Efè Pwoteksyon Quercetin sou selil andotelyo ki blese pa ipoksi ak reoksijenasyon

Pou plis enfòmasyon kontaktetina.xiang@wecistanche.com

Background: Maladi ti veso serebral (CSVD) se yon gwoup sendwòm klinik ki kouvri tout pwosesis patolojik nan ti veso nan sèvo a, ki ka lakòz konjesyon serebral ak demans grav. Sepandan, kòm patojèn nan CSVD pa klè, se konsa tretman an limite. Malfonksyònman selil andothelial yo pi bonè pase sentòm klinik yo, tankou tansyon wo ak lekoz. Se poutèt sa, tretman an nan selil andothelial espere yo dwe yon nouvo zouti.Quercetin, yon flavonoid prezan nan yon varyete plant, gen fonksyon an nan anti-enflamasyon ak anti-oksidasyon. Etid sa a te vize pou mennen ankèt sou efè pwoteksyon quercetin sou blesi selil andothelial epi bay yon teyori debaz pou aplikasyon ki vin apre nan klinik la.

Metòd: Selil endothelial mikwovaskilè imen nan sèvo (HBMECs) yo te kiltive nan vitro, ak modèl la aksidan nan selil endothelial te etabli pa ipoksi ak reoxygenation (H/R). Efè pwoteksyon quercetin sou HBMEC yo te etidye nan pèspektiv viabilite selil, migrasyon selil, anjojenèz, ak apoptoz. Yo nan lòd yo plis etidye mekanis nan quercetin,estrès oksidatifak estrès retikul andoplasmik yo te analize. Anplis de sa, yo te etidye entegrite san-sèvo baryè (BBB).

Rezilta yo: Quercetinka ankouraje viabilite, migrasyon, ak anjyogenesis HBMECs, epi anpeche apoptoz. Anplis de sa, quercetin kapab tou aktive chemen an siyal Keap1 / Nrf2, redwi ekspresyon pwoteyin ATF6 / GRP78. Plis etid te montre kercetin te kapab ogmante ekspresyon Claudin-5 ak Zonula occludens-1.

Konklizyon: Eksperyans nou yo montre ke quercetin ka pwoteje HBMECs soti nan H/R, ki gen pwomosyon pwopagasyon selil, migrasyon selil, ak anjyogenesis, diminye domaj potansyèl manbràn mitokondriyo ak anpeche apoptoz selil. Sa a ka gen rapò ak antioksidasyon li yo ak anpèchman nan estrès retikul andoplasmik. An menm tan an, quercetin ka ogmante nivo BBB connexin, sijere ke quercetin ka kenbe entegrite BBB.

Mo kle: maladi ti veso serebral, selil endothelial, quercetin, estrès oksidatif, estrès retikul endoplasmik, baryè san-sèvo.

ENTWODIKSYON

Maladi ti veso serebral(CSVD) se yon tèm parapli ki anglobe tout pwosesis patolojik ki enplike ti veso yo nan sèvo a epi li refere a yon gwoup sendwòm klinik, imaj, ak pathologie ki gen plizyè etyoloji ki gen arteriol entrakranyen rive nan venul (dyamèt).<400 μm）（wardlaw="" et="" al,2013;="" wardlaw="" et="" al,2019).="" the="" most="" common="" symptoms="" include="" mainly="" new-onset="" subcortical="" small="" infarcts,="" lacunar="" foci="" of="" vascular="" origin,="" cerebral="" white="" matter="" hyperintensities,="" microbleeds,="" cerebral="" atrophy,="" and="" enlarged="" perivascular="" spaces="" (wardlaw="" et="" al,2013).="" with="" the="" progression="" of="" the="" disease,="" subclinical="" and="" early-stage="" patients="" can="" have="" emotional="" abnormalities,="" gait,="" memory,="" disorientation,="" and="" even="" stroke="" and="" dementia="" and="" other="" serious="" consequences.="" up="" to="" 25%="" of="" stroke="" and="" 45%="" of="" dementia="" are="" caused="" by="" csvd(cannistraro="" et="" al,2019),="" which="" brings="" a="" heavy="" socioeconomic="" burden="" and="" is="" a="" major="" problem="" that="" needs="" to="" be="" addressed="" by="" slow="" disease="" and="" health="" strategies.="" scholar="" has="" used="" dynamic="" contrast="" enhanced-mri="" technique="" to="" find="" that="" blood-brain="" barrier(bbb)leakage="" is="" more="" prevalent="" in="" csvd="" patients(zhang="" et="" al,2017).="" extravasation="" of="" blood="" components="" may="" lead="" to="" local="" vascular="" changes="" and="" diffuse="" brain="" tissue="" damage.="" the="" bbb="" is="" a="" junction="" of="" endothelial="" cells,="" pericytes,="" and="" astrocyte="" tight="" junctions(keaney="" and="" campbell,="" 2015).in="" addition,="" more="" and="" more="" scholars="" also="" believe="" that="" endothelial="" dysfunction="" plays="" a="" key="" role="" in="" the="" early="" development="" of="" csvd="" (hainsworth="" et="" al,2015).="" therefore,="" protecting="" endothelial="" cells="" may="" be="" a="" potential="" therapeutic="" strategy="" for="">

