Aktivite konpleman reglemante nan Glomerulopathy C3 pa IgG-faktè H Pwoteyin Fusion ak ak san Domèn vize Properdin

Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Alyssa C. Gilmore, Yuchun Zhang, H. Terence Cook', Deborah P. Lavin, Suresh Katti, YiWang2, Krista K. Johnson, SungKwon Kim², ak Matthew C. Pickering

'Sant pou Maladi Enflamatwa, Imperial College London, UK; and²Alexion Pharmaceuticals, New Haven, Connecticut, USA

C3 glomerulopatikarakterize pa akimilasyon konpleman C3 nan glomeruli. Kòz yo enkli men yo pa limite a, anomali nan faktè H, pi gwo regilatè negatif nan chemen altènatif konpleman an. Faktè H-defisi (Cfh-/-) sourit devlope C3glomerulopatiansanm ak yon rediksyon nan nivo plasma C3. Sèvi ak modèl sa a, nou evalye efikasite de pwoteyin fizyon ki genyen domèn regilasyon altènatif faktè H (FH1-5)

lye ak swa yon imunoglobulin sourit ki pa vize (IgG-FH1-5) oswa yon antikò propedin anti-sourit (Anti-P-FH1-5). Tou de pwoteyin yo te ogmante plasma C3 epi redwi depo glomerulè C3 nan yon limit ekivalan, ki sijere ke properdin-targeting pa te obligatwa pou FH1-5 chanje deklanchman C3 nan swa plasma oswa glomeruli. Apre administrasyon IgG-FH1-5, nivo plasma C3 te korelasyon tanporèman ak chanjman nan nivo faktè B tandiske nivo plasma C5 te korelasyon ak chanjman nan nivo plasma properdin. Miyò, ogmantasyon nan plasma

Nivo C5 ak properdin te pèsiste pou pi lontan pase ogmantasyon nan C3 ak faktè B. Nan sourit Cfh-/- IgG-FH1-5 redwi blesi ren pandan nefrit nefrotoksik serik akselere. Kidonk, done nou yo demontre ke IgG-FH1-5 te retabli aktivite sikile altènatif nan chemen an ak redwi depo glomerulè C3 nan sourit Cfh-/- e ke nivo plasman properdin yo se yon makè sansib nan aktivite C5 konvètaz nan defisi H faktè. Pwoteyin FH1-5 konjige imunoglobulin, atravè mwatye lavi plasma ki konparativman long li yo, ka yon terapi potansyèl pou C3.glomerulopati.

Cistanche ka ede ak Glomerulopathy

Deklarasyon tradiksyon

C3 glomerulopati(C3G) se yon maladi ren karakterize pa akimilasyon nòmal nan konpleman C3 nan glomeruli ak domaj glomerulèr. Li se akòz aktivasyon san kontwòl nan chemen an altènatif konpleman. Pwoteyin fizyon, ki gen ladan domèn fonksyonèl regilatè chemen altènatif la, faktè H (FH), ki lye ak yon antikò, retabli règleman konpleman, ak redwi glomerulè C3 nan yon modèl sourit C3G. Konjigezon antikò ki pa vize a te lakòz yon mwatye lavi plasma pwoteyin fizyon konparativman long, e sa a, oswa metòd konjigezon menm jan an, ta ka itilize pou ogmante fonksyon FH nan terapi C3G.

C3 glomerulopati(C3G) se yon maladi ren konpleman-medyatè karakterize pa kantite nòmal C3 nan glomeruli.1 Li ka pwogrese nan ensifizans ren epi li pa gen okenn tretman definitif.2 C3G asosye ak aktivasyon nòmal nan konpleman altènatif chemen an (AP). Aktivasyon AP rezilta nan pwodiksyon C3bBb (C3 konvètaz), yon anzim ki fende C3. Apre adisyon a nan yon lòt molekil C3b, konplèks C3bBbC3b ki kapab lakòz (C5 convertase) ka fann konpleman C5. San kontwòl

Aktivasyon AP nan C3G ka asosye ak yon rediksyon nan sikile C3, C5, faktè B (FB), ak properdin. Kòz deklanchman AP san kontwòl yo enkli pèt chanjman fonksyon nan regilatè konpleman ak pwogrè nan chanjman fonksyon nan aktivateur konpleman.2 Regilatè AP negatif kle a se faktè H (FH), epi defisi FH nan imen, kochon, ak sourit asosye ak C3G. 3 Faktè nefritik C3, yon antikò ki estabilize konvètaz AP C3 a souvan nan C3G.4 Faktè nefritik C3 ka lakòz yon rediksyon nan C3 pou kont li (faktè nefritik C3 endepandan) oswa rediksyon nan tou de C3 ak C5 (pwopriyete). depandan faktè nefritik C3).5,6

Malgre ke defisi properdin pa t amelyore nivo plasma C3, nivo C5 te ogmante, sa ki sijere ke properdin te nesesè pou aktivite C5 la, men se pa C3 konvètaz la.8,9

Administrasyon sourit10 oswa imen FH11,12 sou Cfh–/– sourit diminye tach glomerulè C3 ak ogmante nivo C3 sikile. Konstriksyon ki genyen sèlman domèn regilasyon ak vize nan FH (mini-FH molekil) yo efikas tou nan modèl sa a.13 Lòt apwòch yo enkli pwoteyin ki vize sit aktivasyon konpleman. Men sa yo enkli TT30,14 yon pwoteyin ki genyen domèn regilasyon konpleman FH (FH1-5) ki lye ak domèn konpleman-obligatwa nan reseptè konpleman 2, ak molekil omodimèrik FH,15 molekil mini-FH ki gen domèn konpleman-obligatwa. nan pwoteyin ki gen rapò ak faktè H 1.

