Optimizasyon Pwosesis Ekstraksyon Flavonoid nan Panax notoginseng Stem Leaf ak yon Etid nan Aktivite Antioksidan ak Efè Li sou Melanom B16 Selil Sourit.
Mar 22, 2022
Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com
Chun-Yan Dai 1,2,3,4,†, Peng-Fei Liu 1,2,3,4,†, Pei-Ran Liao 1,2,3,4, Yuan Qu 1,2,3,4 ID ,Cheng-Xiao Wang 1,2,3,4, Ye Yang 1,2,3,4,* ak Xiu-Ming Cui 1,2,3,4,*
Résumé:LaPanax notoginseng(P. notoginseng) fèy tij se moun rich nanflavonoid. Sepandan, akòz mank de rechèch sou pwosesis la ekstraksyon flavonoid ak devlopman fonksyonèl nan fèy P. notoginsengstem, pati sa yo yo jete kòm fatra agrikòl. Se poutèt sa, nan etid sa a, nou gen entansyon tooptimize pwosesis la ekstraksyon epi devlope fonksyon yo blanchi po nan P. notoginseng tij leafextracts. Pwosesis ekstraksyon tij la ak fèy P. notoginseng flavonoid (SLPF) optimize ki baze sou konsepsyon Box-Behnken (BBD) ak metodoloji sifas repons (RSM). Kondisyon yo pi bon ekstraksyon nan SLPF la se jan sa a: tan an ekstraksyon, konsantrasyon nan etanòl, kontni an sodyòm dodecyl sulfat (SDS), ak rapò a materyèl likid (v / w, ki se 52 min, 48.7 pousan, 1.9 pousan, ak 20). : 1, respektivman. Anba kondisyon ekstraksyon pi bon yo, mwayèn total SLPFcontent se 2.10 pousan.antioksidanaktivite ak anti-depozisyon nan melanin nan selil B16 sourit nanP. notoginsengekstrè fèy tij yo etidye. Rezilta yo endike ke valè EC50 nan aktivite rediksyon, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) aktivite pou retire radikal gratis, kapasite pou retire superoksidanion, ak 2,{{5} }azino-bis-3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) freeradical removal capacity are 7.212, 2.893, 2.949, and 0.855 mg/mL, respektivman. Ekstrè IC50 valè nan sentèz tirozinaz ak melanin yo se 0.045 ak 0.046 mg/mL, respektivman. Se poutèt sa, teknoloji pwosesis optimal pou SLPF yo jwenn nan etid sa a non sèlman ogmante to itilizasyon li yo, men tou diminye depans materyèl yo. Ekstrè yo nan fèy la tij P. notoginseng ka devlope kòm pwodwi manje oswa bote.
Mo kle: antioksidan; flavonoid; selil melanom B16 sourit; Panax notoginseng; surfactant
1. Entwodiksyon
Panax notoginseng(P. notoginseng) (Burk.) FH Chen se yon plant kontinuèl ki fè pati theAraliaceae. Li gen rasin anba tè ki cheche pou itilize kòm medikaman epi yo te enkli nan farmakope Chinwa a. P. notoginseng fèy tij la gen yon valè medsin ki sanble ak rasin lan. Li rapòte nan Pents'ao Kang Mu a ke fèy tij la apwopriye pou tretman ka zo kase, boul, ak senyen. Etid modèn yo te konfime tou ke fèy la tij P. notoginseng gen yon valè medsin ki sanble ak sa ki nan rasin lan pou sistèm san an, sistèm kadyovaskilè a, sistèm nève a, ak sistèm metabolik la [1]. Pwodwi komen ki fèt ak fèy tij P. notoginseng gen ladan QiyeShen'an Pian, Jiang Zhi Ling kapsil, ak Qiye Shen'an kapsil.
Malgre ke fèy tij P. notoginseng te ofisyèlman sètifye kòm manje akòz gwo nitrisyonèl ak gwo valè medsin li yo (DBS 53/024-2017) [2], ti atansyon te konsantre sou pwomosyon pati plant sa yo pou manje. Estatistik preliminè yo te montre ke pwodiksyon anyèl la nan fèy la tij P. notoginseng se 1500 tòn ak sèlman 5 pousan nan kantite lajan sa a itilize [3]. Se poutèt sa, ankouraje thedevelopment nan resous yo fèy tij nan P. notoginseng ka ogmante anpil revni nan.P. notoginsengpwodiktè yo epi redwi polisyon nan anviwònman an, kidonk ogmante benefis sosyo-ekonomik yo.
