Efè Tanshinone IIA sou repons enflamatwa LPS-induit nan yon fason depandan ROS-NLRP3 enflamasome nan selil RAW264.7
Mar 10, 2022
Pou plis enfòmasyon:emily.li@wecistanche.com
Pwen esansyèl
Tan IIA ta ka anpeche repons enflamatwa a ak ekspresyon NLRP3 ankouraje pa LPS oswa LPS plis ATP. Acetylcysteine (N-acetyl-l-cysteine, NAC), yon inibitè ROS, ta ka anpeche LPS plis ogmantasyon ATP-induit nan nivo NLRP3 la. Mekanis ki kache efè Tan IIA ka enplike règleman ROS-NF-κB/P38-NLRP3. Etid sa a te karakterize mekanis molekilè Tan IIA a epi li te bay nouvo panse nan terapi klinik li yo.
Résumé
Prèv émergentes te demontre ke Tanshinone IIA (Tan IIA) anpeche blesi kardyomyosit, fibroblast kadyak, ak ateroskleroz. Sepandan, mekanis molekilè ki kache efè Tan lA toujou klè. Pou mennen ankèt sou wòl Tan ll A nan repons enflamatwa a nan yon fason ROS-NLRP3 ki depann de enflamason. Selil RAW264.7 ankouraje ak LPS yo te rekrite pou pwodwi yon modèl selil repons enflamatwa. Rezilta nou yo te endike ke pwodiksyon NO te ogmante siyifikativman apre yo te ankouraje pa LPS. akTan IIA trete siyifikativman diminye nivo NO. Ekspresyon mRNA nan NLRP3. IL-1B ak TNF-a te siyifikativman anpeche pa Tan LLA konpare ak selil LPS trete. Ekspresyon nan pwoteyin nan NLRP3. IKBa, pp65/p65, ak pp38/p38 te siyen avèk efikasite diminye pa Tan IIA, konpare ak LPS oswa LPS plis gwoup ankouraje ATP. Pandan se tan. Tan IA siyifikativman anpeche nivo ROS pwovoke pa LPS plis ATP. Ak NAC, yon inibitè ROS, ta ka tou anpeche ekspresyon pwoteyin nan NLRP3. Dapre rezilta sa yo, li ta ka espekile ke mekanis ki kache efè Tan IIA ka enplike règleman ROS-NF-kB/P38-NLRP3. Etid sa a te karakterize mekanis molekilè Tan IA a epi li te bay nouvo panse nan terapi klinik li yo.
Mo kle: Tanshinone IIA,Enflamasyon, NLRP3 inflammasome, ROS
Background
Macrophages jwe yon wòl enpòtan nan kenbe omeyostazi kadyak ak orchestration reparasyon tisi kòm byen ke renovasyon. Nankèechèkpasyan yo, cytokin proenflamatwa serik ki wo yo sipoze prediksyon byomarkè rezilta klinik ki pi mal yo, akenflamasyonka kontribye nan pwogresyon nan ensifizans kadyak [1]. Menm sienflamasyonte parèt kòm yon sib terapetik pou trete maladi kadyovaskilè, li, sepandan, sanble ke gwo imino-depresyon echwe pou pou amelyore rezilta klinik swa apre enfaktis myokad (MI) oswa nan ensifizans kadyak [2,3].
Plizyè etid klinik yo te montre ke anpèchman yonenflamatwachemen, tankou aenflamatwacytokine, IL-1, ta ka efektivman redwi evènman kadyovaskilè renouvlab [4, 5]. Li ka espekile ke imunomodulasyon nan repons enflamatwa gen enpòtan dyagnostik ak terapetik siyifikasyon nan pwosesis la nan maladi kadyovaskilè.