Paske itilite terapetik pou anpeche deklanchman C3 konpleman an anba envestigasyon nan C3G,2 li enpòtan pou konprann sinetik depo glomerulè C3 ak relasyon li ak aktivasyon AP nan tou de glomeruli ak sikilasyon an. Nan modèl glomerulonefrit iminitè konplèks, C3c glomerulè disparèt nan lespas 24 èdtan apre yo te anpeche deklanchman konpleman, tandiske glomerulè C3d te pèsiste pou semèn.16 Menm jan an tou, nan sourit Cfh–/–, FH ekzojèn lakòz yon rediksyon nan tach glomerulè C3c nan 24 èdtan. , tandiske glomerulè C3d rete san chanjman.11

Nan etid sa a, nou te envestige efikasite 2 nouvo pwoteyin fizyon ak aktivite regilasyon konpleman nan modèl sourit Cfh–/– C3G. Pwoteyin yo te genyen domèn regilasyon sourit FH (FH1-5), ki te konjige ak Ig sourit pou pwolonje mwatye lavi byolojik la. Youn nan pwoteyin fizyon yo, ki rele IgG-FH1-5, te konjige ak yon antikò monoklonal sourit ki pa vize. Lòt la, ki rele anti-P-FH1-5, yo te konjige ak yon antikò monoklonal kont properdin sourit. Sa a te fè teste ipotèz la ki vize pwoteyin fizyon sa a nan sit aktivasyon konpleman, pa kominike avèk depo properdin, ta amelyore règleman konpleman tisi. Done nou yo demontre ke tou de pwoteyin ki pa vize yo (IgG-FH1-5) ak pwoteyin ki vize apwopriye yo (anti-P-FH1-5) te retabli règleman plasma ak glomerulè C3 nan sourit Cfh–/–. Etid Timecourse te montre ke restorasyon nan nivo C3 ak FB reflete nivo pwoteyin fizyon yo nan sikilasyon an. Kontrèman, ogmantasyon nan plasma C5 te pèsiste apre pwoteyin fizyon yo te netwaye nan sikilasyon an. Nou montre ke IgG-FH1-5 te amelyore blesi glomerulè pandan nefrit nefrotoksik serik akselere nan sourit Cfh–/–.

cistanche ka trete maladi ren amelyore fonksyon ren

REZILTA

Jenerasyon pwoteyin fizyon ak evalyasyon in vitro ak in vivo nan aktivite Pwoteyin fizyon yo te kreye pa lyen 5 premye domèn kout konsansis repete (SCR) nan sourit FH (FH1-5) swa nan yon antikò anti-sourit properdin (antikò). -P-FH1-5) oswa yon antikò ki gen yon domèn Ig ki pa vize (IgG-FH1- 5, Figi Siplemantè S1). Yo te evalye aktivite pwoteyin yo lè l sèvi avèk yon tès emolitik AP-espesifik (Figi 1a). Anti-P-FH1-5 ak IgG-FH1-5 anpeche emoliz nan yon fason ki depann de dòz la ak pi gwo puisans pou anti-P-FH1-5. Anti-properdin (anti-P) tou redwi emoliz nan yon fason ki depann de dòz, men kontwòl IgG la pa te gen okenn efè. Apre piki ekimolar pwoteyin yo nan sourit Cfh–/–, pwoteyin IgG-FH1-5 te detekte jiska 11 jou apre piki, tandiske anti-P-FH1-5 te detekte jiska 4 jou apre. piki (figi siplemantè S2). Pou detèmine si IgG-FH1-5 ak anti-P-FH1-5 ta ka retabli règleman AP plasma nan sourit Cfh–/–, nou te premye mezire nivo plasma C3 apre piki nan pwoteyin fizyon yo (Figi 1b) . Administrasyon swa IgG-FH1-5 oswa anti-P-FH1-5 ogmante siyifikativman plasma C3 nan 24 èdtan epi, nan yon limit pi piti, nan 96 èdtan apre piki (Figi 1b). Done sa yo te demontre ke tou de IgG-FH1-5 ak anti-P-FH{1-5 te kapab retabli tanporèman règleman AP plasma nan sourit Cfh–/–. Apre sa, nou te fè yon analiz detaye sou chanjman sa yo lè nou karakterize tan chanjman nan plasma C3, men tou nan plasma C5 ak pwoteyin chemen altènatif FB ak properdin. Ogmantasyon nan sikilasyon C5 ak nivo properdin pèsiste pi lontan pase ogmantasyon nan C3 ak FB apre administrasyon IgG-FH1-5 ak anti-P-FH1-5 nan sourit Cfh–/–.

Nou konpare sinetik chanjman nan C3, C5, FB, ak properdin lè nou mezire pwoteyin nan entèval jiska 27 jou apre yon sèl piki swa IgG-FH1-5 oswa anti-P-FH1-5 ( Figi 2). Apre administrasyon IgG-FH1-5, pik ogmantasyon nan C3, C5, FB, ak properdin tout te fèt nan jou 1 apre piki. Tan pou chanjman sa yo tonbe nan nivo pre-tretman diferan. Retounen nan nivo pretretman yo te fèt ant jou 1 ak 4 pou FB, ant jou 7 ak 11 pou C3, ak ant jou 14 ak 21 pou tou de properdin ak C5 (Figi 2a, c, e, ak g). Apre administrasyon anti-P-FH1-5, pik C3 nivo yo te fèt nan jou 1 men yo te tonbe nan nivo pretretman ant jou 4 ak 7 (Figi 2b). Nivo pik C5 yo te fèt nan jou 4 epi yo te retounen nan nivo pre-tretman ant jou 7 ak jou 11 (Figi 2d). Ogmantasyon pik nan FB te fèt nan jou 1 epi li te tonbe nan nivo pre-tretman ant jou 1 ak 4 (Figi 2f). Jan li te espere, pwòp plasma gratis te apovri apre piki swa anti-P-FH1-5 oswa anti-P (Figi 2h). Nivo propin nan plasma gratis rete ba pou jiska 7 jou apre anti-P-FH1-5 ak jiska 14 jou apre anti-P (Figi 2h). Malgre ke tou de pwoteyin fizyon yo te retabli tanporèman règleman AP plasma, dire amelyorasyon nan nivo C3, FB, ak C5 te reflete dire deteksyon yo nan plasma, ki te pi kout pou anti-P-FH1-5 (Figi Siplemantè S2) . An rezime, chanjman nan nivo C3 ak FB apre piki nan nenpòt pwoteyin yo te pi kout pase sa yo ki nan C5 ak properdin. Done sa yo sijere ke plasma FB se yon makè sansib nan aktivite konvètaz C3 nan anviwònman sa a, tandiske properdin se yon makè nan aktivite konvètaz C5. Miyò, apre piki anti-P, te gen yon ogmantasyon nan C5 nan 24 ak 96 èdtan ak jou 7.