Engredyan aktif ki pi efikas yo ekstrè nan fèy tij P. notoginseng yo se saponin total ak glikozid flavonoid, ki konte pou 4-6 pousan ak 0.54-2.49 pousan, respektivman [4].Flavonoid yo enpòtan paske nan aktivite famasi yo byen defini, ki gen ladan yoantioksidan, fwa-pwoteksyon, ak aktivite anti-timè [5]. Solvan òganik ki pi souvan itilize pou ekstrè flavonoid yo se etanòl ak metanol [6]. Pou egzanp, Uysal et al. [7] avèk siksè ekstrè flavonoid ki gen eleman nan Cotoneaster integerrimus lè l sèvi avèk methanol.Wang et al. [8] itilize 70 pousan etanòl pou ekstrèflavonoidsoti nan fèy yo nan acer truncatum. Ekstraksyon an te pi wo, ak ekstrè a te pi fasil pou konsantre epi sèk. Li konsidere ke ethanolextraction se yon pi bon metòd ekstraksyon. Kounye a, sèlman Zhang et al. [4,9] ekstrè SLPF pa metòd dlo alkali amik ond ak yon metòd plonje cho. Sepandan, metòd ultrasons la ka fè ekstrè kontinye choke, kontribye nan difizyon solute a, diminye tan ekstraksyon an anpil, ak amelyore pousantaj ekstraksyon flavonoid total ak itilizasyon matyè premyè, ki se yon metòd relativman nouvo pou fè ekstraksyon flavonoid [6]. Se poutèt sa, ekstraksyon efikas nan SLPF la ak rechèch sou itilizasyon pwodwi a pou pwodui kosmetik ak swen sante gen gwo siyifikasyon pou devlopman plis endistri sa a.
Surfactants yo lajman itilize kòm yon oksilyè nan ekstraksyon nan eleman aktif; yo ogmante efikasite ekstraksyon, diminye tan ekstraksyon an, epi ogmante solubilite engredyan yo aktif dlo-ensoluble nan dlo. Anplis de sa, aplikasyon an nan surfactants diminye itilizasyon Solvang òganik ak pri yo, optimize konpozan sib yo pandan pwosesis ekstraksyon an, ak amelyore pite engredyan aktif yo. Pifò nan surfactants yo itilize pou fè ekstraksyon yo pa toksik. Dodecylsulfate sodyòm (SDS), Triton X-100, Tween-20, Tween-80, ak Span{-20 yo souvan itilize surfactants ki kapab siyifikativman ogmante pousantaj ekstraksyon nan.flavonoid[10–13].Metodoloji sifas repons (RSM) te lajman itilize pou optimize pwosesis, ak konsepsyon Box-Behnken (BBD) se youn modèl estatistik metòd konsepsyon sifas repons yo. BBD la reprezante yon konsepsyon kwadratik endepandan ki pa genyen yon konsepsyon faktori oswa fraksyon. Konpare ak lòt metòd konsepsyon, BBD a fasil pou konsepsyon ak analize estatistik; Se poutèt sa, li se lajman ki itilize nan optimize pwosesis ekstraksyon nan flavonoid [14].Pou egzanp, varyab ekstraksyon ki ede mikwo ond yo te optimize lè l sèvi avèk RSM la pou rekiperasyon optimal nan kontni flavonoid total [15]. Anplis de sa, kèk chèchè te jwenn yon pi bon kondisyon teknolojik yo ekstrè flavon total nan Flos Populi [16] ak Coriandrum sativum grenn [17] lè l sèvi avèk aBBD nan RSM la.
