Flavanol kakawo dyetetik amelyore fonksyon mitokondriyo nan misk skelèt epi modifye metabolis tout kò nan sourit ki an sante.

pou plis enfòmasyon, kontakte:tina.xiang@wecistanche.com

Résumé: se malfonksyònman mitokondriyo lajman rapòte nan divès maladi ak kontribye nan patojèn yo. Nou evalye efè a nanflavanol kakawosipleman sou fonksyon mitokondriyo ak metabolis antye, epi nou eksplore si sirtuin deacetylase mitokondriyo -3 (Sirt3) enplike oswa ou pa. Nou eksplore efè 15 jou sipleman CF nan kalite sovaj ak Sirt3-/sourit. Metabolis tout kò yo te evalye pa kalorimetri endirèk, epi yo te fè yon tès oral tolerans glikoz pou evalye.metabolis glikoz. Fonksyon respiratwa mitokondriyo te evalye nan fib pèmeabilize ak kontni an nukleotid piridin (NAD plis ak NADH) yo te kantite. Nan kalite sovaj, sipleman CF siyifikativman modifye metabolis tout kò pa fè pwomosyon itilizasyon idrat kabòn ak amelyore tolerans glikoz. Sipleman CF pwovoke yon ogmantasyon siyifikatif nan mas mitokondriyo, pandan y ap siyifikatif adaptasyon kalitatif ki te fèt pou kenbe pwodiksyon H2O2 ak estrès oksidatif selilè. Sipleman CF pwovoke yon ogmantasyon enpòtan nan kontni NAD plis ak NADH. Tout efè yo mansyone pi wo a te bouche nan sourit Sirt3-7. Ansanm, sipleman CF ranfòse metabolis NAD ki stimul metabolis sirtuin ak amelyore fonksyon mitokondriyo, ki gen anpil chans kontribye nan adaptasyon metabolis tout kò yo obsève, ak yon pi gwo kapasite pou itilize idrat kabòn, omwen pasyèlman atravè Sirt3.

Mo kle: flavanol kakawo; metabolis NAD; mas mitokondriyo; metabolis glikoz; misk skelèt

klike pou jwenn plis enfòmasyon

1. Entwodiksyon

Mitokondri yo se òganèl subselilè ki enplike nan plizyè fonksyon selilè, tankou transdiksyon enèji atravè fosforilasyon mitokondriyo oksidatif ak nan pwodiksyon mitokondriyo oksijene idwojèn oswa aktivasyon lanmò selil mitokondriyo medyatè [1-3]. Prèv émergentes sijere ke malfonksyònman mitokondriyo enplike nan anpil patoloji epi li jwe yon wòl santral nan patojèn yo [4]. Gwoup nou an rapòte andikap mitokondriyo nan pasyan ki gen dyabèt tip 1 lontan anvan konplikasyon klinik [5]. Anplis, yon diminisyon nan kapasite oksidatif mitokondriyo rive ak aje menm nan moun ki an sante [6]. Se poutèt sa, idantifikasyon estrateji pou bese malfonksyònman sa yo oswa amelyore mas mitokondriyo yo se opòtinite pou anpeche, oswa omwen diminye, ensidans nan anpil maladi oswa ogmante kapasite aerobic nan matyè ki an sante.

Nan kontèks sa a, idantifikasyon an nan konpoze ki an sekirite ak natirèl ki amelyore fonksyon mitokondriyo ak metabolis tout kò ak oswa san efè segondè limite se nan enterè. Pami konpoze natirèl yo,flavanol kakawo(CF) yo konsidere kòm molekil pwomèt kòm yo te montre konsomasyon yo afekte pozitivman sante kadyovaskilè, rezistans ensilin, oswa fonksyon iminitè [7]. Vreman vre, CF yo te montre amelyore metabolis glikoz, ak yon administrasyon kout tèm nan CF ki te swiv pa yon ogmantasyon nan sansiblite ensilin, menm nan glikoz-intoleran pasyan ipètansif [8,9].

Pami flavanol yo, (-)-epicatechin (EPI) se monomè ki pi souvan jwenn nan CF, epi EPI konsidere kòm pi gwo molekil biodisponib ak byoaktif nan CF [10]. Yon prèv ki konsistan endike ke sipleman EPI amelyore fonksyon mitokondriyo ak / oswa kontni nan misk skelèt [11]. Sipleman EPI stimul plizyè chemen konvèje sou peroxisome proliferator-aktive reseptè gamma coactivator 1-alpha(PGCl) ak gwo konplèks transkripsyon nikleyè. EPI dirèkteman amelyore jenerasyon oksid nitrique, ki ankouraje byogenesis mitokondriyo [11]. An menm tan an, sirtuins 1 ak 3 yo tou ankouraje pa sipleman EPI [11]. Itilizasyon proanthocyanidins, oligomerikflavonoidki gen EPI, yo te montre yo ogmante nivo entraselilè nikotinamid adenine dinukleotide (NAD plis) atravè ogmantasyon plizyè précurseurs pou NADbyosynthesis ak ogmante nivo sirtuin-1 mRNA nan fwa rat [12]. Fanmi sirtuin (Sirt), yon deacetylase ki depann de NAD, gen sèt manm ki diferan pa distribisyon subselilè yo, espesifik substra yo, ak fonksyon selilè [13]. Sirt1, yon manm anpil etidye nan fanmi sa a, stimul byogenesis mitokondriyo pa ankouraje deacetylation nan PGCl, kidonk amelyore aktivite transcription li yo [14]. Sirte, yon detèktè metabolik kle, te ankouraje apre administrasyon EPI [12,15-17]. Sepandan, enfliyans nan EPI sou lòt sirtuins pa te eksplore. Evalyasyon efè EPI a pral patikilyèman enteresan sou sirtuin ki sitiye nan mitokondri yo (Sirt3, Sirt 4, ak Sirt5), yo konnen yo modile aktivite sik Krebs ak anzim chèn respiratwa [18]. Sirt3, ki trè eksprime nan tisi ak woulman metabolik segondè ak kontni mitokondriyo, se yon enterè patikilye konsènan wòl kritik li nan kenbe fonksyon nòmal mitokondriyo atravè revèsib pwoteyin lizin deacetylation [19-21]Anplis, Sirt3 jwe yon wòl enpòtan nan la. regilasyon metabolis tout kò [20. Sirt3 te montre yo chanje nan misk skelèt nan modèl nan dyabèt tip 1 ak tip 2 ak maladi kadyovaskilè [22,23]. Anplis de sa, li te sijere ke aktivasyon Sirt3 ta ka reprezante yon estrateji pwomèt terapetik pou amelyore fonksyon mitokondriyo ak metabolis [23,24]. Se poutèt sa, detèmine si Sirt3 kache yon pati nan efè yo benefisye nan sipleman CF sou metabolis tout kò ak fonksyon mitokondriyo se nan enterè.

Nan etid sa a, nou te itilize yon apwòch entegre pou mennen ankèt sou, sourit, efè yon 15-sipleman CF jou. Nou te ipotèz ke sipleman CF a ta: (i) modifye metabolis tout kò akmetabolis glikoz, (ii) ogmante fonksyon mitokondriyo nan misk oksidatif ak glikolitik nan fib pèmeabilize, ak (ii) ranfòse metabolis NAD. Nou menm tou nou eksplore patisipasyon Sirt3 nan CF-induit byogenesis mitokondriyo ak metabolis tout-kò. Ipotèz nou yo te fè konnen efè CF sou metabolis tout kò a ak mas mitokondriyo yo ta diminye nan sourit Sirt3-7.