NLRP3 inflammasome se pi etidye nan tout kalite inflammasomes. Li te dokimante ke NLRP3 inflammasome jwe yon pati enpòtan nan anpil maladi, tankou paralezit miltip (MS), maladi alzayme (AD), ateroskleroz, obezite, ak dyabèt tip 2 [6], ak plis ak plis prèv ki endike ke NLRP3. inflammasome tou patisipe nan ischemi myokad / blesi repafizyon (MI / RI) [7,8]. Mekanis yo nan aktivasyon NLRP3 ka gen ladan jenerasyon an nan espès oksijèn reyaktif (ROS), eflux potasyòm, ak liberasyon an nan kathepsin nan sitosol la apre destabilizasyon lizozomal. Lè selil yo te ankouraje pa patojèn oswa siyal danje, NLRP3 te aktive ak rekrite pro-caspase-1 atravè pwoteyin adaptè ASC la. NLRP3. ASC ak pro-caspase-1 te fè NLRP3 inflammasome asanble konplèks. Anba aksyon NLRP3 inflammasome, pro-caspase-1 te aktive pou vin kaspase-1, evantyèlman mennen nan sekresyon IL-1 ak IL{-18, epi sa ki lakòz yon seri reyaksyon enflamatwa [9,10].
Tan IIA se yon konstitiyan liposolubl nan Danshen (Sahia miltiorrhiza Bge), ki posede divès kalite pwopriyete byolojik ak patisipe nan yon seri reyaksyon byochimik. Tan IA genyenanti-enflamatwa, antioksidanak ankouraje efè anjyogenesis, epi li te tou lajman effused pou tretman maladi kardyo-serebrovaskilè sistèm [1, 12]. Prèv émergentes yo montre ke Tan IIA anpeche blesi kadyomiosit, fibroblast kadyak, ateroskleroz, akneroenflamasyon[13-16]. Sepandan, mekanis molekilè ki kache efè Tan IIA toujou klè.
Pandan blesi iskemi/repèfizyon, monosit/makrofaj, netrofil, ak selil andotelyal yo kòmanseenflamatwarepons, pwovoke liberasyon an nan yon varyete deenflamatwacytokines, ak sa ki lakòz ogmante pèmeyabilite vaskilè, èdèm tisi, ak domaj. Macrophage se yon enpòtan enflamatwa règleman kalite selil pami tout laenflamatwaespès selil yo epi li jwe yon wòl enpòtan nan pwosesis enfaktis myokad [17]. Monosit / makrofaj rekrite nan myokad ki domaje a ka plis lage ROS, medyatè enflamatwa, ak proteaz ki agrave blesi myokad [18].
Pou rezon ki fè makrofaj yo jwe yon wòl enpòtan nan kenbe omeyostazi kadyak ak orkestre reparasyon tisi, nou rekrite selil RAW264.7 ankouraje ak LPS pou pwodwi yon modèl selil repons enflamatwa. Etid la kounye a envestige si Tan IIA gen yon efè sou makwofaj LPS ankouraje, ak mekanis ki kache efè Tan ⅡA sou makrofaj nan yon fason ROS-NLRP3 inflammasome-depandan.
Materyèl ak Metòd
Kilti Selil ak Tretman
Selil RAW264.7 te achte nan Sant Kilti Selil Akademi Chinwa Syans Medikal (Beijing, Lachin). Selil yo te kiltive nan mwayen DMEM (glikoz ki wo), yo te ajoute 10 pousan serom fetal bovine (FBS), 100 U/mL penisilin, ak 100 ug/mL streptomycin. Selil yo te kiltive a 37 degre nan yon atmosfè konplètman imidifye ak 5 pousan CO2. Pou tout eksperyans, selil yo te trete nan 80-90 pousan konfli selil yo. Selil yo te trete ak diferan konsantrasyon Tan IIA (nan 10,1, ak 0.1 uM) pou diferan fwa, avèk oswa san 1 ug/mL LPS. Pandan se tan, selil nan gwoup kontwòl la te trete ak volim egal 0.1 pousan DMSO.
