Efè benefis nan total Phenylethanoid glikozid fraksyon izole nan Cistanche Deserticola sou mikwostrikti zo nan rat ovariectomized Ⅰ

Etid prezan an te fèt pou estime aktivite antiosteyopowotik total fraksyon glikozid feniletanoid izole nanC. deserticola(CDP) sou rat pwovoke pa ovariectomy (OVX) osi byen ke mekanis ki gen rapò. Apre 3 mwa nan administrasyon oral, ladiminye dansite mineral zo yo, serom Ca, ak P nan rat OVX yo te refè ak trabecular la deteryoremikrochitekti zote an pati amelyore pa CDP (60, 120, ak 240 mg / kg) entèvansyon, aktivite yo nan makè resorption zo yo te downregulated, ak byoaktif nan endèks la fòmasyon zo yo te upregulated; pandan se tan, kontni an nan MDA te refize, ak GSH te ogmante pa tretman CDP. Konpozisyon, 8 konpoze phenylethanoid glikozid yo te idantitefikseed nan CDP, ak kantite total sa yofikseed kòm 50.3% lè l sèvi avèk metòd HPLC. Mekanistikman, CDP te bese nivo TRAF6, RANKL, ak RANK, kidonk siprime RANKL/RANK/TRAF6-pwovoke deklanchman NF-κB ak PI3K/AKT siyal chemen epi finalman anpeche aktivite kle pwoteyin osteoklastojèn nan NFAT2 ak c-Fos. Tout done ki anwo yo te implique ke CDP te montre benefiksecial eèyè grennects sou mikwostrikti zo nan rat ovariectomized, ak sa yo eèyè grennect yo ka gen rapò ak NF-κB ak PI3K/AKT siyal chemen ki te deklanche pa obligatwa RANKL, RANK, ak TRAF6.

CISTANCHE NATIRÈL ÒGANIC POU KWAKSYON ZO

1. Entwodiksyon

Osteyopowoz postmenopoz, kote 1 nan 3 fanm ki gen plis pase 50 ane ap soufri, ap vin tounen yon danje sante prensipal ki aflije plis pase 200 milyon fanm nan tout mond lan [1]. Nan menopoz, n bès nan nivo estwojèn anjeneral mennen nan yon resorption zo depase ki te koze pa osteoclastogenesis ranfòse; Lè sa a, balans ant fòmasyon zo osteoblast-induit ak osteoclast-induitresorption zose deranje, ak resorption zo akselere finalman lakòz osteyopowoz la e menm ka zo kase anch oswa kolòn vètebral [2]. Yo te kwè ke diferansyasyon nan osteoclast la te deklanche lè reseptè activator nan faktè nikleyè kappa B (RANK) mare nan RANKL, ligand nan RANK. Sepandan, konbinezon RANK ak RANKL pa ka aktive sof si pwoteyin timè necrosis faktè reseptè-asosye faktè 6 (TRAF6) ansanm nan li [3], ki te swiv pa eksitasyon nan chemen yo siyal en ki gen ladan PI3K / AKT ak NF-κB. . Finalman, ekspresyon faktè nikleyè selil T aktive c2 (NFAT2) ak c-Fos yo te kontwole [4] pou modile diferansyasyon osteoclast la ak resorption zo. Kidonk, yo te kwè faktè ak regilatè ki dirèkteman oswa endirèkteman ki gen rapò ak aktivasyon ak diferansyasyon osteoclast kòm objektif enpòtan pou anpeche pèt zo.