2. Metòd

2.1. Bèt ak Rejim

Pou etid sa a, yo te achte sourit gason 129S1/SvlmJ 10-nan men Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME, USA). Pou detèmine si sirtuin yo patisipe nan mas mitokondriyo ak adaptasyon fonksyon administrasyon CF ki te pwovoke, nou te itilize tou 10-sourit gason Sirt3 knock-out tout kò ki gen yon semèn sou menm souch ak kalite sovaj [25]. Sirt3/sourit yo te itilize pou eksplore patisipasyon Sirt3 nan byogenesis mitokondriyo CF-induit ak adaptasyon metabolis tout kò. Sourit yo te kenbe nan yon chanm nan yon tanperati reglemante nan 23-25 degre ak ekleraj kontwole ({12-h sik limyè ak nwa). Bèt yo te gen aksè a manje wonjè ak dlo tiyo ad libitum.

Apre omwen yon semèn nan abitye nan etablisman bèt la, bèt eksperimantal yo te resevwa sipleman CF atravè gavaj oral nan yon ekstrè natirèl (302.1 mg / kg pwa kò de fwa pa jou pou 15 jou) resisansyon nan yon karboksimetilceluloz (Sigma-Aldrich, St. Louis). , Mo, USA). Konpozisyon poud kakawo a dekri nan tablo 1 e li te jwenn nan Naturex (Quart de Poblet, Espay). Konpozisyon an te etabli pa metòd segondè-pèfòmans likid kromatografi ak 100 mg nan ekstrè a ekivalan a yon mwayèn de 475 mg nan grenn kakawo sèk. Sourit kontwòl yo te resevwa yon veyikil ki konpoze de kontni ki sanble teobromin ak kafeyin ki fonn nan karboksimetil seluloz pa gavaj oral. Dòz la chak jou te detèmine dapre konsèy endistri a ki konvèti dòz imen an nan dòz ekivalan bèt ki baze sou sifas kò a, epi nou miltipliye dòz imen an pa 12.3 [26]. Se yon teknisyen ki gen eksperyans fè gavaj oral la.

2.2. Koleksyon Tisi 1

Vennkat èdtan apre dènye gavaj oral la, bèt ki pa jene yo te anestezi lè l sèvi avèk ketamin ak ksilazin (respektivman: 100 ak 10 mg / kg). Koleksyon tisi yo te fèt imedyatman apre anestezi te reyalize. Solèy la ak pòsyon blan nan gastrocnemius yo te retire. Echantiyon yo te swa imedyatman jele nan nitwojèn likid epi estoke nan -80 degre pou analiz ki vin apre oswa yo te itilize yo prepare fib nan misk po.

2.3. Evalyasyon Metabolik ak Aktivite Fizik

Yo te mezire kalorimetri endirèk ak aktivite fizik espontane lè l sèvi avèk Comprehensive Laboratory Animal Monitoring System (CLAMS; Columbus Instruments, Columbus, OH, USA). Sourit yo te loje endividyèlman nan chanm yo a 28 degre, ak limyè soti nan 07h00 rive 19h00 ak aksè ad libitum nan manje wonjè ak dlo tiyo. Sourit yo te aklimate nan kaj metabolik yo pandan twa jou anvan premye jou koleksyon done yo. Koleksyon done yo te fèt sou kenzyèm jou sipleman an. Konsomasyon oksijèn (VO2), pwodiksyon gaz kabonik (VCO2), ak rapò echanj respiratwa (RER) yo te mezire ak yon koule lè 0.5 L/min ak yon echantiyon lè 0.4 L/. min. Pousantaj frekans relatif kimilatif (PCRF) RER te detèmine sou yon peryòd 24-h jan Riachi et al te dekri deja. (2004). Yon ti tan, PCRF te detèmine pa adisyon nan frekans nan chak pwen done nan sekans enkreman anvan an (ki soti nan 0.65 a 1.20 ak yon enkreman nan 0.01) [27]. Fleksibilite metabolik la te detèmine pa pant Hill (valè H) ak percentile 50yèm (EC50) koub PRCF la ak mezire anplitid RER sou 24 èdtan (Riachi et al.2004). Aktivite fizik jeneral yo te kontwole lè l sèvi avèk yon sistèm detèktè enfrawouj ki fonksyone ki te detekte aktivite aks x ak z. Tou de konte total (chak fwa yo kase yon gwo bout bwa) ak konte anbilantè (chak fwa yo kase yon nouvo gwo bout bwa) yo te evalye. Yon konte X-total (X-TOT) anrejistre lè bèt la deplase orizontal plis pase 0.5 pous epi li reprezante ti echèl aktivite repetitif, tankou grate ak penyen. X-ambulatory count (X-AMB) mezire aktyèl mouvman lè li anrejistre yon konte sèlman lè bèt la kraze yon nouvo travès. Yon konte Z-total (Z-TOT) anrejistre lè 1.5 pous nan mouvman vètikal rive, sa vle di, elvaj (Abreu-Vieira 2016). Pou estime idrat kabòn ak grèsoksidasyonsoti nan VO2 ak VCO2, nou te itilize tab kosyan respiratwa ki pa pwoteyin ki soti nan Péronnet ak Massicotte ki te deja itilize nan sourit [28,29].

2.4. Total kò ak mas grès

Yo te detèmine mas grès total ak mas mèg total nan sourit san anestezi pa analiz entèferans sonorite quantitative lè l sèvi avèk analizè sonorite mayetik tout kò EchoMRI (Echo Medical System, Houston, TX, USA). Mas grès total reprezante sòm tout grès nan kò a. Mas mèg total enkli sitou misk ak ògàn enteryè. Yo konnen mas nan misk skelèt pou kont pou pi gwo pòsyon nan mas mèg total.

2.5.Tès Tolerans Glikoz Oral (OGTT)

Yo te mezire glisemi lè l sèvi avèk yon gout san kolekte nan ke a ak yon glikomèt (Accu-Chek Performa, Roche, Ajantin). OGTT te fèt sou sourit ki te fè jèn pou 5 a 6 èdtan. Yo te fè mezi a nan dènye jou sipleman CF. Apre mezi glisemi fondamantal (tan O), sourit yo te enjekte pa os ak yon solisyon 20 pousan glikoz nan dlo esteril nan yon dòz 1.5 g glikoz·kg pwa kò -1. Yo te mezire glisemi nan 15, 30, 60, 90, ak 120 minit apre piki solisyon glikoz la. Lè sa a, te kalkile zòn nan incrémentielle nan koub glikoz la kòm yon mezi tolerans glikoz.

