Chanjman nan pwofil asid amine ak konpoze bioaktif nan kokon swa Thai jan yo afekte pa ekstraksyon dlo Pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

2.8. Korelasyon

Yo te itilize yon analiz korelasyon (tès Pearson) pou fè konparezon (tankou koyefisyan korelasyon, r) nan mitan ak ant valè pou kontni total fenolik, kontni total flavonoid, aktivite DPPHradical-scavenging, ABTS plus , FRAP assay, anti- -amilaz. , anti- -glikozidaz, ak anti-glycation nan SPE nan tansyon Nangsew ak Eri (Tablo 5 ak 6). Chak paramèt yo te jwenn nan etid la te demontre gwo korelasyon pozitif ant TPC, TFC, DPPH, ABTS, FRAP anti- -amilaz, anti- -glikozidaz, ak anti-glikasyon. Sa a ka paske konpoze byoaktif ki prezan nan ekstrè swa a kapab retire divès radikal gratis ak anti- -amilaz, anti- -glikozidaz, ak anti-glisasyon. Konklizyon nou yo te demontre tou ke gen yon korelasyon lineyè trè enpòtan ant rezilta pou de tansyon yo. Rezilta sa yo te nan akò ak sa yo ki nan Benzie ak Stezo [29], ki moun ki te jwenn yon gwo korelasyon pozitif ant kontni total fenolik ak tès FRAP. Yo te jwenn rezilta menm jan an tou ant TPC ak DPPH(R2=0.711) ak FRAP (R{2=0.948), respektivman nan goud anmè jan Kubola [30] rapòte. Kumar et al.[31] te fè yon evalyasyon aktivite antioksidan ak fenol total nan diferan varyete fèy Lantana Camara. Ekstrè yo te montre gwo korelasyon ant kontni fenolik ak aktivite DPPH, FRAP, ak ABTSscavenging. Pi gwo korelasyon (r=0.998, R2=0.997) te jwenn ant kontni total fenolik ak ABTS scavenging esè. Anplis de sa, korelasyon pozitif ant ABTSand TPC (R2=0.885) ak DPPH (R{2=0.999), respektivman, nan fèy Gynura procumbens yo te rapòte pa Kaewseejan et al. [32].

Yo te jwenn korelasyon ant pwopriyete byolojik ak aktivite inhibitory nan rechèch Quan et al.[33] ki te envestige antioksidan ak potansyèl dyabèt inhibitory pwopriyete yo nan ekstrè jape C.tramdenum. Rezilta yo tou te jwenn saantioksidantès (ki gen ladan DPPH, ABTS, rediksyon pouvwa, ak oksid nitrique) yo te fòtman korelasyon ak tès inhibitor -amylase ak -glucosidase nan p.<>

Tanpri klike la a pou w konnen plis

3. Materyèl ak Metòd 3.1.Silk Coc00ns

Nangsew ak Eri tansyon nan kokon swa Thai yo te kolekte. LaNangsew souch(kokon jòn) yo te jwenn nan Baan Hua Saban, Phutthaisong Distri, Buriram Pwovens, Thailand. Souch Eri (kokon blan) te soti nan Kominote Nong Ya Plong, Mancha Khiri, Pwovens Khon Kaen, Thailand.

3.2. Pwodwi chimik ak reyaktif

Tout estanda yo te jwenn nan Sigma-Aldrich Co.(St. Louis, MO, USA), ki gen ladan asid amine esansyèl yo: fenilalanin, valin,triptofan, treonin, izoleuzin, metionin, histidine, arjinin, lizin, ak lesin. Asid amine ki pa esansyèl yo etidye yo te glisin, asid glutamik, asid aspartik, glutamin, serine, tirozin, alanin, ak asparajin. Reyaktif detèminasyon aktivite antioksidan yo te jwenn nan Sigma-Aldrich Co:Folin-Ciocalteu reagent,2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH),2,4,6-tripiridyl-s-triazine (TPTZ),2,2'-and-bis(3-thylbenzthiazoline-6-sulphonic acid)(ABTS).Solvang yo ak reyaktif yo itilize nan analiz HPLC yo te achte nan men Merck (Darmstadt, Almay). -Amilaz (ki soti nan Aspergillus oryzae), -Glukozidaz (ki soti nan Bacillus stearothermophilus), p-nitrophenyl- -D-glucopyranoside (PNP-G), albumin serik bovin (BSA), ak azid sodyòm yo te achte nan men Sigma-Aldrich. Co.