Genyen tout bon kèk klinik ak sentetik òmòn terapi ranplasman dwòg tankou estradiol valerate ki efikas nan tretman osteyopowoz la apre menopoz. Malerezman, kèk nan sa yo ogmante risk pou kansè grav tankou kansè nan tete ak andomètr [5], ki limite aplikasyon klinik yo. Se poutèt sa, li nesesè yo chwazi lòt altènativ ak tou de efikasite ak efè segondè minim. Medikaman tradisyonèl Chinwa (TCM), osi byen ke konpoze bioaktif izole yo ak fraksyon [6-9], yo te pwouve efikas sou divès maladi ki gen ladan osteyopowoz postmenopoz. Pami konpozan ak fraksyon bioaktif sa yo, yo te kwè konpoze phenylethanoid glycoside (PhG) ki gen yon efikasite potansyèl kòm ajan pwomèt pou tretman osteyopowoz la [10-12]. Estrikti PhG yo konpoze de aglycone asid sinamik, yon gwoup idwoksil fenil etil ki konbine avèk -glucopyranose, apiose, galaktoz, rhamnose, oswa ksiloz atravè yon kosyon glikozidik. Yo lajman egziste nan espès medsin nan genus Cistanche [13]. Cistanche deserticola YC Ma se yon TCM ofisyèl ki anrejistre nan famakope Chinwa, epi anplis ke yo te yon TCM enpòtan [14], C deserticola se tou yon zèb tonik anti-aje ak kèk efè segondè ki te devlope nan likè medsin ak likid nitrisyonèl apwouve pa. Administrasyon Eta Manje ak Medikaman. Ki baze sou dosye famakope Chinwa a, C. deserticola te tradisyonèlman itilize pa natif natal pou jere pwoblèm defisyans esans ren tankou feblès nan misk ak feblès lonbèr, ak konpoze glikozid phenylethanoid ki gen ladan echinacoside ak acetonide yo se eleman prensipal yo byoaktif nan zèb sa a. Dapre teyori TCM nan "ren-gouvène-zo", sistèm zo a gouvène pa sans nan ren [15], ak pwoblèm ki gen rapò ak zo tankou maladi osteyopowoz la ta ka refè pa remèd fèy oswa konpoze posede aktivite a nan nouri sans nan ren. Se poutèt sa, nou te ipotèz ke fraksyon total phenylethanoid glikozid izole nan C. deserticola, omwen an pati, te benefisye nan tretman osteyopowoz la. Se poutèt sa, eksperyans aktyèl la te envante pou valide ipotèz nou an lè l sèvi avèk yon modèl rat ovariectomized (OVX); Anplis makè resorption zo ak fòmasyon yo dwe estime, endèks antioksidasyon an ansanm ak RANKL/RANK/TRAF6- pwovoke chemen siyal PI3K/AKT ak NF-κB yo te anplwaye tou pou mennen ankèt sou mekanis prensipal byoaktivite antiosteyopowotik la. .

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Materyèl Plant ak Preparasyon.

Yo te ranmase yon total de 30 kg tij Cistanche deserticola YC Ma nan Konte Yongning nan mwa septanm 2015 ak kowòdone 106.026597 ak 38.262816, Pwovens Ningxia, Lachin. Doktè Lin Dong (Depatman Pharmacognosy, Ningxia Medical University) te idantifye zèb la, epi yo te konsève yon echantiyon korespondan (#201509{01) nan Depatman an. nan analiz famasetik. Premyerman, 3 0.0 kg an poud C. deserticola te ekstrè lè w itilize metòd rflu ak 70% etanòl kòm sòlvan; rapò a nan materyèl ak sòlvan yo te mete kòm 1: 10, ak tan an rflu te 2 èdtan pou 3 fwa. Lè sa a, tout filtraj yo te konbine ak kondanse anba presyon redwi nan 60 degre C. Dezyèmman, AB-8 kolòn résine makroporous yo te itilize pou separasyon an preliminè, ak diferan rapò etanòl nan dlo (0%, 20%, 30%, 40%, 50%, ak 60%, chak 60 L) te anplwaye pou eluting. Twazyèmman, 40% ak 50% eliyan yo te konbine epi pirifye plis lè yo itilize kolòn rezin macroporous AB-8 repete ak eluyan yo nan 0%, 20%, 30%, 40%, ak 50% etanòl nan dlo, ak chak eluent te 12 L. Finalman, yo te kolekte 40% fraksyon ak kondanse anba presyon redwi pou jwenn 150 g jòn pal sediman phenylethanoid glycoside fraksyon nan C. deserticola (CDP, sede a te 0.5%). Pou eksperyans nan vivo, 0.5% CMC-Na sòlvan yo te anplwaye pou fonn CDP; administrasyon oral bay bèt yo te mete kòm 1 mL / 100 g nan pwa kò; pou analiz in vitro Western blot, CDP te fonn ak DMSO ak Lè sa a, dilye ak DMEM jwenn konsantrasyon final yo nan 0.1 mg / mL, 0.01 mg / mL, ak 0.001 mg / mL.