2.6.qRT-PCR analiz

The forward (F) and reverse (R) primers of the selected genes used in this study are presented in Table 2. Total RNA was obtained from pulverized frozen white gastrocnemius muscle using Trizol reagent (Invitrogen Life Technologies, Rockville, MD, USA). The purity, integrity, and quantity of RNA were evaluated using a microplate reader (Synergy H1(Biotek Instruments, Winooski, Vermont). The sample was considered pure when the ratio OD260/OD280 was>1.8. cDNA te sentèz soti nan RNA total (2 μL) lè l sèvi avèk supermix transkripsyon ranvèse iScript pou RT-qPCR (Biorad, Hercules, CA, USA). Pwodwi total RT yo te analize pa reyaksyon chèn polymerase quantitative (PCR) lè l sèvi avèk 2x Platinium SYBR Green qPCR SuperMix-UDG selon espesifikasyon manifakti a (Invitrogen Lige Technologies, Burlington, Kanada). Monte bisiklèt te reyalize nan yon cycler CFX96 (Biorad, Hercules, Kalifòni; kondisyon: 95 degre C pou 10 min ak 40 sik nan 95 degre pou 30 s, 55 degre pou 45 s ak 72 degre pou 45 s). Nan fen chak kouri, yo te konfime absans fòmasyon primè-dimè ak prezans yon anplikon inik lè l sèvi avèk koub k ap fonn lan. Valè sik papòt (Ct) yo te itilize apre metòd 2-A△Ct pou analize done qPCR yo, ak swa ß-Actin oswa HPRT1 kòm yon jèn menaj【30】. Valè RT-PCR yo te gen rapò ak sa yo nan gwoup kontwòl la, ki te mete sou 1.

2.7. Aktivite anzim yo

Mezi aktivite espesifik chèn transpò elèktron ak sitrat sintaz te fè espektrofotometrik jan sa te dekri deja [31]. Pulverize nan frizè misk blan gastrocnemius yo (~ 30 mg) yo te omojeneize ak yon omojèn microbead vibre nan 500 uL nan tanpon omojenizasyon (120 mM KCl, 20 mM nan HEPES, 2mM nan MgCl2,1 mM nan EGTA, ak 5 mg · mL-Iof BSA. , pH7.4) ki te swiv pa adisyon a nan 500 μL nan medya ipotonik (25 mM fosfat potasyòm ak 5 mM MgCl, pH 7.2). Lè sa a, echantiyon yo te soumèt nan twa jij nan sik friz-dekonjle nan nitwojèn likid. Echantiyon yo te santrifuje pou 10 min nan 600 × g nan 4 degre, epi yo te kenbe supernatant la sou glas jiskaske analiz la. Kontni pwoteyin yo te detèmine nan supernatant la an triple lè l sèvi avèk yon Twous Test Pwoteyin Pierce BCA (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA).

Aktivite citrate synthase (CS) te detèmine spectrophotometrically nan 412 nm apre rediksyon 2 mM 5,5'-dithio-bis (2-nitrobenzoic asid) nan prezans 0.1 mM asetil. -CoA ak 12 mM nan asid oksalaketik nan 2 00 mM Tris tanpon (pH 7.4). Rotenone-sansib NADH-decylubiquinone oksidoreductase (konplèks I) tès la te fèt nan 340 nm lè l sèvi avèk akseptè 2,3-dimethoxy-5-methyl-6-n-decyl-14-benzoquinone （ 80 μM） ak NADH kòm donatè elèktron （200 μM） nan 10 mM tanpon Tris (pH 8.0). Anplis de sa nan 4μM nan rotenone te itilize pou quantifier aktivite a rotenone-sansib. Aktivite oksidaz cytochrome （konplèks IV） te fèt nan 550 nm lè l sèvi avèk 10μM redwi cytochrome c kòm yon donatè ak 2.5 mM nan n-dodecyl-ß-maltoside pèmeabilize tou de manbràn mitokondriyo nan 100 mM fosfat potasyòm.

Tout tès anzim yo te detèmine an triple, ak rezilta yo te gen rapò ak sa yo nan gwoup kontwòl la, ki te mete nan 100.

2.8. Evalyasyon mitokondriyo

Mitokondriyo respirasyon ak mitokondriyo pwodiksyon H2O2 yo te etidye in situ nan saponin fib pèmeabilize lè l sèvi avèk blan gastrocnemius ak misk soleus|1]. Yon ti tan, fib yo te separe anba binokilè mikwoskòp nan solisyon A nan 4 degre (nan mM: 2.77 CaK2 EGTA, 7.23 K, EGTA, 6.56 MgCl2, 20 taurin, 0.5 DTT,5{ {50}} K-metan sulfonat, 20 imidazol, 5.7 Na2 ATP ak 15 kreatin-fosfat, pH 7.1) ak pèmeabilize nan solisyon A ak 50 ug·mL-Iof saponin pou 30 min nan 4 degre. Yo te detèmine fonksyon respiratwa mitokondriyo nan yon oksimèt ekipe ak yon elektwòd Clark-type (Oxygraph, Hansatech Instruments, Glasgow). Chanm lan te ranpli ak 1 mL nan solisyon B (nan mM: 2.77 CaK, EGTA, 7.23 K, EGTA, 6.56 MgCl,, 20 taurin, 0.5 DTT, 50 K-metan sulfonat, ak 20 imidazol, pH 7.1) ak apre anrejistreman. kontni oksijèn debaz nan chanm lan, yo te mete yon pake 1-2 mg pwa sèk nan myofibres pèmeabilize nan chanm lan, ki te answit sele fèmen. Apre lekti debaz yo, adisyon sa yo te fèt an sekans: palmitoyl karnitin ak malat (160 μM∶5 mM), glutamate (10 mM), succinate (25 mM), rotenone (0.5 μm), antikouplè a （CCM （1. -A （8 uM）, ak N, N', N'-tetramethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride ak ascorbate (0.9:9 mM). Respirasyon te mezire a 23 degre anba vibrasyon kontinyèl. Nan fen chak tès, fib yo te ak anpil atansyon retire nan selil la xylographic, efase, epi seche omwen 24 èdtan nan ~ 80C pou detèminasyon an nan pwa fib. Pousantaj konsomasyon O2 (JO2) yo te eksprime nan nmol O2 min-1.(mg pwa sèk)-I. Tout mezi yo te fèt omwen an kopi.

Yo te mezire lage H2O2 nèt nan mitokondri yo nan pakèt fib pèmeabilize ak sond fliyoresan Amplex Red（20 μM∶emisyon-eksitasyon∶563-587 nm), jan sa dekri deja [32]. Apre preparasyon fib pèmeabilize, echantiyon

ki destine pou mezi H2O2 yo te rense twa fwa nan tanpon Z (nan mM:110 K-Mes, 35 KCl, 1 EGTA, 5 K2HPO4, 3MgCl,6H2O, ak 0.5 mg:mL{{ {14}} BSA, pH 7.3 nan 4 degre). Pakèt fib ({{20}}.{3-1.0 mg pwa sèk) yo te enkube a 37 degre nan yon mikrokuvèt kwatz ak vibran mayetik kontinyèl nan 600 uL tanpon Z (pH 7.3 nan 37C) konplete ak 1.2 U·mL-I peroksidaz refor. Lekti fluoresans debaz yo te pran nan absans nenpòt substrats respiratwa ekzojèn. Lè sa a, ajoute sa yo te fè sekans: glutamate (5 mM), siksinate (5 mM), rotenone (0.5 uM), ADP (10 mM), ak antimycin-A （8 μM）. Nan fen chak tès, fib yo te. ak anpil atansyon retire nan kivèt la, efase, epi seche pou detèmine pwa fib. Pousantaj pwodiksyon H2O2 yo te eksprime nan AU·min-1.(mg pwa sèk)-I ak pou chak kapasite oxphos ki koresponn ak respirasyon mitokondriyo maksimòm nan eta fosforilasyon. Tout mezi yo te fèt omwen an kopi.