Précédemment, metòd ekstraksyon flavonoid yo te rapòte [18], men jiskaprezan, pwosesis ekstraksyon SLPF poko te fòme. Nan etid sa a, yo te optimize pwosesis ekstraksyon SLPF avèk èd nan ultrason lè w itilize BBD pou detèmine kontni total.flavonoidkòm yon endèks pou premye fwa. Varyab endepandan yo, sa vle di, yon kalite surfactant, dòz, rapò materyèl likid (v / w, tan ekstraksyon, ak yon konsantrasyon etanòl, yo mete kòm faktè sèl. Se poutèt sa, objektif yo nan travay la prezan yo te (mwen) optimize ultrason an- ede pwosesis ekstraksyon flavonoid total, (ii) evalye aantioksidanaktivite ekstrè yo; (iii) evalye efè ekstrè yo sou aktivite selil B16; (iv) eksplore posibilite aplikasyon SLPF nan pwodui kosmetik, pwodwi swen sante, ak endistri pharmaceutique; (v) bay yon referans pou devlopman nanP. notoginsengpwodwi ekstrè stemleaf epi redwi egzeyat dechè agrikòl nan anviwònman an.
antioksidan cistanche
2. Rezilta ak Diskisyon
2.1. Efè Kalite Surfactant sou Efikasite Ekstraksyon nan SLPF
Anplis gwoup kontwòl (CK) (dlo olye de surfactants), diferan kalite surfactants (1.5 pousan) yo te itilize nan lòt gwoup yo pa kenbe rapò materyèl likid (v/w nan 15:1 ak lè l sèvi avèk yon konsantrasyon etanòl 40 pousan). Kontni total flavonoid yo te detèmine apre ekstraksyon ultrasons nan 80 ◦C pou 40 min, rezilta yo montre nan Figi 1. Li ka wè ke surfactants yo amelyore efikasite ekstraksyon nan SLPF, ak kontni ki pi wo a te ekstrè pa SDS la. kontni lè l sèvi avèk SDS te ogmante pa 12.8 pousan konpare ak CK a.Se poutèt sa, SDS yo te itilize nan eksperyans ki vin apre yo.
2.2. Eksperyans sèl faktè
Rezilta a te montre ke efikasite ekstraksyon SLPF ogmante ak ogmantasyon nan tan ekstraksyon; nan rapò materyèl likid (v / w) nan 15: 1, konsantrasyon an etanòl te 4 0 pousan ak SDScontent la te 1.5 pousan (Figi 2A). Sede kontni SLPF la diminye lè tan ekstraksyon an te pi long pase 40 min. Kontni SLPF a te ogmante lè konsantrasyon etanòl la te ogmante de 30 pousan a 50 pousan, men li te diminye piti piti lè konsantrasyon etanòl la te pi wo pase 50 pousan. Highestyield nan kontni SLPF la te 23.1 pousan pou yon tan ekstraksyon nan 40 min, yon rapò materyèl likid (v / w) nan 15: 1, ak yon kontni SDS nan 1.5 pousan (Figi 2B). Lè fè ekstraksyon tan an te 40 min, likid materialratio (v/w) te 15:1, ak konsantrasyon etanòl la te 40 pousan, kontni SLPF kontinye ogmante ak kontni SDS soti nan 0.5 pousan a 2 pousan. Lè kontni SDS la te ogmante de 0.5 pousan a 2 pousan, kontni SLPF te ogmante pa 10 pousan (Figi 2C). Kontni total flavonoid la te pi wo lè rapò materyèl likid (v/w) te 20:1, tan ekstraksyon an te 40 min, konsantrasyon etanòl la te 40 pousan, ak kontni SDS te 1.5 pousan (Figi 2D). Kontni SLPF a te 1.5 fwa pi wo pase sa lè rapò materyèl likid (v/w) de 5:1 te itilize ak diminye lè likid materyèl rapò a te pi gran pase 20:1. Se poutèt sa, pou eksperyans BBD ki vin apre yo, tan ekstraksyon sòti nan 40 a 60 min, konsantrasyon etanòl sòti nan 40 pousan a 60 pousan, kontni SDS sòti nan 1.5 pousan a 2.5 pousan, ak rapò materyèl likid (v/w) sòti nan 15: 1 a 25:1 yo te itilize.