Cistanche ka amelyore iminite

3.3. Ekstraksyon ak dlo distile

Ekstraksyon te fèt lè l sèvi avèk metòd Sangwong et al. [34]. Kokon swa yo te koupe an ti moso. De gram moso sa yo te extrait ak 200 mL dlo distile nan 100 degre pou tan ekstraksyon espesifye yo. Ekstrè yo te santrifuje nan 5000 × g pou 10min pa santrifujeur (Universal 320/320R, Hettich, Boucherville, QC, Kanada). Ekstrè yo te filtre nan papye Whatman No.1 anba vakyòm pou retire materyèl ensolubl, kidonk pwodui ekstrè pwoteyin swa (SPE).

3.4. Detèminasyon Pwoteyin

Detèminasyon pwoteyin te detèmine ki dekri pa tès la Bradford [35]. SPE (0.5 mL) te ajoute nan 1.0mL nan solisyon Bradford epi enkube nan tanperati chanm pou 5 min. Albumin serik bovin (BSA) te itilize kòm yon pwoteyin referans estanda. Yo te mezire absorbans echantiyon yo nan 595 nm ak yon espektrofotomèt vizib (DR 2700rM Portable Spectrophotometer, Hach, Loveland, CO, USA).

3.5.Amin0-Konteni asid pa LCMS/MS

Analiz asid amine yo enplike yon espektwomèt mas LC-MS-MS (Shimadzu LCMS-8030) trip kadrupol, yon mòd ionizasyon electrospray (ESI), ki te swiv pa analiz nan yon sistèm HPLC Shimadzu (Shimadzu, Kyoto, Japon) (Chumroenphat et al. [36). Analiz HPLC enplike yon to koule 0.2 mL/min; tanperati a nan dife pou chofe fou kolòn te 38 degre ak autosampler la te nan 4 degre. Faz mobil yo te prepare (A) akeuz asid fòmik {{10}}.1 pousan (o/o) ak (B) methanol-dlo a (50:50); Lè sa a, mixer a te asid fòmik 0.1 pousan (o/v).Te zegwi autosampler la purge ak metanol anvan ak apre aspirasyon echantiyon an. Analiz yo te fèt an triple.

3.6. Total kontni fenolik (TPC)

Yo te analize kontni fenolik total nan ekstrè pwoteyin swa apre metòd Folin-Ciocalteu [30]. Yon ti tan, 0.3 mL SPE te melanje ak 2.25 mL 10 pousan Folin-Ciocalteu reyaktif fonn nan dlo distile. Apre 5 min enkubasyon, yo te ajoute 2.25 mL nan 6 pousan kabonat sodyòm (NazCO) solisyon epi yo te kite melanj yo kanpe pou 90 min nan tanperati chanm. Yo te mezire absorbans echantiyon solisyon yo nan 725 nm lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt. TPC a nan pwa yo te eksprime kòm ekivalan mg asid galik (GAE) pou chak g pwa sèk (mg GAE / g DW). Analiz yo te fèt an triple.

3.7. Kontni Flavonoid Total (TFC)

Kontni total flavonoid nan SPE yo te detèmine dapre Kubota ak [30], modifye. Yon ti tan, 0.5 mL nan chak solisyon echantiyon yo te melanje ak 2.25 ml nan dlo distile ak 0.15 ml nan 5 pousan NaNO, solisyon (w/v). Yo te kite solisyon an kanpe pou 6 min epi apre sa te ajoute 0.3 mL 10 pousan AlCl3(w/v) nan solisyon an. Apre 5 min, yo te ajoute 0.1 mL nan 1 M NaOH （w/ø） solisyon ak Lè sa a, yo te mezire absorbans nan 510 nm lè l sèvi avèk yon espektwofotomèt. Rezilta yo te eksprime kòm mg rutin ekivalan (RE) pou chak g pwa sèk (mg RE/g DW).