Kapasite retansyon kalsyòm mitokondriyo (CRC) te evalye nan fib fantom nan misk gastrocnemius blan jan yo dekri deja [33]. Yon ti tan, fib yo te enkube nan yon mikrokuvèt kwatz anba vibrasyon kontinyèl nan 6 0 0 μL nan tanpon CRC (nan mM ~ 250 sikwoz, 10 MOPS, 0.005 EGTA, ak 10P;-Tris, pH7.3). Lè sa a, fib yo te ekspoze a yon sèl batman kè 20 nM nan Ca2 plis. Chanjman nan konsantrasyon kalsyòm ekstramitokondriyo yo te kontwole fluorometrically lè l sèvi avèk Kalsyòm vèt 5N (1 mM: eksitasyon-emisyon: 505-535 nm). Pèmeyabilite tranzisyon pò (PTP) te evalye pa mezire tan ki nesesè pou ouvèti PTP, epi yo te pran CRC kòm kantite total Ca' akimile pa mitokondri anvan yo lage li. Nan fen chak tès, yo te retire fib yo ak anpil atansyon nan kuvèt la, yo te efase, epi yo seche pou detèmine pwa fib la. Valè CRC yo te eksprime nan nM nan Ca2 plis pou chak mg nan pwa sèk.

2.9. Analiz Western Blot

Pwoteyin ki soti nan misk gastrocnemius blan ak soleus yo te dilye nan tanpon Laemmli epi yo separe sou Mini-PROTEAN TGX Stain-Free 10 pousan jèl poliakrilamid prefabrike (Biorad); yon estanda entèn te chaje sou chak jèl. Separasyon elektwoforetik te fè nan 200 V pou 35 min nan tanpon migrasyon (25 mM TrisBase, 0.2 M glisin, ak 1 pousan SDS (p/v)). Teknoloji Stain-Free (SF) gen yon konpoze tri-halo propriétaires ki reyaji ak pwoteyin, ki fè yo detekte atravè ekspoze UV. Yo te fè imaj SF lè l sèvi avèk ChemiDoc MP Imager ak Lojisyèl Image Lab4.0.1 (Biorad, Hercules, Kalifòni, USA) ak yon tan 5-min deklanchman tach, ak modèl pwoteyin total yo te vizyalize. Lè sa a, pwoteyin yo te transfere sou yon fèy nitrocellulose 0.2 um lè l sèvi avèk Trans-Blot Turbo Transfè Sistèm (Biorad). Kalite transfè a te kontwole pa manbràn imaj lè l sèvi avèk teknoloji SF. Apre etap transfè a, pwoteyin kabònil yo te derivatize ak dinitrophenylhydrazine dilution nan 2N HCL epi finalman yo te lave anpil ak metanol. Manbràn yo te bloke ak 5 pousan lèt sèk ki pa gen anpil grès nan Tris-tampon saline ki gen Tween-20 (TBST: 15 mM Tris/HCl, pH 7.6,140 mM NaCl, ak 0.05 pousan Tween-20) pou 1 h nan tanperati chanm. Lè sa a, manbràn yo te enkube nan 4 degre lannwit lan oswa 2 èdtan nan tanperati chanm ak antikò prensipal sa yo: pwoteyin karbonil antikò prensipal (Anti-DNP; #STA-308, Cell Biolabs) ak SOD2 (#Ab13533, Abcam). Apre twa lave 10 minit nan TBST, manbràn yo te sonde ak antikò segondè pou karbonil pwoteyin (HRP-konjige; #STA-308, Cell Biolabs) ak SOD2 (anti-lapen IgG-HRP lye; #7074, Siyal selil) nan solisyon bloke pou 2 èdtan nan tanperati chanm epi yo te finalman anpil lave ak TBST. Yo te optimize dilusyon nan antikò prensipal ak segondè pou chak antikò. Deteksyon chimiluminesans te fèt lè l sèvi avèk ECL Clarity (Biorad), epi yo te fè kaptire imaj ak ChemiDocMP. Tout imaj yo te analize avèk lojisyèl Image Lab 4.0.1. Nòmalizasyon entansite siyal pwoteyin yo te fèt apre quantification nivo pwoteyin total respektif yo sou imaj SF, kontwòl echantiyon ak estanda entèn yo.

2.10. Mezi NAD

Nivo total NAD ak NADH yo te mezire nan gastroknemi blan omojenize lè l sèvi avèk yon twous komèsyal (#K337-100, Biovision, USA) epi swiv enstriksyon manifakti a. Yon ti tan, pisin total NAD (NADt= NADt ak NADH) te ekstrè. Pou chak nan echantiyon ekstrè yo, mwatye nan echantiyon an te chofe a 60 degre pou 30min dekonpoze NADt pandan y ap kenbe NADH entak. Tou de echantiyon NADt ak NADH yo te melanje ak anzim monte bisiklèt NAD, epi yo te mezire absorbans nan 450nm. NADt ak NADH yo te mezire lè yo konpare ak koub estanda NADH ak nòmalize nan mg pwoteyin. Finalman, yo te kalkile rapò NAD plis (NADt-NADH) ak NADH. Tout tès yo te fèt an triple.

2.11. Estatistik

Done yo rapòte kòm mwayen ± devyasyon estanda (SD). Yo te evalye nòmal done lè l sèvi avèk tès nòmal D'Agostino-Pearson. Analiz done yo te fèt lè l sèvi avèk T-tès Elèv la ak de-fason ANOVA (gwoup ak tan) pou mezi repete ki te swiv pa tès post hoc Bonferroni a lè l sèvi avèk Prism8.4.1 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Yo te aplike yon nivo de kote 5 pousan pou erè tip I.

3. Rezilta yo

3.1. Konpozisyon kò ak metabolis tout kò

Kenz jou sipleman CF, nan sourit sovaj (WT), pa t modifye pwa kò (p=0.091), mas mèg (p=0.{{24} }73)ak mas grès evalye pa EchoMRI (p=0.89;Figi 1A). Pousantaj konsomasyon O2 eksprime pou chak mas mèg te siyifikativman pi wo nan sik fènwa a (8±8 pousan, p=0.042), tandiske li te rete menm jan an nan sik la limyè (p =0 .392; Figi 1B.). Pa te gen okenn chanjman nan aktivite lokomotè (done yo pa montre). Sourit CF te montre yon ogmantasyon siyifikatif nan depans enèji tout kò pa 15±15 pousan (p =0.042; Figi 1C) ak nan konsomasyon manje (0.08±0.01 vs.0.11±0.01 g pou chak pwa kò mèg, respektivman CF gwoup ak WT, p=0.013, Figi 1D).

