Cistanche: Pwodiksyon oksid nitrique pwovoke echinakozid nan selil andotelyo: wòl reseptè androjèn ak chemen PI3K-Akt

Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com

LI GU, dANHONG LIAN, YIMEI ZHENG, WEI ZHOU, JINLEI GU ak XIN LIU

Entwodiksyon

CistancheHoffmg. Et Link se yon zèb parazit kontinuèl nan yon genus nan fanmi Orobanchaceae. HerbaCistanche, tij la nanCistanche deserticolaY. c. MA akCistanche tubulosa(Schenk) R. Pwa, yo te itilize kòm yon ajan tonik nan trete defisyans ren, enpotans, leukorrhea morbid ak konstipasyon senil (1), ki ka akòz androjèn-tankou oswa efè òmòn sèks li yo regilasyon (2).Echinacoside(Ech; c35H46O20;

pwa molekilè, 786.73; Fig. 1), se youn nan glikozid phenylethanoid (PhGs) izole nan tij Herba.Cistanche, epi li montre plizyè pwopriyete byolojik, ki gen ladan efè antioksidan, antiaje, anti-enflamatwa, epatopwotektif ak neropwotektif (3). Envestigasyon famasi modèn yo te demontre ke plizyè konstitiyan HerbaCistanche, ki gen ladan EcH, acteoside, kankanose, kankanoside F ak cistanoside F, montre aktivite vasorelaxant (4).

Endothelium a se yon regilatè kritik nan vaskilè a, ak oksid nitrique (NO) se yon faktè enpòtan ap detann lage pa selil andotelyal yo. Pa difize nan selil misk lis, NO aktive guanylate cyclase, ogmante nivo siklik guanosine monofosfat (cGMP), ak Lè sa a, aktive cGMP-depandan pwoteyin kinas (PKGs) ankouraje detant nan misk lis (5). Li te deja demontre ke EcH nan 350-400 µM dirèkteman aji sou misk vaskilè lis ak inibit pwopagasyon ipoksi pwovoke nan rat pulmonè selil misk lis (6), tandiske 30-300 µM EcH te lakòz vazorelaxasyon egi nan andotelyòm-. bag entak nan yon fason konsantrasyon-depandan, ak amelyore pwodiksyon cGMP nan misk la kò lis kavernosum nan bag aortik kontrakte pa phenylephrine (7). Lè yo louvri chanèl NO-cGMP-PKG-BKca yo nan selil misk lis yo, 100 oswa 300 µM EcH te siprime kontraksyon noradrenalin pwovoke nan atè poumon rat yo, patikilyèman nan bag andotelyo-denuded (8). Selil endothelial yo se regilatè kle nan fonksyon kadyovaskilè epi, nan plizyè ka, li te jwenn ke detant nan andothelial-depandan te akòz yon sibstans transferable, tankou NO, lage nan andotelyo a (9). Sepandan, mekanis molekilè en nan pwodiksyon EcH-induit NO nan selil endothelial vaskilè mande pou plis envestigasyon.

Nan endothelium vaskilè a, NO jenerasyon prensipalman medyatè pa endothelial NO synthase (eNOS). Plizyè gwoup te demontre ke phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) chemen aktive serin treonin pwoteyin kinaz B (Akt), ki lakòz eNOS fosforilasyon dirèk nan serin 1177 (Ser1177) (10). Reseptè androjèn (AR) se yon manm nan subfanmi reseptè nikleyè s3, ki kanonikman modifye ekspresyon jèn. Lokalizasyon AR nan caveolae yo nan manbràn selilè a enplike nan

règleman ki pa genomik nan fonksyon selil andotelyal oswa ekspresyon jèn pa deklanche kaskad la c-Src/PI3K/Akt, ki finalman rezilta nan fosforilasyon eNOS ak NO pwodiksyon (11). Nan selil endothelial aortik imen, yo te rapòte testostewòn aktive siyal PI3K/Akt epi rapidman pwovoke NO pwodiksyon akòz entèraksyon dirèk AR ak subunit p85 nan PI3K sou sistèm kadyovaskilè a (12). Li te rapòte ke EcH agrave sentòm ki gen rapò ak defisi òmòn ak egzèse efè androjèn li yo akòz lyezon konpetitif nan AR a olye pou yo testostewòn (2). Se poutèt sa, etid la prezan ipotèz ke chemen an PI3K / Akt ka patisipe nan NO pwodiksyon atravè AR-depandan fosforilasyon eNOS pwovoke pa EcH. Objektif etid la se te evalye efè EchH sa yo: i) Endiksyon pwodiksyon NO ak fosforilasyon eNOS; ii) patisipasyon AR nan fosforilasyon eNOS; ak iii) aktivasyon nan chemen an PI3K / Akt nan selil endothelial venn lonbrit imen (HUVEcs), yon modèl eksperimantal byen li te ye pou etidye règleman an nan fonksyon selil andotelyal ak anjyogenesis (13).