3.8. Aktivite Radical Scavenging DPPH

Aktivite antioksidan SPE yo te detèmine kòm aktivite scavenging ki estab 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radikal gratis dapre Brand-Williams et al.[37]. Ekstrè pwoteyin swa 0.1 mL te ajoute nan 3 ml nan yon 0.001 M DPPHin methanol. Te melanj lan kenbe pou 30 minit nan fè nwa a nan tanperati chanm. Yo te detèmine absorpsyon nan 517 nm lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt. Ekwasyon an pou kalkile anpèchman DPPH la te jan sa a:

(1) Anpèchman (pousan)=[(Abs. kontwòl- Abs.sample)/Abs. kontwòl] × 100)

kote Abs la. echantiyon an se absòbe echantiyon an ak Abs. kontwòl se absòbe kontwòl la.

3.9.Antioksidan Aktivite pa ABTS Assay

Metòd kasyon radikal ABTS Re et al. (1999) [22] te modifye pou evalye efè lib radikal-scavenging. Solisyon k ap travay ATBS la te prepare pa konbine 7.4 mM ABTS ak 2.6 mM persulfat potasyòm nan yon rapò 1:1 (v / v), ki pèmèt li reyaji nan fè nwa a pou 12 èdtan nan tanperati chanm, ak Lè sa a, dilye li ak dlo deyonize. . Yo te detèmine absorpsyon an nan 734 nm lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt jiskaske li te rive nan 1.1 ± 0.02.Lè sa a, 150 μL nan SPE a ak 2850 μL nan solisyon an travay ATBS yo te reyaji nan fè nwa a pou 2 èdtan ak melanje, ak la. absorbans nan 734 nm lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt; 100 pousan metanol te itilize kòm yon kontwòl. Ekwasyon an pou kalkile anpèchman an te kòm Ekwasyon (1).

3.10. Ferrik Diminye/Essay Pouvwa Antioksidan (FRAP)

Pouvwa rediksyon ekstrè yo te baze sou tès FRAP la [23]. Yo te prepare reyaktif FRAP fre nan melanje 100 mL tanpon acetate (0.3 mol LI, pH 3.6), 10 mL solisyon TPTZ ki fonn nan 10 mL 40 mmol L-1HC ak 10 mL 20mmol. -1FeCl; nan yon rapò 10∶1∶1 ak, 120 ml dlo distile a 37 degre. Yon ti tan, yo te ajoute 60 μL SPE ak 180 uL dlo deyonize nan 1.8 mL reyaktif FRAP. Solisyon an te souke pa melanje vortex. Apre yo te enkube solisyon an nan yon beny dlo nan 37 degre pou 4 min, yo te mezire absorbans nan 593 nm kont yon kontwòl. Valè FRAP yo te parèt kòm mg FeSO4 pou chak g baz sèk (mg FeSO4/g DW).

3.11.Inhibitory Aktivite kont anzim -Amilaz la

-Amylase anzim inhibition aktivite te mezire itilize metòd Xiao et al. (2006)[38] ak ti modifikasyon. Substra a te prepare lè w bouyi 100 mg lanmidon pòmdetè nan 5 mL tanpon fosfat (pH 7.0) pou 5 min, Lè sa a, refwadi nan tanperati chanm. SPE （50μL）, substrate （300μL） ak 5ug/mL -amylase solisyon （20μL）yo te melanje ak solisyon an te enkube nan 37 degre pou 15 min. Reyaksyon an te sispann lè yo ajoute 50 μL 1 M HCl, ak Lè sa a, 50μL solisyon yòd te ajoute. Absorbans la te mezire nan 650nm pa yon lektè microplate. Acarbose te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Pousantaj anpèchman x-amylase te evalye kòm Ekwasyon (1).

3.12.Inhibitory Aktivite kont anzim nan -Glucosidase

Yo te fè tès anpèchman anzim -glucosidase dapre metòd Wang ak Zhao[39].SPE (2mL fonn nan dimethylsulfoxide; DMSO) ak 0.5 U/mL a-glucosidase (40 mL) yo te melanje nan 120 mL nan 0.1 M tanpon fosfat (pH 7.0). Apre 5 min pre-enkubasyon, 5 mM p-nitrophenyl - - D-glucopyranoside solisyon (40 mL) te ajoute, epi yo te solisyon an enkubate nan 37 degre pou 30 min. Absòbsyon an te mezire nan 405 nm pa UV/Vis absorption spectrophotometer microplate reader. Pousantaj anpèchman -glucosidase te evalye kòm Ekwasyon (1).