Quercetinse yon flavonoid prezan nan plizyè plant, tankou Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc gen gwo antioksidan ak aktivite anti-enflamatwa epi li ka egzèse efè pwoteksyon nan divès kondisyon patolojik tankou maladi kadyovaskilè, maladi metabolik, maladi neurodegenerative, dyabèt, kansè, ak obezite (Dok-Go et al, 2003; Comalada et al, 2005; Cho et al, 2006). Pretretman ak quercetin siyifikativman ogmante nivo ekspresyon nan anzim antioksidan andojèn nan newòn piramidal ipokanp CA1 nan bèt ischemi ki blese, ki montre gwo efè antioksidan ak neropwotektif (Chen et al, 2017). Dènye etid yo te jwenn tou ke quercetin gen efè neropwotektif kont aksidan ischemik pandan y ap kenbe entegrite BBB (Jin et al, 2019). Sepandan, efè li sou sèvo selil endothelial mikwovaskilè (BMECs) anba ipoksi ak reoxygenation (H/R) aksidan mal etidye, ak pwoteyin sib la nan quercetin pwoteje BMECs pa te rapòte.

Nan etid nou an, nou eksplore efè pwoteksyon quercetin sou selil endothelial mikwovaskilè imen (HBMECs) blese pa H/R nan kilti. An menm tan an, nou plis etidye mekanis posib nan efè pwoteksyon li yo, konsa tankou bay yon baz plis teyorik pou pwomosyon klinik la nan quercetin epi bay nouvo lide pou tretman CSVD.

