Èske Cistanche Deserticola ekstrè ankouraje repons iminitè?

Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Shuangshuang Feng a,1, Xiumei Yang a, Xiang Weng a,1, Bin Wang b, Ailian Zhang a,*

yon Xinjiang laboratwa kle nan resous byolojik ak Jenetik Jeni, kolèj nan syans lavi ak teknoloji, Xinjiang University, Urumqi, 830046, Xinjiang, Lachin

b Kle Laboratwa nan Viroloji Molekilè Medikal, Lekòl Syans Medikal Debaz, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai, 200032, Lachin

Enpòtans etnofarmakolojik:Polisakarid èrbal yo te ekspoze gwo potansyèl iminitè-amelyore. Adjuvant yo se yon zouti kle pou devlope vaksen efikas. Nan etid anvan nou an, yon polisakarid dlo-idrosolubl ekstrè soti nan bwaCistanchedeserticolaYC Ma te montre aktivite imunostimulatwa ki pisan.

Objektif etid la:Nan etid sa a, pwofil iminitè yo ak efikasite nan ekstrè akeuz nan kiltiveCistanchedeserticolaYo te envestige YC Ma (AECCD) sou sourit ICR kont ovalbumin (OVA). Nan eksperyans nan vitro, yo te evalye posib mekanis aktivasyon DC pa AECCD.

Materyèl ak metòd:AECCD yo te ekstrè lè l sèvi avèk dlo cho apre sa polisakarid yo brit yo te presipite pa etanòl. Sourit yo te premyèman vaksinen anba lar ak OVA (10 ug pou chak sourit) pou kont li oswa OVA (10 ug pou chak sourit) respektivman ki gen diferan dòz AECCD (200, 400, ak 800 ug pou chak sourit) nan jou 1 ak 14 ak grandè ak sinetik nan Lè sa a, yo te evalye antikò ak repons selilè yo.

Rezilta:AECCD te pwovoke repons IgG wòdpòte ak alontèm ak repons melanje Th1/Th2 ak nivo cytokines ki gen rapò ak Th (CD4 plis IL-4, CD4 plis IFN-, ak CD8 plis IFN-). Anplis, AECCD pwovoke fò selilè aiminitèreponskarakterize pa ogmante pwopagasyon splenosit ak repons selil T aktive. Miyò, AECCD siyifikativman amelyore spirasyon selil dendritik (DCs) ak inibit Tregs. Eksperyans vitro, Tès preliminè yo endike ke AECCD pwovoke deklanchman DC pa ankouraje fenotip spirasyon, seksyon cytokine, ak aktivite allostimulatory. Toll-like receptor 4 (TLR4) se te yon reseptè esansyèl pou DC yo dirèkteman mare AECCD. Inibitè NF-κB yo diminye nivo ekspresyon CD40, CD80, CD86, ak MHC-II ak pwodiksyon IFN-, TNF-, ak IL-6 atravè DCS.

Konklizyon:Finalman, rezilta sa yo sigjere ke AECCD te kapab pwovoke ki pisan ak dirab espesifik antijèniminitèrepons yoatravè deklanchman DC, ki te patisipe nan règleman an nan makè spirasyon ak ekspresyon cytokine atravè chemen NF-κB ki gen rapò ak TLR4-. Etid la endike ke AECCD se yon imunomodulateur potansyèl.

Mo kle:Polisakarid adjuvant Kiltive,Cistanchedeserticola, Immunomodulator, selil dendritik reseptè 4 ki tankou Toll, chemen siyal NF-κB

Cistanche deserticolaekstrè ankourajeiminitèrepons

1. Entwodiksyon

Anpil etid sigjere ke adjuvant yo ka amelyore efikasite vaksen kont divès maladi enfektye tankou VIH, COVID -19, grip, ak maladi aftye (Cao et al., 2020; Giuseppe et al., 2018). ). Adjuvant yo ka pwovoke diferan kalite ak grandèiminitèrepons yo, Se konsa, yon adjuvant byen chwazi ka pwovoke aiminitèreponsobligatwa pou yon patojèn oswa antijèn bay (Reed et al., 2013). Ekstrè èrbeuz natirèl yo te lajman itilize nan lavi chak jou oswa swen sante. Nan anpil ka, medikaman tradisyonèl Chinwa (TCM) ak konpozan aktif li yo, espesyalman miltip TCM adjuvant polisakarid ki sòti, siyifikativman amelyore efikasite vaksen yo. Polisakarid TCM (Advax™, polisakarid Astragalus, polisakarid Ginseng, polisakarid Lycium barbarum, ak polisakarid Ganoderma lucidum) te gen plizyè avantaj sou lòt adjuvan, tankou pi bon sekirite, byokonpatibilite, amelyorasyon iminitè fò, ak reyaktojenisite ki ba (Li ak Wang, Schijns2015). et al., 2020). Konpoze ak fòmilasyon ki baze sou polisakarid TCM, Se poutèt sa, gen potansyèl la kòm kandida adjuvant.

Cistanche deserticolaYC Ma (Roucongrong nan Chinwa) se yon medikaman tradisyonèl Chinwa ki anrejistre nan Farmakope Chinwa e li te itilize kòm yon manje tonik pou plizyè santèn ane nan Lachin (Chinese Pharmacopeia Komisyon, 1992). Etid famasi modèn yo te montre aplikasyon miltip famasi ak imunomodulateur li yo (Dong et al., 2007; Fu et al., 2017). Nan etid anvan nou an, polisakarid yo brit sòti nan bwaCistanchedeserticolaYC Ma ankouraje repons umoral ak selilè espesifik antijèn yo epi li kontwole spirasyon selil dendritik (DCs) (Zhang et al., 2018; Zhao et al., 2019). Sepandan, sovajCistanchedeserticolaYo te eksplore YC Ma twòp epi yo te mete yo nan lis kòm espès ki an danje.CistanchedeserticolaYC Ma te plante sou yon gwo echèl epi li lajman itilize nan devlopman ak aplikasyon resous TCM. Sepandan, potansyèl la adjuvant nan kiltiveCistanchedeserticolaYC Ma toujou pa klè.

DCS se regilatè esansyèl kont maladi enfeksyon. Apre DC yo aktive, molekil sifas yo ak sitokin pro-enflamatwa sou DC yo kominike avèk reseptè ki koresponn yo pou aktive selil T yo ak pwovoke repons antijèn espesifik ak pwodiksyon sitokin ki dirije adaptasyon.iminitèrepons yo(Banchereau ak Steinman, 1998). Li te rapòte ke toll-like reseptè 4 (TLR4) sou DCs fonksyon kòm yon reseptè polisakarid enpòtan (Park et al., 2014; Qi et al., 2016). Vreman vre, anpil polisakarid ka kominike dirèkteman oswa endirèkteman ak TLR4 sou DC yo aktive en faktè nikleyè kappa B a (NF-κB), ki ka pwovoke ekspresyon divès kalite jèn proenflamatwa tankou IFN-, TNF-, ak IL{{11} }} ak repons enflamatwa pou elimine ajan patojèn (Tian et al., 2019; Zhou et al., 2017; Zhu et al., 2013). Se poutèt sa, DCS ak NF-κB yo te etidye anpil kòm sib potansyèl pou terapi maladi.