Sipleman CF siyifikativman modifye metabolis tout kò: efè prensipal la nan pi wo RER nan gwoup CF la te obsève sou 24 èdtan (p=0.023, Figi 2A) ak vle di RER plis pase 12 èdtan te pi wo. nan gwoup CF la nan sik limyè ak nwa (plis 5±3 pousan, p=0.035 ak plis 9±4 pousan, respektivman, p=0.026). Anplis de sa, sipleman CF ankouraje itilizasyon idrat kabòn (CHO) (51 ± 13 pousan nan konsomasyon enèji depann sou oksidasyon CHO nan gwoup CF la vs. 37 ± 12 pousan nan gwoup kontwòl la pandan sik limyè a, p=0.108 ak 71±21 pousan nan gwoup CF vs.47±24 pousan nan gwoup kontwòl la pandan sik nwa a, p =0.004; Figi 2B.). Sepandan, lè yo eksprime an kJ, pa te gen okenn diferans nan oksidasyon CHO ni oksidasyon asid gra (CHOoksidasyon: 3.7±1.4 kcal·d-1 nan kontwòl kont 4.4±1.7 kcal.mas kò mèg-1. d-1 nan CF,p=0.33 ak oksidasyon asid gra: 2.3± 1.0 kcal·d-Iin kontwòl kont 2.6±0.87 kcal.mas kò ki mèg-1.d{{ 50}}nan CF,p=0.608).Analiz PRCF nan RER revele yon ogmantasyon de valè EC50 nan gwoup CF la (p{=0,009; Figi 2D) sa vle di ke CF pwovoke yon chanjman. nan pi gwo itilizasyon idrat kabòn. Yo te obsève yon diminisyon nan pant Hill la nan gwoup CF la (valè H: 25.16±4.44 nan kontwòl kont 12.79±3.96 nan gwoup CF la,p<0.001). moreover,="" the="" rer="" amplitude="" over="" 24h="" was="" increased="" by="" 31±="" 31%="" in="" the="" cf="" group="" (p="0.035)." cf="" supplementation="" improved="" glucose="" tolerance="" following="" oral="" glucose="" administration="" from="" unchanged="" baseline="" blood="" glucose="" levels="" after="" an="" overnight="" fast="" (figure="" 2e,p="0.003)." the="" area="" under="" the="" capillary="" blood="" glucose="" curve="" was="" lower="" in="" the="" cf="" group(1018±135="" vs.="" 1181±="" 170="" mm·120="" min,="" p="0.005;" figure="">

3.2. Bioenèjik mitokondriyo

Nou teste efè sipleman CF sou enèji mitokondri nan gastwoknemi blan ak misk soleus nan sourit WT. Yo te obsève pi wo respirasyon mitokondriyo lè l sèvi avèk substra konplèks IV nan misk gastroknemi blan ak soleus (p =0.004 ak p=0.028, respektivman; Figi 3A, B). Pa gen okenn modifikasyon nan rapò respirasyon CII/CI ak CIV/CI yo te obsève (p =0.899 ak p =0.701 pou gastrocnemius blan an ak p=0.693 ak p{{ 11}}.912 pou misk solè yo, respektivman, done yo pa montre). Anplis, aktivite konplèks, I, IV, ak sitrat sintaz yo te ogmante siyifikativman nan misk blan gastrocnemius (respektivman: plis 31 ± 27 pousan ,p=0.004; plis 28 ± 38 pousan ,p=0 .027; plis 35±38 pousan ,p= 0.009; plis 14±13 pousan ,p=0.040;Figi 3C).Kapasite mitokondri yo oksidasyon palmitoyl-carnitine gen tandans ogmante nan gastrocnemius blan an (plis 24±12 pousan, p =0.096; Figi 3D), tandiske pa gen okenn diferans obsève nan soleus la (p =0.363). Pousantaj relatif yo nan palmitoyl-carnitine-stimile respirasyon yo te chanje lè yo te eksprime nan fonksyon nan konplèks I respirasyon (62±11 nan gwoup la kontwòl vs.64±20 nan gwoup la CF nan gastrocnemius blan an ak 70 ± 18 vs.72± 16). nan solè a). Apre sa, nou eksplore sansiblite nan Ca plus-induced PTP ouvèti nan gastrocnemius blan an. Jan yo montre nan Figi 3E, ni tan ouvèti PTP ni kapasite retansyon Ca² yo pa t modifye apre sipleman CF (p=0.608 ak p=0.943, respektivman).

Evalyasyon mRNA nan jèn ki enplike nan byogenesis mitokondriyo te montre yon ogmantasyon 70 pousan nan NRF1 mRNA, tandiske pa gen okenn diferans ki te rapòte pou PGCl, Tfam, CS, ND1, ND2, SDHa ak Cox2 (Tablo 3). Nou eksplore, sou kèk echantiyon, efè sipleman CF sou supercomplexes mitokondriyo (Figi S1, Materyèl siplemantè). Analiz densitometrik la sijere ke sipleman CF ogmante kontni an jeneral supercomplexes san adaptasyon kalitatif oswa rearanjman. Vreman vre, dansite respiratwa te amelyore pa 58 pousan lè l sèvi avèk konplèks I ak konplèksⅡ sond ak pa 93 pousan lè l sèvi avèk konplèks I sond. Menm jan an tou, konplèks I ak konplèks III kontni entegre nan supercomplexes te pi wo nan gwoup CF la.

Sipleman CF diminye emisyon mitokondriyo ROS. Pandan ke emisyon H2O2 rete san chanjman tou de nan gastrocnemius blan ak soleus lè eksprime pou chak pwa sèk (Figi 4A, B, respektivman), pousantaj yo te diminye lè eksprime pou chak kontni mitokondriyo (Figi 4C). Yon efè prensipal pozitif nan sipleman CF yo te obsève nan divès kondisyon nan gastrocnemius blan an (p<0.048; figure="" 4c).="" the="" mitochondrial="" h2o2="" emission="" was="" also="" significantly="" reduced="" when="" expressed="" peroxidative="" phosphorylation="" capacity="" assessed="" by="" state="" 4="" respiration="" using="" complex="" i+ii="" substrates="" by="" 26±13%="" in="" the="" white="" gastrocnemius="" (p="0.044)and" by="" 29±12%="" in="" the="" soleus(p="0.024;" figure="">

3.3. Makè estrès oksidatif nan misk skelèt

Nivo estrès oksidatif pwoteyin selilè nan sourit WT pa te afekte pa CF siplemantè kòm kontni selilè SOD2 te menm jan an nan gwoup eksperimantal ak kontwòl nan gastrocnemius blan ak soleus (Figi 4E). Anplis, pa gen okenn diferans obsève nan karbonylation pwoteyin nan gastrocnemius blan ak soleus (Figi 4F). Anplis de sa, pa gen okenn diferans nan ekspresyon katalaz ak MnSod mRNA yo te obsève apre sipleman CF (Tablo 3).

3.4.NAD Metabolis

Pisin total nukleotid piridin yo te ogmante apre sipleman CF pa 36±33 pousan (p=0.012). Espesyalman, kontni NAD ak NADH ogmante nan gastrocnemius blan an (respektivman pa 69±60 pousan, p{{6). }}.026 ak 29± 42 pousan ,p=0.017;Figi 5A,B)ak rapò NAD plis /NADH te gen tandans ogmante nan gwoup CF la (p =0.084).Non te obsève yon efè enpòtan pou Sirt3 mRNA (p=0.096), NMNAT mRNA (p=0.094), ak Sirt1 mRNA (p =0.869; Tablo 3 ).

