Cistanche Glyside Rg1 amelyore fibwoz fwa ki pwovoke aje pa anpeche enflamasome NOX4/NLRP3 nan sourit SAMP8.

Résumé.Ajese souvan akonpaye pablesi nan fwaepifibwoz, evantyèlman mennen nan yon bès nanfonksyon fwa. Sepandan, mekanis nanblesi fwa pwovoke ajeepifibwozse toujou pa konplètman konprann, nan pi bon an nan konesans nou an, epi kounye a pa gen okenn opsyon tretman efikas ki disponib pou aje fwa. Yo rapòte ke Cistanche Glycoside Rg1 (Rg1) fè efè anti-aje pisan akòz pisan antioksidan ak aktivite anti-enflamatwa. Etid la prezan te vize envestige efè pwoteksyon ak mekanis ki kache nan aksyon Rg1 nanblesi fwa pwovoke ajeepifibwoznansenesans-akseleresourit ki gen tandans 8 (SAMP8) sourit trete pou 9 semèn.

Klike la a pou w jwenn plis enfòmasyon sou tretman anti-aje Cistanche pou fwa

Rezilta istopatolojik yo te montre ke aranjman epatosit yo te dezòdone, koripsyon tankou vakuol te fèt nan majorite selil yo, ak kolagen IV ak TGF-. 1 nivo ekspresyon, ki te detekte atravè imunohistochimi, yo te siyifikativman ogmante tou nan gwoup SAMP8 la. Tretman Rg1 amelyore anpilblesi fwa ak fibwoz pwovoke aje, ak siyifikativman desann nivo ekspresyon kolagen IV ak TGF- 1. Anplis de sa, tach dihydro ethylene ak rezilta Western blotting te montre ke tretman Rg1 siyifikativman redwi nivo espès oksijèn reyaktif (ROS) ak IL-1. , ak desann nivo ekspresyon NADPH oksidaz 4 (NOX4), p47phox, p22phox, fosforilated-NF-κB, caspase-1, pwoteyin tankou speck ki asosye ak apoptoz ki gen yon domèn rekritman kaspase C-terminal ak domèn pirin fanmi NLR ki gen 3 (NLRP3) enflamasome, ki te siyifikativman regilasyon nan tisi fwa sourit SAMP8 granmoun aje yo. An konklizyon, konklizyon yo nan etid la prezan sijere ke Rg1 ka diminyeblesi fwa ak fibwoz pwovoke ajepa redwi NOX4-medyatè ROS estrès oksidatif ak anpeche deklanchman NLRP3 inflammasome.

Entwodiksyon

Fibwoz fwa se yon pwosesis dinamik ki asosye ak depo kontinyèl ak resorption nan matris la ekstraselilè, sitou kolagen fibrilè (3), ki se souvan premye etap la nan distòsyon achitekti ak malfonksyònman ki anpeche fonksyone nòmal nan fwa a (4). Si yo pa trete, fibwoz fwa ka mennen nan siwoz nan fwa avanse ak epatoma (4). Prèv akimile te sijere ke sansibilite nan fibwoz fwa ak epatit siyifikativman ogmante ak laj (5). Kidonk, li rete nan gwo enpòtans pou etidye aje fwa ak mekanis ki kache ki asosye yo bay nouvo estrateji pou anpeche fibwoz fwa ki gen rapò ak aje.7

reseptè rekonesans nan caspase-1 ak apoptoz ki asosye ak pwoteyin tankou speck ki gen yon domèn rekritman caspase C-terminal (ASC). Dapre konklizyon etid anvan yo, yo te dekouvri enflamasome NLRP3 a, yon kalite enflamasome ki eksprime toupatou nan tisi anpil, ki gen ladan fwa a, ki te enplike nan evolisyon fibwoz fwa a ak pwogresyon nan blesi fwa ak maladi fwa ki gen rapò ak laj ( 20-22). Lè yo aktive pa divès kalite irite, tankou ATP ak kristal kolestewòl, osi byen ke patojèn bakteri, viral ak chanpiyon (23,24), NLRP3 inflammasome reponn a enflamasyon nan ankouraje spirasyon nan yon seri de sitokin proenflamatwa, tankou IL-1. ak IL-18 (25). Anplis de sa, yo te rapòte ke twòp akimilasyon ROS aktive NLRP3 inflammasome nan fwa a pandan pwosesis la nan aje, evantyèlman mennen nan maladi fwa ki asosye aje (26).