Nan etid la, ak estrateji an vivo (sourit ICR), nou premye evalye efè iminostimulatwa ekstrè akeuz nan kiltive.CistanchedeserticolaYC Ma (AECCD) ak diferan dòz (ba, mwayen, ak wo) pou fè yoniminitèreponskont OVA epi eksplike fason an vitro pou aktive DC ak chemen ki gen rapò ak reseptè en. Avèk yon modèl sourit, nou revele ke AECCD ankouraje repons antikò alontèm ak ogmante tit IgG ak selilè.iminitèrepons. Sa ki enpòtan, AECCD pwovoke Th-asosye sitokin, espesyalman IFN-pwodiksyon, ki te mennen nan repons Th1 kont enfeksyon. Efè endiksyon an te byen korelasyon ak yon spirasyon DC amelyore ak diminye Tregs. Mekanistikman, AECCD ankouraje deklanchman DC atravè chemen NF-κB ki gen rapò ak TLR4-. An rezime, etid la konfime aktivite adjuvant ki pisan nan AECCD nan pwomosyon repons adaptasyon an. Etid la te mete yon fondasyon pou devlopman adjuvant polisakarid AECCD.

2. Materyèl ak metòd

2.1. Reyaktif

Ovalbumin (OVA), 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromur (MTT), polymyxin B (PMB), konkanavalin A (ConA), lipopolysaccharide (LPS), mitomicin C ak 3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine (TMB) yo te jwenn nan Sigma (USA). Serom fetal bovine (FBS) te achte nan men Endistri Byolojik. Twous konte selil-8 (CCK-8) te achte nan men Biosharp (Lachin). Kabrit anti-sourit IgG/IgG1/IgG2a-HRP konjige yo te soti nan Southern Biotech (USA). Enjekte Alum te soti nan Thermo Scientific Pierce (USA). GM-CSF te soti nan Peprotech (USA). Antikò ki gen etikèt fluorescent (anti-CD3-PE, anti-CD4-APC, anti-CD8a-FITC, anti-CD44-PE, anti-CD62L-PE, anti-MHCII -FITC/Percp-cy5.5, anti-IL-4-PE, anti-IFN– -PE, anti-CD86-APC, anti-CD40-FITC/PE, anti- CD11c-PE/FITC, anti-CD80-APC), Golgistop, Cytofix/Cytoperm, ak tanpon Perm/Wash te soti nan BD Bioscience (USA). Twous regilasyon T-selil tach la te soti nan eBiosciences (USA). TAK-242 te soti nan MedchemExpress (Shanghai, Lachin). PDTC te soti nan Beyotime Biotechnology (Lachin). Twous analiz koule milti-analit la te soti nan Biolegend (USA).

2.2. Preparasyon nan AECCD C. deserticola

(Yon echantiyon bon nimewo CD10041602) te idantifye pa Pwofesè Jiang He. AECCD te jwenn pa ekstraksyon dlo, presipitasyon etanòl, ak metòd deproteinization la ak kèk modifikasyon minè (Zhang et al., 2018). Yon ti tan, kiltiveCistanchedeserticolate premyèman ekstrè ak dlo anpil fwa ak Lè sa a, polisakarid brit yo te presipite lannwit lan lè yo ajoute etanòl dapre yon rapò volim nan 1:4. Lè sa a, yo te jwenn polisakarid brit yo deproteinized pa metòd la Sevag (Liu et al., 2012). Kontni an total de sik te detekte yo dwe 76.82 pousan ak metòd la anthrone-sulfuric asid (Dubois et al., 1951).

2.3. Enfrawouj analiz espektroskopik

Nan bi pou yo analize gwoup fonksyonèl òganik, AECCD ak KBr te bourade nan granules pou mezi spectre enfrawouj (IR). Yo te detèmine spectre IR echantiyon yo nan 4000-400 cm-1.

Cistanchezèbankourajeiminitèrepons

2.4. Eksperyans nan vivo

2.4.1. Vaksinasyon bèt

Sourit C57BL/6 fi ak sourit ICR (6 semèn fin vye granmoun) ki soti nan Xinjiang Medical University (Urumqi, Lachin) te aklimate pou 3 jou. Tout pwosedi eksperimantal yo te fèt an konfòmite ak règleman Komite sou Etik Eksperyans Animal nan Xinjiang kle laboratwa nan resous byolojik ak Jeni Jenetik nan Xinjiang University (BRGE-AE001).

Sourit yo te vaksen anba lar ak OVA pou kont li oswa OVA ak konsantrasyon diferan nan AECCD ak ranfòse nan Jou 14 dapre diferan gwoup jan sa a (6 sourit nan chak gwoup): Gwoup kontwòl (0.9 pousan NaCl), gwoup OVA ( 10 ug OVA), gwoup AECCD-H (AECCD 800 ug), OVA/ AECCD-L gwoup (10 ug OVA, AECCD 200 ug), OVA/AECCD-M gwoup (10 ug OVA, AECCD 400 ug). ), OVA/AECCD-H gwoup (10 ug OVA, AECCD 800 ug), ak OVA/Alum gwoup (10 ug OVA, Alum100 ug). Yo te enjekte fòmilasyon vaksen nan 100 μL 0.9 pousan NaCl nan de sit diferan (50 μL nan chak sit) nan po dèyè chak sourit. Apre vaksinasyon an, echantiyon san yo te kolekte nan plexus retro-orbital la, epi yo te achte sera epi estoke nan -80 ◦C pou plis analiz deteksyon IgG. Pwopagasyon splenosit ak deteksyon cytokine, selil T, makè sifas DCs, ak Tregs yo te fèt apre menm pwotokòl vaksinasyon an.

2.4.2. Analiz antikò

Tit IgG nan serom kont OVA yo te detèmine pa ELISA nan jou 14, 28, 42, ak 56 apre vaksinasyon prensipal mansyone deja (Zhang et al., 2018). Yo te mezire IgG1 ak IgG2a nan Jou 21. Yo te jwenn absorpsyon nan 450 nm / 630 nm lè l sèvi avèk yon lektè (Bio-Rad, USA). Rezilta repons antikò yo eksprime kòm tit IgG ak izotip IgG1 ak IgG2a yo eksprime kòm absorbans korespondan.

2.4.3. Esè pwopagasyon splenosit

Yo te fè tès pwopagasyon splenosit nan sourit ak yon twous tès CCK-8 dapre enstriksyon manifakti a. Nan jou 21 apre premye vaksinasyon an, splenosit yo te izole nan larat nan sourit vaksen yo ak eritrosit yo te lysed apre fanm k'ap pile. Splenosit (1 × 106 selil/byen) yo te ankouraje ak OVA (10 ug/mL), OVA 323-339 (10 ug/mL), ConA (10 ug/mL), ak LPS (10 ug/mL) pou de jou ak selil vid yo te itilize kòm kontwòl la. Aktivite pwopagasyon an te eksprime kòm endèks eksitasyon (SI), ki te kalkile rapò absòbe yon selil stimulé ak yon selil ki pa stimule anba longèdonn 570/630 nm.