Figi 1| (a) Konpleman tès emoliz altènatif ki depann de chemen an. Antikò yo te titre nan 2-dilusyon pliye soti nan 60 nM jiska 0.5 nM. IgG-FH1-5, anti-P-FH1-5, ak reyaktif anti-P yo redwi emoliz eritrosit lapen nan yon fason ki depann de dòz la. Pa gen okenn anpèchman itilize pwoteyin IgG-kontwòl la. Ba orizontal yo endike valè mwayen, ak ba erè reprezante SD. (b) Plasma konpleman C3 nan sourit Cfh–/– apre piki pwoteyin fizyon. Plasma C3 te mezire anvan ak 24 èdtan ak 96 èdtan apre administrasyon IgG-FH1-5 (triyang wouj, n ¼ 5) Anti-P-FH1-5 (triyang koulè wouj violèt, n ¼ 6), Anti -P (pwen vèt, n ¼ 5), ak IgG-kontwòl (pwen ble, n ¼ 5). Ba orizontal yo vle di valè vle di, ak moustach yo vle di SD. ***P # 0.001 parapò ak valè pre-tretman ak ki sòti nan 2-fason ANOVA ak tès konparezon miltip Bonferroni. FH, faktè H; P, properdin.

(Figi 2d). Jan nou te rapòte, 8,9 endike ke C5 convertase depann de properdin nan sourit Cfh–/–.

IgG-FH1-5 ak anti-P-FH1-5 redwi glomerulè C3c men pa t chanje tach C3d nan sourit Cfh–/–

Apre sa, nou te evalye enfliyans IgG-FH1-5 ak anti-P-FH1-5 sou glomerulè C3b/iC3b/C3c, C3d, properdin, ak pwoteyin ki gen rapò ak FH (FHR). Nan 96 èdtan apre piki IgG-FH1-5, tach glomerulè C3b/iC3b/C3c te redwi men glomerulè C3d (Figi 3a) ak tach FHR (Figi 3b) pa t '. Glomerulè C3b/iC3b/C3c rete san okenn chanjman ak swa IgG-kontwòl oswa anti-P. Modèl lineyè nòmal nan tach glomerular properdin nan sourit Cfh–/– ki pa trete9 rete 96 èdtan apre kontwòl IgG. Nan sourit Cfh–/– yo te enjekte swa anti-P oswa IgG-FH1-5, nivo glomerular properdin te prèske detektab nan 96 èdtan (Figi 3b). San atann, piki anti-P-FH1-5 te lakòz yon modèl tach glomerulaire granulaire lè l sèvi avèk anti-properdin, anti-FH/FHR, ak anti-IgG (Figi 3b). Konklizyon sa a sijere ke pwoteyin anti-P-FH1-5 yo te depoze nan glomeruli. Piki pwoteyin anti-P-FH1-5 nan sourit sovaj te lakòz tach glomerulè ak anti-properdin, anti-FH/FHR, ak anti-IgG antikò nan 96 èdtan (figi siplemantè S3), ki endike ke sa a. reyaktif reyaji ak glomeruli nòmal. Sepandan, nou te espekile ke pwoteyin anti-P-FH1-5 te kapab tou kominike avèk properdin glomerulè ki te deja egziste nan sourit Cfh–/–. Lè nou te enjekte reyaktif la nan sourit Cfh–/– ki te pretrete ak anti-P pou retire properdin glomerulèr, te gen yon rediksyon nan modèl tach granulè yo lè l sèvi avèk anti-properdin, anti-FH/FHR, ak anti-IgG. Figi siplemantè S4). Obsèvasyon sa yo endike entèraksyon glomerulè pwoteyin anti-P-FH1-5 nan sourit Cfh–/– an pati depann de properdin glomerulèr.

IgG-FH1-5 amelyore blesi ren pandan nefrit nefrotoksik serik akselere nan sourit Cfh–/–

Nan pasyan ki gen C3G, blesi ren egi ka devlope nan yon kontèks enfeksyon entèkouran. Pa egzanp, pèt fonksyon ren nan nefropati FHR5 ki asosye ak epizòd ematuri makroskopik sinfarinjitik.17 Disregulasyon C3 ki kache nan pasyan C3G gen anpil chans pou rezilta nan blesi ren améliorée konpleman apre yon deklanche ki lakòz enflamasyon ren. Pou modèl sa a, nou pwovoke akselere serom nefrotoksik nefrit, yon konplèks iminitè

Figi 2| Kou profil konpleman Plasma nan sourit Cfh–/– yo te enjekte ak IgG-FH1-5 ak anti-P-FH1-5. Plasma C3 (a,b), C5 (c,d), FB (e,f), ak properdin (P; g,h) soti nan kòmansman eksperimantal jiska 27 jou apre yon sèl piki IgG-FH{{1{{21 }}}} (a,c,e,g; triyang wouj, n ¼ 5) oswa anti-P-FH1-5 (b,d,f,h; triyang wouj, n ¼ 6). Kontwòl yo enkli anti-P (pwen vèt, n ¼ 5) ak yon antikò monoklonal izotip matche (IgG-kontwòl; pwen ble, n ¼ 5). Ba orizontal yo vle di valè vle di, ak moustach yo vle di SD. *P # 0.05, **P # 0.01, ***P # 0.001 kont valè pre-tretman ak sòti nan 2-fason analiz divèjans ak tès Bonferroni konparezon miltip. FB, faktè B; FH, faktè H.

modèl glomerulonefrit ki enplike konpleman ak chemen reseptè Fc medyatè,18,19 nan sourit Cfh–/–. Nou te deja montre ke sourit Cfh–/– yo ipèrsansibilite nan blesi ren nan anviwònman sa a7 ak ipotèz ke pwoteyin FH1-5, lè yo amelyore règleman AP, ta ka amelyore blesi ren konpleman-medyatè nan modèl sa a. Paske done nou yo te endike ke pwoteyin anti-P-FH1-5 te depoze nan glomeruli nòmal, nou te itilize IgG-FH1-5 pandan nefrit nefrotoksik serik akselere. Vennkat èdtan anvan piki serom nefrotoksik mouton, sourit yo te resevwa yon piki ip swa IgG-kontwòl (n ¼ 7) oswa IgG-FH 1-5 (n ¼ 8). Pwotokòl eksperimantal la montre nan Figi 4a. Sourit yo te touye 6 jou apre administrasyon serom nefrotoksik mouton. Tout 3 mezi istolojik nan patoloji glomerulèr (nòt severite, nimewo total selil, ak nimewo makrofaj) te siyifikativman pi ba nan gwoup IgG-FH1-5 (Figi 4b). Blesi tubulointerstitial la te pi ba tou nan gwoup IgG-FH1-5 (Figi 4b). Ure serik te siyifikativman elve nan

