou pou reflete efè antiosteyopowotik, ak konsantrasyon Ca ak inòganik P yo te anjeneral depann sou nivo kalsitonin ak PTH [26]. Nan etid la prezan, byenke pa gen okenn bès enpòtan oswa tandans ogmante nan nivo eskresyon urin nan Ca,

Figi 9: Ipotèz mekanis molekilè: CDP ta ka anpeche pèt zo sou rat OVX la atravè RANKL/RANK/TRAF6-induit inaktivasyon NF-κB ak aktivasyon nan chemen PI3K/AKT kòm byen ke eksitasyon c-Fos ak repwesyon NFAT2. , ki pwouve pa downregulation nan nivo ekspresyon TRAF6, RANKL, RANK, NF-κBIA, ak NFAT2, tandiske c-Fos, AKT, ak PI3K te siyifikativman upregulated pa tretman CDP kòm konpare ak gwoup kontwòl la.

serom P, serom Ca, ak PTH nan rat nan gwoup la modèl OVX yo te jwenn, ak nivo urin enpòtan nan P ak kalsitonin (p <{0}}) yo te obsève. Konfòm ak done yo pibliye ke defisi estwojèn ki te koze pa operasyon ovariectomy toujou mennen nan yon nivo kalsitonin diminye nan san, sa a diminye kalsitonin serom finalman mennen nan yon nivo ogmante PTH, kote Ca te kwè kòm regilatè a pi gwo nan sekresyon PTH. Paske konsantrasyon PTH pa montre okenn diferans enpòtan ant gwoup OVX ak SHAM nan etid prezan an, nivo Ca nan tou de serom ak pipi pa montre okenn chanjman evidan ant de gwoup ki anwo yo. Sepandan, yon tandans siyifikativman refize sou nivo kalsitonin ant gwoup OVX ak SHAM yo te jwenn, e kidonk, kontni P nan pipi OVX te pisan diminye. Nou kwè ke done ki anwo yo ka eksplike fenomèn nan kontradiktwa poukisa eskresyon urin nan nivo Ca nan rat OVX pa te montre okenn chanjman evidan an konparezon ak rat SHAM, ak fenomèn sa a ka gen rapò tou ak to a ogmante nan woulman zo [27] . Apre tretman ak CDP, nivo P ak Ca nan serom yo te miyò regilasyon, epi kontni P nan pipi te kontwole nan rat OVX, ki te reflete ke CDP pa t kapab sèlman anpeche eskresyon eleman mineral zo yo, men tou amelyore kontni serik sa yo. eleman, kidonk endirèkteman siprime pèt zo.

Anplis de sa, fòmasyon zo ak makè resorption ak anzim antioksidan ki gen ladan SOD ak GSH yo te travay tou pou eksplike mekanis antiosteyopowotik ki kache nan CDP. Menm jan ak done yo pibliye, nivo ALP nan rat nan gwoup modèl OVX te montre yon tandans ogmante ki pa estatistik siyifikatif ki endike yon to akselere nan woulman zo nan osteyopowoz postmenopoz [10]. Sepandan, apre tretman ak CDP a (60, 120, ak 240 mg / kg / jou), pwopriyete ALP te siyifikativman amelyore. Li te byen li te ye ke OVX te lakòz yon gwo bès nan nivo estwojèn ki anjeneral mennen nan yon resorption zo depase ak estrès oksidatif [28], evidans nivo yo nan TRAP, cathepsin K, ak DPD kòm byen ke MDA miyò regilasyon nan rat yo. OVX modèl gwoup. Sepandan, deteryorasyon sa yo te an pati amelyore pa entèvansyon CDP. Anplis de sa, tretman OVX rat ak CDP (60 ak 240 mg / kg) te demontre yon ogmantasyon siyifikatif nan aktivite GSH (p <{8}}). Rezilta ki anwo yo te implique ke CDP te montre yon efè terapetik sou OVX-induit osteyopowoz la, ak efè sa yo te tou de pa amelyore fòmasyon zo ak siprime resorption zo kòm byen ke amelyore sistèm nan anti-oksidan zo.

Aktivasyon RANK pa ligand RANKL li ankouraje ekspresyon NFAT2 ak c-Fos atravè siyal PI3K/AKT ak NF-κB [29]. NF-κB te pwouve esansyèl pou osteoclastogenesis kòm dezòd la nan NF-κB te kapab mennen nan yon diferansyasyon osteoclast andikape ak yon fenotip osteyoporotik, ak NF-κB upregulated c-Fos ak downregulated ekspresyon NFAT2 pandan RANKL / RANK / TRAF-induced osteoclastogenesis. Pou estime enfliyans benefisye CDP sou NFAT2 ak c-Fos-medyatè osteoclastogenesis, nivo ekspresyon RANKL ak RANK yo te analize. Espere, CDP siyifikativman inibit NFAT2 ak ankouraje nivo c-Fos pa downregulating ekspresyon yo nan RANKL ak RANK. Pandan se tan, RANK tèt li te manke pwopriyete kinaz intrinsèques sof si yo te rantre nan TRAF6 pou deklanche siyal en a [3]. CDP tou downregulated ekspresyon nan TRAF6, ki te mennen nan kantite obligatwa RANKL ak RANK siyifikativman redwi. Yon mekanis antiosteyopowotik ipotèz CDP sou rat OVX kouvri chemen siyal ki anwo yo, epi regilatè yo te dekri nan Figi 9. Brèf, CDP te refize nivo TRAF6, RANKL, ak RANK, kidonk siprime chemen siyal en yo ki gen ladan PI3K/AKT ak NF-κB ki yo deklanche pa RANKL/RANK, epi finalman redwi ekspresyon ak aktivite kle pwoteyin osteoklastojèn NFAT2 ak c-Fos. Se poutèt sa, plizyè endikasyon done enplike efè benefik CDP sou metabolis zo nan rat OVX sitou atravè RANKL/RANK/TRAF6-medyatè PI3K/AKT ak NF-κB chemen.

5. Konklizyon

An rezime, total phenylethanoid glikozid, izole nan C. deserticola, te montre siyifikatif efè benefik sou osteyopowoz postmenopoz nan rat OVX, ak potansyèl terapetik nan siprime pèt zo te sitou nan eksitan fòmasyon zo ak anpeche zo resorption kòm byen ke amelyore zo antioksidan. sistèm; mekanis yo ka gen rapò ak RANKL/RANK/TRAF6-induit deklanchman NF-κB ak inaktivasyon PI3K/AKT kòm byen ke eksitasyon c-Fos ak repwesyon NFAT2, epi finalman, diferansyasyon an nan osteoclast te inibe.

NATIRÈL TIB CISTANCHE POU KWAKSYON ZOFENYLETHANOID GLYCOSIDE 75% ECHINACOSIDE 30% ACTEOSIDE 12%