Dyetetik Cistanche soulaje domaj egi ileum nan kanna

Résumé: Aflatoxin B1 (AFB1) se yon metabolit toksik ki estab ki menase sante moun ak bèt yo ak manje bèt ak manje moun ki lajman kontamine. Etid sa a prezan te vize envestige efè yo nancistanche dyetetiksou aksidan ileum nan kana pwovoke pa administrasyon AFB1 ak eksplore mekanis kache li yo. Kanna (N=450, gason ki gen yon sèl jou) ak yon pwa menm jan an te owaza asiyen nan 3 gwoup, ki gen gwoup kontwòl la, gwoup AFB1 (60 µg AFB1 kg-1 pwa kò), ak cistanche (500 mg). cistanche kg-1 rejim) plis gwoup AFB1. Administrasyon AFB1 ogmante domaj nan ileum, AFB1-ADN adducts nan plasma a, ak estrès oksidasyon ak enflamasyon. Ajoute cistanche nan rejim alimantè a pwoteje ileum a kont domaj mòfoloji pwovoke pa administrasyon AFB1, diminye AFB1-adducts ADN nan plasma a, epi elimine estrès oksidasyon ak enflamasyon nan ileum nan kana.Anti-oksidasyonepianti-enflamatwa efè cistancheta ka pwoteje ileum a kont domaj egi lè li aktive chemen siyal Nrf2-ARE ak anpeche chemen siyal NF-κB. Definitivman,sistanchte yon dyetetikanti-oksidasyonepianti-enflamasyonajan atravè aktive chemen siyal Nrf2-ARE ak anpeche yon chemen siyal NF-κB domaj egi pwovoke pa administrasyon AFB1.

Mo kle:sistanch; ileum egi; AFB1-ADN aduk; Nrf2-ARE;

Klike la a pou pwodwi anti-aje Cistanche

Mande plis:

Imèl:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plis 86 15292862950

1. Entwodiksyon

Vyann se yon sous enpòtan nan bon jan kalite pwoteyin pou nitrisyon imen. Vyann kanna yo konsome abondans atravè lemond, espesyalman nan pwovens Lazi akòz karakteristik nitrisyonèl dezirab li yo [1]. Se poutèt sa, elvaj la nan kana te atire atansyon moun yo. Pou kana, gen divès kalite dezavantaj nan pwosesis elvaj la, tankou AFB1 ki menase sante kana. Aflatoxin B1 (AFB1) se youn nan metabolit toksik tab ki pwodui pa espès Aspergillus. AFB1 rekonèt kòm pi toksik nan mitan gwoup aflatoksin (AF), ansanm ak yon varyete efè toksik ki menase sante moun ak bèt [2].

Pou moun oswa bèt, manje oswa manje se yon fason komen ak enpòtan pou ekspoze a AFB1, men rale ak kontak dirèk ak kontak po oswa mukoza yo tou konte epi yo pa inyore [3]. Etid anvan yo te pwouve ke AFB1 egzèse yon toksisite ki pisan ki trè konplèks ak fò, sa ki lakòz reta kwasans, malformasyon byolojik, toksisite fwa, maladi aparèy dijestif e menm kansè [4,5]. AFB1 jwenn nan kontak manje oswa mukoza te gen efè negatif sou sistèm respiratwa, sistèm dijestif ak tisi ak pèfòmans kwasans [3,6,7]. Tisi ak domaj ògàn pwovoke pa administrasyon AFB1 ki gen rapò ak estrès oksidasyon ak enflamasyon. Administrasyon AFB1 make ogmante kontni AFB1-ADN aduk nan ògàn blese [8]. Absòpsyon ak konvèsyon eleman nitritif ak toksin yo te fèt nan vant lan ak ti trip, kidonk ti

Sistèm iminitè mukozal entesten se premye liy pou pwoteje kò kont blesi [9]. Fonksyonalite ak mòfoloji nan aparèy la gastwoentestinal sante ka detwi pa faktè favorab tankou toksik, bakteri ak viris [10,11]. AFB1 pwovoke nan destriksyon estrikti nan entesten, manifeste pa koule nan selil epitelyal nan villus jejunal ak enfiltrasyon selil lenfositik nan trip la nan poul [12,13]. Fonksyonalite a varyasyon ak mòfoloji ka atribiye nan pwosesis metabolis toksin ki souvan akonpaye pa enflamasyon estrès oksidatif. Li se yon pwoblèm ijan pou jwenn yon antidot pou redwi ak minimize menas AFB1 pou moun ak bèt yo.