2.3. Modèl Fitting ak Optimizasyon nan SLPF
2.3.1. Modèl Fitting
Matris ki fèt la, rezilta analiz divèjans yo, ak konpetans ak kondisyon fizik modèl yo montre nan Tablo 1. Yo te fè yon analiz regresyon miltip lè l sèvi avèk Logiciel Design-Expert. Relasyon ant varyab repons lan (kontni SLPF) ak varyab endepandan yo te eksprime pa ekwasyon polinòm dezyèm lòd sa a:
Y {{0}} -30.678 plis 0.487A plis 0.304B plis 4.596C plis 0 .853D − 0.001AB − 0.{020AC − 0.005AD plis 0.010BC − 0.001BD − 0.076CD − 0.003A2 − 0.002B2 − 0.683C2 − 0.010D2(1)
kote Y se kontni SLPF la; A, B, C, ak D reprezante tan an ekstraksyon, konsantrasyon etanòl la, kontni SDS la, ak rapò materyèl likid la, respektivman.
2.3.2. Analiz de sifas repons
Analiz rezidyèl nan modèl optimize sifas repons lan te fèt lè l sèvi avèk yon zouti graphicalanalysis. Li enpòtan pou teste inifòmite divèjans erè modèl la. Si rezilta yo montre yon bon anfòm ak valè yo prevwa, koub ekipe nan valè eksperimantal ak prevwa a se lineyè. Anplis, li enpòtan pou evalye si distribisyon rezidyèl yo nòmal lè w ap detèmine presizyon modèl la. Lè rezidyèl yo gen yon distribisyon nòmal, koub ekipe rezidyèl yo lineyè [19]. Anplis de sa, si valè prediksyon rezidyèl yo gen yon distribisyon o aza, omojeneite divèjans rezidyèl la konsistan avèk kondisyon optimize yo [20].Nan etid sa a, modèl kwadratik la te pi bon anfòm pou done yo. (Valè R2 0.9818) (Figi 3A) [21].Anplis de sa, yo te itilize trase pwobabilite nòmal rezidyèl yo (Figi 3B) ak trase rezidyèl yo kont repons prevwa a (Figi 3C) pou valide konpetans modèl la. . Done yo te montre ke pwen yo nan konplo nòmal la te fòme yon liy dwat (Figi 3B). Sa a te endike ke done yo pa montre okenn devyasyon nan nòmal. Anplis de sa, trase a nan rezidyèl yo kont repons prevwa a te montre yon distribisyon o aza, ki endike ke modèl la te adekwa epi li pa t vyole sipozisyon endepandans la oswa divèjans konstan (Figi 3C) [22].
Rezilta yo te montre ke yon gwo pwopòsyon nan divèjans total la te eksplike pa modèl kwadratikregression (R2 nan 0.982), ki endike ke modèl la se apwopriye pou optimize nan extractionparameters yo [23]. R2Adj 0.964 te relativman pre R2Pred 0.902, sa ki montre ke modèl la enpòtan [14]. Valè rapò siyal-a-bri (RSN) te 24.553, ki te byen pi wo pase 4. Rezilta a endike ke modèl sa a ta ka itilize pou espas konsepsyon an. Anplis, koyefisyan varyasyon (CV) te ba (2.657 pousan), ki endike ke modèl la adapte done eksperimantal yo satisfezan epi yo ka itilize yo predi rezilta a nan seri a nan done yo. Koefisyan regresyon yo ki nan Tablo 2. Nan modèl SLPF, A, B, C, AB, AC, AD, BC, CD, A2, B2, C2, ak D2 te siyifikativman diferan (p < 0.05)="" ,="" men="" d="" ak="" bd="" pa="" t="" 'siyifikativman="" diferan="" (p=""> 0.05).
