Dereplication-gide izolasyon nan nouvo fenilpropanoid-ranplase diglikozid soti nan Salsa Cistanche ak aktivite inhibition yo sou NO Pwodiksyon nan makrofaj.

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis

Résumé:

Dereplication pèmèt pou idantifikasyon rapid nan konpoze li te ye ak enkoni nan ekstrè plant yo. Nan etid sa a, nou te fè dereplication ki baze sou chromatografi likid-mass spectroscopie (LC-MS) lè l sèvi avèk done ki soti nan ESI plis QTOF-MS pou analiz laglikozid ki ranplase fenilpropanoid, pi gwo elektè aktif Cistanche salsa (CA Mey.) Beck. Lè l sèvi avèk TOF-MS pou kont li, substruktur yo nan konpoze sa yo ta ka konfime san anbigwite ki baze sou modèl yo fragmantasyon karakteristik nan pwodiksyon divès kalite. Des HPLC-MS ki baze sou C. salsa pèmèt tou pou deteksyon nouvofenilpropanoid-ranplaseglikozid soti nanplant sa a. Nan yo, senk nouvo phenylpropanoid-ranplasediglikozid, yo te rele cistansalsides A–E (5, 6, 12, 17 ak 18), yo te izole. Estrikti yo te elisid atravè metòd espektroskopik ki gen ladan analiz NMR ak MS. Tout izolat yo te teste pou aktivite inhibitor yo kont NO pwodiksyon nan selil RAW 264.7 ankouraje pa LPS. Nan konpoze tès yo, konpoze 5, 11, 13 ak 18 te montre aktivite inhibiteur modere sou NO synthase inductible. Konpoze 11, 13 ak 18 tou anpeche fosforilasyon NF-κB nan makrofaj yo. Okenn nan konpoze yo pa parèt enpòtansitotoksisite. 

Mo kle:dereplication; diglikozid fenilpropanoid-ranplase; Cistanche salsa; anti-enflamatwa

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Entwodiksyon

Cistanche salsa (CA Mey.) Beck, ki fè pati fanmi Orobanchaceae, se yon plant parazit ki jwenn nitrisyon li nan rasin Haloxylon ammodendron (Chenopodiaceae) ak lòt plant dezè [1]. Plant sa a te itilize nan medikaman tradisyonèl pou tretman neurasthenia, malfonksyònman seksyèl ak defisyans ren [2,3]. Nan etid fitochimik anvan yo, yo te rapòte ke tout plant C. salsa te genyen plizyè kalite konpoze ki gen ladan glikozid fenilethanoid ak glikozid iridoid [4-7]. Phenylethanoid glycosides, tankou acteoside ak echinacoside, se pi gwo eleman aktif nan plant la [8]. Ekstrè yo nan C. salsa te montre pwopriyete benefisye, ki gen ladan aktivite imunomodulateur, antikansè ak anti-enflamatwa [9,10]. Dereplication se yon pwosesis kote melanj echantiyon yo ta dwe teste pou diferansye konstitiyan enkoni de konpoze li te ye. Estrateji dereplication yo baze sou teknik analyse ak rechèch baz done pou idantifye metabolit segondè yo byen bonè nan pwosesis rechèch fitochimik [11]. Nan teknik analyse yo, ESI-QTOF-MS (electrospray ionization-quadrupole-time of flight-mass spectroscopy) te kapab bay bonjan enfòmasyon sou estrikti chimik metabolit segondè yo. Yo te demontre fraksyonman dereplication ki baze sou LC-MS la pou pèmèt ekstraksyon ak pirifikasyon metabolit sib soti nan ekstrè brut plant ak efikasite segondè [12-15]. Etid sa a te fè dereplication ki baze sou LC-MS lè l sèvi avèk done ki soti nan ESI plis TOF-MS pou analiz diglikozid phenylpropanoid-ranplase, pi gwo konstitiyan aktif C. salsa. Done TOF-MS yo ta ka sijere substruktur yo nan konpoze sa yo ki baze sou modèl fragmantasyon karakteristik nan iyon pwodwi divès kalite. Baze sou dereplication sa a, pwofil LC-MS nan etil acetate (EtOAc) fraksyon ak dlo-idrosolubl fraksyon yo te analize. Fraksyon EtOAc la te sibi estrateji dereplication pou plis separasyon, te lakòz izolasyon senk nouvo diglycosides phenylpropanoid-ranplase ak 13 konpoze li te ye (Figi 1). Li te konfime ke estrikti pwovizwa prevwa nan diglycosides phenylpropanoid-ranplase yo te kòrèkteman matche ak estrikti reyèl yo. Anplis de sa, yo te eksplore aktivite anti-enflamatwa izolat yo.