3.5.Repons metabolis tout kò ak selilè apre sipleman CF nan Sirt3-/ sourit

Nou egzamine efè sipleman CF nan sourit Sirt{{0}}. Konpozisyon kò kòm pwa, mas mèg, ak mas grès pa t diferan ant gwoup CF ak gwoup kontwòl (p= 0.52,p=0.66,p=0.45,respektivman; Figi 6A). Menm jan an tou, depans enèji chak jou yo pa te afekte pa sipleman CF ({{10}}.38±0.{{4{0}}1 Kcal.kò mèg. mas-1.jou-1 nan kontwòl yo kont 0.39 ± 0.01 Kcal·mèg mas kò-1.jou-1 nan CF, p=0.502; Figi 6B). RER a te menm jan an ant tou de gwoup yo nan sik limyè ak nwa (p=0.301; Figi 6C), ak oksidasyon substra pa te afekte pa sipleman CF (44 ± 17 pousan nan konsomasyon enèji depann sou oksidasyon CHO nan la). gwoup kontwòl kont 50 ± 11 pousan nan gwoup CF la pandan faz limyè a,p=0.209 ak 65±19 pousan nan gwoup kontwòl la vs.77±21 pousan nan gwoup CF la pandan faz nwa a, p=0.395; Figi 6D). Fleksibilite metabolik evalye pa anplitid RER sou 24 èdtan rete menm jan an ant de gwoup yo (0.19± 0.05 nan kontwòl vs.0.20±0.03 nan CF,p=0.604), tandiske pant PRCF la te diminye nan gwoup CF la. (H valè: 17.77±4.38 nan kontwòl vs.12.79±3.93 nan CF,p=0.039).

Apre sa, nou konpare efè sipleman CF sou aktivite anzim mitokondriyo. Sipleman CF echwe pou pou ogmante aktivite anzim konplèks I, I, IV, ak CS nan Sirt3-/sourit jan yo obsève deja nan WT (respektivman: p=0.623,p=0 .629,p=0.283, ak p{=0.791, Figi 6E).Pi gwo aktivite anzim konplèks ak IV te obsève nan WT konpare ak Sirt3-7sourit apre sipleman CF ( respektivman:p=0.027 ak P=0.045)

4. Diskisyon

Nan etid sa a, nou bay yon analiz entegre efè CF enjèstyon. Nou te obsève ke enjèstyon CF kwonik amelyore respirasyon mitokondriyo ak redwi pwodiksyon H2O2, evalye nan anviwònman myofibre yo, tandiske sansiblite nan ouvèti PTP pa te chanje. CF enjèstyon amelyore NADmetabolism, sipòte patisipasyon nan chemen sirtuin sou adaptasyon yo obsève mitokondriyo. Nou te obsève tou modifikasyon metabolis tout kò yo nan direksyon pou yon pi gwo kapasite yo sèvi ak idrat kabòn kòm substra prensipal ki sijere ke adaptasyon mitokondriyo gen anpil chans kontribye nan adaptasyon an obsève metabolis tout kò.

4.1.Metabolis

Yo te idantifye administrasyon dyetetik flavanol kakawo kòm yon estrateji efikas pou soulaje entolerans glikoz, sa ki pèmèt opòtinite pou amelyore maladi metabolik [34]. Rezilta nou yo an akò ak etid anvan yo ki te rapòte yon ogmantasyon tolerans glikoz apre konsomasyon flavanols [35,36]. Mekanis yo pwopoze pou efè sa a enplike yon ogmantasyon nan translokasyon GLUT4 nan direksyon manbràn selilè a, yon ogmantasyon nan fosforilasyon AMPK, ak ogmantasyon nan ekspresyon jèn UCP-2 nan misk skelèt la [8,37] . Anplis, enjèstyon CF te asosye ak amelyorasyon sansiblite ensilin nan imen [8]. Apre 15 jou nan konsomasyon chokola nwa, yo te obsève yon diminisyon nan evalyasyon modèl omeyostaz nan endèks rezistans ensilin nan matyè ki ansante ansanm ak yon ogmantasyon nan endèks chèk la sansiblite quantitative ensilin ak endèks la sansiblite ensilin [8]. Nou te obsève tou yon ogmantasyon paralèl nan tolerans glikoz ak fleksibilite metabolik nan sourit WT, ki refere a kapasite yon òganis pou adapte oksidasyon gaz ak disponiblite gaz [38]. Enteresan, pandan ke kapasite mitokondriyo oksidatif andikape ak oksidasyon substrate ki gen rapò yo te asosye ak rezistans ensilin 39, fòmasyon fè egzèsis andirans ogmante kontni mitokondriyo, sansiblite ensilin, ak fleksibilite metabolik [38]. Se poutèt sa, rezilta prezan yo espesifik nan sipleman CF epi yo pa enfliyanse pa aktivite espontane.

Efè pozitif CF sou fleksibilite metabolik, osi byen ke ogmantasyon nan aktivite konplèks mitokondriyo, te bouche nan Sirt3-7sourit, ki endike ke efè pozitif CF yo rive omwen pasyèlman nan Sirt3. Rezilta sa yo sipòte rezilta anvan yo ak wòl prensipal Sirt3 sou règleman fleksibilite metabolik [24]. Rezilta nou yo sijere ke yon ogmantasyon nan fonksyon mitokondriyo ka amelyore fleksibilite metabolik. Sepandan, san konte fonksyon mitokondriyo, kosyan respiratwa fondamantal la, to jete glikoz, kapasite depo lipid tisi adipoz, ak konsantrasyon asid gra san plasma yo te idantifye tou kòm faktè detèminan fleksibilite metabolik epi yo ta dwe konsidere [40]. Etid nan lavni yo ta dwe evalye detèminan selilè fleksibilite metabolik yo pi pwofondman pou apwofondi konpreyansyon nou sou kòz ki kache nan amelyorasyon fleksibilite metabolik apre sipleman CF.

Evalyasyon metabolis tout kò a revele yon ogmantasyon nan oksidasyon CHO relatif apre sipleman CF. Rezilta sa a diferansye ak yon etid anvan ki te rapòte yon ogmantasyon nan lipoliz apre yon enjèstyon egi flavanol oswa yon sipleman de semèn ak flavan-3-ol nan sourit [36]. Anplis diferans ki genyen nan konpozisyon ekstrè, sa yo konklizyon kontradiktwa ka soti nan efè yo pleyotropic nan NO. Li byen aksepte ke CF enjèstyon stimul pwodiksyon an oswa byodisponibilite nan NO metabolis [7]. Sou yon bò, NO stimul transpò glikoz ak absorption nan misk skelèt. Ensilin oswa oksijene idwojèn eksitasyon pwodiksyon NO nan myotub selil ki sòti nan liy selil yo te lakòz yon ogmantasyon nan translokasyon GLUT4, ki te redwi ak anpèchman nNOS [41]. Anplis, NO ka ogmante transpò glikoz nan yon chemen endepandan ensilin ki mennen nan yon ogmantasyon nan nivo GMP siklik ak AMPK [42], ki ankouraje oksidasyon glikoz nan misk skelèt rat endepandan de disponiblite asid gra ak oksidasyon [43]. Nan lòt bò a, NO ankouraje oksidasyon asid gra pa diminye nivo malonyl-CoA atravè anpèchman acetyl-CoA carboxylase ak aktivasyon malonyl-CoA decarboxylase nan misk skelèt [44]. Pandan ke nou te obsève yon chanjman nan direksyon pou yon pwopòsyon relatif ki pi ba yo sèvi ak asid gra kòm substra ak CF, pa te gen okenn diferans konsènan valè yo absoli eksprime nan kJ. Sa a sijere ke ogmantasyon nan depans enèji obsève ak sipleman CF depann sou yon ogmantasyon nan oksidasyon glikoz. Se poutèt sa, rezilta sa yo sipòte lide ke konsomasyon CF ogmante sansiblite ensilin ak ankouraje oksidasyon glikoz san yon efè koncomitan sou kapasite oksidasyon asid gra. Rezilta sa yo poze kesyon sou enpòtans pou itilize flavanol kakawo nan yon kontèks rejim alimantè ki gen anpil grès. Etid nan lavni ta dwe evalye yon posib efè danjere nan yon asosyasyon nan sipleman CF ak yon rejim alimantè ki gen anpil grès.