Mezi pwodiksyon NO
Yo te itilize NO Test Kit (Beyotime, Lachin) pou mezire pwodiksyon NO selon enstriksyon manifakti a. Yon ti tan, estanda yo te dilye ak DMEM plis 10 pousan FBS ak 50μL estanda oswa sipènatant kilti selil yo te ajoute nan chak pi nan plak la 96-byen. Lè sa a, 50uL Griess Reagent I ak II yo te pipette nan chak pi nan plak la ak dansite optik (OD) te detekte pa lektè microplate Varioskan LUX multimode nan 540 nm.
Ekstraksyon RNA
Selil RAW264.7 yo te plake nan yon dansite 1 × 106 selil / byen ak 10 pousan FBS DMEM nan plak sis-pi. 24 èdtan apre, yo te retire mwayen an e li te ajoute ak mwayen DMEM san serom, san antibyotik. Selil RAW264.7 yo te trete ak DMSO (kontwòl), LPS (1 ug/mL) ak LPS plis Tan IIA (10,1, and0.1uM pou 6 h. Lè sa a, total RNA yo te ekstrè pou detekte nivo mRNA NLRP3, IL{ {18}} , ak TNF-. Total RNA yo te ekstrè pa itilize nan reyaktif TRIzol (Ambion). RNA yo te mezire pa konsantrasyon Va yon espektrofotomèt ultramicrofluorescence (DeNovix). Yo te itilize twous sentèz HiFiScript cDNA (cwbiotech) pou transkripsyon ranvèse dapre enstriksyon manifakti a te transkri 1 ug echantiyon RNA, ak etap reyaksyon yo te jan sa a: 42 degre C pou 50 min, 85 degre C pou 5 min, ak Lè sa a, kenbe nan 4 degre.
RT-PCR
Ouantitative PCR(OPCR) tès te fèt ak yon enstriman O-PCR (Lightcycler 96, Roche), lè l sèvi avèk UltraSYBR melanj (cwbiotech). Pwotokòl PCR la te 95 degre pou 10min, ki te swiv pa 40 sik 95 degre pou 10s, 56 pou 30s, ak 72 pou 32s. Jadendanfan yo itilize pou qRT-PCR yo montre jan sa a: GADPH-Forward: 5'-AACTTTGGCATTGTGGAAGG-3';GADPH-Reverse:5'-ACACATTGGGGGTAGGAACA-3',NLRP3-Forward: 5'-ATGCTGCTTCGACATCTCCT-3'NLRP3-Reverse:5'-AACCAATGCGAGATCCTGAC-3';IL-1 -Anvan:5'-GCCCATCCTCTGTGACTCAT-3';IL{ {32}}Anvers:5'-AGGCCACAGGTATTTTGTCG-3':TNF- -Avant:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTATC-3'TNF-a-Reverse:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTATC-3 ! Nivo ekspresyon jèn yo te kalkile ak metòd 2-AACt la.
Western blotting
Western blotting te fèt ak sa ki annapre yoantikò: anti-NLRP3 antibody (CST), anti-pp38 antibody (CST), anti-p38 antibody (CST), anti-pp65 antibody (CST), anti-GADPH antibody (pwoteyin teknoloji), anti- -tibulin antikò (pwoteyin teknoloji), anti-HMGB1 antibody (pwoteyin teknoloji), anti-p65 antibody (pwoteyin teknoloji), anti-IKB- antibody (pwoteyin teknoloji). Fraksyon pwoteyin yo te ekstrè soti nan lysates yo nan selil kiltive epi yo te itilize yon Enhanced BCA Pwoteyin Assay Twous (Beyotime, Lachin) itilize pou mezire konsantrasyon pwoteyin yo. Pwoteyin yo te denatire ak rezoud sou SDS-PAGE, Lè sa a, transfere nan yon manbràn PVDF. Apre bloke ak QuickBlockTMBlocking Buffer (Beyotime, Lachin) pou 1 èdtan, yo te enkube manbràn PVDF yo ak antikò prensipal lannwit lan nan 4 degre. Lè sa a, manbràn yo te lave ak Western Wash Buffer (Beyotime, Lachin) twa fwa, ak enkubasyon ak HRP konjige antikò segondè pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Yo te itilize yon twous BeyoECL Plus (Beyotime, Lachin) pou detekte pwoteyin yo dapre enstriksyon manifakti a. Yon C-DiGit 3600 (Li-Cor, USA) te anplwaye pou imaj ak bann yo te quantitated pa Image J Software.