Yon graf sifas 3D (Figi 4A1–D1) nan kontni total flavonoid ak koub kontou (Figi 4A2–D2) de varyab teste yo te pwodwi nan modèl final la pou dekri entèraksyon ant varyab endepandan yo ak paramèt pwosesis optimal yo. Chak graf te konplete a kondisyon ke lòt faktè yo te kenbe nan nivo zewo respektif yo chak fwa [24]. Si trase kontou a gen yon fòm sikilè, entèraksyon ki genyen ant faktè korespondan yo neglijab. Fòm eliptik trase kontou a endike ke entèraksyon ant varyab yo kontribye nan kontni total.flavonoidnan yon nivo siyifikatif [25].Baze sou done yo montre nan Tablo 2 ak Figi 4, nan modèl la SLPF, klasman an nan efè a entèraksyon ant varyab endepandan yo soti nan wo a ba te CD-AD-AB-AC. Efè C (kontni SDS la) ak D (rapò materyèl likid (v/w)) sou kontni SLPF yo te montre kòm yon 3Dplot ak yon trase kontou ki asosye. Fòm eliptik trase kontou a montre yon korelasyon enpòtan (p < 0.0001)="" ant="" c="" ak="" d,="" ki="" te="" kontribye="" nan="" diferan="" kontni="" slpf="" (tablo="" 2;="" figi="" 4d1,="" d2).="" kontni="" slpf="" ogmante="" (2.13="" pousan)="" lè="" kontni="" sds="" la="" te="" ogmante="" de="" 1.5="" pousan="" a="" 2.0="" pousan="" ak="" rapò="" materyèl="" likid="" (v/w)="" te="" ogmante="" de="" 15:1="" a="" 20:1="" (figi="" 4d1,="" d2).="" li="" enpòtan="" ke="" pwosesis="" ekstraksyon="" an="" ekonomik="" ak="" posib="" epi="" apwòch="" modèl="" la="" fasilite="" rediksyon="" nan="" pri="" a="" ak="" tan="" pandan="" pwodiksyon="" an="" mas="" nan="">
ekstrè cistanche antioksidan
2.3.3. Validasyon modèl la
Pou valide modèl yo pwopoze a, yo te chwazi divès kondisyon reyaksyon nan seri varyab yo (Tablo 3). Paramèt pwosesis optimal pou jwenn yon kontni segondè flavonoid totalobtained pa Ekwasyon (1) yo te tan ekstraksyon nan 51.84 min, yon konsantrasyon etanòl nan 48.68 pousan, yon SDScontent nan 1.88 pousan, ak rapò materyèl likid (v/w) nan 19.81:1; sa a te lakòz kontni flavonoid total de 2.13 pousan. Te presizyon nan modèl la konfime ki baze sou twa tès nan kondisyon pi gwo. Kontni an mwayèn total flavonoid te 2.10 pousan, ki te montre pa gen okenn diferans enpòtan nan valè a prevwa. Sa a te endike ke valè eksperimantal la te trè pre valè prevwa a, ki te pwouve ke rezilta yo te rezonab ak serye; modèl Ekwasyon (1) te konsidere kòm satisfezan ak egzat pou predi kontni SLPF la. Apwòch sa a pa sèlman amelyore efikasite ekstraksyon, men tou ogmante pousantaj itilizasyon P.notoginsengfèy tij.
2.4. Aktivite antioksidan nan P. notoginseng tij fèy ekstrè yo
Kapasite a redwi nan ekstrè yo fèy tij P. notoginseng pozitivman ki gen rapò ak li yoaktivite antioksidan; Se poutèt sa, li ka itilize kòm yon endèks evalyasyon enpòtan nan aktivite antioksidan [26].Kapasite rediksyon nan ekstrè yo ak nan asid ascorbic ogmante ak konsantrasyon an ak te montre yon siyifikatif korelasyon pozitif ak konsantrasyon an (Figi 5A). EC5 0 ekstrè yo ak asid ascorbic te 7.212 ak 0.0287 mg/mL, respektivman. Rezilta sa yo sijere saP. notoginsengEkstrè yo se yon donatè elèktron efikas ki kapab reyaji ak radikal gratis yo konvèti nan pwodwi ki pi estab. Radikal DPPH la se yon radikal lib relativman ki estab epi li ka aksepte elektwon oswa atomsto idwojèn pou fòme molekil ki estab. Radikal Hydroxyl posede pi gwo kapasite oksidasyon epi yo ka domaje molekil byolojik. Se poutèt sa, DPPH ak radikal idroksil yo te lajman itilize kòm yon endèks evalyasyon enpòtan nan aktivite antioksidan [27]. Aktivite radikal DPPH yo te ogmante ak konsantrasyon ekstrè yo ak asid ascorbic, epi yo tout te montre yon korelasyon pozitif enpòtan ak konsantrasyon an. Valè EC50 ekstrè yo ak asid ascorbic yo te 2.893 ak 0.0938 mg/mL, respektivman (Figi 5B). Aktivite scavenging radikal hydroxyl yo te gen yon tandans menm jan ak DPPHradical la pou tretman ekstrè yo oswa asid ascorbic, ak valè EC50 nan ekstrè yo ak asid ascorbic yo te 1.514 ak 0.0902 mg / mL, respektivman (Figi 5C). Rezilta sa yo endike ke theP. Ekstrè notoginseng gen yon gwo kapasite yo retire DPPH oswa radikal idroksil.