4.2.Fonksyon mitokondriyo

Yo te montre administrasyon dyetetik flavanol kakawo amelyore fonksyon mitokondriyo, ki gen ladan (i) respirasyon mitokondriyo ak aktivite anzim chèn transpò elèktron; (i) lage mitokondriyo H2O2, ki reflete pwodiksyon espès oksijèn reyaktif mitokondriyo (ROS); ak (i) mitokondriyo kapasite retansyon kalsyòm ki reflete sansibilite nan mitokondriyo pèmeyabilite tranzisyon pò (mPTP) ouvèti (pou revizyon gade [11]. Rezilta nou yo an akò ak etid anvan yo; kanmenm, etid nou an te premye a evalye efè a nan CF sipleman sou fonksyon mitokondriyo evalye in situ nan fib pèmeabilize ak nan diferan kalite misk Kontrèman ak syans anvan yo sou mitokondri izole, evalyasyon an nan fonksyon mitokondriyo nan fib pèmeabilize prezève mòfoloji mitokondriyo, entèraksyon fonksyonèl ak lòt konpozan intraselilè [1] epi evite estrikti mitokondriyo. dezòd pandan pwosesis izòlman mitokondriyo a [32].Se poutèt sa, li enpòtan pou etidye fonksyon mitokondriyo nan preparasyon tisi kote estrikti mitokondriyo a konsève, ak tout pisin mitokondriyo a reprezante pi byen evalye repons lan nan tretman an.

Etid anvan yo te fè nan kilti selilè oswa in vivo nan sourit yo te montre ke sipleman ak EPI, ki konsidere kòm prensipal molekil byoaktif nan CF, ogmante maksimòm respirasyon ADP-stimile (egzanp, respirasyon eta 3) lè mitokondri yo kouran ak yon konbinezon enèji. substrats ki bay manje divès sit sou chèn respiratwa a [45-49]. Konfòm ak rezilta sa yo, nou obsève yon efè prensipal sipleman CF sou respirasyon mitokondriyo nan misk oksidatif ak glikolitik. Pou detèmine si ogmantasyon sa a gen rapò ak yon ogmantasyon mas mitokondriyo oswa renovasyon nan konplèks respiratwa mitokondriyo, nou evalye supercomplexes mitokondriyo nan misk kwadrisèps la. Yo panse estrikti supramolekilè sa yo diminye pwodiksyon ROS, estabilize oswa ede nan asanble konplèks endividyèl yo, kontwole aktivite chèn respiratwa, epi anpeche agregasyon pwoteyin nan manbràn mitokondriyo enteryè ki rich nan pwoteyin [50-52]. Malgre yon kantite limite mezi, analiz vizyèl rezilta yo (Materyèl Siplemantè) sijere ke sipleman CF pwovoke yon ogmantasyon nan mas mitokondriyo, jan yo reflete pa yon ogmantasyon nan tout espès supercomplex, olye ke reòganizasyon espesifik chèn respiratwa konplèks. Kolektivman, rezilta sa yo sijere ke CF ankouraje yon ogmantasyon mas mitokondriyo san adaptasyon kalitatif nan aranjman konplèks chèn respiratwa.

Pandan respirasyon mitokondriyo, kantite varyab superoksid yo fòme epi yo ka metabolize pou fòme lòt kalite ROS [53]. Malgre ke twòp pwodiksyon ROS soti nan mitokondri yo enplike nan yon gwo spectre nan patoloji, konsantrasyon fizyolojik ki ba nan ROS ka gen efè benefisye, tankou pwoteje kont ajan enfektye ak patisipe nan siyal selilè [2,54]. Etid anvan yo te fè nan vivo nan rat ak moun ak modèl kilti selil rapòte efè sipleman CF benefisye sou pwodiksyon ROS ak divès sistèm antioksidan [11]. Pou egzanp, gavaj oral ak EPI pandan 15 jou ogmante aktivite SOD2 ak katalaz nan misk kwadrisèps sourit [17]. Pandan ke pwodiksyon mitokondriyo ROS pa te evalye lajman, nou obsève ke nivo pwodiksyon ROS yo te menm jan an lè valè yo te eksprime pou chak pwa nan misk, tandiske pwodiksyon an te bese lè eksprime pou chak mas mitokondriyo, sijere ke adaptasyon kalitatif rive kenbe konsantrasyon fizyolojik yo nan ROS. Anplis, nou pa t 'obsève okenn efè CF sou SOD2 ni domaj ROS-induit evalye pa karbonylation pwoteyin. Pandan ke CF amelyore pisin pwoteyin antioksidan, ki gen ladan yo lajman rapòte SOD2 ak nivo katalaz [16,17,55], adaptasyon sa a pa te toujou asosye ak yon diminisyon nan domaj ROS-induit [56-59]. Done sa yo sipòte teyori ke nivo ki ba nan pwodiksyon ROS yo nesesè pou omeyostazi selil nòmal [2]. Ansanm, rezilta sa yo sijere ke, ansanm ak yon ogmantasyon nan mas mitokondriyo, CF ankouraje adaptasyon kalitatif mitokondriyo amelyore kapasite antioksidan li yo epi kenbe nivo ki ba nan pwodiksyon ROS.

4.3.Byogenesis mitokondriyo

Mas mitokondriyo se rezilta entèaksyon ant byogenesis mitokondriyo ak mitofaji. Etid nou an konsantre sou byogenesis mitokondriyo aktive pa konsomasyon polifenol [60]. Mitokondriyo byogenesis se pwosesis selilè ki amelyore mas mitokondriyo. Pwosesis konplèks ak trè reglemante sa a enplike plizyè faktè transkripsyon, reseptè òmòn nikleyè, ak koaktivatè transkripsyon ki aji kolektivman pou kowòdone chanjman nan ekspresyon jèn kode ADN nikleyè ak mitokondriyo [61]. Etid anvan yo te eseye idantifye ki chemen (yo) ki ka anba CF sipleman mitokondriyo pwovoke byogenesis. Stimulasyon siyal NO-depandan parèt kòm yon chemen santral ki enplike nan byogenesis mitokondriyo. Sipleman CF amelyore jenerasyon NO pa anpeche arginine degrade anzim arginase, ki ogmante disponiblite L-arginine pou NO byosentèz [62,63]. Anplis, lè l sèvi avèk yon inibitè eNOS, efè stimulation epicatechin sou byogenesis mitokondriyo yo te pasyèlman blunted [17]. Rezilta sa yo sijere patisipasyon lòt chemen siyal pou ankouraje byogenesis mitokondriyo.