Materyèl ak metòd

Animals and treatment. In total, 9 male senescence‑accelerated resistant mouse 1 (SAMR1) and 45 male SAMP8 mice (both age, 6 months; weight, 30‑40 g) were purchased from the Department of Experimental Animal Science, Peking University Medical Science Center (Beijing, China). The mice were maintained in an environmentally controlled room (temperature, 22‑25˚C; relative humidity, 50‑70%) under a 12‑h light/dark cycle with unlimited access to food and water. The SAMP8 mice were randomly divided into five groups (n=9 in each group): i) SAMP8 model group; ii) SAMP8 + apocynin (50 mg/kg) group; iii) SAMP8 + tempol (50 mg/kg) group; iv) SAMP8 + Rg1 (5 mg/kg) group; v) SAMP8 + Rg1 (10mg/kg) group; and vi) SAMR1 mice group, which were used as the control group. The treatments were administered intragastrically (0.1 ml/10 g body weight), and the mice treated with either apocynin (MilliporeSigma), tempol (MilliporeSigma) or Rg1 (content >98 pousan; Chengdu Desite Biotechnology co, Ltd.) yon fwa pa jou pou 9 semèn. Gwoup SAMP8 ak SAMR1 yo te trete ak dlo distile pou 9 semèn. Apre 9 semèn tretman, yo te sakrifye sis sourit nan chak gwoup atravè dislokasyon nan matris. Fwa yo te rekòlte ak estoke nan -80˚C pou yo itilize apre yo nan eksperyans Western blotting, oswa yo te mete yo.

tome (Leica CM3050; Leica Microsystems GmbH) nan -20˚C. Seksyon yo te lave ak PBS ak enkubasyon ak 5 mg / l solisyon Hoechst 33258 (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) nan tanperati chanm pou 5 min. Lè sa a, seksyon yo te sele ak yon ajan trempe anti-fluoresans (Beyotime Institute of Biotechnology) epi yo te vizyalize lè l sèvi avèk yon mikwoskòp fluoresans (Olympus IX72; Olympus Corporation; agrandisman, x400). Lojisyèl Image Pro Plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc.) te itilize pou detekte dansite mwayèn fliyoresan wouj ki soti nan twa jaden de vi chwazi owaza nan chak seksyon pou endike pwodiksyon ROS.

Egzamen patolojik nan tisi fwa a.

Chanjman mòfolojik nan fwa yo te egzamine lè l sèvi avèk H&E, peryodik asid-Schiff (PAS), ak teknik tach trichrome Masson la. H&E tach se metòd ki pi komen pou obsève chanjman patolojik nan tisi (38). Yon ti tan, yo te fikse espesimèn fwa yo nan 4 pousan paraformaldeyid pou 24-48 èdtan, yo te dezidrate epi yo te mete yo nan parafin, epi yo te koupe yo an seksyon 5-µm epè. Seksyon fwa yo (n=4) yo te deparafinize nan xylene ak reyidrate nan seri alkòl gradye (etanòl anidrid, etanòl 85 pousan, etanòl 75 pousan), Lè sa a, tache ak ematoksilin pou 3 min ak eosin pou 30 sec. Tout etap sa yo te fèt nan tanperati chanm. Seksyon yo te sele ak résine net epi obsève lè l sèvi avèk yon mikwoskòp limyè (Olympus IX72; Olympus Corporation; agrandisman, x200).

Tach imunohistochimik.

Seksyon ki gen ladann parafin yo (n=4) yo te deparafinize ak reyidrate, dapre metòd ki dekri pou tach H&E. Lè sa a, seksyon yo te enkube ak 3 pousan H2O2 pou 10 minit nan 37˚C pou bloke aktivite peroksidaz andojèn yo anvan yo te benyen nan tanpon sitrat sodyòm bouyi pou 7 minit nan yon fou mikwo ond pou rekipere antijèn. Apre sa, yo te enkube seksyon yo ak 10 pousan serom kabrit (cat. No. C0265; Beyotime Institute of Biotechnology) nan 37˚C pou 30 minit pou bloke lyezon ki pa espesifik. Lè sa a, seksyon yo te enkube ak antikò prensipal sa yo nan 4˚C lannwit lan: Lapen poliklonal anti-kolagen IV (1:100; Bioworld Biotechnology, Inc.; Cat. No. BS1072), lapen poliklonal anti-NLRP3 (1:100; Bioworld Biotechnology, Inc.; Cat. No. BS90949) ak lapen poliklonal anti-TGF-1 (1:100; Abcam; Cat. No. ab92486).

Western blotting.

Pwoteyin total te ekstrè nan tisi fwa (n{{0}}) lè l sèvi avèk RIPA lysis tanpon (cat. No. P0013B; Beyotime Institute of Biotechnology) ak yon echantiyon otomatik rapid fanm k'ap pile machin (Jinxing Industrial Development Co., Ltd .) nan 65 Hz pou 60 segonn nan 4˚C. Pwoteyin total yo te mezire lè l sèvi avèk yon twous tès pwoteyin BCA ak pwoteyin yo (20 µg) yo te separe atravè 8-15 pousan SDS/PAGE. Pwoteyin ki separe yo te transfere imedyatman sou manbràn PVDF (MilliporeSigma) epi yo te bloke ak 5 pousan lèt ekreme nan tanpon TBS-0.05 pousan Tween-20 (TBST) pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Apre sa, yo te enkube manbràn yo ak antikò prensipal sa yo lannwit lan nan 4˚C: Anti-NLRP3 (1:1,000; Bioworld Biotechnology, Inc.; cat. No. BS90949), anti-ASC (1:1). ,000; BIOSS; Cat. No. bs-67412-R), anti-caspase-1(1:1,000; Abcam; Cat. No. ab1872), anti-IL-1 (1:500; Abcam;cat. No. ab9722), anti-NOX4 (1:1,000; Bioworld Biotechnology,Inc.; Cat. No. BS60435), anti-p47phox (1:1,{ {40}}; Bioworld Biotechnology, Inc.; Cat. No. BS4852), anti-p22phox (1:1,000; Bioworld Biotechnology, Inc.; Cat. No. BS60290), anti-NF-κB p65 (1:1,000; Wuhan Sèvis Teknoloji Co, Ltd.;