2.4.4. Analiz de fenotip lenfosit T nan drenaj nœuds lenfatik ak larat

Sispansyon splenosit nan nœuds lenfatik ak larat nan sourit vaksen yo te jwenn dapre metòd ki mansyone pi wo a (Zhang et al., 2018). Apre lave yo, echantiyon yo te tache (1 × 106 selil/pi) pou 30 minit ak antikò pou makè sifas yo, ki gen ladan anti-CD3-PE, anti-CD4-APC, anti-CD8a-FITC, anti-CD44-PE, ak anti-CD62L-PE. Nivo lenfosit T yo te egzamine pa sikometri koule. Rezilta fenotip T-lenfosit yo eksprime kòm pousantaj CD4 plis selil T (pousan), CD8 plis selil T (pousan), CD44 plis selil T (pousan) ak CD62L plis (pousan) selil T.

2.4.5. Flow-cytometric analiz de nivo cytokine

Nan objektif analiz tach cytokine intraselilè, lenfosit larat yo te separe ak trete nan yon sispansyon sèl-selil nan Jou 21 apre premye vaksinasyon an (Zhang et al., 2017). Yo te enkube echantiyon (2 × 106 selil/mL) ak OVA (10 ug/mL) pou 4 èdtan. Apre sa, Golgistop te ajoute pou 12 èdtan. Lè sa a, echantiyon yo te lave, bloke, ak tache ak anti-CD4-APC oswa anti-CD8a-FITC antikò pou 30 minit. Apre fikse ak pèmeabilizasyon ak Cyto fix/Cytoperm, echantiyon yo te make ak anti-IL-4-PE oswa anti-IFN--PE. Yo te fè analiz koule pou detèmine nivo cytokine.

2.4.6. Estimasyon deklanchman DC ak selil Treg nan yon larat

Pou envestige si DCs ak Tregs jwe yon wòl nan amelyore aiminitèreponskont OVA, nan Jou 3 apre premye vaksinasyon an, lenfosit larat ki soti nan sourit vaksen yo te rekòlte pou evalyasyon an nan spirasyon DC (Zhang et al., 2017). Selil yo te bloke respektivman ak enkubasyon ak anti-CD11c-PE/FITC, anti-CD40-PE, anti-CD86-APC, anti-CD80-APC, ak anti-MHCII- FITC pou 30 min. Selil yo te analize pa sikometri koule. Nan jou 21 apre premye vaksinasyon an, Tregs yo te teste ak twous tach sourit T-selil la. Splenosit yo te tache ak anti-CD4-FITC pou makè sifas selil yo, ki te swiv pa tach entraselilè ak anti-CD25-APC ak anti-Foxp3-PE dapre enstriksyon manifakti a. Nivo CD4 plis CD25 plis Foxp3 plis selil yo te detèmine pa sikometri koule.

Cistanche plant ekstrè ankouraje yoniminitèrepons

2.5. Eksperyans vitro

2.5.1. Jenerasyon DC, viabilite selil, ak nivo endotoxin

DCs sòti nan mwèl zo sourit C57BL/6 yo te jwenn dapre metòd ki dekri deja (Inaba et al., 1992). Yon ti tan, selil yo te kiltive ak RPMI-1640 mwayen konplè (20 ng/mL GM-CSF ak 5 ng/mL IL-4). Apre sis jou, tout selil sispann yo te kolekte kòm DCs frelikè pou tès ki vin apre yo. Pousantaj CD11c plis DC nan selil ki pa aderan yo te detèmine pou 94 pousan pa sikometri koule.

Yo te detekte viabilite selil DC ak splenosit ki soti nan sourit sou AECCD ak twous CCK{{0}} dapre enstriksyon manifakti a. Selil ki soti nan DCS ak splenosit yo te jwenn ak Lè sa a, ankouraje ak konsantrasyon diferan nan AECCD (0, 10, 100, 400, 800, ak 1600 ug / mL). Vitabilite selil la te eksprime kòm rapò a nan absorpsyon nan gwoup la trete ak absòbe a nan gwoup la kontwòl) × 100 pousan.

Nan bi pou yo ekskli efè endotoxin nan AECCD, apre AECCD (100, 200 ak 400 ug/mL) ak LPS (100 ng/mL) yo te pretrete ak PMB (100 ug/mL) pou 60 min, DCs (5 × 105 selil/mL) yo te enkube ak AECCD pretrete (100, 200 ak 400 ug/mL) ak LPS pou 12 èdtan. Apre tretman ki anwo a, yo te evalye nivo CD40, CD86, CD80, ak MHCII.

2.5.2. Analiz de fenotip DC

Nivo molekil costimulatory yo te detèmine pou evalye spirasyon atravè eksperyans nan vitro. Nan sis jou, DC yo te trete ak AECCD (20, 100, 200 ak 400 ug/mL) oswa LPS (100 ng/mL) pou 12 èdtan. Lè sa a, DC yo te tache ak molekil sifas ak analize pa sikometri koule.

2.5.3. Pwodiksyon Cytokine pa DCs nan vitro

Sipènatant kilti selil la te kolekte pou mezire nivo cytokin yo lè l sèvi avèk yon twous ELISA oswa twous analiz milti-analit ak metòd CBA. Tout etap eksperimantal yo te fèt dapre enstriksyon manifakti a.

2.5.4. Reyaksyon lenfosit melanje alojenik (MLR)

Splenosit ki soti nan sourit BALB/c yo te jwenn aseptik nan mwayen RPMI - 1640 (Zhang et al., 2018). Ki gen matirite C57BL/6 DCs (ki gen matirite nan prezans diferan konsantrasyon nan AECCD oswa LPS) yo te pretrete ak 50 ug / mL Mitomycin C pou 60 min nan 37 ◦C. Apre lave, DC yo te melanje ak splenosit dapre yon rapò 1:5 oswa 1:10 pou 2 jou. Pwopagasyon selil yo te detèmine pa tès MTT.

2.5.5. Eksperyans netralizasyon inibitè

Pou mennen ankèt sou chemen NF-κB ki gen rapò ak TLR4-, DC yo kolekte yo te chaje sou yon plak 24-byen epi yo te pretrete yo ak TAK-242 (5 μM) oswa PDTC (5 μM) , respektivman. Apre 1-enkubasyon, selil yo te ankouraje ak diferan konsantrasyon AECCD (100, 200 ak 400 ug/mL) oswa LPS (100 ng/mL) pou 24 èdtan. Lè sa a, nivo ekspresyon molekil sifas ak sitokin nan supernatant kilti yo te detèmine dapre metòd ki dekri pi wo a.

3. Rezilta yo

3.1. espektroskopi FTIR

Pwen absòpsyon prensipal AECCD nan Figi 1 yo te pik absòpsyon karakteristik estrikti glikozidik ki koresponn ak vibrasyon etann O–H nan 3342.95 cm− 1. Gwoup la nan 2933.54 cm− 1 te gen absòpsyon fèb karakteristik C-H etann vibrasyon. Pik la nan 1657.39 cm− 1 te atribiye a vibrasyon flexural O–H. Absòpsyon nan 1411.00 cm− 1 te atribiye a O–H oswa C–H ak C–O vibrasyon etann. Pik yo nan 1018.38 cm−1 te endike tou vibrasyon band glikozidik CO ak C–O–C.

Fig. 1. Spectre FTIR nan AECCD.