Materyèl epi metòd

Pwodwi chimik yo epi reyaktif.EcH (pite, 92.5 pousan) te jwenn nan Nòm Nasyonal Referans dwòg nan Enstiti Nasyonal pou kontwòl manje ak dwòg. Antikò kont p-Akt (Ser473; cat. No. ab8805), Akt (cat. No. ab81283), p-eNOS (Ser1177; Cat. No. ab184154) ak eNOS (cat. No. ab76198) te achte nan men Abcam. Inibitè yo nan nilutamide ak IcI 182780 yo te jwenn nan Sigma-Aldrich; Merck KGaA. L-NAME te achte nan men Adamas-Beta, Ltd., epi wortmannin te achte nan men Pribolab.

Selil kilti ak dwòg tretman.HUVEcs yo te jwenn nan Sciencell Research Laboratories Inc. epi yo te kiltive nan mwayen selil andotelyal (EcM; Sciencell Research Laboratories) ak 5 pousan (v/v) serom fetal bovine (FBS; Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc.) ak 1 pousan selil andotelyal. sipleman kwasans (ECGS) nan 37˚C (5 pousan CO2 ak 95 pousan imidite) (14). Lè yo rive nan konfluans, selil yo te dijere ak tripsin ak plake nan EcM ak 1 pousan FBS ak 1 pousan EcGS. Pou tout eksperyans, HUVEcs yo te plake nan yon konsantrasyon nan 1x104 / ml ak grandi jiskaske yo rive nan konfluans. Anvan tretman ak EcH oswa lòt stimulateur, selil yo te enkube nan fenol wouj-gratis EcM san FBS ak EcGS pou 6 èdtan pou pwovoke.

arè kwasans. Nan eksperyans inhibitor yo, HUVEcs yo te pre-enkube ak divès kalite antagonist oswa inhibiteur, ki gen ladan 10 µM nilutamid, 10 µM IcI 182780, 0.5 mM L-NAME oswa 5 µM wortmannin, pou 30 min, avèk oswa san ECH, nan 37˚C. Nan tout gwoup, ki gen ladan kontwòl la, dMSO te itilize kòm yon sòlvan nan konsantrasyon egal nan 0.001 pousan.

Mezi nan entraselilè NOpwodiksyon.

Chanjman relatif nan konsantrasyon cytosolic NO nan HUVEcs yo te kontwole lè l sèvi avèk fliyoresan NO pwofonde DAF-FM (Kayman Chemical Company), jan yo te deja rapòte (12). Yon ti tan, selil yo te chaje ak 5 µM DAF-FM diacetate pou 20 min nan 37˚C nan yon plak mikrotiter nwa epi rense plizyè fwa ak PBS (pH 7.4). Yo te detèmine fliyoresans nan eksitasyon ak longèdonn emisyon 495 ak 515 nm, respektivman, lè l sèvi avèk yon lektè microplate fliyoresan (Biotek Synergy H4; BioTek Instruments, Inc.) ak yon mikwoskòp kontra envèse (Nikon eclipse Ts2R; Nikon Corporation).