MATERYÈL AK METÒD

Medya, reyaktif, ak antikò

Quercetin(purity>98 pousan) te akeri nan pi bon teknoloji byolojik co, Ltd.(Chengdu, Lachin). HBMEC yo te achte nan men Qingqi Biotechnology Development Co, Ltd (Shanghai, Lachin). Serom fetal bovine (FBS) te jwenn nan Endistri Byolojik (Kibbutz Beit Haemek, Izrayèl). Penicilin/streptomycin ak mwayen malfini modifye Dulbecco (DMEM) yo te achte nan men Hyclone (GA, Etazini). Yo te achte twous tès potansyèl manbràn mitokondriyo (JC-1), twous tès pwoteyin BCA, 2,7-dichloride-hydro fluorescein diacetate (DCFH-DA), ak NP40 lysate nan men Beyotime Biotechnology (Shanghai, Lachin). Yo te achte preparasyon fosfataz ak inibitè proteaz konplè nan Roche (Shanghai, Lachin). Apoptosis Kit te achte nan men BD Biosciences (Sparks, MD, Etazini). Malondialdehyde (MDA), superoksid dismutase (SOD), molekil adezyon selil entèselilè-1 (ICAM-1), molekil adezyon selil vaskilè-1 (VCAM{{10}} )enzyme-lyed immunosorbent assay (ELISA) te (Cambridge, Abcam achte konpayi dfrom1"一Wayòm Ini). Antikò kont faktè nikleyè E2-faktè ki gen rapò 2(Nrf2), Kelch Like ECH Associated Protein 1 (Keap1), Aktive transkripsyon faktè 6(ATF6), pwoteyin glikoz reglemante 78(GRP78), Zonula occludens 1 (ZO-1), Claudin-5, GAPDH te achte nan men Cell Signaling Technology (Danvers, Etazini). Yo te jwenn IgG anti-lapen ki konjige peroksidaz refor (HRP) nan konpayi Jackson (Pennsylvania, Etazini). Yo te achte twous rapid SDS-PAGE ak solisyon chromogenic ECL nan EpiZyme Biotechnology (Shanghai, Lachin). Kilti selilè ak modèl blesi HBMECs yo te kiltive nan DMEM ki gen 10 pousan FBS ak 1 pousan penisilin-streptomycin, nan 37Cincubator ak 5 pousan CO2. Pou lakòz endothel domaj selil yo, HBMEC yo te trete ak 12 h ipoksi ki te swiv pa 8 h reoxygenation, ak pwosedi espesifik yo te jan sa a (Warpsinski et al., 2020): HBMECs yo te premye enkubate ak medyòm nan serom-gratis nan yon enkibatè ipoksi (1 pousan). O,5 pousan CO.94 pousan N) pou 12 h, ak Lè sa a, mwayen an te chanje nan mwayen nòmal ki gen 10 pousan FBS, pandan ke yo te enkubatè nan yon enkibatè normoxia (95 pousan O2,5 pousan CO2) pou 8 h. Tretman Quercetin 2 mg Quercetin te fonn nan 331μL DMSO pou fòme yon solisyon stock ak yon konsantrasyon 1 mmol/L epi estoke nan -20 degre degre. Solisyon k ap travay la te dilye nan 0.1,0.5,1,2,5,10umol/L ak DMEM, nan ki pousantaj DMSO te pi ba pase 0.1 pousan. Yon fwa selil yo te aderan, yo te ajoute quercetin ak mwayen san serom, epi yo te imedyatman mete plak yo nan enkibatè ipoksi a. Apre 12 èdtan, selil yo te retire, chanje nan quercetin ak medyòm serom, epi yo mete yo nan yon enkibatè normoxia pou 8 èdtan.

Selil Viabilite Essay

Efè yo nanquercetinYo te egzamine sou viabilite HBMEC yo pa Twous konte selil-8 dapre manyèl operatè a. Dòz yo san danje nan quercetin nan selil yo nan absans domaj nan selil andothelial yo te premye evalye, ak Lè sa a, efè pwoteksyon li nan kondisyon an nan domaj selil yo te teste. Tout rezilta eksperimantal yo te repete omwen twa fwa.

Gerizon grate ak tès fòmasyon tib Eksperyans migrasyon yo te fèt lè l sèvi avèk yon metòd grate selil. Anvan tretman quercetin, yo te trase yon liy dwat pèpandikilè nan pati anba a nan plak kilti a ak foto pou anrejistreman pou 0 h, epi selil yo te sibi tretman quercetin ak modèl anvan yo pran foto pou anrejistreman. Zòn anteryè ak dèyè yo te contraste de fwa.

Fòmasyon tib imite kapasite selil anjyojenik, yo te mete Matrigel ({0}}mg/ml) sou pati anba a nan plak kilti a, Lè sa a, quercetin ak modèl selil trete yo te plake sou tèt, apre 8 èdtan, foto yo te pran. Yo te analize jenerasyon an branch nan veso sangen ak konpare lè l sèvi avèk ImageJ.

Potansyèl manbràn mitokondriyo ak tès apoptoz

Chanjman potansyèl manbràn mitokondriyo a ak twous apoptoz yo te itilize pou detekte apoptoz selil. Chanjman potansyèl manbràn mitokondriyo yo te detekte lè yo tache HBMEC yo ak JC-1 sond fliyoresan. JC-1(1×) solisyon travay tach te ajoute ak enkube nan yon Cincubator 37 degre pou 20 minit anvan yo te lave de fwa ak JC-1 (1 ×) tanpon tach epi finalman ajoute nan chak pi pou PBS. . Lè sa a, yo te itilize imaj selil kontni segondè pou analiz.