2.2. Pwodwi chimik ak Solvang.

Estradiol valerate (EV) te soti nan Delpharm Lille SAS, Lafrans; fosfataz alkalin (ALP),zo gla-pwoteyin(BGP), tartrate ki reziste asid fosfataz (TRAP), ak deoxypyridinoline (DPD) crosslink ELISA kits soti nan Xinyu Byolojik Jeni Co Ltd, Shanghai, Lachin, 201605; malondialdehyde (MDA, 20181221), super oksid dismutase (SOD, 20121218), ak glutatyon (GSH, 20181221) twous reyaktif nan Institute of Nanjing Jiancheng Byolojik Jeni, Nanjing, Lachin; lntact parathormone (l-PTH, NEWASHE7UZ), kalsitonin (2L9ISN7AIU), ak reseptè alfa ki gen rapò ak estwojèn (ERR, Y3AY8QEWB3) crosslink ELISA twous ki soti nan Elabscience Biotechnology Co Ltd, Wuhan, Lachin; kathepsin K ELISA reyaktif twous ki soti nan BioVision, Amerik, 1l300141; antikò prensipal RANKL (GR3193842-5), RANK (AA02113656), TRAF6 (2), c-Fos (AG12059411), NFAT2 (AO11015648), NF-κBp65 (AH04138226), PI3 alfa kinase (p86026), PI3 alfa (p86015648). AKT 1 (AF05173234), -aktin (17AV0411), ak antikò segondè nan refor peroksidaz-konjige kabrit anti lapen IgG soti nan ZSGB-BIO, Lachin, 136080; total BCA pro tein assay kit ak twous komèsyal la pou deteksyon fòmasyon oste oclast ak serom fetis bovin ak mwayen Dulbecco modifye Eagle's (DMEM) ki soti nan HyClone, Logan, UT, USA; fliyorid polivinilidèn (PVDF) manbràn ki soti nan Millipore Life Sciences, Billerica, MA, USA; penisilin ak streptomycin soti nan Gibco, Rockville, MD, USA. Tout lòt ajan chimik yo te itilize yo te nan klas AR.

2.3. HPLC Quantification CDP.

Yo te itilize yon enstriman HPLC Agilent 1220 pou idantifye ak quantifier konpozisyon CDP. Kondisyon kwomatografi yo te jan sa a: kolòn C18 (TSK-GEL, 4 6 I d × 250 mm, 5 μm); elisyon gradyan te genyen solvants A (asetonitrile) ak B (dlo ki gen 0.5% asid acetic) (0-10 min: 17-20% A; 10-30 min: 20-25% A; ak 30-40 min: 25-30% A); longèdonn deteksyon an te 333 nm; tanperati anbyen; to koule te 1.0 mL / min; volim piki echantiyon te 5 μL. Yo te idantifye uit konpoze PhG, sètadi, cistanoside F, echinacoside, 6′-acetylatteoside, cistanoside C, cistanoside A, acteoside, 2′-acetylatteoside, ak isoacteoside; lè l sèvi avèk sibstans referans korespondan yo ak yon metòd estanda ekstèn, sa ki pi wo a 8 PhG yo te quantifier pa analiz HPLC (Figi 1).

Figi 1: HPLC anprent CDP. Yo te jwenn uit konpoze glikozid phenylethanoid nan fraksyon sa a, epi sa ki total yo te mezire kòm 50.7%. Konpoze yo ak kontni yo te jan sa a: (1) acteoside F (3.6%), (2) echinacoside (8.8%), (3) cistanoside A (5.0%), (4) acteoside (13.3%), (5) isoacteoside (3.3%), (6) acteoside C (3.6%), (7) 2′-acetylatteoside (9.9%), ak (8) 6′-acetylatteoside (3.2%).

2.4. Pwotokòl eksperimantal bèt.

Yon total de 6 0 fi adilt rat Sprague-Dawley ki gen laj 3 mwa te objektif nan sant tès bèt nan Ningxia Medical University, ak yon mwayèn pwa kò inisyal apeprè 234 ± 25 g. Rat yo te loje nan yon anviwònman estanda espesifik patojèn ki vle di pou aklimate pou 1 semèn. Lè sa a, tout rat yo te anestezi (idrat chloral, 100 mg / kg, ip) sèlman oswa sham ovariectomized (SHAM), oswa de ovè yo te tou de retire ak Lè sa a, owaza divize an 5 sougwoup: oralman trete ak machin (0.5% CMC-). Na) te etabli kòm gwoup modèl (OVX), estradiol valerate (1 mg/kg/jou) kòm gwoup pozitif (EV), ak 60, 120, ak 240 mg/kg/jou CDP ki ba (CDPL), gwoup dòz modere (CDPM), ak segondè (CDPH), respektivman. Tout rat yo te administre oralman chak jou epi yo te dire pou 3 mwa ak dòz la ajiste chak 2 semèn ki depann de chanjman nan pwa yo tout kò. Nan dènye jou eksperyans bèt la, 24-èdtan pipi yo te jwenn lè w itilize kaj metabolik yo; serom yo te kolekte nan atè femoral rat anestezi-tize; femora dwat yo, tibya yo, ak tout ògàn yo te diseke epi estoke nan -80 degre C pou plis analiz. Eksperyans bèt ke nou te fè yo te apwouve pa Komite Enstitisyonèl Swen ak Itilizasyon Animal nan Ningxia Medical University.