Rezilta ak Diskisyon

Diglikozid fenilpropanoid-ranplase ki izole nan C. salsa anjeneral gen estrikti ki baze sou glikozid disakarid, ki konpoze de yon glikoz ak yon rhamnose ak yon lyezon Rha (1→3) Glc ak yon substituent cinnamoyl, tankou asid koumarik (Cou), kafeik. asid (Caf) ak asid feruloyl (Fer), nan pozisyon C-4 oswa C-6 glikoz la. Aglikon an souvan tache nan pozisyon C-1 glikoz la. Yo te rapòte souvan estrikti diglikozid fenilpropanoid ki ranplase ak yon gwoup asetil nan C-2 glikoz [6,12,16]. Pou fè dereplication, modèl fragmantasyon MS nan konpoze sa yo te analize pa mòd pozitif ESI-QTOF-MS. Nan MS spectre, tout diglycosides phenylpropanoid-ranplase yo te pwodwi pik ion adduct nan [M plis NH4] plis , [M plis K] plis ak [M plis Na] plis , ki te bay pwa molekilè a ak fòmil. Modèl iyon fragman yo ka jwenn pa pèt siksesif nan glikon ak rezidi glikozid ([M plis H − Aglycone] plis , [M plis H − Aglycone − Rha] plis ak [M plis H − Aglycone - Figi 1. Estrikti konpoze 1–18 2. Rezilta ak Diskisyon Diglikozid ki ranplase fenilpropanoid ki izole nan C. salsa anjeneral gen estrikti ki baze sou glikozid disakarid, ki gen ladan yon glikoz ak yon ramnoz ak yon lyezon Rha (1→3) Glc ak yon substituant cinnamoyl, tankou asid koumarik (Cou), asid kafeyik (Caf) ak asid feruloyl (Fer), nan pozisyon C-4 oswa C{-6 glikoz. Aglikon an souvan tache nan C{{24} }} pozisyon glikoz. Yo souvan rapòte estrikti diglikozid fenilpropanoid ki ranplase ak yon gwoup asetil nan C-2 glikoz [6,12,16]. Pou fè dereplication, MS fragmantasyon modèl konpoze sa yo. yo te analize pa mòd pozitif ESI-QTOF-MS.Nan MS spectre, tout diglyco nan fenilpropanoid-ranplase. kote yo te pwodwi pik ion adduct nan [M plis NH4] plis , [M plis K] plis ak [M plis Na] plis , ki te bay pwa molekilè a ak fòmil. Modèl iyon fragman yo ka jwenn pa pèt siksesif nan glikon ak résidus glikozid ([M plis H − Aglycone] plis, [M plis H − Aglycone − Rha] plis ak [M plis H − Aglycone - Rha − Glc (oswa Asetil). -Glc)] plis), ki te itil pou predi ki kalite substituent cinnamoyl ak sik. Iyon fragman yo nan m/z 163 nan gwoup kafeyil la, m/z 147 nan gwoup la koumaroyl oswa m/z 177 nan gwoup la feruloyl bay siyal karakteristik nan yon substituent cinnamoyl nan diglycosides yo phenylpropanoid-ranplase [4,15] ( Figi 2). Analiz iyon fragman yo ta bay enfòmasyon itil pou idantifikasyon estrikti diglikozid phenylpropanoid-ranplase. Sepandan, izomè yo pa t 'kapab diferansye pa MS spèktrometri pou kont li. Pou idantifikasyon egzat nan estrikti konplè yo, espèk NMR yo obligatwa.