HBMECs yo te ranmase nan 6-plak yo byen, santrifuje yo retire supernatant la, answit ajoute 1 × solisyon annexin V obligatwa soufle ak melanje selil yo, Lè sa a, ajoute lank FITC Annexin V nan enkubasyon nan fè nwa a nan tanperati chanm pou 10. min, ajoute propidium iodide (PI) tach solisyon 5 min anvan machin nan, epi Beckman koule cytometer te anplwaye pou detekte.

ELISA

Apre selil yo te trete ak H/R oswa quercetin, yo te kolekte supernatant la. ICAM-1, VCAM-1, SOD, ak MDA te detekte lè l sèvi avèk twous ELSA dapre manyèl operatè a.

Espès oksijèn reyaktif (ROS) Esay Yo te detekte kapasite jenerasyon ROS pa pwofonde DCFH-DA a, ki te evalye pa imajè selil kontni segondè, epi analize pa fliyoresans lè l sèvi avèk ImageJ. Western Blotting

HBMECs yo te kolekte nan plak kilti, NP40 lysate ajoute preparasyon fosfataz ak inibitè proteaz konplè yo te itilize ekstrè pwoteyin nan selil yo. Kontni pwoteyin yo te detèmine epi yo te pran 30ug pwoteyin pou eksperyans imunoblotting. Yo te itilize jèl SDS-PAGE pou elektwoforèz, bloke ak 5 pousan lèt sèk san grès apre elektwotransfè nan manbràn PVDF pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Lè sa a, anti-Nrf2 (lapen, 1:1, 000), anti-Keapl (lapen, 1:1,000), anti-ATF6 (lapen, 1:1,000 ), anti-GRP78(lapen,1:1,000), anti-ZO-1(lapen,1:1,000), anti-Claudin-5( lapen,1:1,000) antikò yo te enkube lannwit lan nan 4C. Apre lave jou kap vini an, yo te ajoute antikò segondè Goat anti-lapen dilye (IgG HRP, 1:10, 000) epi yo te enkube pou 1 èdtan. Finalman, deteksyon an te devlope apre lave twa fwa nan TBST.

Analiz pwoteomik

HBMEC yo te trete ak H / R nan prezans quercetin (l umol / L). Imedyatman, selil yo te dousman grate nan plak kilti a ak yon grate selil, kolekte nan kriyovial, byen vit mete yo nan nitwojèn likid, ak Lè sa a, estoke nan -80 degre pou 5 minit teknoloji iTRAQ te itilize fè analiz la pwoteomik, la. pwoteyin ki gen valè p<0.05 and="" ratio="" multiple="" changes="">1.2 oswa<0.83 were="" defined="" as="" differentially="" expressed="">

Analiz estatistik

Done yo te anfòm ak distribisyon nòmal, epi yo te itilize mwayen ± devyasyon estanda pou eksprime done yo. GraphPad Prism 8 te itilize pou analiz estatistik. De echantiyon endepandan yo te analize pa t-tès, ak done yo mezi yo te dekri pa vle di ± Devyasyon estanda (SD). Konparezon ant gwoup yo te fèt pa yon sèl-fason analiz de divèjans (ANOVA). p-valè<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

REZILTA

Rezilta yo

Efè Quercetin sou viabilite selil

Pou teste efè quercetin sou viabilite selil yo, nou premye egzamine yon dòz san danje nan quercetin sou selil yo, jan yo montre nan Figi 1A, ki pa te gen okenn enpak sou viabilite selil nan 0.1-10 umol/L . Apre sa, pou chèche yon dòz efikas sou baz domaj selil andothelial, nou te montre kercetin nan 0.1-1 μmol/L te kapab ankouraje viabilite selil nan H/R-HBMECs, jan yo montre nan Figi. 1B. Eksperyans ki vin apre yo te fèt alantou ranje konsantrasyon sa a. Li se vo anyen ke lè konsantrasyon dwòg la rive nan 10 μmol / L, sitotoksisite parèt. Nou te panse ke lè HBMEC yo te domaje pa H/R, tolerans yo diminye. Se poutèt sa, lè konsantrasyon dwòg la te yon ti kras pi wo, domaj nan selil yo ogmante. Se poutèt sa, sitotoksisite rive lè konsantrasyon dwòg la se 10 μmol / L.