Figi 3| Imunostaining konpleman glomerulè nan sourit Cfh–/– 96 èdtan apre piki swa IgG-FH1-5 oswa anti-P-FH1-5. (a) Imaj reprezantan ansanm ak quantifikasyon glomerulè C3b/iC3b/C3c ak C3d nan 4 gwoup eksperimantal yo: IgG-FH1-5 (triyang wouj, n ¼ 5), anti-P-FH1-5 (triyang koulè wouj violèt, n ¼ 6), anti-P (pwen vèt, n ¼ 5), ak kontwòl IgG (pwen ble, n ¼ 5). (b) Pwen done yo reprezante valè medyàn yo, epi moustach yo vle di yon seri ant katil. Valè P ki sòti nan tès Kruskal-Wallis ak tès konparezon miltip Dunn. (b)Imaj ki reprezante IgG glomerulè, FHR, ak, tach nan 4 gwoup eksperimantal yo. Ba ¼ 100 mm.AFU, inite fliyoresan abitrè; FH, faktè H; P, properdin. Pou optimize gade imaj sa a, tanpri gade vèsyon an sou entènèt nan atik sa a nanwww.kidney-international.org.

gwoup IgG-kontwòl la, men chanjman nan albumin serik ak rapò albumin-a-kreyatinin nan pipi pa t diferan (Figi 4b). Kòm espere, glomerulè C3b/iC3b/C3c te siyifikativman redwi nan gwoup IgG-FH1-5 (Figi 4b), men glomerulè IgG sourit (Figi 4b) ak mouton IgG (done yo pa montre) pa t diferan ant gwoup yo. .

Figi 4| Pretretman ak IgG-FH1-5 amelyore blesi ren pandan nefrit nefrotoksik nan serik akselere nan sourit Cfh–/–. (a) Chema pwotokòl nefrotoksik serik akselere a. Sourit pre-vaksen ak IgG mouton yo te resevwa swa IgG-FH1-5 (gwoup tretman, n ¼ 8) oswa IgG-kontwòl (gwoup kontwòl, n ¼ 7) 24 èdtan anvan administrasyon serom nefrotoksik mouton an. (b) Fonksyon ren ak istoloji 6 jou apre endiksyon nefrit nefrotoksik serik akselere nan sourit ki te trete ak swa IgG-FH1-5 (tretman; triyang wouj, n ¼ 8) oswa IgG-kontwòl (kontwòl; ti sèk ble, n). ¼ 7). Ba orizontal yo vle di valè medyàn, ak moustach yo vle di yon seri entèrkwatil. *P # 0.05, **P # 0.01, ***P # 0.001 kont kontwòl ak sòti nan tès Mann-Whitney. FH, faktè H; P, properdin.

DISKISYON

Tou de IgG-FH1-5 ak anti-P-FH1-5 nòmalize nivo C3, FB, ak C5 nan sourit Cfh–/–. Konklizyon sa a konsistan avèk lefèt ke domèn regilasyon konpleman FH sourit yo sitiye nan domèn SCR 1 jiska 5 (yon sit ki konekte C3b ak aktivite kofaktè pou klivaj faktè I nan C3b).20 Domèn rekonesans sifas, ki Enfliyans lyezon nan eparin ak selil andotelyal epi yo gen ladan yon dezyèm sit C3b-obligatwa, yo prezan nan domèn SCR 18 jiska

20 (FH18-20) e se poutèt sa yo pa prezan nan pwoteyin fizyon yo.20 Men, tou de pwoteyin redwi glomerulè iC3b/C3b/C3c, ki endike ke FH18-20 pa t nesesè nan anviwònman sa a. Konklizyon sa a konsistan avèk done anvan yo ki montre sourit Cfh–/– ki eksprime yon pwoteyin FH mutan ki gen ladan domèn SCR 1 a 15 (Cfh–/– .FHD16-20) pa t devlope depozisyon C3 glomerulè nòmal.21,22 Sepandan, bèt Cfh–/–.FH D16-20 yo pa t kapab kontwole deklanchman C3 ansanm andotelyom ren yo epi yo te devlope mikroanjyopati tronbotik. Li posib ke, akòz mank nan sifas ki vize domèn FH18-20, administrasyon an nan pwoteyin fizyon ki gen FH1-5 nan deficiency FH ​​ta ka lakòz sansibilite nan mikroanjyopati tronbotik. Li posib tou ke ogmante avidity pou C3b obligatwa, anba estrikti dimerik nan pwoteyin fizyon yo, se ase pou konpanse pou absans la nan sifas la vize domèn FH18-20. Sepandan, rekonesans sifas C3b enfliyanse tou pa chanjman konformasyon nan FH.23 Yon Streptococcus pneumoniae FH-obligatwa pwoteyin (PspCN, ki mare SCR domèn 9), deklanche yon chanjman konformasyon FH, ak konplèks FH-PspCN a te ogmante C3b obligatwa ak amelyore aktivite pouri-akselere. Sit FH20 C3d-obligatwa a pa ekspoze nan FH men li vin ekspoze nan konplèks FH-PspCN la. Sa ka eksplike poukisa FH19-20 kominike avèk sifas C3d men FH pa fè sa.24,25 Nou espekile ke ajan nou yo, atravè chanjman konformasyon, ka kominike avèk efikasite tou de faz likid ak sifas C3b. Miyò, tou de IgG-FH1-5 ak anti-P-FH1-5 pwoteje eritrosit kont liz nan yon tès emoliz ki depann de AP.