Lwès tach analiz.Jan nou te rapòte deja (15), monokouch selil yo te lave de fwa nan PBS ki frèt ak lysed ak tanpon RIPA (P0013d; Beyotime Institute of Biotechnology). Konsantrasyon pwoteyin nan supernatant la te mezire lè l sèvi avèk metòd tès asid bicinchoninic (16). Answit, yo te chaje 30 µg pwoteyin pou chak liy, yo te separe avèk 10 pousan jèl poliakrilamid epi yo te transfere sou manbràn difluorid polivinilidèn. Manbràn yo te bloke ak 5 pousan lèt ekreme pou 1 èdtan nan 25˚C. Apre enkubasyon ak antikò monoklonal kont Akt (1:1, 000 dilution), p-Akt (1:500 dilution), eNOS (1:2,000 dilution), oswa p-eNOS (1 :1,000 dilution) nan 4˚C lannwit lan, manbràn yo te lave ak TBST (ki gen 0.1 pousan Tween-20) 4 fwa pou ~ 15 min pou chak lave nan 25˚C. Apre sa, yo te enkube manbràn yo ak antikò segondè ki konjige ak peroksidaz refor (1:5, 000 dilution; antikò anti-sourit, cat. No. A0216, oswa anti-lapen antikò, cat. No. A0208, Beyotime Institute. nan byoteknoloji) pou 1 èdtan nan 25˚C, epi yo detekte lè l sèvi avèk yon twous kimiluminesans amelyore (chat No. 32209, Thermo Fisher Scientific, Inc.). Bann entansite yo te quantifier itilize Image J gel analiz lojisyèl, vèsyon 1.8.0_112 (National Institutes of Health).

Ti entèfere (si) RNA preparasyon epi transfèksyon.RNAs doub-cheche long yo te sentèz pa mRNA sib AR ak reseptè estwojèn (ER) ak sekans yo montre nan Tablo I. Kondisyon yo pou knockdown siRNA yo te enplike transfekte HUVECs nan 70 pousan konfluans kenbe nan ki pa antimikwòb. mwayen kilti nan asyèt kilti kolagen an 60 mm. Transfèksyon 5 nM AR-siRNA oswa 10 nM ER -siRNA ak reyaktif Lipofectamine 3000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) te fèt separeman, dapre pwotokòl manifakti a. Transfeksyon efikasite te evalye pa ranvèse transcription quantitative-PcR analiz (RT-qPcR), jan yo te rapòte deja (17). Kondisyon tèrmo-siklèt yo te jan sa a: 10 min nan 95˚C; 40 sik 95˚C pou 5 sec ak 60˚C pou 1 min, ak yon koub k ap fonn nan 95˚C pou 15 sec, 60˚C pou 1 min ak 95˚C pou 15 sec; yo te fè twa kopi byolojik endepandan pou chak echantiyon. Eksperyans ki vin apre yo te fèt 48 èdtan apre transfèksyon. Pè Primer te fèt ak lojisyèl Primer Premier v5.0 (PREMIER Biosoft) ak sekans sa yo: AR devan, 5'-GGTTAcAccAAAGGGcTAGAA-3' ak ranvèse, 5'-GAcTTGTAGAGAGACAGGGTAGA-3'; ER pi devan, 5'-ccAGTAccA ATGAcA AGG GAAG -3' ak ranvèse, 5'-TcAcAGGAccAGAcTccATAA-3'; ak GAPdH pi devan, 5'-cAGGGcTGcTTTTAAcTcTGGTAA-3' ak ranvèse, 5'-GGGTGGAATcATATTGGAAcATGT-3'.

Estatistik analiz.Tout done yo prezante kòm mwayèn ± devyasyon estanda. Konparezon estatistik ant gwoup yo te fèt lè l sèvi avèk tès Kruskal-Wallis oswa ANOVA de-fason ak tès post hoc Tukey a pou konparezon miltip. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Rezilta yo

ECH pwovoke NON pwodiksyon epi eNOSfosforilasyon.Jan yo montre nan Fig. 2A ak B, 1 µM ECH siyifikativman ogmante pwodiksyon NO intraselilè nan HUVEcs konpare ak selil kontwòl negatif yo, pandan y ap efè a stimulation nan EcH te atenye nan nivo kontwòl la pa pretreatman ak L-NAME. Pou jwenn konsantrasyon optimal, yo te teste fosforilasyon eNOS nan 60 minit apre tretman ak Ech nan konsantrasyon.

