Pwofil asid amine ak pwopriyete byolojik nan kokon swa jan yo afekte pa dlo ak anzim ekstraksyon Pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

Sa SPE a gen kapasite nan aktivite fòmasyon anti-AGE yo ka jwenn nan tou de metòd ekstraksyon (dlo ak ekstraksyon anzimatik), ak 24.33 ak 26.83 pousan anpèchman, respektivman (ak diferans enpòtan nan mitan metòd la (p).<0.05). however,="" enzymatic="" extraction="" provided="" better="" inhibition="" than="" water="" extraction="" (figure="" 4).="" the="" anti-glycation="" capacity="" of="" numerous="" medicinal="" herbs="" and="" dietary="" plants="" was="" comparable,="" or="" even="" stronger="" than="" that="" of="" aminoguanidine="" [38].="" several="" studies="" have="" demonstrated="" that="" the="" anti-glycation="" activity="" correlates="" significantly="" with="" the="" phenolic="" content="" of="" tested="" plant="" extracts="" [39,="" a0].="" polyphenols="" are="" the="" most="" abundant="" dietary="" antioxidants,="" being="" common="" constituents="" of="" fruits,="" vegetables,="" cereals,="" seeds,="" nuts,="" chocolate,="" and="" beverages,="" such="" as="" coffee,="" tea,="" and="" wine.="" they="" have="" been="" shown="" to="" lead="" to="" many="" health="" benefits,="" such="" as="" the="" prevention="" of="" cancer="" [41],="" neurodegenerative="" diseases="" [42,="" cardiovascular="" diseases,="" and="" diabetes="" [43].="" therefore,="" spe(water="" or="" enzyme="" extracts)="" with="" total="" flavonoid="" contents="" of="" 49.64="" and="" 52.02="" mg="" re/g="" dw,="" respectively,="" thus,="" would="" be="" capable="" of="" causing="" inhibitory="" activity="" against="" the="" enzymes="" a-amylase,="" α-glucosidase,="" and="" anti-ages="" formation="">

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Plizyè envestigasyon yo te jwenn yon korelasyon enpòtan ant pwoteyinidrolysat antioksidanaktivite ak rezidi espesifik asid amine [44]. Pou egzanp, Zainol et al. [45] te jwenn ke asid amine aromat (tankou tirozin ak fenilalanin) ka ede elimine radikal gratis lè yo fonksyone kòm donatè elèktron ki pisan, pandan y ap asid amine idrofob (tankou alanin, leucine, ak prolin) ka ede tou pou elimine radikal gratis. Peptides ki rich nan methionine, leucine, histidine, alanine, ak valine gen yon gwoantioksidanaktivite [46]. Kòm yon rezilta nan gwo kantite sa yo résidus asid amine ak aktivite antioksidan amelyore nan laidrolizatjere pa alcalde, idrolyza a ta dwe gen ekselan potansyèl antioksidan.

3. Materyèl ak Metòd

3.1.Silk Coco00ns

Kokon jòn Tayi-swa (souch Nangtui) te soti nan distri Phutthaisong Thailand, nan pwovens Buriram.

3.2. Pwodwi chimik ak reyaktif

Estanda esansyèl ak ki pa esansyèl asid amine soti nan Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA). Sigma-Aldrich te bay reyaktif Folin-Ciocalteu, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil (DPPH), 2,4,6-tripiridyl-s-triazine (TPTZ), 2,2' -ak-bis (3-thylbenzthiazoline-6-asid sulfonik) (ABTS), -amylase (ki soti nan Aspergillusoryzae), -Glukozidaz (ki soti nan Bacillus stearothermophilus),p-nitrofenil-D-glucopyranoside (PNP-G), albumin serom bovin (BSA), azid sodyòm, ak proteaz (ki soti nan Bacillus licheniformis). Reyaktif pou HPLC te soti nan Merck, Darmstadt, Almay.

3.3. Metòd ekstraksyon

(1) Tretman kontwòl te sa a nan Sangwong et al. [17]. Ti moso nan kokon swa (de gram) yo te benyen nan 200 mL dlo distile pou de zè de tan (san chofaj) ak santrifuje pou dis minit nan 5000 × g (Universal 320/320R, Hettich, Boucherville, QC, Kanada). Ekstrè yo te filtre nan papye Whatman No.1 anba vakyòm pou retire materyèl ensolubl. Ekstrè pwoteyin swa (SPE) se te pwodwi final la, kenbe nan -18 degre nan yon boutèy Amber.

(2) Metòd ekstraksyon dlo a se te metòd Bungthong ak Siriamornpun [10]. Ti moso nan kokon swa (de gram) yo te ekstrè nan 100 degre pou 6h nan 200 mL dlo distile. Santrifijasyon, filtraj, pwosesis depo SPE te fèt menm jan ak tretman kontwòl.