Anions superoksid ka mennen nan ensidan peroksid nan manbràn plasma a [28]. Se poutèt sa, kapasite nan retire anyon superoksid trè enpòtan pou yon antioksidan. Nan etid sa a, pousantaj anyon superoksid la te ogmante ak konsantrasyon ekstrè yo ak ascorbicacid, epi to retire yo te tou korelasyon ak konsantrasyon an (Figi 5D). Valè EC50 ekstrè yo ak asid ascorbic yo te 2.949 ak 0.140 mg/mL, respektivman, ak pi gwo pousantaj retire yo te 94.90 pousan ak 93.73 pousan, respektivman.antioksidanaktivite ekstrè yo jeneralman reflete nan kapasite nan retire ABTS plis radikal gratis [29]. Efè scavenging nan ekstrè yo ak asid ascorbic sou ABTS yo plis freeradicals ogmante ak konsantrasyon an (Figi 5E), e te gen yon korelasyon pozitif ant la to scavenging ak konsantrasyon nan ekstrè yo oswa asid ascorbic la. Valè EC50 theP. Ekstrè notoginseng ak asid ascorbic la te 0.855 ak 0.205 mg/mL, respektivman.
Anpil etid yo te jwenn saflavonoidposede byenantioksidanpwopriyete yo. Rezilta yo nan Farombi et al. [30] te montre ke yon ekstrè nan grenn Garcinia kola te montre yon efè 57 pousan scavenging sou superoksid nan yon konsantrasyon 1 mg/mL, yon efè 85 pousan scavenging sou oksijene idwojèn nan yon konsantrasyon 1.5 mg/mL, ak yon 89 pousan scavenging efè sou DPPH nan yon konsantrasyon nan 2 mg / mL.Srisawat et al. [31] te demontre aktivite anyon superoksid radikal nan ekstrè diri valè EC50 nan seri 0.6-5 mg/mL, ki te sanble ak rezilta etid sa a. An jeneral, rechèch sa a tou te endike keP. notoginsengEkstrè fèy tij posede yon aktivite antioksidan fò.
2.5. Efè ekstrè sou aktivite selil B16
Sekirite a nanP. notoginsengEkstrè fèy tij yo trè enpòtan nan ankèt sou viabilite selil, aktivite tirozinaz selilè, ak nivo melanin nan selil B16 melanom. Rezilta yo te montre ke viabilite selil la te apeprè 85 pousan nan yon konsantrasyon 0.032 mg/mL e ke valè IC50 viabilite selil la te {{2{{22} }}}.405 mg/mL (Figi 6A). Ekstrè yo fèy tij P. notoginseng pa t 'speciallycytotoxic pou B16 selil yo. Se poutèt sa, ekstrè konsantrasyon pi ba pase 0.032 mg / mL yo te itilize pou fè eksperyans ki vin apre yo. Rezilta yo endike ke ekstrè yo siyifikativman redwi tyrosinaseactivity ak pwodiksyon melanin nan selil murin yo nan yon fason ki depann de dòz (Figi 6B). Te gen korelasyon pozitif ant kontni an ekstrè ak rapò a anpèchman nan tirozinaz la oswa sentèz melanin (R2=0.9162 ak R2=0.9118). Valè IC50 nan rapò anpèchman thetyrosinase ak sentèz melanin yo te 0.045 mg / mL ak 0.046 mg / mL, respektivman (Figi 6B). Melanin jwe yon wòl desizif nan koulè po. Fòmasyon melanin reglemante pa tirozinaz, ki se yon gwo anzim limite ki kontwole pa radikal gratis. Etid detaye te montre saflavonoidyo pito inhibiteur ki pisan, epi yo ka dirèkteman anpeche tirozinaz epi aji sou pati distal nan chemen an oksidatif melanogenesis [33]. Rezilta nou yo endike ke P. notoginseng tij leafextracts yo montre bon pèfòmans nan diminye aktivite tirozinaz ak pwodiksyon melanin. Li se evidan ke ekstrè fèy tij P. notoginseng ka gen gwo kandida kòm manje sante ak yon pwodui kosmetik paske nan pèfòmans ekselan li yo nan yon depo anti-pigman.