3.13.Evalyasyon Aktivite Fòmasyon Anti-AGEs

Kapasite inhibitor fòmasyon AGEs nan pwoteyin swa ak fraksyon li yo te mezire lè l sèvi avèk metòd Vinson ak Howard [40]. Volim total solisyon reyaksyon glikasyon （2.5 mL） te prepare pa melanje 5{{10}}0 μL SPE, 500 μL 20 mg/mL BSA nan tanpon fosfat, 500 μL 0.5 M glikoz nan. tanpon fosfat ak 1mL tanpon fosfat 0.1 M nan pH 7.4 ki gen 0.02 pousan (w/v) azid sodyòm. Melanj sa a te enkube nan 37 degre pou 5 jou nan fè nwa a ak Lè sa a, kantite fluorescent AGEs ki te fòme yo te detèmine lè l sèvi avèk yon espektwomèt fliyoresan ak yon longèdonn eksitasyon nan 330 nm ak longèdonn emisyon nan 410 nm. Pousantaj fòmasyon anti-AGE yo te kalkile dapre entansite fliyoresan (FI) ki te lakòz lè l sèvi avèk ekwasyon sa a:(2) n =[{1-(FIsample - FIsample blank)/(kontwòl-kontwòl vid) )]×100 kote Flsample a se entansite fliyoresan echantiyon an, echantiyon vid se entansite fliyoresan nan vid echantiyon an, kontwòl se entansite fliyoresan nan kontwòl la ak vid FIcontrol se entansite fliyoresan nan vid echantiyon kontwòl la.

3.14. Analiz estatistik

Tout done yo te analize pa lojisyèl SPSS (IBM SPSS, Chicago, IL, USA). Rezilta yo rapòte kòm mwayèn ± devyasyon estanda (SD) nan twa kopi ak done yo te analize lè l sèvi avèk yon sèl-fason analiz de divèjans (ANOVA) ak tès la pi piti diferans enpòtan (LSD) pou detèmine siyifikasyon an parapò ak kontwòl la ak korelasyon Pearson la. tès pou evalye korelasyon ki genyen ant mwayen yo. Nan tout ka yo, p<0.05 was="" considered="">

4. Konklizyon

Etid nou an nan efè ekstrè pwoteyin swa enplike ekstraksyon ak dlo distile nan 100 degre pou sis èdtan; pwosedi sa a te bay valè ki pi wo nan kontni pwoteyin, asid amine, kontni total fenolik (TPC), kontni total flavonoid (TFC), aktivite DPPH radikal-scavenging, ABTS tès kapasite radikal scavenging, tès FRAP, anti- -amilaz, anti-a-glucosidase, ak anti-glycation lè yo konpare ak lòt fwa ekstraksyon. Anplis de sa, SPE nan tansyon yo Nangsew bay pi wo kontni nan tout sibstans sa yo nitrisyonèl benefisye, lè yo konpare ak ekstrè nan tansyon yo Eri. Rezilta yo sijere ke Nangsew ta dwe tansyon yo pi pito pou plan kontinyèl nou yo devlope yon aditif natirèl pou manje fonksyonèl, ki baze sou sericin ekstrè pandan tretman kokon, ki bay opòtinite pou yon altènatif nan pwodiksyon an nan bwason fonksyonèl.

Kontribisyon otè:Konseptyalizasyon, CBand SS; Metodoloji, CBand SS; Validasyon, CBand SS; Analiz fòmèl, CBand SS; Envestigasyon, CBand SS; Writing—Original Draft Preparation, CBand SS; Redaksyon—Revizyon ak koreksyon, CBand SS; Vizyalizasyon, CBandS.S. Tout otè yo te li epi yo te dakò ak vèsyon ki te pibliye maniskri a.

Finansman:Rechèch sa a te finanse pa Thailand Science Research and Innovation (TSRI) ak Siam Natural Products Co., Ltd.

Deklarasyon Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl:Pa aplikab.

Deklarasyon Konsantman Enfòme:Pa aplikab. Deklarasyon Disponibilite Done: Pa aplikab.

Rekonesans:Sant Ekipman Laboratwa Mahasarakham University pou koperasyon ak èd syantifik yo bay. Mèsi tou a Colin Wrigley, University of Queensland, Ostrali, pou koreksyon angle.

Konfli enterè:Otè yo pa deklare okenn konfli enterè.

Atik sa a soti nan Molecules 2021, 26, 2033. https://doi.org/10.3390/molecules26072033 https://www.mdpi.com/journal/molecules