Kontinwe, AFB1 se youn nan enkyetid prensipal yo nan endistri bèt volay akòz toksisite ki pisan li yo. cistanche se yon kalite eleman polifenol ki fèt nan rizom timerik (Cur cuma Longa Linn) kòm yon aditif manje fonksyonèl yo itilize nan manje bèt [14], ak lajman itilize.

kòm yon epis vèt ak natirèl, koloran, konsèvasyon ak arom nan endistri a manje. Ekstrè plant tankou cistanche ki gen polifenol amelyore iminite kò a [15]. cistanche jwe yon wòl kle kont estrès oksidatif-medyatè kondisyon patolojik-patolojik ak aktivite lè yo itilize kòm yon terapi pou tretman ak prevansyon maladi kwonik [16,17]. Esè klinik yo te endike ke cistanche pa gen gwo toksik oswa efè segondè, ak pwopriyete anti-kanserojèn ak anti-toksikojèn, ki te mennen nan cistanche kòm yon ajan chemopreventive atire kont domaj tisi AFB 1-pwovoke [18-20]. Literati te demontre ke cistanche gen kapasite pou anti-enflamasyon, anti-apoptoz ak antioksidasyon lè li aktive chemen Nrf2/HO-1, ogmante kapasite antiox pou elimine enflamasyon ak estrès oksidatif nan kò a epi elimine AFB1-pwovoke. estrès oksidatif [21-25]. cistanche siprime estrès oksidasyon ak fòmasyon enflamasome pa aktive Nrf2-ARE ak anpeche chemen siyal NF-κB nan demoning ren rès [26], anti-oksidasyon ak pwopriyete anti-enflamatwa. Anplis de sa, cistanche dyetetik siyifikativman amelyore kapasite antioksidan nan griy [27] ak kana [28]. Pa te gen okenn tantativ pou korelasyon wòl cistanche nan chemen siyal Nrf2-ARE ak NF-κB ak nan modèl bèt nan administrasyon egi AFB1.

Etid sa a te bay limyè sou pwoblèm sa a epi li te bay yon baz teyorik pou cistanche kòm yon aditif manje pou pwoteje sante kanna kont administrasyon AFB1 epi redwi pèt ekonomik nan endistri manje ak elvaj ki te koze pa polisyon AFB1.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Pwodwi chimik yo

cistanche te achte nan men Nanjing Nutri-herb Biotech co, Ltd (Nanjing, Jiangsu, Lachin, CAS: 458-37-7), pite li yo te plis pase 98 pousan pa analiz HPLC. AFB1 (pite pi gran pase oswa egal a 98 pousan, CAS NO. 1162-65-8) te achte nan men Shanghai Yuan ye Bio-Technology Co., Ltd. (Shanghai, Lachin). Antikò yo te itilize nan etid sa a te achte nan men Bey time Biotechnology, Shanghai, Lachin, ki gen ladan GAPDH (nimewo katalòg: AG019), Nrf2 (nimewo katalòg: AF7623), Phospho-NF-κB p65 (Ser276) (nimewo katalòg: AF5875), HRP ki make Goat Anti-Rabbit IgG (H plis L) (nimewo katalòg: A0208) ak HRP ki make Goat

Anti-sourit IgG (H plis L) (nimewo katalòg: A0216).

2.2. Kanna ak Elvaj

Pwotokòl eksperimantal la te fèt an akò ak pratik ki endike nan Gid pou Swen ak Itilizasyon Bèt Agrikòl nan Rechèch ak Ansèyman Agrikilti nan Northeast Agricultural University (Nimewo Pwotokòl: NEAU-[2011]-9).