3. Materyèl ak Metòd
3.1. Materyèl Plant yo
Tij fre fèy nanP. notoginsengte achte nan sant komès entènasyonal P. notoginseng, Wenshang, pwovens Yunnan, nan mwa Oktòb 2017, ak Lè sa a, lave nan dlo distile, ak dlo sifas yo te retire. Te fèy fre tij P. notoginseng cheche nan yon pwa konstan nan 60 ◦C, epi li te lave an poud pou plis itilize.
benefis ekstrè cistanche:depozisyon anti-pigman
3.2. Pwodwi chimik ak reyaktif
Na2HPO4, NaH2PO4, TCA (asid trichloroacetic), FeCl3, FeSO4, asid ascorbic, pirogallol, H2O2 yo te jwenn nan Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, Lachin) DPPH (2,2-diphenyl 1- picrylhydrazyl), ABTS, -MSH, L-DOPA ak MTT yo te achte nan men Sigma Chemical Co.(St. Louis, MO, USA), PBS (Endistri Byolojik, Beit-Haemek, Izrayèl), Dulbecco a Modifed EagleMedium (DMEM) kilti ak serom fetis bovin (FBS; Gibco, NY, USA), ak tripsin yo te jwenn nan Biological Industries, pèp Izrayèl la. DMSO ak Triton X-100 yo te jwenn nan MP Biomedicals ak Amresco nan USA, respektivman. Tout lòt reyaktif yo te nan klas analyse. Dlo ultrapur te jwenn nan sistèm Millipore (Bedford, MA, USA).
3.3. Optimizasyon seleksyon kondisyon ekstraksyon
Ultrasound-asistans ekstraksyon nan totalflavonoidsoti nanP. notoginsengfèy tij te optimize pa RSM la. Kontni SLPF te etabli kòm endèks pou jije kondisyon ekstraksyon an. Dapre teknoloji èkstraksyon an, surfactants yo, tan ekstraksyon, konsantrasyon etanòl, SDScontent ak rapò materyèl likid yo se faktè kle. Valè ki pi wo nan eksperyans yo te pi gwo valè santral pou kontni SLPF la. Lè sa a, yo te itilize yo etidye pi bon teknoloji pwosesis ekstraksyon nan SLPF pa metòd la nan RSM. Tretman sèl faktè te jan sa a: P. notoginseng fèy tij la te (1) ekstrè lè l sèvi avèk diferan surfactants (Tablo 4), ultrasonsextraction pou 40 min pa kenbe rapò a materyèl likid (15:1, v / w) , ak 40 pousan etanòl konsantrasyon; (2) ekstrè pa ultrason pou 10, 20, 30, 40, 50 ak 60 min lè rapò materyèl likid la te 15:1 (v / w), konsantrasyon nan etanòl te 40 pousan, ak kontni an nan SDS te 1.5 pousan; (3) ekstrè pa 30, 40, 50, 60, 70, 80 ak 90 pousan etanòl pou 40 min lè rapò materyèl likid la te nan 15:1 (v / w), ak kontni an SDS te 1.5 pousan; (4) ekstrè pa 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 ak 3 pousan SDS pou 40 min lè rapò materyèl likid la te 15:1, ak kontni an nan etanòl te 40 pousan; (5) ekstrè ak diferan rapò materyèl likid (5:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1 ak 30:1; v / w) pou 40 min pa kenbe theconcentration nan etanòl te 40 pousan, ak kontni an nan SDS te 1.5 pousan. Lè sa a, kontni an nan SLPF inextracts te detèmine.
