Brèf rale Sevoflurane ka diminye fòmasyon sikatris glial apre blesi nan sèvo ipoksik-ischemik nan rat neonatal Pati 2

PCR an tan reyèl

RNA total yo te ekstrè nan tisi ipokanp nan pups nan 12, 24, ak 48 èdtan apre operasyon lè l sèvi avèk TRIzolreagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). ADN konplemantè te sentèz lè l sèvi avèk yon twous avanse Superscript II RT-PCR (Invitrogen).

Blesi ipoksik-iskemik refere a yon eta patolojik ki te koze pa iskemi serebral, ipoksi, maladi metabolik, ak domaj selil nève akòz maladi nan sistèm kadyovaskilè ak serebwo vaskilè. Avèk pwogrè sosyal ak chanjman fòm, aksidan ipoksik-iskemik ap vin pi plis ak pi komen. Kondisyon sa a ka lakòz anpil domaj nan sante moun, tankou afekte entèlijans ak memwa.

Malgre ke ipoksi ak iskemi ka lakòz yon bès nan fonksyon nan sèvo, sa pa vle di ke memwa pral afekte negatif. Okontrè, nou ka amelyore memwa epi ogmante efikasite sèvo a atravè bon metòd. Men kèk fason pou ede amelyore memwa ou:

1. rejim alimantè ki an sante: enpak rejim alimantè a sou memwa trè enpòtan. Manje ki rich nan pwoteyin, vitamin, ak mineral ka ede kenbe yon sistèm nève ki an sante ak fonksyon panse.

2. Egzèsis plis: Egzèsis fizik ka ankouraje sikilasyon san, ogmante koule oksijèn, amelyore iminite kò a, epi redwi risk pou maladi. Atravè egzèsis, ou ka amelyore kapasite memwa ou.

3. Ranfòse konfyans nan tèt ou: Konfyans se yon faktè enpòtan nan memwa yon moun. Si ou kwè ke ou ka ranpli yon sèten travay, ou pral fasil reyalize rezilta ou vle, epi ou ka efektivman amelyore memwa ou.

Li ka wè ke aksidan ipoksik-ischemik se pa yon kondisyon ki pral inevitableman fè mal memwa imen. Osi lontan ke nou metrize metòd kòrèk yo epi pran bon swen nan sèvo nou an, nou ka anbrase yon avni an sante ak yon atitid pozitif. Li ka wè ke nou bezwen amelyore memwa, ak Cistanche deserticola ka siyifikativman amelyore memwa, paske Cistanche deserticola gen efè antioksidan, anti-enflamatwa, ak anti-aje, ki ka ede diminye oksidasyon ak reyaksyon enflamatwa nan sèvo a, kidonk pwoteje sante nan sistèm nève a. Anplis de sa, Cistanche deserticola kapab tou ankouraje kwasans ak reparasyon nan selil nève, kidonk amelyore koneksyon ak fonksyon rezo neral yo. Efè sa yo ka ede amelyore memwa, aprantisaj, ak vitès panse, epi yo ka anpeche tou devlopman nan malfonksyònman mantal ak maladi neurodegenerative.

Klike sou konnen fason pou amelyore fonksyon nan sèvo

Fluoresan SYBR Green I teinture (SYBR Green PCRMaster Mix, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) ak 1μL ADN konplemantè transkripsyon ranvèse yo te itilize pou detekte sentèz ADN pa PCR an tan reyèl ak HIF-1 -primer espesifik.

Nan sistèm anplifikasyon ADN an tan reyèl jèn rotor (Corbett Research, Sydney, Ostrali), PCR te fèt ak sik sa yo: denaturasyon nan 95 degre pou 15 minit; 40 sik nan 95 degre (20 segonn), annealing nan 58 degre pou 25 segonn. , ak rale-desann nan 72 degre pou 35 segonn. Siveyans pwodwi fliyoresan an te fèt pou yon tan pwolonje nan 72 degre.

Lojisyèl analiz jèn rotor (Corbett Research) te itilize pou estandadize jèn GAPDH nan kay la ak quantifier ekspresyon jèn relatif. Tout sekans premye yo montre nan Tablo 1.

Nissl tach
Sèvo rat yo te prepare an tranch 28 jou apre operasyon an jan sa dekri pi wo a pou imunohistochimi. Chak sèvo te seksyon youn apre lòt, epi yo te chwazi twa seksyon ki sanble nan sèvo a pou tach Nissl.

Sèvi ak yon kamera mikwoskòp Nikon C1dijital (Nikon Corporation, Tokyo, Japon), yo te kaptire mikrofotografi tipik nan ipokanp CA1, CA3, ak DGareas. Plizyè selil ki konte nan chak nan twa seksyon yo te fèt nan yon fason avèg lè l sèvi avèk lojisyèl ImageJ.

Tès konpòtman

Rat yo te sevre nan 3 semèn, divize an twa a senk gwoup, epi yo te kenbe nan kalòj dapre plasman gwoup yo. Yo te fè tès konpòtman sou rat P28-P33 (sa vle di 21-26 jou apre operasyon), jan sa te dekri deja (Wang et al., 2019a). )men ak yon ti modifikasyon. Pou eskli enfliyans sik la sou konpòtman wonjè yo, yo te teste sèlman rat gason yo.