Efè Quercetin sou Migrasyon Selil ak Angiogenesis

Pou egzamine efè quercetin sou kapasite migratè ak anjyojenik selil endothelial yo, HBMEC yo te sibi tretman H/R pandan y ap kercetin yo te administre. Nou te fè yon tès grafouyen pou teste kapasite migrasyon selilè a, ki te montre ke tretman H/R febli kapasite migrasyon H/R-HBMEC yo konpare ak kontwòl la, epi quercetin te kapab siyifikativman ankouraje migrasyon selilè nan yon konsantrasyon 0 .1-1 μmol/L. Tubulogenesis te itilize pou imite anjyogenesis vitro, ak longè branch li yo reprezante kapasite angiogenic. Rezilta yo te montre ke tretman H/R te lakòz diminye kapasite anjyojenik, men quercetin 0.1-1 μmol/L te kapab ranvèse blesi sa a, jan yo montre nan Figi 2.

Efè Quercetin sou apoptoz selilè

Pou teste potansyèl quercetin pou anpeche apoptoz selil andotelyal, nou te itilize potansyèl manbràn mitokondriyo ak apoptoz pou evalyasyon. Lè selil yo te blese sibi evènman apoptotik, potansyèl manbràn mitokondriyo a te redwi, fluoresans wouj sitoplasmik te siyifikativman redwi, fliyoresans vèt te ogmante, ak wouj / vèt (R / G) te finalman adopte pou reprezante chanjman nan potansyèl manbràn mitokondriyo, ki ap diminye lè potansyèl manbràn mitokondriyo a konpwomèt. Rezilta nou yo te montre ke apre tretman H/R, potansyèl manbràn mitokondriyo selil yo diminye, jan sa endike nan ogmante fliyoresans vèt. Avèk ogmante dòz quercetin, fliyoresans wouj te toujou ap amelyore, sa ki endike ke quercetin ka elve potansyèl manbràn mitokondriyo depandans de dòz la (Figi 3A, C). Pli lwen, sitometri Flow te anplwaye pou egzamine dirèkteman apoptoz selil. Rezilta yo te montre ke HBMEC yo te montre yon pousantaj apoptoz ki wo apre tretman H/R, tandiske quercetin nan 0.1-1 umol/L te montre yon kapasite klè pou anpeche apoptoz (Figi 3B, D).

Efè Quercetin sou Adhesion selil

Yon fwa ke selil andothelial yo domaje, gen kèk molekil adezyon, tankou ICAM{{0}} ak VCAM{-1 yo pwodui, yo absòbe sibstans toksik nan BBB a, epi yo domaje parenchyma nan sèvo (Hauptmann et al, 2020). ).Pou egzamine efè quercetin sou kapasite H/R-HBMEC yo pou pwodwi molekil adezyon, yo te mezire ICAM-1 ak VCAM-1 lè l sèvi avèk ELISA. Nan etid nou an, H/R te lakòz ogmante nivo ICAM-1 ak VCAM-1, men adisyon nan quercetin anba konsantrasyon 0.1-1 umol/L diminye efè sa a (Figi 4).

Quercetin ta ka anpeche estrès oksidatif

Quercetin se yon flavonoid ki gen kapasite antioksidan fò, kidonk nou te anplwaye yon pwofonde DCFH-DA pou detekte ROS. Nou te obsève

ogmante jenerasyon ROS nan HBMEC yo ekspoze a H/R, ki te siyifikativman redwi pa tretman quercetin nan konsantrasyon yo nan {{0}}.1-1 umol/L Pandan se tan, nou detekte chanjman nan nivo estrès oksidatif. pwodwi SOD ak MDA ak ELISA, ak rezilta yo te montre kercetin nan konsantrasyon nan 0.1-1 μmol / L te kapab diminye SOD ak MDA, ki te elve pa H / R, konsa endike ke quercetin te kapab redwi a. domaj nan HBMECs soti nan estrès oksidatif (Figi 5).