Mezi akimilasyon ROS
Yo te itilize yon tès DCFH-DA pwofonde Reactive Oxygen Species Assay Twous (Beyotime, Lachin) pou mezire nivo ROS intraselilè nan selil RAW264.7 dapre enstriksyon manifakti a. Yon ti tan, DCFH-DA te dilye ak medyòm DMEM san serom epi konsantrasyon final la te ajiste a 10μM / L. Apre enkubasyon ak 10 μM DCFH-DA lank pou 30 min nan 37 degre C, selil RAW264.7 yo te lave twa fwa ak medyòm DMEM san serom, konsa tankou yo retire depase DCFH-DA a. Pou kontwòl pozitif, byen, lμL nan Rosup te ajoute nan selil yo. Fliyoresans lan te mezire lè l sèvi avèk yon mikwoskòp envèse Nikon IX73. Imaj selil yo te mezire lè l sèvi avèk Image J Software.
Analiz estatistik
Tout eksperyans yo te repete omwen twa fwa. Yo te itilize lojisyèl SPSS la pou tout analiz, epi GraphPad Prism 5 te fèt pou desen grafik yo. Tout rezilta yo te bay kòm valè an mwayèn ± SD. Yo te itilize ANOVA yon sèl-fason pou analize done pami gwoup yo ak konparezon pè lè l sèvi avèk tès SNK-q la. Yon valè P< 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant="" in="" all="">
Figi 1. Tan IIA te genyen yon efè regilasyon sou pwodiksyon NO, NLRP3, IL-1, TNF-mRNA
ekspresyon
A. RAW264.7 Selil NO pwodiksyon de diferan gwoup. Selil yo te pretrete ak Tan IIA 10µM, 1µM, ak
{{0}}.1µM pou 30 min ak ankouraje ak LPS (1 ug/mL) pou 24 èdtan. * P < 0.05="" vs="" ctrl,="" #="" p="">< 0.05="" vs="" lps.="" bd.="" tan="">
posede yon efè regilasyon sou ekspresyon mRNA nan TNF-, NLRP3, ak IL-1. Selil yo te pretrete ak Tan IIA
Rezilta yo
Efè a sou selil RAW264.7 NO pwodiksyon Tan IIA Tretman
NO, yon dezyèm molekil mesaje, fè plizyè fonksyon nan pwosesis fizyolojik ak patolojik selil yo. NO macrophages sekrete jwe yon wòl enpòtan nan reyaksyon enflamatwa, iminitè ak anti-viral [19, 20]. Akòz sa yo, NO ka itilize pou estime efè LPS sou repons iminitè ak enflamatwa. Selil yo te trete ak diferan konsantrasyon Tan IIA (nan 10, 1, ak 0.1 μM) avèk oswa san 1 ug/mL LPS pou 24 èdtan, epi selil yo nan gwoup kontwòl la te trete ak yon volim egal nan 0.1 pousan DMSO. Jan yo montre nan Figi 1A, konpare ak gwoup kontwòl la, nan gwoup modèl la ankouraje ak LPS pou 24h, pwodiksyon NO an ogmante ansibleman (P<0.05); and="" various="" concentrations="" of="" taniia="" treatment="" (at="" 10,="" 1,="" and="" 0.1="" μm)="" significantly="" decreased="" the="" no="" production=""><0.05) of="" the="" cells="" stimulated="" with="">
Efè a sou ekspresyon NLRP3, IL-1 ak TNF-mRNA nan tretman Tan IIA