Labirent dlo Morris

Tès labirent dlo Morris yo te itilize pou evalye kapasite espasyal ak memwa rat P28-P33 (Wang et al., 2019a).

Tès la konsiste de de faz ki gen ladan seksyon fòmasyon an ak tès rechèch espasyal. Pandan 5 jou youn apre lòt, kat seksyon fòmasyon yo te aplike chak jou apati 8:00am. Pou tès deteksyon platfòm, 10 rat nan chak gwoup yo te mete endividyèlman nan dlo a nan divès kote, stochastically, fè fas a miray la nan pisin lan.

Si yon rat te detekte platfòm la avèk siksè nan lespas 90 segonn, li te oblije rete sou platfòm la pou 20 segonn epi tan li te pran pou detekte platfòm la te anrejistre kòm latansi chape. Chak wonn tès la te 90 segonn, epi latansi chape a te mezire kòm tan ki soti nan rat la yo te mete nan dlo a ak siksè monte nan platfòm la.

Si rat la echwe pou jwenn platfòm la nan 90 segonn, anrejistreman an te sispann epi yo te fè aprantisaj ak konsèy memwa (eksperimantè a te itilize yon baton long pou gide rat la nan platfòm la epi pèmèt yo rete sou platfòm la pou 20 segonn pou aprann). Pandan tès la, latansyon chape rat ki echwe pou antre nan etap la te anrejistre kòm 90 segonn.

Nan tès spatialprobe ki te aplike nan sizyèm jou tès la, yo te retire platfòm la epi yo te mete rat la nan kadran opoze a epi yo te pèmèt yo naje pou 90 segonn. Vitès la nan naje, latans chape, ak kantite fwa yo te travèse plas kote platfòm la te deja sitiye te anrejistre pa sistèm nan swiv videyo (Shanghai MobileDatum Ltd., Shanghai, Lachin).

Tès sispansyon

Yo te fè tès sispansyon an sou rat P28-P32 pou evalye fonksyon motè yo, kòmanse a 3 pm chak jou. Yo te mete yon kòd plastik orizontal ki gen yon dyamèt 0.5 cm nan yon distans 45 cm soti nan tè a, epi yo te gide rat yo pou yo kenbe kòd plastik la ak tou de manm anwo yo, nan moman sa a jiskaske rat la tonbe te mezire kòm la. latansi sispansyon.Tès la te fini si: (i) rat la tonbe; (ii) latansi sispansyon an te plis pase 60 segonn; oswa (iii) kòd la te kenbe pa branch dèyè.

Tès jaden louvri

Tès jaden louvri te fèt sou rat P28 lè l sèvi avèk ekipman deyò ki konpoze de yon bwat plèksiglas (100 cm × 100 cm; Borj Sanat, Tehran, Iran) antoure pa yon miray ki wo 45- cm, ak yon etaj divize an 16 kare. Zòn santral la te zòn 50 cm × 50 cm nan sant tèren an. Chak rat yo te plase endividyèlman nan sant tèren an epi yo te pèmèt yo eksplore san limit pandan 10 minit.

Yo te itilize yon sistèm swiv videyo (Borj Sanat) pou anrejistre ak analize totalitinerè a (kòm yon endikatè aktivite egzèsis) ak tan ki pase nan zòn santral la (kòm yon endikatè konpòtman enkyetid) (Zhai etal., 2019).

tach Golgi

Apre yo fin fè tès konpòtman an (sa vle di 26 jou apre operasyon), yo te chwazi senk rat nan chak gwoup. Yo te fè tach Golgi sou seksyon sèvo 150-μm-epesè yo lè l sèvi avèk yon Twous tach Golgi rapid FD (FDNeuroTechnologies, Columbia, MD, USA) dapre pwotokòl manifakti a.

Lojisyèl ImageJ te itilize pou analize dansite kolòn vètebral (nimewo kolòn vètebral pou chak 10 μm) chak newòn. Epin yo te konte sou de oswa twa segman segondè dendrit.

Analiz estatistik

Yo te itilize SPSS 17. 0 pou Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) te itilize pou analize done yo, ki montre yo kòm mwayen ± erè estanda nan mwayèn (SEM). Yo te itilize tès Shapiro-Wilk pou teste sipozisyon nòmal nan mitan tout varyab kontinyèl yo. Anplis de sa, yo te apwoche analiz yon sèl-fason nan divèjans ki te swiv pa Tukey'spost hoc tès konparezon miltip nan yon seri eksperyans.

Si done yo echwe pou satisfè sipozisyon nòmal la, tès Kruskal-Wallis H oswa Mann-Whitney Utest la te konplete separeman. Latansi chape yo te analize baze sou analiz de-fason divèjans pou mezi iteratif. Valè P < 0.05 yo te konsidere kòm estatistik siyifikatif.

Rezilta yo

SPC amelyore pèt selil newòn ipokanp lan

Ipokanp la, ki gen ladan twa rejyon egzamine yo, asosye ak aprantisaj ak memwa (Jung et al., 2020). Apre tès konpòtman, yo te fè tach Nissl pou egzamine achitekti ipokanp.