nan {{0}}, 0.01, 0.1, 1 ak 10 µM. Rezilta yo te revele ke EcH nan konsantrasyon 0.01-10 µM ka siyifikativman pwovoke eNOS fosforilasyon nan Ser 1177 nan yon fason ki depann de konsantrasyon, ak maksimòm fosforilasyon eNOS obsève nan 10 µM EcH endiksyon (Fig. 2c ak d). Anplis de sa, fosforilasyon eNOS nan Ser1177 te egzamine pa analiz Western blot nan 0, 5, 15, 30, 60 ak 120 min apre enkubasyon ak 1 µM EcH. Li te obsève ke fosforilasyon eNOS te rapidman deklanche pa Ech nan 5 min, e li kontinye ogmante jiska 30 min nan enkubasyon (Fig. 2E ak F). Imedyatman, malgre tretman Ech, grandè relatif fosforilasyon eNOS te rete estab soti nan 30 min ivè; Se poutèt sa, Ech pa t 'afekte ekspresyon total eNOS (Fig. 2c ak E).

AR medyatè ECH-pwovoke NON pwodiksyon epi eNOSefè entèfere nan AR-siRNA-1 ak ER -siRNA-2 te gen plis siksè nan anpeche ekspresyon an nan AR ak ER nan HUVEcs nan etid la prezan (Fig. 3). Imedyatman, yo te aplike yon antagonis pou analiz AR anpèchman fonksyon ak siRNA pou analiz pèt fonksyon AR pou evalye patisipasyon AR nan aktivasyon eNOS EcH-induit ak NO pwodiksyon an. Jan yo montre nan Fig. 4A, 1 µM ECH ogmante siyifikativman NO pwodiksyon nan HUVEcs (P<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789,="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibi-="" tion="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphoryla-="" tion="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ECH aktive la PI3K/Akt chemen.Nan etid aktyèl la, yo te teste fosforilasyon Akt nan Ser473 60 minit apre enkubasyon EchH nan konsantrasyon 0, 0.01, 0.1 , 1 ak 10 µM. Rezilta yo endike ke EcH (0.01-10 µM) ka pwovoke fosforilasyon Akt. Nivo ekspresyon relatif p-Akt te monte nan 1 ak 10 µM nan tretman EchH (figi 5A ak B). Anplis de sa, fosforilasyon Akt te egzamine pa analiz Western blot nan 0, 5, 15, 30, 60 ak 120 min apre adisyon a nan 1 µM EcH nan kilti HUVEc. Jan yo montre nan Fig. 5c ak d, EcH rapidman ogmante fosforilasyon Akt apre 5 min nan enkubasyon, epi nivo pwoteyin maksimòm p-Akt te obsève nan 60 min. Kontrèman, EcH pa t afekte ekspresyon total Akt (figi 5A ak c). Anplis, pou mennen ankèt sou efè potansyèl PI3K sou fosforilasyon eNOS, HUVEcs yo te pre-trete ak wortmannin inibitè PI3K anvan aplikasyon Ech. Wortmannin te jwenn pou redwi EcH-induit NO pwodiksyon nan nivo debaz (figi 5E). Yon fenomèn menm jan an te obsève lè l sèvi avèk mikwoskospi fliyoresan lè w ap egzamine fliyoresans DAF-FM EcH-induit (figi 5F). Anplis de sa, wortmannin ka gen kapasite pou aboli rapid fosforilasyon eNOS nan HUVEcs (Fig. 5G ak H). Rezilta yo mansyone pi wo a sijere ke Ech ka aktive fosforilasyon eNOS ak NO pwodiksyon atravè chemen PI3K / Akt la.

Diskisyon

Ech se yon konpoze natirèl izole nan HerbaCistanche, ak divès kalite pwopriyete famasi. Li te deja demontre ke Ech te egzèse yon efè detant vaskilè depandan andothelium lè li louvri chanèl NO-cGMP-PKG-BKca nan selil misk lis veso sangen yo (7,8). Konklizyon aktyèl yo bay prèv ke ECH te egzèse aktivasyon AR-depandan eNOS pou pwovoke NO pwodiksyon ak patisipasyon chemen siyal PI3K/Akt nan selil endothelial vaskilè yo.