3.2. OVA-espesifik repons antikò serik

Sera nan sourit iminize yo te teste pou tcheke prezans antikò ki pwodui (IgG, IgG1, ak IgG2a) kont OVA. Jan yo montre nan Fig. 2A, tit IgG nan sourit vaksinen ak OVA/AECCD-M te pwovoke IgG total ki pi wo (tit: 220,000, 25{{30}}, 000 ak 250,000) parapò ak gwoup OVA (tit: 100,000, 100,000 ak 120,000), e li te pre gwoup Alum (tit: 250,000, 250,000 ak 270,000) nan Jou 28, 42 ak 56 apre vaksinasyon prensipal la. OVA/AECCD-M/H siyifikativman amelyore nivo IgG1 konpare ak gwoup OVA (P <0.05) ak="" diferans="" ki="" genyen="" ant="" gwoup="" ova/aeccd-m/h="" ak="" gwoup="" alum="" pa="" t="" enpòtan="" (p=""> 0.05). OVA / AECCD-M / H tou ansibleman amelyore nivo IgG2a konpare ak gwoup OVA ak gwoup Alum (Fig. 2B ak C) (P <0.05). nivo="" igg2a="" amelyore="" ta="" ka="" anpeche="" yon="" maladi="" ki="" mande="">iminitèrepons.

Fig. 2. Tit antikò espesifik OVA ak izotip IgG nan serom. Yo te kolekte echantiyon serom apre vaksen prensipal ak rapèl pou antikò ak ELISA. (A) Yo te evalye tit IgG nan serom pisin nan jou 14, 28, 42, ak 56 apre premye vaksinasyon an. (B-C) IgG1 ak IgG2a yo te mezire nan Jou 21 apre premye vaksinasyon an. Done yo prezante kòm mwayen ± SD (n=6). *P <0.05 konpare="" ak="">

3.3. Repons iminitè selilè

Pwopagasyon lenfosit larat te envestige pa tès MTT anba restimulation ak OVA oswa OVA {{0}}. Analiz pwoliferasyon te revele ke OVA/AECCD-M tou de ogmante anpil pwopagasyon splenosit apre ekspoze a OVA, OVA 323-339, Con A, oswa LPS parapò ak gwoup OVA. OVA ak OVA 323-339 siyifikativman amelyore repons pwopagasyon ki pi wo pase sa nan gwoup Alum (figi 3) (P <>

Fig. 3. Pwopagasyon splenosit sou tretman AECCD nan vivo. Splenosit yo te re-stimile ak OVA, OVA323-339, ConA oswa LPS epi yo te mezire pa metòd MTT nan Jou 21 apre premye iminisyon an. Pwopagasyon selil yo te montre kòm endèks eksitasyon (SI): (A–B) Endèks eksitasyon OVA ak OVA 323-339. (C–D) Endèks stimulation nan ConA ak LPS. Done yo prezante kòm mwayen ± SD (n=5). *P<0.05, **p="" <="" 0.01,="" and="" ***p="" <="" 0.001="" compared="" to="" ova;="" #p="" <="" 0.05="" and="" ##p="" <="" 0.01="" compared="" to="" ova/="">

3.4. Aktivasyon nan ti gwoup selil T nan drenaj gangliyon lenfatik ak larat

Nœuds lenfatik ak larat nan sourit vaksen yo te rekòlte pou detekte selil T nan Jou 21 apre vaksinasyon prensipal la. Pousantaj selil T (CD4 plis, CD8 plis, CD44 plis selil T) ki soti nan nœuds lenfatik nan gwoup OVA/AECCD-M te siyifikativman pi wo pase gwoup OVA ak gwoup Alum (Fig. 4A-D) (P). < 0.05).="" pousantaj="" selil="" t="" yo="" (cd4="" plis,="" cd8="" plis,="" cd44="" plis,="" ak="" cd62l="" plis="" selil="" t)="" nan="" yon="" larat="" te="" siyifikativman="" pi="" wo="" pase="" sa="" yo="" ki="" nan="" gwoup="" ova="" (fig.="" 4e-j)="" (p=""><0.05). konklizyon="" sa="" yo="" endike="" ke="" aeccd="" ankouraje="">iminitèrepons.

Fig. 4. Nivo sou-ansanm selil T nan drenaj nœuds lenfatik ak larat nan vivo. Nan jou 21 apre premye vaksinasyon an, selil ki soti nan gangliyon lenfatik ak larat yo te itilize pou detekte selil T pa sikometri koule. (A–D) Pousantaj CD4 plis, CD8 plis ak CD44 plis selil T nan nœuds lenfatik yo. (E–J) Pousantaj CD4 plis , CD8 plis , CD44 plis ak CD62L plis selil T nan yon larat. Done yo prezante kòm mwayen ± SD (n=5). *P <{{10}}.05, **p=""><0.01, ak="" ***p=""><0.001 konpare="" ak="" ova;="" #p=""><0.05 ak="" ##p=""><0.01 konpare="" ak="">

3.5. Sitokin sekrete pa splenosit restimulated nan vivo

'Th1/Th2 sitokin ki soti nan larat sourit vaksen yo te detèmine pa tach intraselilè nan Jou 21 apre premye vaksinasyon an. Nivo CD4 plis IL-4, CD4 plis IFN-, ak CD8 plis IFN- nan gwoup OVA/AECCD-M yo te siyifikativman pi wo pase sa nan gwoup OVA ak gwoup Alum (P <0 .05,="" fig.="" 5).="" diferans="" yo="" endike="" ke="" aeccd="" te="" kapab="" ankouraje="" th1/="" th2="" repons,="" espesyalman="" t-selil="">iminitèrepons.

Fig. 5. Analiz cytokine antijèn espesifik nan selil T nan vivo. Splenosit ki soti nan sourit vaksen yo te egzamine nan Jou 21 apre premye vaksinasyon an pa tach intraselilè cytokine. (A) Pousantaj CD4 plis IL-4. (B–C) Pousantaj CD4 plis IFN- ak CD8 plis IFN-. Done yo prezante kòm mwayen ± SD (n=5). *P <{{10}}.05 ak="" **p=""><0.01 konpare="" ak="" ova;="" #p=""><0.05 konpare="" ak="">

3.6. Matirite DC ak Tregs nan vivo

Aktivasyon DC ka kòmanse iminite adaptasyon. Efè AECCD sou spirasyon DC nan sourit vaksen yo te evalye nan 3yèm jou apre premye vaksinasyon an. OVA/AECCD-M pwovoke pi wo nivo CD40, CD80, CD86, ak MHCII sou DC yo parapò ak gwoup OVA a, ak diferans ki genyen ant OVA/AECCD-M. gwoup ak gwoup Alum te enpòtan (Fig. 6A-D) (P <0.05). frekans="" cd4="" plis="" cd25="" plis="" foxp3="" plis="" tregs="" nan="" gwoup="" ova/aeccd-m="" te="" dramatikman="" pi="" ba="" pase="" sa="" nan="" gwoup="" ova="" (figi="" 6e)="" (p=""><0.05). done="" sa="" yo="" sijere="" ke="" aeccd="" ta="" ka="" aktive="" dcs="" ak="" pi="" ba="" frekans="">