Nan gwoup HI a, yo te redwi newòndensite solid konpare ak gwoup sham la.Sepandan, kantite newòn yo te ogmante nan bèt ki te ekspoze a SPC; efè sa a te ranvèse pa YC -1, ki te redwi dansite newòn (Figi 1A). Fenomèn sa a te obsève nan rejyon CA1, CA3, ak DG nan ipokanp la (P< 0.05; Figure 1B–D).

SPC amelyore epi redwi dansite kolòn vètebral dendritik nan zòn CA1 ipokanp lan

Yo te itilize tach Golgi pou detekte dansite kolòn vètebral piramidal neuronaldendritic CA1 (Figi 2A). Paske gwosè epin yo varye anpil (egzanp, dendrit branch, mens oswa djondjon), nou sèlman detèmine ke dansite epin nan dendritik te ogmante siyifikativman nan gwoup HIS la konpare ak gwoup la HI (P < 0.{{6) }}5), pandan y ap dansite epin dendritik yo te redwi nan gwoup HIS + YC-1 konpare ak gwoup HIS la (P <0.01; Figi 2B).
SPC amelyore ekspresyon PSD95 ak GAP43 nan ipokanp lan

Nou evalye ekspresyon de pwoteyin ki asosye ak sinaps GAP43 ak PSD95 pou detèmine si yo te anpeche sikatris glial yo. HI siyifikativman redwi ekspresyon pwoteyin PSD95 (P <0.01) ak GAP43 (P <0.05) konpare ak shamgroup la (Figi 2C-E). Konpare ak gwoup HIS la, nivo ekspresyon PSD95 ak GAP43 yo te miyò diminye apre piki YC -1.

Fòmasyon astroglioz ak mak glial domaj achitekti ipokanp apre HI

Apre sa, nou te eseye verifye si sevoflurane amelyore aprantisaj ak fonksyon memwa lè nou pwoteje achitekti ipokanp lan ak diminye astrogliosis. Neonatal HIE te pwovoke apoptoz newòn nan ipokanp la, osi byen ke astrogliosis reyaktif nan rejyon enfaktis la ki answit devlope nan yon mak glial (Rolls et al., 2009).

Nan gwoup HI a, kouch piramidal CA1 ak CA3, ak rejyon DG yo te montre yon diminisyon evidan nan newòn (P <{2}}.01, P <0.001; Figi 3E ak 4C), osi byen ke ogmante kantite astwosit ak chanjman mòfolojik diferan (P <0.001; Figi 3C ak 4B). Nou evalye ekspresyon GFAP ak NeuN nan twa zòn nan ipokanp gòch la lè l sèvi avèk imunohistochimi ak analiz Western blotting.

Rezilta nou yo te montre ke konpare ak gwoup fals la, astwosit yo te aktive nan HIgroup la, yo te antre nan kouch piramidal CA1 (Figi 4A) ak CA3 (Figi 3A), ak newòn ki te antoure nan DG a (Figi 3B). Twòp astroglioz te lakòz plis ekstansyon nan pwosesis glial nan direksyon estrikti newòn nòmal, ki fòme yon rezo astrosit ki sanble ak miray ranpa (Figi 3A, B, ak 4A).

Anplis, iminoreaktivite GFAP (Figi 3C, D ak 4B, E) ak nivo pwoteyin yo te ogmante (P < 0.0 1; Figi 4E), pandan y ap iminoreaktivite NeuN te diminye (P < {{7} }.01 orP <0.001 Figi 3E, F ak 4C). Pou plis verifye fòmasyon glial mak, nou evalye nivo ekspresyon neurocanprotein ak iminoreaktivite nan thehippocampus (Figi 5A, B, ak 6A).

Rezilta imunofluoresans doub etikèt te revele diferans remakab nan entansite fliyoresan neurocan +/GFAP + immunostainingbetween HI ak gwoup sham (P <0.001, P <0.05, P <0.01; Figi 5G, H ak 6D), ki konsistan avèk rezilta Western blot (P< 0.01; Figure 6F).

SPC diminye astroglioz ak fòmasyon sikatris glial nan ipokanp la

Apre sa, etid nou an te envestige si SPC atenue scarformation glial. Konpare ak gwoup HI a, iminoreaktivite GFAP (Figi 5C, D, ak 6C) ak neurocan (Figi 5E, F, ak 6B) nan gwoup HIS la te byen kontwole nan ipokanp la (P <0.{{6} }1 oswa P <0.001).

Kontrèman, ekspresyon GFAP ak neurocan nan gwoup HIS + YC-1 yo te ogmante anpil konpare ak gwoup HIS la epi yo pa t diferan de gwoup HIS + YC-1 ak HI (P > 0.05; Figi 6E ak F).

Anplis de sa, iminopozitivite NeuN te regilasyon ak estrikti yo te parèt pi byen nan gwoup HIS la konpare ak gwoup HI a, ki te ranvèse pa YC -1 (Figi 3E, F, ak 4C).

For more information:1950477648nn@gmail.com