Dènyèman, Aragones et al. (2016) rapòte ke proanthocyanidins dyetetik, manm nan fanmi an polifenol, ranfòse epatik NAD plis metabolis pa amelyore de kounye a o NAD plis chemen biosentèz ak aktivite Sirte nan yon fason ki depann de dòz nan rat [12]. Anplis de sa, fwa a ekspòte précurseurs NADt nan lòt ògàn, tankou misk skelèt, ki gen yon kapasite pi ba pou sentèz NAD, ogmante posiblite pou pwolonje efè yo obsève nan fwa a nan tout òganis la [64]. Pandan ke kèk etid rapòte yon efè nan CF sipleman sou kontni Sirt1 pwoteyin, aktivite, oswa mRNA [12,15-17,65,66], patisipasyon nan metabolis NAD nan byogenesis mitokondriyo apre CF siplemantè lè l sèvi avèk pèt oswa genyen nan. fonksyon pa janm te teste. Pandan ke yon misk-espesifik knock-out ta pi preferab sou tout-kò Sirt3 KO sourit yo itilize nan etid nou an, rezilta nou yo sijere ke CF amelyore metabolis NAD, ak Sirt3 patisipe nan amelyorasyon aktivite chèn transpò elèktron mitokondriyo ki pwovoke sipleman sa a. Efè pozitif yo obsève sou aktivite konplèks mitokondriyo apre sipleman CF yo pa te obsève lè l sèvi avèk sourit Sirt3-7, epi yo te obsève yon pi gwo aktivite nan aktivite konplèks I ak IV apre sipleman CF sèlman nan WT. Obsèvasyon sa yo pwolonje travay anvan yo montre ke Sirt3 jwe yon wòl esansyèl nan fonksyon mitokondriyo ]67. Ansanm, rezilta sa yo sijere ke sirtuin yo, atravè modulasyon metabolis NAD, yo patisipe nan amelyorasyon mas mitokondriyo yo obsève apre sipleman CF. 4.4.Limit

Pwa kakawo yo konpoze de yon melanj de flavanol monomerik, oligomerik ak polymère. Pami flavanol yo, EPI parèt kòm monomè polifenol ki pi abondan yo te jwenn nan pwodwi kakawo, ki reprezante jiska 35 pousan nan kontni an polifenol [68]. EPI te etabli kòm prensipal molekil byoaktif ki kache ki asosye ak sipleman kakawo ak chokola [47,69]. Sepandan, metabolit EPI (EPIm) ka patisipe nan efè byolojik EPI-induit yo obsève nan etid vivo. EPIm ka rive jwenn pi gwo konsantrasyon plasma pase EPI[70]. Anplis, gwo diferans nan EPIm yo te obsève atravè espès yo. Vreman vre, 80 pousan nan EPIm prezan nan imen pa te detekte nan rat, pandan y ap resanblans ki genyen ant sourit ak moun yo te jwenn yon ti kras pi favorab kòm de metabolit yo pi gwo imen yo te detekte [70]. Nou te itilize ekstrè CF anrichi ki gen jiska senk fwa plis EPI pase pwa kakawo san fèrmante[71]. Anplis, kontni EPI te redwi pa 10-20 pousan pa fèmantasyon ak diminye nan yon fason ki depann de tanperati pandan torréfaction [71,72]. Ansanm, done sa yo sijere ke yo ta dwe peye atansyon sèlman sou kontni an EPI lè yo evalye benefis ki genyen nan sipleman EPI sou sante moun, ak rezilta prezan yo ta dwe konsidere ak prekosyon anvan èkstrapolasyon yo obsève mekanis kache nan imen.

5. Konklizyon

Sipleman CF chak jou pou 15 jou mennen nan amelyorasyon fonksyon mitokondriyo nan misk oksidatif ak glikolitik. Rezilta prezan yo sijere ke ogmante respirasyon mitokondriyo a lakòz yon ogmantasyon nan mas mitokondriyo pandan y ap kenbe nivo selilè pwodiksyon ROS, sa ki sijere adaptasyon kalitatif nan mitokondri yo. Paralèlman ak efè selilè sou NO metabolis ki dekri deja [73], CF modil metabolis NAD, ki stimul aktivite sirtuins. Sirt3 jwe yon wòl santral nan adaptasyon mitokondriyo ak fleksibilite metabolik apre sipleman CF. Kòm sirtuin yo se sib ki sot pase nan divès maladi patojèn, tankou dyabèt oswa opresyon [74,75l, plis etid yo pral eksplore enterè potansyèl pou itilize CF kòm yon activator natirèl nan sirtuin.

Referans

1. Kuznetsov, AV; Veksler, V.; Gellerich, FN; Saks, V.; Margreiter, R.; Kunz, WS Analiz fonksyon mitokondriyo in situ nan fib misk pèmeabilize, tisi, ak selil yo. Nat. Pwotok. 2008, 3, 965–976. [CrossRef]

2. Sena, LA; Chandel, NS Wòl fizyolojik nan espès mitokondriyo reyaktif oksijèn. Mol. Cell 2012, 48, 158–167. [CrossRef]

3. Wacquier, B.; Combettes, L.; Van Nhieu, GT; Dupont, G. Entèaksyon ant entraselilè Ca2 plis osilasyon ak Ca2 plis -stimulé metabolis mitokondriyo. Sci. Rep 2016, 6, srep19316. [CrossRef]

4. Suomalainen-Wartiovaara, A.; Battersby, BJ Maladi mitokondriyo: kontribisyon repons estrès òganèl nan patoloji. Nat. Rev Mol. Selil Biol. 2018, 19, 77–92. [CrossRef]

5. Heyman, E.; Daussin, F.; Wieczorek, V.; Caiazzo, R.; Matran, R.; Berthon, P.; Aucouturier, J.; Berthoin, S.; Descatoire, A.; LeClair, E.; et al. Pwovizyon ak itilizasyon oksijèn nan misk nan dyabèt tip 1, soti nan lè anbyen rive nan chèn respiratwa mitokondriyo a: Èske gen yon etap limite? Swen Dyabèt 2020, 43, 209–218. [CrossRef]

6. Daussin, FN; Boulanger, E.; Lancel, S. Soti nan mitokondri nan sarkopeni: Wòl nan enflamasyon ak RAGE-ligand enplikasyon aks. Eksp. Gerontol. 2021, 146, 111247. [CrossRef] [PubMed]

7. Katz, DL; Doughty, K.; Ali, A. Cocoa, ak Chokola nan Sante Moun ak Maladi. Antioksid. Redox siyal. 2011, 15, 2779–2811. [CrossRef] 8. Grassi, D.; Lippi, C.; Necozione, S.; Desideri, G.; Ferri, C. Kout tèm administrasyon chokola nwa swiv pa yon ogmantasyon siyifikatif nan sansiblite ensilin ak yon diminisyon nan san presyon nan moun ki an sante. Am. J. Clin. Noutr. 2005, 81, 611–614. [CrossRef] [PubMed]

9. Grassi, D.; Desideri, G.; Necozione, S.; Lippi, C.; Casale, R.; Properzi, G.; Blumberg, JB; Ferri, C. Tansyon redwi ak sansiblite ensilin ogmante nan sijè ki pa tolere glikoz ak ipètansif apre 15 jou konsome chokola nwa ki gen anpil polifenol. J. Nutr. 2008, 138, 1671–1676. [CrossRef]

10. Ottaviani, JI; Manman, TY; Heiss, C.; Kwik-Uribe, C.; Schroeter, H.; Keen, CL Konfigirasyon estereochimik nan flavanols enfliyanse nivo ak metabolis flavanols nan imen ak aktivite byolojik yo nan vivo. Radik gratis. Biol. Med. 2011, 50, 237–244. [CrossRef] [PubMed]