Fig. 6. Efè AECCD sou spirasyon DC ak Tregs nan vivo. Splenosit ki soti nan sourit ICR yo te itilize pou detekte molekil costimulatory sou DCs ak Tregs nan jou 3 oswa 21 apre premye vaksinasyon an. (A–D) Pousantaj CD40, CD86, CD80, ak MHCII sou CD11c plis DCs. (E) Pousantaj CD4 plis CD25 plis Foxp3 plis Tregs. Done yo prezante kòm mwayen ± SD (n {{10}}). *P <0.05 ak="" **p=""><0.01 konpare="" ak="" ova;="" #p=""><0.05 ak="" ##p=""><0.01 konpare="" ak="">

3.7. Esay nan sitotoksisite ak kontaminasyon endotoksin

Apre tretman ak diferan konsantrasyon AECCD pou 2 jou, yo te itilize selil DCS ak splenosit sourit yo pou detèmine sitotoksisite potansyèl ak twous CCK-8 la. Pa te gen okenn repons siyifikatif pwopagasyon inibit nan viabilite selil DCs ak splenosit konpare ak gwoup kontwòl yo (figi 7A-B) (P> 0.05). Rezilta sa yo montre ke AECCD nan konsantrasyon 10-1600 ug/mL pa montre okenn sitotoksisite enpòtan nan DCs ak splenosit konpare ak kontwòl la (P> 0.05). Kidonk, konsantrasyon AECCD nan eksperyans ki vin apre yo te mete anba 1600 ug/mL.

Pou eskli entèferans nan kontaminasyon endotoxin nan efè yo nan AECCD sou aktivasyon DC, PMB, yon antibyotik lajman rekonèt akòz efè LPS-netralize li yo, yo te itilize pou eskli kontaminasyon endotoxin (Morrison and Jacobs, 1976). Jan yo montre nan Figi 7C-F, CD40, CD80, CD{86 oswa MHC-II nivo ekspresyon nan DC trete AECCD an prezans PMB pa montre okenn chanjman enpòtan ( P > 0.05). Sepandan, yon bès dramatik nan CD40, CD80 CD 86, ak nivo ekspresyon MHC-II yo te obsève nan DCs LPS-trete nan prezans PMB (P <0.001). rezilta="" sa="" yo="" te="" demontre="" ke="" aeccd="" te="" san="" kontaminasyon="">

Fig. 7. Sitotoksisite ak efè PMB sou spirasyon DC pwovoke sou AECCD. (A-B) DCS ak splenosit sourit yo te kiltive nan prezans AECCD pou 2 jou pou detèmine viabilite selil la ak metòd MTT la. (C–F) DC yo te enkube pou 12 èdtan ak AECCD oswa LPS pretrete nan prezans / absans PMB pou 6 0 min. Pousantaj CD40, CD80, CD86, ak MHCII sou CD11c plis DC yo te detèmine. Done yo prezante kòm mwayen ± SD (n =3). **P <0.01 ak="" ***p=""><0.001 konpare="" ak="" gwoup="" ak="">

3.8. Matirite fenotip ak deklanchman fonksyonèl DCs nan vitro

Ki baze sou eksperyans vaksinasyon ki anwo yo, yo te eksplore spirasyon fenotip DC yo apre tretman ak AECCD an vitro. Nan jou 6, DCs frelikè yo te ankouraje ak yon konsantrasyon bay nan AECCD oswa LPS pou analize molekil sifas yo. AECCD pwovoke spirasyon selil ki karakterize pa yon ogmantasyon enpòtan nan pousantaj CD4 0, CD80 CD 86, ak MHC II nan yon fason ki depann de dòz (P <0.001, fig.="" 8a-d).="" yon="" spirasyon="" fenotip="" ki="" sanble="" nan="" dc="" yo="" te="" obsève="" tou="" apre="" eksitasyon="" an="" ak="" 100="" ng="" ml="" lps.="" done="" analiz="" yo="" revele="" ke="" aeccd="" amelyore="" spirasyon="">

Soti nan rezilta ki anwo yo, AECCD amelyore spirasyon fenotip DC yo. Yo nan lòd yo obsève efè a nan AECCD sou fonksyon DC nan vitro, kapasite nan AECCD-trete DCs nan estimile alogeneic T selil pwopagasyon nan yon MLR nan yon rapò DC-splenosit nan 1: 5 oswa 1: 1 0 te. envestige. DCs trete ak diferan konsantrasyon nan AECCD pwovoke siyifikatif pwopagasyon selil T konpare ak trete-DCs (Fig. 8E-F) (P <0.001). matirite="" dc="" te="" kapab="" pwovoke="" pwodiksyon="" cytokines.="" apre="" sa,="" supernatant="" dc="" yo="" trete="" ak="" aeccd="" oswa="" lps="" yo="" te="" detekte="" pa="" twous="" elisa.="" nivo="" il-12="" ak="" tnf-="" nan="" supernatant="" dc="" yo="" te="" ogmante="" dramatikman="" nan="" yon="" fason="" ki="" depann="" de="" dòz="" la="" (p=""><0.001, fig.="">

Fig. 8. Matirite fenotipik ak aktivasyon fonksyonèl DC yo sou tretman AECCD an vitro. (A–D) Nan jou 6, DC yo te trete ak yon konsantrasyon bay nan AECCD oswa LPS pou 12 èdtan. Selil yo te tache ak antikò ak detèmine pa sikometri koule. Entansite fluoresans mwayen (MFI) CD40, CD80, CD86 ak MHCII sou CD11c plis DCs. (E-F) C57BL/6 DCs trete ak diferan konsantrasyon nan AECCD oswa LPS yo te melanje ak splenosit soti nan sourit BALB / c nan yon rapò 1:5 oswa 1:10 nan yon MLR pou 2 jou. Pwopagasyon selil yo te detèmine pa tès MTT. (G–H) Supernatant kilti DC yo te teste IL-12 ak TNF-a pa ELISA kit. Done yo prezante kòm mwayen ± SD (n =3). *P <0.05, **p=""><0.01, ak="" ***p=""><0.001 konpare="" ak="" dc="" ki="" pa="" trete;="" #p=""><0.05 konpare="" ak="">

3.9. TLR4, yon reseptè pou AECCD sou DCs

DCS ka kòmanse siyal selilè pa reseptè manbràn. Poudetèminewòl nan TLR4 nan patisipe nan AECCD-trete DC spirasyon, apre pre-tretman an ak TLR4 inibitè TAK -242, DCs yo te ankouraje ak yon konsantrasyon bay nan AECCD, ak Lè sa a, estati a aktivasyon nan DC yo te egzamine pa sitomèt koule. . Nivo ekspresyon cytokines nan supernatant kilti yo te analize pa yon twous analiz koule milti-analit. Regilasyon CD40, CD80, CD86, ak MHC-II pwovoke pa AECCD te siyifikativman anpeche pa bloke chemen TLR4 (P <0.01, fig.="" 9a-d).="" anplis,="" konpare="" ak="" kontwòl="" ki="" pa="" trete,="" bloke="" tlr4="" ak="" tak="" -242="" te="" gen="" yon="" efè="" anpèchman="" ki="" pi="" enpòtan="" sou="" pwodiksyon="" ifn-,="" tnf-,="" ak="" il-6="" (p=""><0.01, fig.="" 9e-g)="">