Kanna (n {{0}}, yon sèl jou-gason Anas platyrhynchos, 33.8 ± 0.2 g) ki pa gen okenn pwa diferan enpòtan yo te achte nan yon kouve komèsyal epi yo te asiyen owaza nan 3 gwoup (Tablo 1), ak 10. replike plim (kaj) pou chak gwoup ak 15 kanna pou chak plim pou yon 70-jou

esè manje. Rejim fondamantal yo te fòme dapre National Research Council (1994). Kanna nan gwoup T0 ak T0 plis AFB1 yo te manje yon rejim fondamantal mayi-soja (Tablo 2), kana nan gwoup T500 plis AFB1 yo te manje rejim fondamantal la ak 500 mg.

cistanche kg-1 nan rejim (T500) yon esè 70-jou. Nan 70 jou yo, kana ki gen menm pwa kò yo nan gwoup T0 plis AFB1 ak T500 plis AFB1 yo te manje 60 µg AFB1 kg-1 pwa kò yo, epi kana nan gwoup T0 yo te manje volim egal nan solisyon PBS. Kanna yo te manje nan Acheng Experimental Base nan Northeast Agricultural University epi yo te bay aksè ad libitum nan dlo ak alimantasyon an poud. Yo te chwazi kenz kana ki gen pwa kò ki sanble (1.4 ± 0.3 kg) nan chak gwoup epi yo te fè jèn pou 12 èdtan, epi yo te manje kana PBS nan gwoup T0 ak 60 µg AFB1 kg-1 nan pwa kò a kana nan T0 plis AFB1 ak T500 plis gwoup AFB1 an menm tan. Apre 12 èdtan, kenz kana yo nan chak gwoup yo te jwenn echantiyon kana.

2.3. Koleksyon echantiyon

Yo te jwenn echantiyon san (10 mL) lè l sèvi avèk tib eparin ki soti nan venn zèl kanna epi yo te santrifuje nan 1000 × g pou 15 min nan 4 ◦C. Plasma jwenn yo te imedyatman separe epi estoke nan -80 ◦C pou analiz. Kanna yo te anestezi lè yo respire etè epi yo te touye pou jwenn ileum. Ileum nan te lave 3 fwa nan PBS, imedyatman, epi endividyèlman ki estoke nan yon tank nitwojèn likid Lè sa a, nan -80 ◦C pou qRT-PCR ak analiz kapasite antioksidan. Lè sa a, yo te jwenn apeprè 0.125 cm3 ileum epi mete yo nan 4 pousan solisyon paraformaldehyde pou seksyon tisi yo epi yo te mete apeprè 1 mm3 ileum nan mikwoskòp elèktron.

solisyon nan 4 ◦C pou obsèvasyon ultrastruktural pita.

2.4. Esè nivo antioksidan nan Plasma a

Nivo plasma nan total superoksid dismutase (T-SOD), glutatyon peroksidaz (GSH Px), glutatyon S-transferaz (GSH-ST), ak malondialdehyde (MDA) yo te mezire pa twous tès (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Lachin) , respektivman, avèk

UV-VIS Spectrophotometer (UV1100, MAPADA, Shanghai, Lachin).

2.5. Esè nivo AFB1-ADN nan plasma a

Yo te detèmine jenerasyon AFB1-ADN adducts nan plasma a lè l sèvi avèk twous ELISA dapre espesifikasyon twous la (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nan jing, Lachin).

2.6. Esè kapasite antioksidan nan Ileum

Ileum (100.00 mg) te devolue epi melanje nan 0.9 mL solisyon saline konjesyon serebral-fizyolojik (4 ◦C, 0.9 pousan NaCl, pH=7.2). –7.4) pou jwenn 10 pousan ileum/SPSS omojèn. Aktivite oswa kontni total superoksid dismutase (T-SOD U/mg Pwoteyin), rediksyon Glu glutatyon (GSH-PX µmol/mg Pwoteyin), Glutatyon S-transferaz (GSH-ST U/mg Pwoteyin) ak Malondialdehyde (MDA nmol/mg). mg Pwoteyin) nan ileum yo te evalye lè l sèvi avèk twous Essay (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Lachin), respektivman, ak yon UV-VIS

spectrophotometer (UV1100, MAPADA, Shanghai, Lachin).