Cistanche ka amelyore iminite

(3) Tretman anzim te Vaitanomsat akPunyasawon[47]. Ti moso kokon tranpe nan dlo distile lannwit lan nan 10 degre yo te trete (kokon: rapò dlo nan 1:100 ak Alcalase a soti nan Novozvmes 0.5 pousan (v/o) (pH ajiste a 8.0). ) ak enkubasyon (50 degre) pou 120 min.Pou sispann aksyon anzim, yo te melanj lan chofe a 100 degre pou ven minit ak Lè sa a, santrifuje (6000 × g pou 15 min).Filtrasyon an ak pwosesis depo nan SPE te fèt nan menm bagay la. fason kòm pou tretman kontwòl.

3.4. Mikwostrikti nan fib swa

Yo te itilize yon mikwoskòp limyè (Carl Zeiss Inc., Toronto, ON, Kanada) pou egzamine glisad seksyon nan fib swa [48]. Yo te itilize pwogram Zeiss xioCamlCc3 pou nimerik fichye yo. Yo te itilize yon mikwoskòp elektwon (SEM; TM4000 plus, Hitachi, Japon) ekipe ak lojisyèl TM 4000 plis pou egzamine amelyorasyon estriktirèl yo. Anvan analiz SEM nan mòd vakyòm, echantiyon yo te kouvwi ak lò.

3.5. Detèminasyon Pwoteyin

Pou detèmine kontni pwoteyin, nou te itilize tès Bradford [49]. SPE(0.5 mL) plis solisyon Bradford (1.0 mL) te enkube pou 5 min. Albumin serik bovin (BSA) te itilize kòm estanda. Yo te detèmine absorpsyon nan 595 nm ak yon espektrofotomèt vizib (DR 2700TM Portable Spectrophotometer, Hach, Loveland, CO, USA).

3.6. Kontni asid amine pa LCMS/MS

Kontni asid amine te detèmine dapre Chumroenphat et al. [50]. Nou te itilize yon LC-MS-MS (LCMS-8030, Shimadzu, Kyoto, Japon) trip-quadrupole mas spectrometer nan electrospray ionization (ESI) mòd.

3.7.Total kontni fenolik (TPC)

Kontni total fenolik la te detèmine dapre Kubota ak Siriamornpun [51]. Nou itilize yon espektrofotomèt (UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Japon) pou mezire absòbe echantiyon solisyon yo nan 725 nm. TPC te mezire an miligram ekivalan asid galik (GAE) pou chak gram pwa sèk (mg GAE/g DW). 3.8. TotalFlavonoidKontni (TFC) Total laflavonoidkontni te detèmine dapre Kubota ak Siriamorn-pun [51. Yo te itilize yon espektrofotomèt (UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Japon) pou kalkile absorpsyon nan 510 nm. Rezilta yo te eksprime nan miligram ekivalan rutin (RE) pou chak gram pwa sèk (mg RE/g DW).

3.9.DPPH Aktivite Radikal Scavenging

DPPH radikal aktivite scavenging te detèmine selon Brand-Williams et al. [52]. Yo te itilize yon espektrofotomèt (UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Japon) pou detèmine absorpsyon nan 517 nm. Anpèchman DPPH la te kalkile lè l sèvi avèk ekwasyon sa a: (1) Anpèchman (pousan) =[(Abs. kontwòl-Abs. echantiyon)/Abs. kontwòl]×100, kote Abs la. echantiyon=absòbe echantiyon an, ak Abs.control= absòbe kontwòl la. 3.10. Aktivite antioksidan pa ABTS Assay. Pou evalye rezilta yo gratis radikal-scavenging, yo te detèmine kasyon radikal ABTS dapre Re et al. [53]. Yo te mezire absorpsyon nan 734 nm lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt (UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Japon), epi yo te itilize 100 pousan nan metanol kòm yon kontwòl. Yo te kalkile tès ABTS la lè l sèvi avèk Ekwasyon (1).

3.11. Ferrik Diminye/Essay Pouvwa Antioksidan (FRAP)

Yo te detèmine tès FRAP la dapre Benzie ak Strain [54]. Yo te mezire absorpsyon nan 593 nm lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt (UV-1700, Shimadzu, Tokyo, Japon). Egzamen FRAP la te eksprime an miligram FeSO4 pou chak gram pwa sèk (mg FeSO4/g DW).