Fig. 9. Aktivasyon siyal TLR4 nan DC trete AECCD. Apre DCs frelikè yo te trete ak AECCD nan absans oswa prezans TAK-242 pou 12 èdtan, yo te egzamine spirasyon fenotipik pa sitomèt koule ak nivo sitokin nan supernatant yo te pa metòd CBA. (A–D) Pousantaj CD40, CD80, CD86 ak MHCII sou CD11c plis DCs. (E–G) Nivo IFN-, TNF- ak IL-6. Done yo prezante kòm mwayen ± SD (n=3). **P <0.01 ak=""><0.001 compared="" to="" the="" group="" with="">

3.10. Aktivasyon DC pa AECCD atravè chemen NF-κB ki gen rapò ak TLR4-

Pou mennen ankèt sou si wi ou non ekspresyon molekil sifas ak sitokin nan DC trete AECCD yo te reglemante pa NF-κB apre DCs frelikè pretrete ak inibitè NF-κB PDTC yo te ankouraje ak AECCD pou 12 èdtan, nivo ekspresyon molekil costimulatory ak sitokin yo te mezire pa sitomèt koule. Nivo CD40, CD80 CD86, ak MHC-II pwovoke pa AECCD te siyifikativman diminye konpare ak kontwòl la pa trete lè yo bloke chemen NF-κB ak inibitè korespondan yo (P < 0.001,="" fig.="" 10a–d).="" ansanm,="" ekspresyon="" ifn-,="" tnf-="" ak="" il-6="" te="" tou="" siyifikativman="" anpeche="" pa="" pdtc="" (p=""><0.05, fig.="">

Figi 10. Patisipasyon NF-κB nan deklanchman DC AECCD-induit. DC yo te trete ak AECCD nan absans oswa prezans PDTC pou 24 èdtan. (A–D) Pousantaj CD40, CD80, CD86, ak MHCII sou CD11c plis DC yo te detèmine pa sikometri koule. (E–G) Nivo IFN-, TNF-, ak IL-6 nan supernatant la te detèmine pa metòd CBA. Done yo prezante kòm mwayen ± SD (n=3).*P <0.05, **p=""><0.01, ak="" ***p=""><0.001 konpare="" ak="" gwoup="" la="" ak="">

4. Diskisyon

Kounye a, yo te envestige divès polisakarid ki soti nan TCM kòm adjuvant pou vaksen moun ak bèt (Sun et al., 2018; Rey-Ladino et al., 2011). Nan etid sa a, efè iminitè-modulasyon AECCD ak mekanis deklanchman prensipal DC yo te envestige an vivo ak in vitro pa yon seri eksperyans yo nan lòd yo evalye adaptasyon an.iminitèreponskont OVA ak estati aktivasyon DCS. Eksperyans nan vivo yo endike ke AECCD konsiderableman ankouraje pwodiksyon OVA-espesifik IgG ak IgG izotip, amelyore pwopagasyon splenosit, ak pwovoke deklanchman selil T ak sitokin (IL-4/IFN-). Anplis, AECCD amelyore spirasyon DC ak ekspoze Tregs diminye. Konklizyon sa yo sigjere ke fonksyon AECCD kòm yon adjuvant efikas te reyalize pa ankouraje spirasyon DC ak anpeche Tregs. Eksperyans vitro yo te endike ke AECCD te ankouraje spirasyon fenotip DCs, seksyon cytokine, ak aktivite allostimulatory atravè chemen NF-κB ki gen rapò ak TLR4-. Rezilta eksperimantal sa yo te endike ke AECCD te gen gwo potansyèl kòm yon stimulateur iminitè-amelyore.

Chak adjuvant gen karakteristik iminitè inik kont diferan antijèn, ki endike ke adjuvant yo gen potansyèl aplikasyon nan diferan maladi. Premyèman, yo te teste pwopriyete adjuvant nan ko-administrasyon AECCD ak OVA lè yo detèmine efè yo sou adaptasyon.iminitèreponsnan sourit. Anpil etid te montre ke aktivite iminitè-stimulation yo te dirèkteman pwopòsyonèl ak dòz la nan yon seri sèten (Li et al., 2020; Reed et al., 2020; Zhang et al., 2017). Menm jan an tou, nan etid la, analiz la nan antikò ak izotip revele ke AECCD nan yon seri dòz sèten amelyore repons OVA-espesifik IgG, IgG1, ak IgG2a e ke dòz medyòm nan AECCD te dòz la pi bon. Nan eksperyans ki vin apre yo, nou sitou envestige efè stimulation AECCD nan yon dòz medyòm optimal. Dòz mwayen AECCD ogmante siyifikativman repons pwopagasyon splenosit nan sourit vaksinen yo, sa ki endike ke AECCD ankouraje selilè.iminitèrepons yokont OVA. Rezilta sa yo sijere ke AECCD amelyore tou de umoral ak selilèiminitèrepons yo, ki te asosye ak potansyèl adjuvant.
Aktivite sibstansyèl T-selil la ka fezab pou elimine maladi. Pandan yoniminitèrepons, selil T aktive ka rive nan tisi lenfoyid segondè, ki gen ladan larat ak gangliyon lenfatik (Steinman, 2012). Mwayen dòz AECCD a efektivman amelyore efikasite vaksen an paske li ka amelyore siyifikativman repons selil T CD4, CD8, CD44, ak CD62L nan drenaj nœuds lenfatik ak larat. Selil T CD8 aktive yo te sekrete IFN-. Selil T CD4 pwolifere yo te diferansye nan selil Th1 ak selil Th1. Selil Th1 sekrete Th1 cytokine pou estimile pwopagasyon lenfosit ak Th2 selil sekrete Th2 cytokine pou amelyore pwodiksyon antikò (Seder et al., 2008). Nan etid la, nivo CD4 plis IL-4, CD4 plis IFN-, ak CD8 plis IFN- te ogmante pa AECCD nan yon dòz mwayen. AECCD pwovoke yon repons ekilibre Th1/Th2 ak dirije aiminitèreponspa chanje rezo cytokin la.

Yon adjuvant ta dwe pwovoke iminite espesifik ak kontwole rezilta a naniminitèreponspa reglemante estati DC yo nan plizyè pwen (Carrera Silva et al., 2013). Ekspresyon molekil sifas sou DC se yon endikatè enpòtan pou evalye spirasyon DC epi li tipikman korelasyon ak diferansyasyon lenfosit T (Steinman, 2012). Nan etid sa a, AECCD amelyore ekspresyon de molekil costimulatory ak fasilite spirasyon DC lè li te itilize kòm yon adjuvant kont OVA. Sa a ka youn nan fason ke AECCD ankouraje umoral ak selilèiminitèrepons yo. Pandan se tan, AECCD te diminye tou frekans CD4 plis CD25 plis Foxp3 plis Tregs, ki te bay yon iminite ekilibre apre vaksinasyon an. Rezilta nou yo te sipòte rezilta ki sot pase yo ke divès polisakarid ki soti nan TCM yo te regilatè spirasyon DC (Bo et al., 2019; Li et al., 2015; Zhu et al., 2016).