2.7. Izolasyon RNA ak reyaksyon chèn polymerase an tan reyèl (qRT-PCR)

Yo te izole RNA total ileum kana a (100.00 mg) lè l sèvi avèk yon twous reyaktif (TaKaRa, Japon) dapre pwotokòl manifaktirè yo rekòmande. Yo te detekte konsantrasyon ak pite total RNA nan rapò A260/A280 ak yon espektrofotomèt (IMPLEN, Almay). Yo te konvèti 1 µg RNA total nan chak echantiyon an nan cDNA ak yon twous reyaktif Prime Script™ RT ak gDNA Eraser (TaKaRa, Dalian, Lachin) dapre

pwotokòl la rekòmande pa manifaktirè yo. Yo te itilize cDNA ki te jwenn nan chak ileum kanna kòm yon modèl pou yon twous TB Green™ Premix Ex Taq™ (TaKaRa, Dalian, Lachin) RT-PCR (qRT-PCR). Nimewo asansyon jèn nan kana te jwenn nan NCBI ak

Sangon Biotech Co., Ltd. (Shanghai, Lachin) te sentetize primè jèn kanna yo (Tablo 3). Ekspresyon jèn ki enpòtan nan ileum kanna a te detèmine pa aparèy tèmik Quanta Gene Q225. qRT-PCR te kouri nan Monad Chwazi an tan reyèl

Sistèm PCR (ABI 7500 an tan reyèl PCR enstriman (USA)) ap koule tankou dlo nan kondisyon an: yon sik nan 95 ◦C pou 30 s, 40 sik nan 95 ◦C pou 5 s ak nan 60 ◦C pou 30 s. Te rapò ekspresyon jèn relatif deteksyon mRNA detekte lè l sèvi avèk metòd 2-∆∆Ct ak nòmalize nan ekspresyon -aktin.

2.8. Western Blotting

Ileum nan kanna te pulverize ak lysed nan tanpon RIPA ki gen 1 mmol / L PMSF (Beyotime, Shanghai, Lachin) nan glas la. Konsantrasyon total pwoteyin nan ileum a te detèmine pa yon twous tès asid bicinchoninic (BCA) (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Lachin). 12 pousan ak 10 pousan jèl SDS-polyacrylamide pou elektwoforèz te

itilize pou jwenn pwoteyin sib ki gen diferan pwa molekilè. Lè sa a, pwoteyin sib yo te transfere nan yon manbràn polyvinylidene-difluoride (PVDF) (Beyotime, Shanghai, Lachin) pou blots ak yon aparèy trans blotting. Yo te lave manbràn PVDF la 3 fwa pou 10 minit chak fwa nan 1 × PBST ak Lè sa a, bloke 2 èdtan nan 5 pousan lèt ekreme. Mem brane PVDF te lave 3 fwa ankò, epi enkubasyon ak antikò prensipal GAPDH, Nrf2 ak P-P65 (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Lachin) pou 8-12 èdtan nan 4 ◦C, respektivman. Nan denmen, yo te lave manbràn PVDF la 3 fwa ankò, epi yo te enkube ak antikò korespondan refor peroksidaz la nan 37 ◦C pou 1 èdtan, epi lave 3 fwa ankò.

Gwoup pwoteyin sib yo te detekte ak vizyalize anba aksyon an nan twous deteksyon fluoresans amelyore BeyoECL Star (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Lachin). Imaj nan tach yo te anrejistre ak analize pa platfòm la D 'Essential V6 (UVITEC, Cambridge,

Angletè). Pwoteyin GAPDH te sèvi kòm yon pwoteyin kontwòl entèn. Tout rezilta eksperyans yo te repete an triple. Ekspresyon relatif pwoteyin sib yo te eksprime kòm rapò entansite gwoup pwoteyin ak GAPDH.

2.9. Analiz estatistik

Done eksperyans yo te jwenn omwen sis fwa epi chak echantiyon yo te mezire twa fwa. Analiz done rechèch yo lè l sèvi avèk Endepandan-Samples T Test pa SPSS (Vèsyon 22.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA) ak 5 pousan Pwobabilite erè ak siyifikasyon estatistik te p < {{4} }.05 nan etid sa a