Kòm kouch ki pi entèn nan miray la veso, andotelyom la ka byen vit santi ak reponn a chanjman nan sikilasyon san, an vire sa ki lakòz transmisyon siyal nan selil yo ki kache nan misk lis yo nan lòd yo kontwole ton vaskilè (18). Yo te rapòte lajman ke plizyè konpoze vazodilatè ki sòti nan andoteli yo egziste, ak sibstans ki pi pwototip.ke yo te NON, ki te fòme nan izofòm andotelyal eNOS, ki lakòz fosforilasyon (19). Nan kondisyon nòmal, eNOS rete inaktif lè mare nan caveolin, epi li aktive ak siksesyon sa a nan evènman nan andotelyal.selil yo: i) eNOS disoye ak caveolin-1 epi asosye ak ca2 plis /caM; ii) pwoteyin chòk chalè (HSP) 90 ankouraje eNOSdimerizasyon ak favè yon fòmasyon esterik pou rekrite Akt; ak iii) calcineurin dephosphorylates Thr495 pou ranfòse eta aktivasyon an (20). Nan etid sa a, NO pwodiksyon te ogmante siyifikativman nan HUVECs trete ak 1 µM ECH. Fenomèn sa a te menm jan ak rezilta anvan yo, kote EcH ogmante lage NO ak ankouraje sentèz cGMP nan bag aortik torasik rat (7). Anplis de sa, de sit fosforilasyon, Ser1177 ak Thr495, parèt yo dwe patikilyèman enpòtan pou reglemante aktivite eNOS (20), ak etid la prezan revele ke Ech pwovoke egi fosforilasyon eNOS nan Ser1177 nan yon fason ki depann de konsantrasyon. Anplis de sa, estimilis ki asosye ak efè yo sou nivo pwoteyin eNOS sitou detèmine estabilite eNOS mRNA, epi si estimilis la kenbe pou yon peryòd tan ki pi long, eNOS mRNA transkripsyon rive atravè mitogen-aktive pwoteyin kinaz ak faktè nikleyè κB (20). Ansanm, obsèvasyon sa yo endike ke aktivasyon eNOS nan Ser1177 responsab pou NO sentèz induit pa EcH.

Anplis de sa, yon kantite syans ogmante montre ke AR eksprime nan selil andotelyal nan yon kantite tisi imen, ki sijere yon wòl potansyèl pou androjèn ak analogue yo, ki aji atravè pwosesis AR-medyatè, nan modulasyon andotelyal imen an. omeyostazi selil (21). Nan chemen PI3K/Akt ki pa klasik, AR ka aktive PI3K lè li kominike dirèkteman ak sousinite regilasyon PI3K p85 (22). Etid la te demontre ke yon antagonist AR oswa AR siRNA diminye pwodiksyon NO ak fosforilasyon eNOS pwovoke pa EcH nan HUVEcs. Yo te deja rapòte ke estwojèn pwovoke fosforilasyon eNOS ak estimile NO pwodiksyon atravè deklanchman klasik ER nan selil endothelial (23), ak administrasyon an nan ECH siyifikativman amelyore ekspresyon an nan ER nan matris la (24). Sepandan, nan etid la prezan, efè AR a te pi enpòtan konpare ak ER sou deklanchman eNOS EcH-induit ak pwodiksyon NO. Anplis de sa, li te obsève ke EcH te lakòz pwodiksyon egi NO nan kèk minit atravè AR ki enplike deklanchman eNOS nan HUVEcs, ki se ki konsistan avèk nati a ki pa genomik nan repons lan nan selil endothelial. AR a asosye ak pwoteyin echafodaj, ki gen ladan HSP90, HSP70 ak kinaz Src, nan sitoplasm la, epi li ka transpòte nan manbràn ki soti nan konplèks AR a nan 5 minit nan tretman testostewòn (23). Baze sou estrateji 'lapèch la sib', HSP90 te idantifye kòm sib la PhGs-makonnen, ki endike ke Ech ka fasilite disosyasyon nan AR soti nan pwoteyin yo echafodaj (25). Yon lòt etid sijere ke, nan ipotalamus la, EcH ka konbine avèk pòch AR nan asid amine Met-894 ak Val{-713 epi anpeche transpò AR sitoplasmik nan nwayo a (26). Sepandan, mekanis ki kache nan ki EchH medyatè sitoplasmik AR translokasyon nan manbràn nan mande pou plis envestigasyon. Se poutèt sa, gen plis rechèch obligatwa pou elicide mekanis nan ki EchH reyalize AR-depandan aktivasyon eNOS ak ki jan li ka asosye ak obligatwa nan HSP90 nan selil endothelial vaskilè.