Aktivasyon nan adaptasyoniminitèrepons yopa adjuvant polisakarid se medyatè prensipalman atravè rekonesans yo pa reseptè espesifik DCs (Akira, 2004). DCs aktive atravè TLR4-chemen ki gen rapò ka sekrete divès imunomodulateur kòm medyatè kritik kont enfeksyon (Akira, 2007). Se poutèt sa, nan eksperyans ki vin apre yo, nou preliminè eksplore mekanis molekilè nan efè a stimulation nan AECCD sou DCs nan vitro. Yo nan lòd yo obsève sitotoksisite nan AECCD, yo te detèmine viabilite selil DCs ak splenosit soti nan sourit. AECCD nan 10-1600 ug/mL pa montre okenn sitotoksisite nan DCs ak splenosit. Pou eskli kontaminasyon LPS, nou te pretrete AECCD ak PMB. Nivo ekspresyon CD40, CD80 CD86, ak MHC-II nan DC trete AECCD pa te diminye, men PMB efektivman anpeche ekspresyon molekil costimulatory nan DC trete LPS. Sa a te demontre ke AECCD te gratis nan kontaminasyon endotoxin. Apre sa, yo te eksplore estati deklanchman DCs. Menm jan ak DC trete LPS, nan yon fason ki depann de dòz, DC trete AECCD ogmante nivo CD40, CD80 CD86, ak MHC II ansanm ak pwodiksyon cytokine pro-enflamatwa a, ki te yon paramèt spirasyon fonksyonèl DC yo. Nan yon MLR, yo te evalye kapasite pwopagasyon selil T alojenik nan DCs trete AECCD. AECCD ta ka prime ak aktive selil T alojenik yo. DC yo te premyèman pre-trete ak Mitomycin C ak Lè sa a, byen lave yo retire reyaktif sa a, kidonk efè AECCD sou DC yo pa t 'gen chans yo dwe atribiye a aktivite mitogenic la. Done eksperimantal yo te revele ke spirasyon fenotip DC ak aktivasyon fonksyonèl ta ka atribiye a eksitasyon AECCD.

Yon kantite polisakarid TCM ta ka ankouraje spirasyon DCs atravè TLR4. NF-κB kòm yon manm nan TLR4-chemen en ki gen rapò jwe yon wòl enpòtan nan reglemante fenotip ak fonksyonèl spirasyon DC yo ak pwovoke ekspresyon divès jèn ki enplike nan.iminitèrepons yo(Qi et al., 2016; Re ak Strominger, 2001; Wei et al., 2016; Zhu et al., 2013). Atravè eksperyans in vitro, nou te jwenn ke AECCD ankouraje spirasyon DC e ke TAK-242 (inibitè TLR4) ak PDTC (inibitè NF-κB) diminye nivo ekspresyon CD40, CD80, CD86, ak MHC. -II ak nivo sekresyon IFN-, TNF-, ak IL-6 sou AECCD-trete DCs, Konklizyon sa yo endike ke TLR4 ak NF-κB te enplike nan AECCD-pwovoke DC aktivasyon ak sekresyon cytokine. Rezilta sa yo te konsistan avèk etid deja rapòte paske AECCD kòm yon adjuvant amelyore vize antijèn sou DC yo.

An rezime, rezilta nou yo te montre ke AECCD pwovoke dirab ak repons Th1/Th2, espesyalman T-selil medyatè.iminitèreponskont OVA. AECCD te aktive DC yo atravè chemen NF-κB TLR4-medyatè, kidonk amelyore pwodiksyon iminomodulatè ak pwopagasyon selil T allojenik yo. AECCD ka itilize kòm yon adjuvant efikas nan devlopman vaksen. Sepandan, yo pral fè yon analiz egzat eleman pou detèmine ki eleman nan DC aktive AECCD. Avèk yon konsantre sou mekanis yo konsènan fason AECCD ranfòse iminojenisite, ki gen ladan optimize nan fòmilasyon adjuvant ak wout nan administrasyon vaksen an, nou pral plis eksplore eleman imunomodulateur yo ak pwopriyete yo adjuvant espesifik nan AECCD nan bi pou yo desine adjuvant vaksen efikas kont maladi enfeksyon.

Cistanche benefis deserticolaankouraje yoniminitèrepons

Kontribisyon otè

Akizisyon, analiz, ak entèpretasyon done: Shuangshuang Feng, Xiumei Yang, Xiang Weng. Ekri orijinal bouyon: Shuangshuang Feng, Xiang Weng.

Akizisyon finansman:Ailian Zhang.

Envestigasyon:Ailian Zhang.

Metodoloji:Ailian Zhang, Bin Wang.

Sipèvizyon:Ailian Zhang.

Deklarasyon enterè konpetisyon

Otè yo pa gen okenn konfli enterè ki gen rapò ak etid sa a.

Rekonesans

Travay sa a te sipòte pa Fondasyon Nasyonal Syans Natirèl Lachin nan [nimewo sibvansyon 31960164 ak 31660259] Fonksyonè yo pa te gen okenn wòl nan konsepsyon etid, koleksyon done, ak analiz, desizyon pou pibliye, preparasyon, oswa nan maniskri a.

Otè yo remèsye Pwofesè Xingguo Zheng ak Jiang He (Urumqi, Lachin) pou jantiyès bay materyèl ak idantifikasyon.

Referans

Akira, S., 2004. Fanmi reseptè peyaj: estrikti ak fonksyon. Semin. Imunol. 16, 1–2.

Akira, KS, 2007. Siyal NF-κB pa reseptè toll-like. Tandans Mol. Med. 18, 156–163.

Banchereau, J., Steinman, RM, 1998. Selil Dendritik ak kontwòl iminite a. Nature 392, 245–252.
Bo, R., Liu, Z., Zhang, J., Gu, P., Ou, N., Solèy, Y., Hu, Y., Liu, J., Wang, D., 2019. mekanis nan Lycium barbarum polisakarid lipozom sou aktive selil dendritik murin yo. idrat kabòn. Polym. 205, 540–549.
Cao, P., Wu, S., Wu, T., Deng, Y., Zhang, Q., Wang, K., Zhang, Y., 2020. Wòl nan enpòtan nan polisakarid ki soti nan yon medikaman tradisyonèl Chinwa-Netwayaj poumon ak Dekoksyon dezentoksikasyon kont pandemi COVID-19. idrat kabòn. Polym. 240,m116346
Carrera Silva, EA, Chan, PY, Joannas, L., Errasti, AE, Gagliani, N., Bosurgi, L., Jabbour, M., Perry, A., Smith-Chakmakova, F., Mucida, D., Cheroutre, H., BurstynCohen, T., Leighton, JA, Lemke, G., Ghosh, S., Rothlin, CV, 2013. T selil ki sòti
pwoteyin S angaje siyal reseptè TAM nan selil dendritik pou kontwole grandè aiminitèrepons. Iminite 39, 160–170.
Chinwa Pharmacopeia Komisyon, 1992. Ministè Chinwa Sante Dwòg Creole Chinwa Medikaman èrbal, volim yon sèl. Chinese Pharmacopeia Commission Press, Beijing, p. 1.