Quercetin ta ka kontwole Keap1/Nrf2 ak ATF6/GRP78 Pwoteyin

Pou plis eksplore mekanis pwoteksyon quercetin sou HBMECs, nou analize nivo ekspresyon yoestrès oksidatifak pwoteyin retikul endoplasmik ki gen rapò ak estrès. Keap1/Nrf2 konnen pou kontwole repons antioksidan nan vivo. Blesi estrès oksidatif fòse selil andotelyo yo sibi yon repons estrès, sa ki lakòz ogmante nivo Keapl/Nrf2 (Warpsinski et al, 2020). Nan etid la prezan, H/R te lakòz deklanchman mekanis repons selilè antioksidan ak ogmante nivo Keapl ak Nrf2, ki ta ka vin pi plis ranfòse pa quercetin nan 0.5-1 umol/L pou amelyore kapasite antioksidan HBMECs. .ATF6/GRP78 se youn nan chemen ki kontwole omeyostazi endoplasmic reticulum(ER). Estrès ER ka agrave blesi selil andothelial (Nie et al, 2020).Nan etid nou an, estrès ER te aktive pa H / R, ak nivo ATF6 ak GRP78 yo te ogmante. Quercetin nan l umol / L te kapab siyifikativman diminye nivo pwoteyin tou de, anpeche estrès ER, ak pwoteje HBMECs kont aksidan H / R (Figi 6).

Quercetin ta ka kenbe entegrite BBB

BMEC yo se kolòn vètebral estrikti BBB, ak lanmò yo oswa apoptoz apre aksidan H/R afekte entegrite ak fonksyonalite BBB (Ding et al, 2019). Nan papye sa a, fonksyon selil endothelial yo te reflete pa deteksyon chanjman nan ekspresyon an. nan pwoteyin ki asosye ak BBB ZO-1 ak Claudin-5. Konpare ak gwoup kontwòl la, ekspresyon ZO-1 ak Claudin-5 te

diminye nan H/R blesi, ki endike ke BBB a te domaje ak domaj sa a ka ranvèse pa quercetin nan konsantrasyon yo nan 0.5-1 μmol/L, ki endike ke quercetin ka kenbe fonksyon an nan selil andothelial. (Figi 7).

Analiz pwoteomik

Pou jwenn pwoteyin ekspresyon diferans (DEP) nan HBMECs blese H/R nan prezans quercetin oswa ou pa, yo te itilize ITRAO pou fè analiz pwoteomik la. Pwoteyin ki montre ap<0.05 and="" a="" ratio="" fold="" change="">1.2 oswa<0.83 were="" defined="" as="" deps.="" in="" our="" study,="" the="" differences="" in="" protein="" among="" the="" control,="" h/r,="" and="" quercetin="" groups="" were="" compared.="" the="" results="" showed="" that="" 172="" proteins="" were="" identified="" as="" deps="" between="" the="" control="" and="" h/r="" groups,="" among="" which="" 94="" were="" upregulated="" and="" 78="" were="" downregulated="" in="" the="" h/r="" group.="" there="" were="" 1,016="" proteins="" identified="" as="" deps="" between="" the="" h/r="" group="" and="" the="" quercetin="" group,="" of="" which="" 553="" were="" up-regulated="" and="" 463="" were="" down-regulated="" in="" the="" quercetin="" group,="" as="" shown="" in="" figure="" 8a.="" between="" control="" vs="" h/r="" and="" h/r="" vs="" quercetin="" group,56="" of="" the="" same="" deps="" were="" shared="" between="" the="" two="" groups.="" the="" expressions="" of="" these="" deps="" were="" analyzed="" by="" hierarchical="" clustering="" as="" shown="" in="" figure="" 8b.="" among="" these="" deps,="" the="" top="" 20="" were="" shown="" in="" table="" among="" these="" 20="" commons,="" insulin="" receptor-related="" protein="" (insrr),="" dual-specificity="" protein="" phosphatase="" 3="" (dusp3),="" annexin="" a2(anxa2),="" hemoglobin="" subunit="" alpha="" (hba1),="" phosphoglycerate="" kinase="" 1="" (pgk1),="" vitronectin="" (vtn),="" glucose-6-phosphate="" isomerase="" (gpi)="" are="" related="" to="" endothelial="">

DISKISYON

CSVD, kòm yon fado medikal ak sosyoekonomik ogmante, te rapidman atire atansyon. Men, etonan, patojèn nan CSVD rete fènwa kounye a, rann pa gen okenn konplo klè pou tretman li yo. Etandone ke etap yo pita nan CSVD ka pwogrese nan rezilta grav tankou konjesyon serebral ak demans, vize blesi yo byen bonè pou tretman ka efektivman retade pwogresyon nan CSVD (Cannistraro et al, 2019). Li te montre ke chanjman yo byen bonè patolojik nan CSVD manti nan malfonksyònman selil endothelial ak dwòg ki estabilize malfonksyònman li yo ka amelyore vilnerabilite nan matyè blan serebral nan blesi CSVD (Rajani et al, 2018). Etandone wòl selil andotelyo yo jwe nan CSVD, nou te deside pou mennen ankèt sou efè pwoteksyon medikaman tradisyonèl Chinwa yo sou selil andotelyo lè l sèvi avèk HBMECs.