Chemen PI3K/Akt se youn nan kaskad siyal ki pi enpòtan yo, se deklanchman ki pwovoke pa pwodui fosfatidilinositol-3,4,5-trisfosfat pou mare domèn omoloji N-terminal pleckstrin nan Ser/. Thr kinase Akt. Sa a fasilite rekritman Akt nan manbràn plasma a (27). Chemen PI3K/Akt ka jwe yon wòl enpòtan nan kontwòl detant NO-depandan pwovoke pa EcH.

Etid la prezan te revele ke pwodiksyon EcH-induit NO te siyifikativman redwi lè selil yo te enkubate ak wortmannin inibitè PI3K la. Yon rapò anvan te demontre ke 15 mg/kg EchH aktive chemen siyal PI3K/Akt nan selil mwèl zo 5-fluorouracil-siprime (28). Nan etid la prezan, inibitè PI3K diminye siyifikativman fosforilasyon eNOS EcH-induit nan Ser1177. Anplis, Akt aktivite te majorite reglemante pa en regilasyon chemen, patikilyèman PI3K-depandan fosforilasyon nan Ser473 (20). Nan etid prezan an, EcH pwovoke Akt fosforilasyon nan Ser473 nan yon fason ki depann de dòz la; menm jan an tou, yon etid anvan te demontre ke 5, 10 oswa 20 µM EcH egzèse yon efè kardyopwotektif kont tretman anoksi/repèfizyon nan yon fason ki depann de dòz pa potansyèlman upregulating p-Akt ak SLc8A3 (29). Regilasyon transkripsyon jèn Akt rete lajman enkoni (30); Se poutèt sa, etid la prezan konsantre sou efè regilasyon pòs-transcription EcH sou Akt. Lè w pran konklizyon ki endike anwo yo an konsiderasyon, li te dedwi ke aplikasyon EcH nan HUVEcs ka mennen nan aktivasyon an nan chemen an PI3K / Akt, ki fosforil eNOS epi, imedyatman, ogmante pwodiksyon NO.

An konklizyon, Ech se yon pwodwi natirèl ki se sitou izole nan HerbaCistanche.Mekanis potansyèl ki kache EcH-induit pwodiksyon NO nan selil endothelial ka gen ladan sa ki annapre yo (Fig. 6): i) EcH aji kòm yon ligand fonksyonèl nan AR ki lokalize nan caveolae yo nan manbràn selilè a; ii) PI3K mare nan domèn idrofob Akt nan Ser473 epi li fasilite rekritman Akt nan manbràn selilè a; iii) rekritman PI3K/Akt kaskad yo deklanche fosforilasyon eNOS ki depann de AR; ak iv) jenerasyon NO an se medyatè eNOS nan selil andotelyal yo. Obsèvasyon ke EcH pwovoke NO pwodiksyon atravè fosforilasyon AR-depandan eNOS ak patisipasyon chemen PI3K/Akt ka kontribye nan plis konpreyansyon sou efè vasorelaxant EcH. Anplis de sa, Ech la ki vize chemen NO ki sòti nan andothelial yo ka akòz efè ki pa genomik. Se poutèt sa, etid prezan an ka ede elicide mekanis yo nan ki EchH egzèse efè famasi li yo pou anpeche maladi kadyovaskilè.

Rekonesans

Pa aplikab.

Finansman

Etid la te sipòte pa Fondasyon Nasyonal Syans Natirèl Lachin nan (sibvansyon pa gen 81503333).

Disponibilite nan done epi materyèl yo

Ansanm done yo pwodwi ak analize pandan etid sa a yo disponib nan men otè ki koresponn lan sou demann rezonab.

Otè yo kontribisyon

LG ak XL te vin ansent ak fèt eksperyans yo. dL ak YZ te fè eksperyans yo. WZ ak JG analize done yo. LG te ekri maniskri a. XL te revize epi modifye maniskri a. Tout otè li epi apwouve maniskri final la.

1202 GUet al: ECHINACOSIDE PRODUI PWODIKSYON NITRIC OXID PA CHEMIN PI3K/AKT DEPANDAN AR.

Etik apwouve epi konsantman pou patisipe

Pa aplikab.

Pasyan konsantman pou piblikasyon

Pa aplikab.

Konpetisyon enterè yo

Otè yo deklare ke yo pa gen okenn enterè konpetisyon.