Apre enkubasyon antikò prensipal la, yo te lave manbràn yo ak TBST twa fwa (10 min chak fwa) epi yo te enkube ak HRP-konjige kabrit anti-lapen IgG (1:10,000; Affinity Biosciences; Cat. No. S. 0001) ak kabrit anti-sourit IgG (1:10,000 Affinity Biosciences; cat. No. S0002) antikò segondè pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Gwoup pwoteyin yo te vizyalize lè l sèvi avèk yon twous ECL (Bio-Rad Laboratories, Inc.) ak yon Bioshine Chemi Imaging System (Q4600 Mini; Shanghai Bioshine Technology). Dansite optik chak gwoup te semi-quantifye lè l sèvi avèk lojisyèl ImageJ 1.53a (Enstiti Nasyonal Sante) ak nòmalize nan ekspresyon GAPDH.

Analiz estatistik.

Tout done yo prezante kòm mwayèn ± SD nan pi gwo pase oswa egal a 3 eksperyans endepandan. GraphPad Prism 8.0 lojisyèl (GraphPad Software, Inc.) te itilize pou fè analiz estatistik yo. Yo te fè ANOVA yon sèl-fason ki te swiv pa tès post hoc Tukey a pou konpare diferans ki genyen ant gwoup yo. P< 0.05 was considered to indicate a statistically significant difference.

Rezilta yo

eksplore si Rg1 soulaje fibwoz fwa ki gen rapò ak aje, yo te mezire depozisyon kolagen an nan tisi fwa lè l sèvi avèk tach Masson la. Rezilta yo te montre ke zòn ble pozitif yo te ogmante siyifikativman nan tisi fwa gwoup SAMP8 la konpare ak gwoup SAMR1 (figi 2A ak B). Sepandan, konpare ak gwoup modèl SAMP8 la, nivo depozisyon kolagen an te siyifikativman redwi nan gwoup tretman tempol, apocynin ak Rg1 (5 ak 10 mg / kg) (figi 2A ak B). Anplis de sa, nivo ekspresyon kolagen IV ak TGF-1 yo te mezire nan tisi fwa lè l sèvi avèk tach imunohistochimik.

Rezilta yo nan tach yo kolagen an IV te revele ke kolagen an IV te eksprime nan nivo ki ba nan tisi yo fwa nan gwoup la SAMR1 (Fig. 3A ak C). Sepandan, konpare ak gwoup SAMR1 la,

Tretman Rg1 diminye pwodiksyon ROS ak ekspresyon NOX4 nan fwa sourit SAMP8 yo. ROS se yon faktè enpòtan nan devlopman fibwoz epatik (41). Nan etid sa a, yo te itilize yon sond ROS, DHE, pou detekte nivo pwodiksyon ROS nan tisi fwa yo. Rezilta yo te montre ke te gen nivo ki ba nan pwodiksyon ROS nan tisi fwa gwoup SAMR1 la. Sepandan, konpare ak gwoup SAMR1, nivo pwodiksyon ROS yo te ogmante siyifikativman nan gwoup SAMP8 (figi 4A ak B), pandan ke yo te konpare ak gwoup SAMP8, tempol, apocynin ak tretman Rg1 (5 ak 10 mg/kg). redwi nivo pwodiksyon ROS nan tisi fwa yo (figi 4A ak B). Pou konfime efè NOX4 sou akimilasyon ROS pandan aje, yo te analize nivo ekspresyon pwoteyin ki gen rapò ak NOX4. Rezilta yo te demontre ke, konpare ak gwoup SAMR1, nivo ekspresyon NOX4, p22phox ak p47phox nan tisi fwa yo te siyifikativman regilasyon nan gwoup SAMP8 (Fig. 5A-D).

Sepandan, konpare ak gwoup la SAMP8, tanpòl, apocynin ak Rg1 (5 ak 10 mg / kg) tretman siyifikativman downregulated nivo ekspresyon NOX4, p22phox ak p47phox nan tisi fwa pandan aje (Fig. 5A-D). Done sa yo sijere ke tretman Rg1 ka amelyore blesi estrès oksidatif ROS-induit nan tisi fwa pa anpeche NOX4 pandan aje nan sourit.