Quercetin se yon flavonoid prezan nan yon varyete plant (Nawrot-Hadzik et al, 2019). Li gen gwo antioksidan ak aktivite anti-enflamatwa epi li ka egzèse efè pwoteksyon nan divès kondisyon patolojik. Nan etid sa a, nou te demontre ke quercetin ka amelyore blesi H / R, ak plizyè done eksperimantal konfime konklizyon nou ke quercetin ka ankouraje viabilite selil, migrasyon selil, anjyogenesis, ogmante potansyèl manbràn mitokondriyo ak anpeche apoptoz.

Lè nou konsidere kercetin gen gwo aktivite antioksidan, nou te envestige mekanis ki kercetin pwoteje HBMECs an tèm de antioksidasyon. Nivo ROS ka ogmante siyifikativman pa estrès oksidatif (Wu et al., 2018), ak akimilasyon nan ROS ka lakòz anpil maladi, ki gen ladan maladi kadyovaskilè, malfonksyònman andotelyal ak maladi ki gen rapò ak aje, ak maladi neurodegenerative (Chen et al, 2015; Jakaria et al., 2018; Santos et al., 2018). Anplis, estrès oksidatif rive nan peroksidasyon lipid, ki pwodui MDA, ki pral detwi balans oksidatif antioksidan kò a ak ogmante domaj selil andotelyo (Yang et al, 2021).

Keapl/Nrf2 konsidere kòm wout estrès pwòp tèt ou-anti-oksidatif ki pi enpòtan kounye a, ak aktivasyon nan chemen sa a ka siyifikativman amelyore malfonksyònman selil andotelyal. An patikilye, ROS ede ankouraje deklanchman chemen siyal Nrf2 (Selimoglu-Buet et al, 2017). Nou te demontre ke quercetin ka diminye jenerasyon ROS ak MDA, pandan y ap ogmante ekspresyon pwoteyin Keapl ak Nrf2, sigjere ke quercetin ka diminye blesi selil andotelyo lè yo diminye repons estrès oksidatif atravè aktive chemen siyal Keapl/Nrf2.

Se pa sèlman sa, estrès soutni ER aktive repons pwoteyin ki dewoule ak chanje ekspresyon jèn antioksidan, ki mennen nan apoptoz selil andotelyal (Tang et al, 2019). Anplis, estrès oksidatif ka lakòz tou twoub nan plisman pwoteyin nan ER a, pwovoke estrès ER, ak agrave blesi selil andothelial (Hetz, 2012). Estrès ER ka aktive pa twa chemen sa yo: PKR-tankou ER kinaz (PERK), inositol ki mande anzim 1 (IRE1), ak aktive ATF -6, ki pwoteje selil yo kont estrès ER nan kondisyon omeostatik (Hetz et al. ,2020). Men, lè yo afekte pa ekstèn ekstèn negatif, twa chemen sa yo ta aktive repons estrès ER a epi pwovoke apoptoz selil. Anplis, etid yo te montre ke anpèchman nan repons estrès ER a ka ranvèse H/R-induit disfonksyon selil endothelial (Chen et al, 2020).Nan etid nou an, quercetin te kapab redwi kontni an wo ATF6 / GRP78 ki te koze pa H / R, anpeche. repons estrès retikul endoplasmik la, epi pwoteje selil andotelyo yo.