Referans

1. Chinwa Pharmacopeia komisyon:CistancheHerba. Nan: Farmakope Repiblik Pèp la nan Lachin 1. manton. Med. Sci. Press, Beijing, pp 135, 2015.

2. Jiang Z, Wang J, Li X ak Zhang X: Echinacoside akCistanche tubulosa(Schenk)R. wight amelyore bisphenol A-pwovoke tèstikul ak domaj espèm nan rat nan aks gonad reglemante anzim steroidojèn. J Ethnopharmacol 193: 321-328, 2016.

3. Liu J, Yang L, dong Y, Zhang B ak Ma X: Echinacoside, yon pwodwi natirèl enestimab nan tretman newolojik ak lòt maladi. Molekil 23: piiE1213, 2018.

4. Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S ak Muraoka O: Phenylethanoid oligoglycosides ak acylated oligosugars ak aktivite vasorelaxant soti nanCistanche tubulosa. Bioorg Med chem 14: 7468-7475, 2006.

5. Arnold WP, ​​Mittal cK, Katsuki S ak Murad F: oksid nitrique aktive guanylate cyclase ak ogmante nivo guanosine 3':5'-cyclic monofosfat nan divès kalite preparasyon tisi. Proc Natl Acad Sci USA 74: 3203-3207, 1977.

6. Gai XY, Tang F, Ma J, Zeng KW, Wang SL, Wang YP, Wuren TN, Lu dX, Zhou Y ak Ge RL: Efè antiproliferatif nan echinaco-side sou rat pulmonè selil misk lis nan ipoksi. J Pharmacol Sci 126: 155-163, 2014.

7. Li WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ ak Tu PF: Echinacoside lakòz detant andotelyo-depandan nan bag aòtik rat atravè yon chemen NO-cGMP. Planta Med 75: 1400-1404, 2009.

8. Gai XY, Wei YH, Zhang W, Wuren TN, Wang YP, Li ZQ, Liu S, Ma L, Lu dX, Zhou Y ak Ge RL: Echinacoside pwovoke rat poumon vazorelaxasyon atè pa louvri NO-cGMP-PKG-. Chanèl BKca ak diminye nivo entraselilè ca2 plis. Acta Pharmacol Sin 36: 587-596, 2015.

9. Maruhashi T, Kihara Y ak Higashi Y: Evalyasyon vazodilatasyon endothelium-endepandan: Soti nan metodoloji nan pèspektiv klinik. J Hypertens 36: 1460-1467, 2018.

10. Ahmad KA, Ze H, chen J, Khan FU, chen X, Xu J ak dérivés sou venn lonbrit imen selil endothelial kont aksidan oksidatif estrès-induit: Patisipasyon nan antioksidasyon ak PI3k / Akt / eNOS / NO chemen siyal. Biomed Pharmacother 106: 1734-1741, 2018.

11. Yu J, Akishita M, Eto M, Koizumi H, Hashimoto R, Ogawa S, Tanaka K, Ouchi Y ak Okabe T: Src kinase-medyatè androjèn reseptè-depandan ki pa genomik aktivasyon nan kaskad siyal ki mennen nan endothelial nitrique oksid sentaz . Biochem Bioph Res commun 424: 538-543, 2012.

12. Yu J, Akishita M, Eto M, Ogawa S, Pitit B, Kato S, Ouchi Y ak Okabe T: Aktivasyon depandan de reseptè Androjen nan sentaz oksid nitrique endothelial nan selil endothelial vaskilè: Wòl fosfatidilinositol {{3} }kinase/Akt pathway.Endocrinology 151: 1822-1828, 2010.

13. Pittarella P, Squarzanti dF, Molinari c, Invernizzi M, Uberti F ak Reno F: NO-depandan pwopagasyon ak migrasyon pwovoke pa vitamin d nan HUVEc. J Steroid Biochem 149: 35-42, 2015.

14. Li Y, Luan Z, Fu X ak Xu X: Overexpression nan dekoupling pwoteyin 2 inibit segondè glikoz-induit apoptoz nan venn lonbrit imen selil endothelial. Int J Mol Med 37: 631-638, 2016.