Selil RAW264.7 ki ankouraje ak LPS ka pwovoke deklanchman repons enflamatwa a, epi li ka amelyore pa Tan IIA, ki gen ladan ekspresyon mRNA NLRP3, IL{3}} ak TNF-. Jan yo montre nan Figi 1B-D, konpare ak gwoup kontwòl la, nan gwoup modèl estimile ak LPS, ekspresyon mRNA nan NLRP3, IL-1 ak TNF- yo te ogmante ansibleman (P <{{1{{14} }}}.05);="" ak="" divès="" kalite="" konsantrasyon="" nan="" tretman="" tan="" iia="" (nan="" 10,="" 1,="" ak="" 0.1="" μm)="" siyifikativman="" diminye="" ekspresyon="" mrna="" nan="" nlrp3,="" il-1="" ak="" tnf-="" (p=""><0.05) nan="" selil="" ankouraje="" ak="">
Efè a sou ekspresyon pwoteyin NLRP3 nan tretman Tan IIA
ATP, yon dezyèm molekil siyal, se yon aktivateur ki nesesè pou deklanchman NLRP3 inflammasome. Se konsa, ATP te itilize pou pwovoke aktivasyon NLRP3 [21, 22]. Rezilta nou yo te montre ke LPS plis ATP-induit aktivasyon an nan ekspresyon pwoteyin NLRP3 epi li ta ka amelyore pa Tan IIA. Jan yo montre nan Figi 2, konpare ak gwoup kontwòl la, nan gwoup modèl la pwovoke pa LPS plis ATP, nivo ekspresyon pwoteyin NLRP3 te ogmante ansibleman (P <{8}}.{12}}5); ak="" tretman="" taniia="" (nan="" 10μm)="" siyifikativman="" diminye="" ekspresyon="" pwoteyin="" nlrp3="" (p=""><0.05) nan="" selil="" ankouraje="" ak="" lps="" plis="">
Tan IIA ka anpeche deklanchman LPS nan chemen NF-κB ak p38
Jan yo montre nan Figi 2, konpare ak gwoup kontwòl la, nan selil yo ankouraje ak LPS oswa LPS plis ATP, ekspresyon pwoteyin IKB, pp65/p65 te ogmante ansibleman (P <{3}}.05); ak="" tan="" iia="" tretman="" (nan="" 10μm)="" siyifikativman="" diminye="" upregulation="" la.="" nivo="" pwoteyin="" nan="" pp38="" p38="" te="" upregulated="" nan="" selil="" ankouraje="" ak="" lps="" plis="" atp,="" ak="" upregulation="" a="" te="" inibit="" pa="" tan="" iia="" (10μm)="" (figi="" 2).="" sepandan,="" nivo="" pwoteyin="" pp38/p38="" pa="" t="" chanje="" anpil="" nan="" selil="" ki="" ankouraje="" ak="" lps.="" anplis="" de="" sa,="" ekspresyon="" pwoteyin="" hmgb1="" te="" amelyore="" tou="" nan="" selil="" ki="" pwovoke="" ak="" lps="" oswa="" lps="" plis="" atp="" men="" pa="" te="" montre="" okenn="" diferans="" estatistik.="" rezilta="" sa="" yo="" sijere="" ke="" lps="" oswa="" lps="" plis="" atp="" pwovoke="" deklanchman="" nan="" chemen="" nf-κb="" ak="" p38="" ka="" anpeche="" pa="" tan="">
Tan IIA posede yon efè regilasyon sou ROS
Pou konfime si Tan IIA te kapab elimine ROS intraselilè, yo te evalye pwodiksyon ROS entraselilè pa mikwoskopi fluoresans lè l sèvi avèk yon Twous Espès Espès Oksijèn Reyaktif. Selil RAW264.7 yo te ekspoze a LPS pou 6 èdtan, epi yo te ajoute 1 mM ATP 30min anvan selil yo te rekòlte. Selil ROS-pozitif yo te vizyalize kòm tach vèt klere, ak tretman LPS plis ATP ogmante nivo ROS entraselilè anpil, konpare ak sa ki nan gwoup kontwòl la (Figi 3). Pandan se tan, tretman ak Tan IIA inibit LPS la plis ogmantasyon ATP-induit nan ROS entraselilè anpil (Figi 3). Rezilta sa yo sijere ke Tan IIA te gen kapasite antioksidan.