Ni pwoteyin fizyon yo pa redwi tach glomerulè C3d, petèt akòz nati ki pèsistan nan C3d glomerulèr. Nan nefrit iminitè eksperimantal, C3c glomerulè rezoud nan lespas 24 èdtan apre yo sispann aktivasyon konpleman men C3d pèsiste pandan plizyè semèn.16 Anplis de sa, C3d glomerulè pèsistan nan nefrit lupus. Repete piki FH imen nan sourit Cfh–/– te montre yon rediksyon nan glomerulè C3d sou 10 jou.11 Li posib ke repete dòz IgG-FH1-5 ta ka diminye glomerulè C3d nan modèl sa a. Pa te gen okenn chanjman tou nan tach glomerulè FHR. Yo konnen anpil bagay sou fonksyon pwoteyin FHR sourit yo, men yo ka kominike avèk tou de C3b27,28 ak C3d.27 An reyalite, afinite aparan tou de FHR-A ak FHR-B pou C3d pi fò pase FH.27. Nou espekile ke pwoteyin glomerulè FHR gen chans rive nan klè nan glomeruli sèlman lè C3d yo te retire. Nan kontèks sa a, li remakab ke nan C3G imen, pwoteyin ki gen rapò ak faktè H 5 asosye ak C3d glomerulèr.29

Pwoteyin anti-P-FH1-5 yo te diminye nivo pwoprèdin nan plasma gratis jan yo te espere a paske pati antiproperdin nan pwoteyin fizyon sa a ka bloke aktivite AP (akòz deplètman pwoprèdin) pandan 8 jou apre yon sèl piki.30 Sepandan, done nou yo te montre ke efikasite FH1-5 nan ogmante nivo plasma C3 ak diminye tach glomerulè C3b/iC3b/C3c te konparab ant 2 pwoteyin fizyon yo (sa vle di, te endepandan de vize properdin). Anplis, tach nòmal glomerular properdin te siyifikativman redwi apre administrasyon swa anti-P oswa IgG-FH1-5. Evidamman, kontrèman ak pwoteyin C3d ak FHR, glomerular properdin fasilman netwaye apre restorasyon règleman C3. Properdin glomerulè chanje nan modèl apre administrasyon pwoteyin anti-P-FH1-5, men sa a te konplike pa obsèvasyon ke nou detekte depozisyon nan pwoteyin fizyon sa a nan tou de Cfh–/– ak glomeruli sovaj. Sa a te an pati akòz yon entèraksyon ak glomerular properdin, men depozisyon an nan glomeruli sovaj endike ke li te tou an pati antyèman nan-depandan sou konpleman glomerulèr ak gen anpil chans ki gen rapò ak pwopriyete yo fizikochimik nan pwoteyin fizyon an.

Done sinetik nou yo te demontre nouvo rezilta konsènan chanjman tanporèl nan FB, C5, ak properdin ki akonpaye ogmantasyon nan C3 nan sourit Cfh–/– apre piki pwoteyin fizyon yo. Nivo FB te ogmante rapidman apre piki

epi li te retounen nan nivo debaz nan yon moman kote tou de C5 ak nivo properdin te rete elve. Nivo Properdin nan sourit Cfh–/– yo te redwi nan nivo debaz epi yo te ogmante nan nivo nòmal (20 mg/ml30) apre piki IgG-FH1-5 epi yo te rete nan nivo sa yo pou omwen 14 jou. Yon kou tan menm jan an te wè pou ogmantasyon nan nivo plasma C5. Enpresyonan, IgG-FH1-5 te sitou absan nan sikilasyon an nan 11 jou, sa ki endike ke fòmasyon nan konvètaz C5 nan sourit Cfh–/– pi dousman pase sa ki nan konvètaz C3 a (paske nivo C3 tounen nan debaz ant 7 ak 11 jou). Plasma C5 ogmante apre tretman anti-P ak ogmante plis ak pwoteyin anti-P-FH1-5. Pakonsekan, tou de vize properdin ak efè FH1-5 yo te kontribye nan ogmante nivo C5 yo epi endike ke konvètaz C5 la se pasyèlman depandan nan properdin nan sourit Cfh–/–. Konklizyon sa a konsistan avèk amelyorasyon C5 dysregulation nan sourit ak deficiency konbine nan FH ak properdin.8,9 Nivo properdin sikile yo ka redwi nan C3G epi yo parèt korelasyon ak aktivite C5 konvètaz sifas kontrèman ak swa plasma C5 oswa C5b soluble. {30}}.31,32 Done nou yo sipòte yon lyen entim ant nivo properdin ak aktivite konvètaz C5 epi sipòte itilizasyon nivo properdin kòm yon biomarker nan deklanchman C5 glomerulè k ap kontinye.

Miyò, pwoteyin IgG-FH1-5 te toujou detekte nan sikilasyon an jiska 11 jou apre yon sèl piki. Sa a pi long pase sa nou te rapòte anvan pou pwoteyin sourit FH1-5 san konjige a, ki te retire nan sikilasyon an nan 24 èdtan. {9}} pwoteyin ki sòti nan konjigezon antikò a. Mwatye vi plasma a nan pwoteyin IgG-FH1-5 la te pi long tou pase sa nou te deja obsève pou tout longè FH.10,11 Pou egzanp, FH imen yo te retire nan sikilasyon an nan 96 èdtan apre yon sèl piki. nan sourit Cfh–/–.11 Konbine avèk done nou yo ki montre efikasite pwoteyin IgG-FH1-5 nan règleman konpleman, nou konsidere ke konjigezon FH1-5 pwoteyin pou pwolonje pwofil farmakokinetik li yo gen potansyèl terapetik. sèvis piblik nan C3G.

An rezime, nou montre ke, malgre pa gen domèn rekonesans sifas, pwoteyin fizyon FH1-5 yo te efikas nan diminye deklanchman glomerulèr C3 ak restore règleman konpleman plasma nan defisi FH. Pa te gen okenn avantaj evidan nan konjige domèn FH1-5 ak anti-propedin, epi pwoteyin IgG-FH1-5 te redwi blesi ren nan nefrit eksperimantal. Kontrèman ak defi yo nan pwodwi gwo echèl preparasyon nan FH pou itilizasyon terapetik, pwodiksyon an gwo echèl nan terapi ki baze sou antikò byen etabli, sa ki fè IgG-FH1-5 yon potansyèl terapetik atire pou C3G.

METÒD

Pwoteyin fizyon

IgG-FH1-5. 5 premye domèn sourit FH SCR (mFH1-5) lye

nan yon Ig sourit IgG1 ki pa vize (yon antikò anti-idyotipik leve kont yon antikò monoklonal sourit).

Anti-P-FH1-5. Murine FH1-5 lye ak antikò sourit anti-properdin (anti-P),30 bay Alexion pa W. Song, University of Pennsylvania).