Tout izolat yo te teste pou efè inhibition yo sou pwodiksyon LPS-pwovoke NO nan selil RAW 264.7. Dexamethasone te itilize kòm yon kontwòl pozitif ak IC5 li yo 0 te 7.0 µM. Nan konpoze tès yo, konpoze 5 (IC50 42.7 ± 6.6 µM), 11 (IC50 37.3 ± 2.2 µM), 13 (IC50 40.{{2{{ 24}}}} ± 4.0 µM) ak 18 (IC50 27.9 ± 0.8 µM) te montre aktivite inhibiteur modere sou NO synthase endivizib, pandan ke lòt konpoze yo te inaktif nan tès sa a (IC50). valè > 100 µM). Pou verifye si konpoze sa yo te gen cytotoxicity, yo te mezire viabilite selil yo ak tès MTT. Kòm yon rezilta, okenn nan yo pa montre sitotoksisite enpòtan (Figi Siplemantè S 6-1). Yo te chwazi kat konpoze sa yo pou evalye aktivite inhibitor yo kont chemen NF-κB nan selil RAW 264.7 ki ankouraje LPS yo. Stimulasyon nan selil RAW 264.7 ak LPS pwovoke fosforilasyon IκB ak NF-κB (p65) apre 0.5 èdtan nan enkubasyon. Fosforilasyon NF-κB (p65) te siyifikativman redwi pa pretreatman ak konpoze 11, 13 ak 18 jan yo montre nan analiz Western blot (Figi 5). Se poutèt sa, konpoze 11, 13 ak 18 ta ka fè egzèsis efè anti-enflamatwa atravè anpèchman nan NF-κB nan makrofaj.

Materyèl ak Metòd

Wotasyon optik yo te mezire ak yon polarimèt dijital Jasco P-2000 (Jasco, Tokyo, Japon). Yo te anrejistre spectre UV sou yon espektwomèt Chirascan plis Dichroism Circular (Chirascan, APL, UK). Yo te anrejistre espèk IR lè l sèvi avèk espektrofotomèt Jasco FT/IR-4200. Gwo rezolisyon electrospray ionizasyon quadrupole-time-of-vol mas spèktrometri (HR-ESI-qTOF-MS) te fèt sou yon Agilent 6530 Precision-Mass Q-TOF LC/MS ekipe ak seri Agilent 1260 Infinity (Agilent Technologies, Inc. , Palo Alto, CA, USA), ak kolòn yo te itilize se te yon kolòn Jasco SFCpak Crest C18T -5 (id150 × 4.6 mm, 5 um). Lojisyèl MassHunter Workstation te itilize pou akizisyon done.