3.4. Konsepsyon eksperimantal RSM
Baze sou rezilta analiz eksperyans sèl-faktè, kondisyon ekstraksyon SLPF deP. notoginsengfèy tij te devlope ak optimize lè l sèvi avèk twa-nivo, kat faktè BBD, konbine avèk RSM (Design-Expert Software, esè vèsyon 8.1.0; Stat-Ease Inc., Minneapolis, MN, USA).Chak varyab endepandan. te kode nan twa nivo ant -1 ak plis 1, kote tan an (A); konsantrasyon nan etanòl (B); kontni SDS la (C); ak rapò materyèl likid (D) yo te chanje nan ranje yo montre nan Tablo 5. Kontni SLPF la te varyab repons lan. Pou kalkil estatistik, yo te itilize yon ekwasyon kwadratik dezyèm lòd jan sa a: [34].
Y= 0 plis 4∑i=1 iXi plis 4∑i=1 iiX2i plis 3∑i=1.4∑j{=i plis 1 ijXiXj plis 4 ∑i=1 iiiX3i(2)
kote Y se repons prevwa a, 0 se yon koyefisyan entèsepte, i se tèm lineyè yo, ii se tèm kare yo, ij se tèm entèraksyon yo, ak Xi ak Xj reprezante nivo kode varyab endepandan yo.
3.5. Total Flavonoid Essay
Kontni total laflavonoidte detèmine ki baze sou yon metòd etabli ak kèk modifikasyon, epi yo te chwazi rutin kòm estanda referans [35]. Rutin sèk la te peze 10 mg avèk presizyon, li fonn ak 20 mL etanòl, epi yo te transfere nan yon flacon volumetrik 1{0{0 mL lè w ajoute dlo nan echèl la. Yon seri solisyon estanda rutin nan seri 0.0–6.0 mL yo te transfere presizeman nan flakon volumetrik 25 mL. Apre sa, yo te ajoute 1 mL 5 pousan NaNO2; apre 6 min, yo te ajoute 1.0 mLof 10 pousan Al(NO3)3 epi yo te kenbe solisyon an pou 6 min nan tanperati chanm; Yo te ajoute 10 mL 4 pousan NaOH nan flakon volumetrik yo. Lè sa a, solisyon sa a te dilye ak yon solisyon dlo a 25 mL epi kenbe pou 15 minit nan tanperati chanm. Absorbans kont yon echantiyon vid san rutin (A) te mezire nan longèdonn 510 nm lè l sèvi avèk yon UV-2600 spectrophotometer (ShanghaiYuanxi Instruments Co Ltd., Shanghai, Lachin) pou jwenn repons lineyè a (A {{25} }.6971B - 0.0072,R2=0.9992). B te kontni total flavonoid (mg) nan longèdonn 510 nm. Yo te dilye yon aliquot 0.1 mL nan echantiyon yo ak metanol a 50 mL epi yo te detèmine konsantrasyon total flavonoid nan espektwofotomèt la. Kontni total flavonoid yo te kalkile dapre ekwasyon sa a: y =m × VM × 100 pousan (3)
3.6. Analiz estatistik
Tout done eksperyans yo te trete ak lojisyèl Microsoft Excel 201{0 epi koub yo te ekipe ak Orijin 8.0. Analiz estatistik te pote lè l sèvi avèk SPSS 19.0.
4. Konklizyon
Ekstraksyon ki ede ltrason amelyore efikasite ekstraksyon totalflavonoid.Kondisyon yo pi gwo ekstraksyon nan SLPF yo te: ultrasound-asistans tan ekstraksyon nan 52 min, yon konsantrasyon etanòl nan 48.7 pousan, yon kontni SDS surfactant nan 1.9 pousan, ak rapò materyèl likid (v/wof 20:1; sa a te lakòz yon 2.10). pousan kontni SLPF. Li te rekòmande ke pwodiktè ajiste done sa yo pou fè ekstraksyon nan SLPF ki baze sou kondisyon espesifik yo reyalize gwo echèl ak pwodiksyon efikas.P. notoginsengekstrè fèy tij ekspoze yon fòantioksidanaktivite ak pwovoke diminye nan sentèz melanin pa anpeche aktivite tirozinaz la. Rezilta nou yo ankouraje itilizasyon P. notoginseng tij fèy ekstrè pou preparasyon kosmetik ak manje se yon ajan blanchiman po.
anti-oksidan: cistanche etract