Kontwòl. Kontwòl yo te matche ak izotip ki pa vize sourit Ig (IgG-kontwòl) ak sourit anti-properdin (anti-P) (figi siplemantè S1). Pwoteyin yo te pwodwi lè l sèvi avèk vektè pVEK ak selil Expi293 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA), pirifye lè l sèvi avèk pwoteyin A (MabSelect Sure, Cytiva, Marlborough, MA).

Egzamen emolitik AP-espesifik

Ven pousan serom sourit nòmal titrate soti nan 60 nM a 0.5 nM te enkube ak eritrosit lapen (1.5 106 selil/ml) nan 37 C pou 30 minit. Lage heme te kwantifye espektrofotometrik (dansite optik 415 nm); 100 pousan lysis te serom ki pa gen okenn inibitè.

Plasma FB ak FH

Plasma yo te jwenn apre santrifijasyon san kolekte nan tib ki gen asid etilendiamin tetraacetic (Sarstedt, Nordrhein-Westfalen, Almay). Pwoteyin yo te mezire pa kapilè elektwoforèz imunoessai (WES, ProteinSimple, San Jose, CA). Antikò yo te itilize yo te poliklonal anti-sourit FH antikò (Alexion Pharmaceuticals, Boston, MA) ak anti-sourit FB antikò (Abcam, Cambridge, UK); WES anti-lapen deteksyon modil (ProteinSimple, San Jose, CA) te itilize. Siyal kimiluminesan yo te analize ak Compass for SW lojisyèl (ProteinSimple, vèsyon 5.0.1), yo te kwantifye kòm zòn pik yo, epi yo te nòmalize nan kontwòl tès la.

Sourit

Tout sourit yo te loje nan kondisyon espesifik san patojèn; pwosedi yo te fèt dapre direktiv enstitisyonèl yo epi yo te apwouve pa Biwo Entèn Wayòm Ini a. Sourit C57BL/6 sovaj yo te achte nan men Jackson Laboratory (Bar Harbor, ME), epi yo te pwodwi sourit Cfh–/– jan sa te dekri anvan an.7 Sourit yo te matche pou laj ak sèks; Dòz ekimolar pwoteyin yo te administre atravè piki ip (1 mg pou anti-properdin ak IgG-kontwòl; 1.4 mg pou IgG-FH1-5 ak anti-P-FH1-5). Nefrit nefrotoksik serik akselere te pwovoke pa piki iv nan serom nefrotoksik mouton nan sourit pre-iminize ak mouton IgG.7 Administrasyon nan pwoteyin fizyon yo te fèt 24 èdtan anvan endiksyon serom nefrotoksik mouton (Figi 4a).

C3, C5, ak properdin gratis Plasma C3 te mezire pa anzim ki lye immunosorbent assay.14 Plasma "gratis" properdin ak C5 nivo yo te mezire lè l sèvi avèk electrochemiluminescence immunoassays (Meso Scale Discovery [MSD], Meso Scale Diagnostics, Rockville, MD) ak anti. - properdin oswa yon koutim anti-murine C5 kouvwi sou plak MSD segondè-obligatwa. Bound "gratis" properdin ak C5 yo te detekte ak anti-properdin (ki soti nan W. Song) oswa biotinylate monoklonal anti-C5 (Alexion) konbine avèk streptavidin-SULFO (MSD, Meso Scale Diagnostics). Siyal kimiluminesan an te akeri lè l sèvi avèk yon imaj SECTOR S 6000 (MSD, Meso Scale Diagnostics) epi yo te analize ak lojisyèl MSD Discovery Workbench (Meso Scale).

Dyagnostik, vèsyon 4.0.12.1). Recombinant murin properdin ak C5 yo te itilize kòm estanda.

Fonksyon ren ak istoloji

Hematuria ak proteinuria yo te evalye lè l sèvi avèk Hema-Combistix (Bayer, Reading, UK); Yo te mezire ure nan plasma epi yo te trete tisi ren yo jan sa te dekri anvan an.9 Yo te detèmine kreyatinin nan pipi sou echantiyon pipi tach lè l sèvi avèk tès Kreatinine Companion Protocol (#1012; Excell, Philadelphia, PA), ak tach pipi/ albumin plasma yo te mezire pa anzim-lye tès imunosorban (#E99-134; Bethyl Laboratories, Montgomery, TX). Seksyon ren asid peryodik-Schiff-tache yo te evalye nan yon mòd avèg epi yo klase dapre gravite blesi glomerulèr ak tubulointerstitial (0 [okenn], 1 [modere], 2 [modere]). Yo te evalye dis glomeruli pou chak seksyon pou detèmine nimewo selil glomerulè mwayèn yo. Yo te fè tach imunofluoresans sou kriseksyon 5-mm ki te monte lè l sèvi avèk mwayen Vectashield ak DAPI (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Antikò yo te itilize yo se fluorescein isothiocyanate (FITC)-konjige kabrit poliklonal anti-sourit C3b/C3c/iC3b (1:200; #55500; MP Biomedical, Santa Ana, CA)9; Fig-chèn-espesifik FITC-konjige kabrit poliklonal anti-sourit IgG (1:400; #F5387; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); FITC-konjige sourit monoklonal anti-kabri kabrit/mouton IgG (1:100; #F5137; Sigma-Aldrich); oswa FITC-konjige kabrit anti-moun properdin (1:50; #GAHu/PPD/FITC, Nordic Immu-no logic Laboratories, Copenhagen, Denmark).9 Kabrit biotinylated anti-sourit C3d (1:10; # BAF2655; R&D Systems). , Minneapolis, MN) te itilize sou seksyon byotin bloke (Biotin Blocking System; Agilent Dako, Santa Clara, CA), ak streptavidin AF488 segondè antikò (1:200; #S-32354; Thermo Fisher Scientific). FH te vizyalize nan rat pirifye anti-sourit CD16/CD32-seksyon bloke (1:100; BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) lè l sèvi avèk kabrit anti-moun FH (1:1000; #A312; Quidel, San Diego). , CA) ak monoklonal anti-kabrit IgG-FITC segondè antikò (1:100; script GT -34; F4891; Sigma-Aldrich). Yo te idantifye makwofaj glomerulè yo lè l sèvi avèk FITC-konjige rat anti-sourit CD68 (FA-11 script GTX43518; GeneTex, Irvine, CA). Yo te fè analiz imunoflyesans kantitatif lè l sèvi avèk yon mikwoskòp optik Leica DM4B makonnen ak kamera dijital Leica DFC700T (Leica Microsystems, Wetzlar, Almay) ak lojisyèl Image-Pro Plus (Media Cybernetics, Rockville, MD, vèsyon 7). Yo te egzamine dis glomeruli pou chak seksyon, e yo te eksprime entansite mwayen an nan inite syans fliyò abitrè.