2.5. Detèminasyon dansite mineral zo ak analiz Micro-CT.

Premyèman, yo te itilize yon machin absorptiometry radyografi doub enèji (Linè, USA) pou estime dansite mineral zo total nan femoral dwat chak rat; Dezyèmman, yo te itilize menm femoral la pou estime imaj 3D mikrochitekti zo trabekulèr lè w itilize yon aparèy eskanè mikwo-CT (GE, Amerik). Rezolisyon izotwòp la te fikse kòm 14 μm pou jwenn yon imaj ideyal 3D; rejyon enterè (ROI) te chwazi pa mete menm kowòdone yo nan plak kwasans femoral chak echantiyon; ak paramèt mòfometri zo yo ki gen ladan separasyon trabecular (Tb.Sp), nimewo trabecular (Tb.N), epesè trabecular (Tb. Th), kontni mineral zo (BMC), dansite mineral tisi (TMD), ak kontni mineral tisi (TMC). ) yo te jwenn nan analize ROI la.

2.6. Serom ak pipi Biochimik essai.

Aktivite serik cathepsin K, TRAP, SOD, ak GSH, ansanm ak sa ki nan serik PTH, kalsitonin, ERR, MDA, BGP, ak pipi DPD, yo te detèmine pa anplwaye twous reyaktif korespondan yo dapre enstriksyon manifakti a, ak nivo fosfataz alkalin (ALP) ak sa ki nan serom ak pipi kalsyòm (Ca) ak fosfò (P) yo te estime pa anplwaye yon machin otomatik (Ciba-Corning 550 Diag nostics Corp., Oberlin, OH, USA).

2.7. Analiz Western Blot.

Osteoclasts yo te pwovoke lè l sèvi avèk selil RAW 264.7 te ajoute ak macrophage koloni-stimulan faktè (MCSF) ak RANKL. Yon ti tan, 1 × 107 selil RAW 264.7 yo te kiltive nan yon plak 6-byen an prezans 30 ng/mL MCSF ak 25 ng/mL RANKL. Apre 6 jou nan endiksyon, selil osteoclast ki gen matirite yo te idantifye lè yo itilize metòd TRAP-tache ak twous ki koresponn lan, epi yo te trete ak CDP (0.1, 0.01, ak 0.001 mg/mL). , respektivman) pou 24 h; Lè sa a, selil yo te lysed ak yon tanpon liz ki gen 0.5 mmol phenylmethylsulfonyl fliyò, proteaz ak inhibiteur fosfataz. Lè sa a, lisat la separe lè l sèvi avèk 10% SDS-PAGE epi yo transfere nan yon manbràn PVDF, ki te sonde ak AKT1, NF-κB-p65, RANKL, PI3K p85, RANK, NFAT2, TRAF6, c-Fos, ak -actin ( 1: 400) apre bloke ak 5% lèt san grès pou 2 èdtan. Menm manbràn yo te retire ak sonde ankò ak pi wo a 9 antikò korespondan yo, respektivman, Lè sa a, yo te detekte pa lojisyèl an laboratwa Imaj nan fen an. Eksperyans yo te repete twa fwa.

2.8. Analiz estatistik.

Tout done yo te jwenn nan eksperyans in vivo ak in vitro, ki dekri kòm mwayen ± SD, yo te analize lè l sèvi avèk yon sèl-fason ANOVA ki te swiv pa tès Dunnett a (SPSS 22.0 lojisyèl, SPSS, USA); p < 0 05 te siyifikatif estatistik.

Sèvis Sipò Wecistanche

Imèl:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Achte pou plis detay espesifikasyon:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-boutik