Kòm yon eleman enpòtan nan BBB a, fonksyon selil andotelyo yo enkli kenbe entegrite yo. Malfonksyònman BBB lakòz flit nan likid, pwoteyin, ak lòt konpozan plasma nan tisi perivaskilè, plis afekte vazodilatasyon serebral ak transpò eleman nitritif (Wardlaw et al, 2019). Lè selil endothelial yo domaje epi entegrite BBB yo pral detwi, kidonk pwoteje selil endothelial yo ka kenbe entegrite BBB.Claudin-5 trè eksprime nan BMECs epi li patisipe nan konstitye zo rèl do chenn junction sere pou kontwole. BBB pèmeyabilite (Yang et al, 2020). Selil endothelial yo ancrage nan sitoskelèt aktin nan echafodaj pwoteyin tankou ZO-1, rann junctions sere ant selil endothelial ki kenbe sere nan BBB a (Zhang et al, 2020). Nan etid nou an, yo te itilize ekspresyon claudin-5 ak ZO-1 pou reprezante entegrite BBB. Rezilta nou yo te montre ke nivo pwoteyin claudin-5 ak ZO-1 yo te diminye nan HBMECs ki te sibi blesi H/R, sa ki endike ke entegrite BBB te deranje, epi quercetin te kapab diminye blesi sa a pa elve claudin{{ 9}} ak nivo pwoteyin ZO 1.

Anplis de sa, pou jwenn objektif potansyèl de quercetin sou HBMEC yo, yo te make i-TRAQ nan selil yo. Apre analiz pwoteomik, yo te envestige 20 pi wo nan pwoteyin komen diferan ki eksprime yo. Pami yo, INSRR, DUSP3,

ANXA2, HBA1, PGK1, VTN, GPI gen rapò ak selil andotelyo. INSRR konsidere kòm yon makè endothelial timè ak ekspresyon li ka ankouraje anjojenèz (Nowak-Sliwinska et al, 2019). Recombinant ANXA2 ka diminye pèmeyabilite andothelial anba eta ipoksik ak enflamatwa aksidan faktè, ki endike ke ANXA2 ka patisipe nan antretyen nan sere selil andotelyal (Li et al, 2019). Nan tach seksyon kòl matris imen, yo te jwenn ekspresyon fò nan DUSP3 nan selil andotelyal, ak eksperyans tou demontre ke DUSP3 nesesè pou kwasans mikwovaskilè debaz faktè fibroblast pwovoke (Amand et al. 2014). Yo te montre ekspresyon HBal nan selil andotelyal yo kontwole ton ak fonksyon vaskilè (Sangwung et al., 2017). PGK1 te panse tou diminye atherogenesis (Zhang et al, 2020). Anplis de sa, VTN konsidere kòm kritik pou fòmasyon tronbis nan anviwònman blesi vaskilè (Bowley et al, 2017). GPI anrichi nan selil endothelial mikwovaskilè nan tisi sinovyal ki soti nan pasyan atrit rimatoyid anba anviwònman ipoksik epi li kontwole sekresyon faktè kwasans andotelyal vaskilè ki soti nan fibroblast sinovyal atrit rimatoyid pou pwovoke anjojenèz (Lu et al, 2017). Anplis de sa, etid la nan diferansye. eksprime pwoteyin ki gen rapò ak varicocele medyatè sterilite te montre ke Nrf2 te yon regilatè en nan ANXA2 (Panner Selvam et al, 2021). Anpèchman PGK1 ka aktive chemen Keapl / Nrf2 ak estimile repons antioksidan pwoteksyon selil (Bollong et al, 2018). De pwoteyin yo ka sib potansyèl de quercetin atravè chemen Keapl/Nrf2. Plis etid ka verifye wòl pwoteyin sa yo sou efè quercetin sou H/R-HBMECs.

Byensir, quercetin ka egzèse efè pwoteksyon sou selil andotelyal yo. Men, sib espesifik aksyon yo toujou mande pou plis envestigasyon, epi si gen plis chemen aksyon rete enkoni.

An konklizyon, etid sa a te montre kercetin kenbe entegrite nan baryè san-sèvo pa pwoteje selil andotelyal yo. Nan nivo molekilè, quercetin ka jwe yon wòl nan pwoteje selil andotelyo pa pwoteje kont estrès oksidatif atravè chemen Keapl/Nrf2 ak anpeche estrès retikul endoplasmik atravè chemen ATF6/GRP78. Etid sa a mete fondasyon pou TCM trete CSVD nan pwoteje selil andotelyo yo.