Analiz estatistik

GraphPad Prism, vèsyon 8.0 (GraphPad, San Diego, CA) te itilize pou analiz estatistik. Repete-mezi 2-fason analiz divèjans ak tès Bonferroni konparezon miltip (faktè yo te tan ak tretman) yo te itilize pou analiz tan-kou a. Yo te itilize tès konparezon miltip Kruskal-Wallis ak Dunn lè yo konpare plizyè gwoup, epi yo te itilize tès Mann-Whitney pou 2 gwoup.

DIVILAJ

MCP te resevwa frè konsiltasyon nan men Alexion, ChemoCentryx, Novartis, Gyroscope, ak Achillion Pharmaceuticals. HTC te resevwa frè konsiltasyon nan men Alexion, Novartis, Aurinia, ak Achillion Pharmaceuticals. YZ, YW, KKJ, ak SK-K se anplwaye Alexion Pharmaceuticals. SK se yon ansyen anplwaye Alexion Pharmaceuticals e aktyèlman ap travay pa Gemini Pharmaceuticals. Tout lòt otè yo te deklare pa gen enterè konpetisyon.

REKONÈS

MCP se yon Wellcome Trust Senior Fellow nan Syans Klinik (referans sibvansyon 212252/Z/18/Z), ak ACG ak DPL yo sipòte pa bous sa a. YZ, SK, YW, KKJ, ak SK-K te finanse pa Alexion Pharmaceuticals.

MATERYÈL siplemantè

Fichye siplemantè (PDF)

Figi S1. Pwoteyin fizyon yo itilize nan etid sa a. Anti-P-FH1-5 konsiste de mFH1-5 ki lye ak yon antikò netralize anti-sourit properdin (anti-P; gade Miwa et al.30). Pwoteyin kontwòl yo enkli yon Ig sourit ki pa vize ki matche ak izotip (IgG-kontwòl) ak antikò netralize anti-sourit properdin (Anti-P). Figi S2. Analiz WES blot pou detekte FH1-5 nan echantiyon plasma ki soti nan sourit ki pa gen FH sou fòm piki ak swa (A) IgG-FH1-5 oswa (B) Anti-P-FH1-5. 94-kDaIgheavychainlinkedtomouseFH1-5 (HC-FH1-5) detektab jiska 11 jou apre enjeksyon IgG-FH1-5 ak jiska 4 jou apre enjekte pwoteyin anti-P-FH1-5 (bwat wouj ).Kontwòl yo enkli plasma nan sourit kalite sovaj kote yo detekte pwoteyin faktè H tout longè (FH, bwat nwa, liy C1) ak sourit ki pa enjekte ki pa enjekte FH, kote pa gen okenn FH evidan (bwat nwa, liy C2,). Jan nou espere, ni FHnorFH1-5 pa detekte nan echantiyon plasma ki soti nan sourit yo te enjekte ak kontwòl Anti-P oswa IgG.

Figi S3. Imunostaining konpleman glomerulè 96 èdtan apre piki IgG-kontwòl oswa anti-P-FH1-5 nan sourit sovaj. Yo montre imaj glomerulè reprezantan yo (ba ¼ 100 mm).

Figi S4. Wòl properdin nan depozisyon anti-P-FH1-5 nan glomeruli sourit ki pa gen anpil FH. Sourit Cfh–/– yo te enjekte swa kontwòl IgG oswa anti-P (tretman 1) ki te swiv 24-èdtan pita pa swa kontwòl IgG oswa anti-P-FH1-5 (tretman 2). Bèt yo te touye 120 èdtan apre yon sèl tretman epi yo te evalye tach glomerulè pou IgG, properdin, ak FH/FHR. Yo montre imaj reprezantatif yo. Piki anti-P redwi siyifikativman properdin (ranje 1, kolòn 2) men se pa FH/FHR (rete san chanje) oswa IgG (rete absan). Administrasyon anti-P-FH1-5 24-èdtan apre IgG-kontwòl te lakòz aparans nan tach granulaire ak anti-IgG, anti-FH/FHR, ak anti-P antikò jan yo wè apre piki anti-P-FH. 1-5 pou kont li (gade Figi 3b). Tach granulaire sa a te redwi lè piki anti-P-FH1-5 te vin anvan pa piki anti-P, ki diminye tou de sikilasyon (gade Figi 1h) ak glomerulè (gade Figi 3b). Tach glomerulè ak anti-IgG te evidan sèlman nan sourit ki te enjekte ak anti-P-FH1-5 (ranje 3, kolòn 3 ak 4) e li te siyifikativman pi ba nan sourit ki te resevwa anti-P-FH1-5 anvan pa anti-P. Nou te konkli ke depozisyon anti-P-FH1-5 nan glomeruli sourit Cfh–/– te an pati depann sou properdin. Ba orizontal yo vle di valè medyàn, ak moustach yo vle di ranje entèkartil la. P-valè a te sòti nan tès Mann-Whitney la. Ba ¼ 100 mm.

REFERANS

1.FakhouriF, Frémeaux-Bacchi V, Noöl LH, et al C glomerulopathy∶ yon nouvo dassification. Nat Rev Nephrol.20106:494-499.

2 SmithRH.AppeG8.BlomAMet aLC3gkomeripathy—konprann vrè maladi konpleman ki ra. Nat ReyNephrol.201915129-143

3. Pickering MC, Cook HT.Tradiksyon mini-revizyon seri sou konpleman faktè H: maladi ren ki asosye ak konpleman faktè H nouvo apèsi sou moun ak bèt. Cin Exp Immunol.2008;151:210-230.

4. Daha MR Fearon DT Austen KF, C3nechritic faktè （C3NeF）∶estabilizasyon nan faz likid ak selil-bound altènatif konvètaz chemen. J Immunol 1976;116:1-7.

5. Mollnes TE, Ng YC, Peters DK, efè et al nan yon faktè nefritik sou C3 ak sou chemen an tèminal nan konpleman an vivo ak in vitro. Oin Exp Immunol. 1986;65:73-79.