15. Xiao-Hong d, chang-Qin X, Jian-Hua H, Wen-Jiang Z ak Bing S: Icariin retade omocysteine-induit endothelial senesans selilè ki enplike aktivasyon nan chemen an siyal PI3K/AKT-eNOS. Pharm Biol 51: 433-440, 2013.

16. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano Md, Fujimoto EK, Goeke NM, Olson BJ ak Klenk dc: Mezi pwoteyin lè l sèvi avèk asid bicinchoninic. Anal Biochem 150: 76-85, 1985.

17. Gu L, Zhong X, Lian d, Zheng Y, Wang H ak Liu X: Biosentèz triterpenoid ak repons transkripsyon an pwovoke pa oksid nitrique nan fèmantasyon submerged.Ganoderma lucidum. Pwosesis Biochem 60: 19-26, 2017.

18. Ellinsworth dc, Sandow SL, Shukla N, Liu Y, Jeremy JY ak Gutterman dd: Endothelium-derived hyperpolarization and coronary vasodilation: wòl divès ak entegre nan asid epoksidik-icosatrienoic, oksijene idwojèn, ak junctions gap. Mikwosikilasyon 23: 15-32, 2016.

19. Freed JK ak Gutterman dd: kominikasyon se kle: Mekanis siyal entèselilè nan vazodilatasyon. J cardiovasc Pharm 69: 264-272, 2017.

20. Quillon A, Fromy B ak debret R: Deteksyon mikwo-anviwònman Endothelium ki mennen nan vazodilatasyon medyatè oksid nitrique: Yon revizyon siyal nève ak byomekanik. Oksid nitrique 45: 20-26, 2015.

21. Torres-Estay V, carreno dV, Francisco IF, Sotomayor P, Godoy AS ak Smith GJ: Reseptè androjèn nan selil endothelial imen. J Endocrinol 224: 131-137, 2015.

22. deng Q, Zhang Z, Wu Y, Yu WY, Zhang J, Jiang ZM, Zhang Y, Liang H ak Gui YT: Aksyon ki pa genomik nan androjèn se medyatè pa fosforilasyon rapid ak règleman nan trafik reseptè androjèn. Cell Physiol Biochem 43: 223-236,2017.

23. de Oliveira TS, de Oliveira LM, de Oliveira LP, costa RMd, Tostes Rc, Georg Rc, costa EA, Lobato NS, Filgueira FP ak Ghedini Pc: Aktivasyon nan chemen PI3K/Akt medyatè pa reseptè estwojèn kont estwòn-induit deklanchman vaskilè siyal cGMP. Vascul Pharmacol 110: 42-48, 2018.

24. Li F, Yang X, Yang Y, Guo c, Zhang c, Yang Z ak Li P: Aktivite antiosteyopowotik nan echinakozid nan rat ovariectomized. Phytomedicine 20: 549-557, 2013.

25. Zeng KW, Liao LX, Wan YJ, Jiang Y ak Tu PF: sib farmakolojik idantifikasyon ak analiz efikasite nan glikozid phenylethanoid soti nanCistanchesHerba baze sou estrateji 'lapèch sib'. chin Tradit Herbal drugs 49: 173-178, 2018.

26. Jiang Z, Zhou B, Li X, Kirby GM ak Zhang X: Echinacoside ogmante kantite espèm nan rat pa vize reseptè androjèn ipotalamik la. Sci Rep 8: 3839-3850, 2018.

27. coffer PJ, Jin J ak Woodgett JR: Pwoteyin kinaz B (c-Akt): Yon medyatè miltifonksyon nan fosfatidilinositol 3-kinaz aktivasyon. Biochem J 335, 1-13, 1998.

28. Wang S, Zheng G, Tian S, Zhang Y, Shen L, Pak Y, Shen Y ak Qian J: Echinacoside amelyore fonksyon ematopoyetik nan 5-FU-induced myelosuppression sourit. Life Sci 123: 86-92, 2015.

29. chen M, Wang X, Hu B, Zhou J, Wang X, Wei W ak Zhou H: Efè pwoteksyon echinacoside kont blesi anoksi/reperfusion nan selil H9c2 atravè up-regulating p-AKT ak SLc8A3. Biomed Pharmacother 104: 52-59, 2018.

30. Abeyrathna P ak Su Y: Wòl kritik Akt nan fonksyon kadyovaskilè. Vascul Pharmacol 74: 38-48, 2015.