3.12. Aktivite inhibition kont anzim a-Amilaz

Metòd Xiao et al. [55] te itilize pou fè tès pou aktivite inhibition nan -amylase a, lè l sèvi avèk lanmidon pòmdetè kòm substra. Yo te itilize yon lektè microplate (Asys UVM 340, Biochrom, Cambridge, UK) nan 650 nm. Acarbose te kontwòl la. Yo te detèmine pousantaj anpèchman -amylase dapre sa ki annapre yo, Ekwasyon (1). 3.13. Aktivite inhibition kont anzim a-Glucosidase. Anpèchman -glucosidase la te detèmine dapre Wang ak Zhao [56]. Nou itilize yon lektè microplate (Asys UVM340, Biochrom, Cambridge, UK) nan 405 nm. Pousantaj anpèchman o-glucosidase te detèmine lè l sèvi avèk Ekwasyon (1).

3.14.Evalyasyon Aktivite Fòmasyon Anti-AGEs

Yo te mezire kapasite inibisyon fòmasyon AGEs pa metòd Vinson ak Howard [57]. Yo te detèmine limit AGEs fliyoresan ki te fòme ak yon espektwomèt fliyoresan (F-7100, Hitachi, Tokyo, Japon): longèdonn eksitasyon, 330 nm; longèdonn emisyon, 410 nm. Pousantaj fòmasyon anti-AGE yo te baze sou entansite fliyoresan ki te lakòz (FI) pa ekwasyon sa a: (2) pousan Anpèchman =[{1-(FIsample-Flsample blank)/(control-FIcontrolblank)]×100 , kote FIsample= entansite fliyoresan echantiyon an,echantiyon vid=entansite fliyoresannan echantiyon vid, FIcontrol=fliyoresanentansite kontwòl, ak kontwòl blank=fluores-sant entansite echantiyon kontwòl vid.

3.15. Analiz estatistik

Yon pwogram SPSS te sèvi pou entèprete rezilta yo (IBM SPSS, Chicago, IL. USA), kòm mwayèn twa kopi devyasyon estanda (SD). Yon sèl-fason analiz de divèjans (ANOVA) te itilize ak pi piti diferans enpòtan (LSD) mezi, ak yon nivo siyifikasyon nan p 0.05.

4. Konklizyon

Etid nou an te demontre ke ekstraksyon anzimatik nan kokon swa bay pi gwo valè nan kontni pwoteyin, asid amine, kontni total fenolik (TPC), kontni total flavonoid (TFC), aktivite DPPH radikal-scavenging, ABTS tès kapasite radikal scavenging, tès FRAP, ant-c-amilaz, anti- -glikozidaz, ak foumi glikasyon lè yo konpare ak ekstraksyon dlo. Limit yo nan metòd la ekstraksyon chwazi nan etid sa a te ke sis èdtan nan ekstraksyon dlo a te lakòz yon tan long ak plis konsomasyon enèji. Sepandan, ekstraksyon dlo te bay yon gou pi dezirab si yo itilize kòm yon bwason fonksyonèl gen entansyon (mwens anmè kou fièl, pi dous, ak umami). Nan chwazi metòd ekstraksyon pi pito a, pwosedi anzim ki baze sou gen yon gwo potansyèl pou tout aspè nan tretman an pwoteyin swa, men gen dezavantaj nan ke anzim yo chè ak ke tretman anzim pwodui yon gou anmè. Altènativman, tretman an anzim ta ka pi apwopriye si yo itilize kòm nutraceuticals konsantre nan lòt fòm, tankou encapsulation, pwodui kosmetik, ak nutraceuticals, olye ke pou konsomasyon dirèk, pa egzanp, kòm yon bwè.

Kontribisyon otè:Konseptyalizasyon, TS; Metodoloji, CBand SS; Validasyon, CBand SS.; Analiz fòmèl, CB ak SS; Envestigasyon, CBand SS; Writing—Orijinal Draft Preparation, CB ak SS; Redaksyon—Revizyon ak koreksyon, CBand CW; Vizyalizasyon, CB.and SS. Tout otè yo te li epi yo te dakò ak vèsyon ki te pibliye maniskri a.

Finansman:Rechèch sa a te finanse pa Research and Researcher for Industries(RRI) anba sipèvizyon Thailand Science Research and Innovation (TSRI ak Siam Natural Products Co., Ltd. Deklarasyon Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl: Pa aplikab).Deklarasyon Konsantman Enfòme:Pa aplikab.

Deklarasyon Disponibilite Done:Tout done yo genyen nan atik la.

Rekonesans:Sant Ekipman Laboratwa nan Mahasarakham University ak Fakilte Teknoloji, Mahasarakham University, Thailand, pou koperasyon ak èd syantifik yo bay. Konfli enterè: Otè yo pa deklare okenn konfli enterè. Egzanp Disponibilite: Pa disponib.

Atik sa a soti nan Molecules 2021, 26, 3455. https://doi.org/10.3390/molecules26113455 https://www.mdpi.com/journal/molecules