Dong, Q., Yao, J., Fang, J., Ding, K., 2007. Karakterizasyon estriktirèl ak aktivite iminolojik nan de polisakarid dlo frèt ekstrè soti nanCistanchedeserticolaYC Ma. idrat kabòn. Res. 342 (10), 1343–1349.
Dubois, M., Gilles, K., Hamilton, JK, Rebers, PA, Smith, F., 1951. Yon metòd kolorimetrik pou detèminasyon sik. Nati 168, 167.
Fu, Z., Fan, X., Wang, X., Gao, X., 2018.CistanchesHerba: yon apèsi sou chimi li yo, farmakoloji, ak pwopriyete farmakokinetik. J. Ethnopharmacol. 219, 233–247.
Giuseppe, DG, Rino, R., Didierlaurent, AM, 2018. Korelate nan adjuvantisite: yon revizyon sou adjuvant nan vaksen ki gen lisans. Semin. Imunol. 39, 14–21.
Inaba, K., Inaba, M., Romani, N., Aya, H., Deguchi, M., Ikehara, S., Muramatsu, S., Steinman, RM, 1992. Jenerasyon gwo kantite selil dendritik soti nan sourit kilti mwèl zo complétée ak granulocyte/macrophage koloni-stimulan faktè. J. Exp. Med. 176, 1693–1702.
Li, P., Wang, F., 2015. Polisakarid: kandida nan adjuvant vaksen pwomèt. Drug Discover Ther 9, 88–93.
Li, X., Zhao, R., Li, H., De, Z., Wu, H., 2012. Deproteinization nan polisakarid soti nan maydis la stigma pa metòd la Sevag. Adv. Mater. Res. 340, 416–420.
Li, J., Li, J., Zhang, F., 2015. Efè imunoregulatwa medikaman Chinwa èrbal sou spirasyon ak fonksyon selil dendritik yo. J. Ethnopharmacol. 171, 184–195.
Li, T., Zhang, L., Jin, C., Xiong, Y., Cheng, YY, Chen, K., 2020. Ekstrè flè grenad bidireksyon kontwole pwopagasyon, diferansyasyon, ak apoptoz 3T 3- Selil L1 atravè règleman ekspresyon PPAR medyatè pa chemen siyal PI3K-AKT la. Biomed. Pharmacother. 131, 110769.
Morrison, DC, Jacobs, DM, 1976. Liaison de polymyxin B pou lipid yon pòsyon lipopolysaccharides bakteri. Iminochimi 13, 813–818.
Park, MJ, Ryu, HS, Kim, JS, Lee, HK, Kang, JS, Yun, J., Kim, SY, Lee, MK, Hong, JT, Kim, Y., 2014. Platycodon grandiflorum polisakarid pwovoke selil dendritik spirasyon atravè siyal TLR4. Manje Chem. Toksik. 72, 212–220.
Qi, C., Guo, Y., Zhou, W., Zhang, Y., 2016. Toll-like reseptè 4-polysakarid imunostimulatwa ki gen rapò: estrikti prensipal, relasyon aktivite, ak modèl entèraksyon posib. idrat kabòn. Polym. 149, 186–206.
Re, F., Strominger, JL, 2001. Toll-like reseptè 2 (TLR2) ak TLR4 diferansye aktive selil dendritik imen. J. Biol. Chem. 276, 37692–37699.
Reed, SG, Orr, MT, Fox, CB, 2013. Wòl kle nan adjuvant nan vaksen modèn. Nat. Med. 19, 1597–1608.
Reed, SG, Tomai, M., Gale, MJ, 2020. Nouvo orizon nan adjuvant pou devlopman vaksen. Curr. Opinyon. Imunol. 65, 97–101.
Rey-Ladino, J., Ross, AG, Cripps, AW, Mcmanus, DP, Quinn, R., 2011. Pwodwi natirèl ak rechèch pou adjuvant vaksen roman. Vaksen 29, 6464–6471.
Schijns, V., Fernandez ´ Ejada, A., Barjaktarovi, A., Bouzalas, I., Lavelle, EC, 2020. Modulation ofiminitèrepons yolè l sèvi avèk adjuvant pou fasilite vaksen terapetik. Imunol. Rev. 296, 169–190.
Seder, RA, Darrah, PA, Roederer, M., 2008. Kalite selil T nan memwa ak pwoteksyon: enplikasyon pou konsepsyon vaksen an. Nat. Rev Immunol. 8, 247–258.
Steinman, RM, 2012. Desizyon sou selil dendritik: sot pase, prezan, ak lavni. Ann. Rev Immunol. 30, 1–22.
Solèy, B., Yu, S., Zhao, D., Guo, S., W, X., Zhao, K., 2018. Polisakarid kòm adjuvant vaksen. Vaksen 36, 5226–5234.
Tian, ​​H., Liu, Z., Pu, Y., Bao, Y., 2019. Efè imunomodulateur egzèse pa polisakarid Poria Coco atravè siyal TLR4 / TRAF6 / NF-κB nan vitro ak nan vivo. Biomed. Pharmacother. 112, 108709.
Wei, W., Xiao, HT, Bao, WR, Ma, DL, Leung, CH, 2016. TLR-4 ka medyatè chemen siyal nan Astragalus polysaccharide RAP-induit ekspresyon cytokine nan selil RAW264.7. J. Ethnopharmacol. 179, 243–252.
Zhang, A., Yang, Y., Wang, Y., Zhao, G., Yang, X., Wang, D., Wang, B., 2017. Ekstrè akeuz Adjuvantactive nan Artemisia rupestris L. amelyoreiminitèrepons yoatravè chemen siyal TLR4 la. Vaksen 35, 1037–1045
Zhang, A., Yang, X., Li, Q., Yang, Y., Zhao, G., Wang, B., Wu, DC, 2018. Aktivite imunostimulatwa nan polisakarid dlo-extractable soti nanCistanchedeserticolakòm yon plant adjuvant nan vitro ak nan vivo. PloS One 13, e0191356.
Zhao, B., Lian, J., Wang, D., Li, Q., Zhang, A., 2019. Evalyasyon ekstrè akeuz nanCistanchedeserticolase yon adjuvant polisakarid pou vaksen kont grip sezonye nan sourit jèn adilt yo. Imunol. Lett. 213, 1–8.
Zhou, L., Liu, Z., Wang, Z., Yu, S., Long, T., Zhou, X., Bao, Y., 2017. Astragalus polisakarid fè egzèsis efè imunomodulateur atravè TLR4-medyatè MyD88-chemen siyal depandan an vitro ak in vivo. Sci Rep-UK 7, 44822.
Zhu, J., Zhang, Y., Shen, Y., Zhou, H., Yu, X., 2013. Lycium barbarum polisakarid pwovoke Toll-tankou reseptè 2- ak 4-medyatè fenotip ak fonksyonèl spirasyon nan selil dendritik murin atravè aktivasyon NF-κB. Mol. Med. Rep. 8, 1216–1220.
Zhu, N., Lv, X., Wang, Y., Li, J., Liu, Y., Lu, W., Yang, L., Zhao, J., Wang, F., Zhang, LW, 2016 Konparezon efè imunoregulatwa polisakarid ki soti nan twa remèd fèy natirèl ak absòpsyon selilè nan selil dendritik. Ent. J. Biol. Macromol. 93, 940–951.