6. Nq YC, Peters DK. Faktè nefritik G3 (C3NeF): disosyasyon nan selil-bound ak estabilizasyon faz likid nan chemen altènatif C3 konvètaz. Cn Exp Imunol.19865:450-457.

7. Pickering MC, Cook HT, Warren J, et al Aktivasyon C3 san kontwòl lakòz glomerulonefrit membranoproliferatif nan sourit ki manke nan faktè konpleman H. Nat Genert.2002:31;424-428.

8. Lesher AM, Zhou L, Kimura Y, et al. Konbinezon faktè H mitasyon ak defisi properdin lakòz glomerulonefrit C3 grav. J Am Soc Nephrol. 2013;24:53–65.

9. Ruseva MM, Veron KA, Lesher AM, et al. Pèt properdin agrave glomerulopati C3 ki soti nan defisi faktè H. J Am Soc Nephrol. 2013;24:43-52.

10. Paixao-Cavalcante D, Hanson S, Botto M, et al. Faktè H fasilite clearance nan GBM mare iC3b pa kontwole deklanchman C3 nan faz likid la. Mol Immunol.2009;46:1942-1950.

11Fakhouri F, de Jorge EG. Brune F, et al Tretman ak faktè H konpleman imen rapidman ranvèse depozisyon konpleman ren nan sourit H-defisyan faktè. Kidney Int.2010:78:279-286.

12. Michelfelder S, Parsons J, Bohlender Ll, et al Moss-pwodwi, glycosylation-optimize faktè imen H pou aplikasyon terapetik nan maladi konpleman. JAm Soc Nephrol.201728:1462-1474.

13. Nichols EM, Barbour TD, Pappworth Y, et al Yon molekil pwolonje faktè H mini-konpleman amelyore glomerulopathy C3 eksperimantal. Kidney Int. 201588:1314-1322.

14. Ruseva MM, Peng T, Lazè MA, et al Efikasite nan anpèchman konpleman vize nan glomerulopathy C3 eksperimantal. J Am Soc Nephrol. 2016;27:405-416.

15. Yang Y, Denton H, Davies OR, et al. Yon konpleman jeni faktè H konstwi pou tretman C3 glomerulopathy. J Am Soc Nephrol. 2018;29:1649-1661.

16. Schulze M, Pruchno CJ, Burns M, et all Glomerular C3clocalization endike fòmasyon depo iminitè kontinyèl ak aktivasyon konpleman nan glomerulonefrit eksperimantal. Mwen J PatholL. 1993:142179-187.

17. Athanasiou Y, Voskarides K Gale DP, et al Familial C3 glomerulopathy ki asosye ak CFHRS mitasyon klinik karakteristik 91 pasyan nan 16 pedigrees. CTn JAm Soc Nephrol.20116:1436-1446.

18. Kaneko Y, Nimmer动hn F, Madaio MP, et al Patoloji ak pwoteksyon nan nefrit nefrotoksik detèmine pa angajman selektif nan reseptè Fc espesifik yo. J Exp Med.2006;203:789-797.

19. Sheerin NS, Springall T, Carroll MC, et al. Pwoteksyon kont manbràn sousòl anti-glomerulè (GBM-medyatè nefrit nan C3-ak C4-defisyans sourit. C Exp Immunol. 1997;110:403-409.

20. Cheng ZZ Hellwae J, Seeberger H et al. Konparezon nan rekonesans sifas ak pwopriyete obligatwa C3b nan sourit ak konpleman imen faktè H.Mol Immunol.2006;43.972-979.

21dp roe EG. Macor P.Paixao-Caakante D. et al Devlopman tipik sendwòm uremik emolitik depann de konpleman C5.J Am Soc Nephrol.2011;22:137-145.

22.Pdkering MC, de Jorge EG.Martinez-Barricarte Ry et al Espontane sendwòm uremik emolitik deklanche pa faktè konpleman H ki manke domèn rekonesans sifas yo. J Exp Med.2007;204:1249-1256.

23Herbert AP. Mike E, Chen ZAet aL Konpleman evasyon medyatè pa amelyorasyon nan kaptire faktè H: enplikasyon pou pwoteksyon nan pwòp tèt ou-sifas soti nan konpleman an.J Immunol. 2015;195:4986-4998.

24. Goicoechea de Jorge E Caesar JJ, Malik TH, et al. Proc Natl Acad Sci US A.2013;110:4685-4690.

25. Schmidt CQ, Bai H Lin Z, et al.Enjenieri rasyonèl nan yon inibitè iminitè minimize ak pwopriyete inik trip-sib. J Immunol. 2013;190:5712-5721.

26. Wilson HR, Medjera-Thomas NR, Gilmore AC, et al. Konplèks atak manbràn glomerulèr se pa yon makè serye nan deklanchman C5 kontinyèl nan nefrit lupus. Kidney Int. 2019.95655-665.

27. Antonioli AH White J, Crawford F, et alL Modilasyon chemen altènatif konpleman pa pwoteyin ki gen rapò ak faktè murin H. J Immunol. 2018;200:316-326.

28. Cserhalmi M, CsincsiALMezei Z, et al. Pwoteyin FHR-B ki gen rapò ak faktè H murin ankouraje aktivasyon konpleman. Front Immunol.20178:1145.

29. Medjeral-Thomas NR, Moffett H, Lomax-Browne HJ et al Glomerular konpleman faktè H ki gen rapò ak pwoteyin 5 (FHR5) se trè répandus nan C3 glomerulopathy ak ki asosye ak renalimpairmentKdney Int Ren. 2019;4:1387-1400.

30. Miwa T, Sato S, Gullipalli D, et al.Blocking properdin, chemen altènatif la, ak reseptè anafilatoksin amelyore blesi ischemi-repèfizyon nan ren nan faktè pouri akselere ak sourit CD59 doub-knockout. J Immunol. 2013;190:3552-3559.

31. Corillo F, Bravo Garcia-Morato M, Nozal P, et al Serum properdin konsomasyon kòm yon biomarker nan C5 convertase dysregulation nan C3 glomerulopathy. Clin Exp Immunol.2016;184:118-125.8. Lesher AM, Zhou L Kimura Y, et al. Konbinezon mitasyon faktè H ak defisi properdin lakòz glomerulonefrit C3 grav.JAm Soc Nephrol.2013;2453-65.

32. Zhang Y, Nester OM Martin B.et al Defini pwofil biomarker konpleman C3 glomerulopathy. Clin J Am Soc Nephvol.20149:186-1882.