1D (H ak 13C) ak 2D('H-1H COSY, HSQC, HMBC, NOESY) espèk RMN yo te jwenn ak yon Jeol LA 300 (Jeol, Tokyo, Japon), Bruker AVANCE-400, Bruker AVANCE-500, Bruker AVANCE-600 ak Bruker AVANCE 800 HDspectrometers makonnen ak cryoprobe (Bruker, Ettlingen, Almay). DMSO-d6 (Cambridge Isotope Laboratories, Inc. Andover, MA, USA) te itilize kòm sòlvan NMR ak pik referans (6H 2.50 ak δc 39.5). Kwomatografi kolòn （CC） te fè lè l sèvi avèk Sephadex LH-20(25-100 um; Pharmacia, Upsala, Sweden) oswa Kieselgel 60 jèl silica ({40-63 um,230-400 may, Art 9385; Merck, Darmstadt, Almay). Kwomatografi kouch mens (TLC) te fèt sou plak pre-kouvwi Kieselgel 60 jèl silica F254 (Art.5715; Merck).Spots sou TLC yo te detekte lè l sèvi avèk UVlamp nan 254 nm ak 365 nm (VL-4.LC, 365). /254;Vilber Lourmat, Torcy, Frans). Kwomatografi likid presyon mwayen (MPLC) te fèt sou yon kolòn flash silica RediSep 120g (lsco, Lincoln, NE, USA) ak jèl silica Kiesegel 60 (40-63 um,230-400 may, Art.9385; Merck). )lè l sèvi avèk yon konpayon Combiflash (Isco). Sistèm segondè presyon likid kromatografi (HPLC) se te yon Gilson HPLC ekipe ak yon ponp Gilson 321 ak UV.VIS 151 detektè (Gilson, Middleton, WI, USA), lè l sèvi avèk kolòn ODS semi-preparatif (Luna 5 um C18 （2） 100). Å, id 250 × 10 mm, 5 μm, Phenomenex Inc, Torrance, CA, USA; Hypersil GOLDrM aQ 175A, id250 × 10mm, 5 um, Thermo ScientificTM, Hennigsdorf, Almay; Inno C18column 120 A, id250 × 10 mm, 5 um, Young Jin Biochrom Co, Ltd, Seongnam, Kore di). Sistèm HPLC se te yon sistèm alyans Waters 2695 ak yon detektè 996 Photodiode Array (PDA) (Waters Corp, Milford, MA, USA), ak kolòn yo te itilize se te yon HypersilTM BDS C18column （130 A, id150 × 4.6 mm, 5 μm, Thermo. Syantifik TM). Asid fòmik te achte nan men Daejung Chemicals & Metals Co, Ltd.(Seoul, Kore di). Solvang klas HPLC yo te achte nan Fisher Scientific Korea Ltd.(Seoul, Kore di). HSOA, Na, CO, ak solvang premye klas pou fè ekstraksyon, fraksyon ak izolasyon yo te achte nan men Daejung Chemical & Metals Co Ltd (Seoul, Kore di). L- ak D-cysteine ​​methyl ester idroklorid ak o-tolylisothiocvanate yo te achte nan Tokyo Chemical Industry (Tokyo, Japon).

Konklizyon

Nan etid sa a, nou izole ak elisid estrikti senk nouvo phenylpropanoid-ranplase diglycosides, yo te rele cistansalside AE ​​(5,6, 12, 17 ak 18), anplis izole ak idantifye 13 konpoze li te ye, lè l sèvi avèk yon estrateji dereplication. Konpoze yo konnen yo te detèmine lipedoside AI (1) [21], 2'-acetylatteoside (2) [22], isocistanoside C (3) [15], osmanthuside B (4) [21], epimeridinoside A (7) [15], cistanoside D(8)[23], salsaside B(9) [6l, tubuloside E (10)[16]cistanoside M(11)[15],isomartynoside(13) [24], salsaside C(14). )[6], jionoside C(15)[25] ak salsaside F (16)[6]. Estrikti yo te etabli atravè analiz done espektroskopik vaste ak konparezon ak done rapòte nan literati a. Li te konfime ke estrikti pwovizwa prevwa nan diglycosides phenylpropanoid-ranplase yo te kòrèkteman matche ak estrikti reyèl yo.

Nan NON tès inhibition, konpoze 5 (IC50 42.7±6.6 μM), 11 (IC50 37.3±2.2 μM), 13 （IC50 40.0 ±4.0 μM） ak 18（ICs0 27.9±0.8uM te montre aktivite inhibition modere. Nan konpoze sa yo, yo te jwenn konpoze 11,13 ak 18 pou anpeche fosforilasyon NF-kB nan makrofaj epi yo ka fè yon aktivite anti-enflamatwa ki pral gen pou pwouve nan plis eksperyans.

Ekstrè soti nan: https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ ("Lisans lan"). Malgre Tèm ak Kondisyon ProQuest yo, ou ka itilize kontni sa a an akò ak kondisyon ki nan Lisans lan.