Figi 3. Tan IIA posede efè regilasyon sou ekspresyon ROS (ba echèl 50μm)
Selil yo te pretrete ak Tan IIA 10µM pou 30 min ak ankouraje ak LPS (1 ug/mL) pou 5.5 èdtan. ATP te ajoute 30 minit anvan selil yo te rekòlte. A. Imaj fluoresans reprezantan ekspresyon selil ROS. B. Done kantite mwayèn atravè twa eksperyans separe. * P <0.05 vs="" ctrl,="" #="" p=""><0.05 vs="" lps/lps="" plis="">
Figi 4. NAC posede yon efè regilasyon sou ekspresyon pwoteyin nan NLRP3.
Selil yo te pretrete ak Tan IIA 10µM pou 30 min epi yo te ankouraje ak LPS (1 ug/mL) /LPS (1 ug/mL) plis NAC (1mM) pou 5.5 èdtan. ATP te ajoute 30 minit anvan selil yo te rekòlte. A. Reprezantan Western blot nan NLRP3. B. Done kantite mwayèn atravè twa eksperyans separe. * P <0.05 vs="" ctrl,="" #="" p=""><0.05 vs="" lps="" plis="">
NAC te genyen yon efè regilasyon sou NLRP3
Acetylcysteine (N-acetyl-l-cysteine, NAC), yon scavenger nan ROS, ta ka anpeche ekspresyon nan pwoteyin nan NLRP3. Kòm mansyone deja, ekspresyon nan pwoteyin nan NLRP3 ogmante siyifikativman apre ankouraje ak LPS plis ATP pou 6h, ak tretman ak Tan IIA inibit LPS la plis ogmantasyon ATP-induit nan nivo pwoteyin NLRP3. Anplis de sa, tretman ak NAC ta ka tou anpeche LPS plis ogmantasyon ATP-induit nan nivo pwoteyin NLRP3 anpil (Figi 4). Rezilta sa yo te montre ke efè regilasyon Tan IIA sou NLRP3 ka depann de yon chemen ROS-NLRP3.
Diskisyon
Macrophages patisipe nan pwosesis la nan repons enflamatwa a epi jwe yon pati enpòtan nan pwosesis la nan enfaktis myokad. Monosit / makrofaj rekrite nan myokad ki domaje a ka plis lage ROS, medyatè enflamatwa, ak proteaz, ki agrave blesi myokad [23]. Selil RAW264.7 yo te konsidere kòm yon modèl eksperimantal makrofaj domine, epi yo jwe yon wòl enpòtan nan rechèch la nan macrophage wout siyal enflamatwa ki enpòtan [24]. Makwofaj jwe yon wòl enpòtan anpil nan kenbe omeyostazi kadyak ak orchestration reparasyon tisi kòm byen ke renovasyon. Selil RAW264.7 ki ankouraje LPS yo te itilize anpil pou etidye dwòg ki genyen pwopriyete anti-enflamatwa ak mekanis kache [25,26].
Enflamasome NLRP3 a se yon medyatè enpòtan nan repons enflamatwa, e gen plis prèv ki montre enflamasome NLRP3 jwe yon pati enpòtan nan maladi kè. Nan veso atè imen, ekspresyon segondè NLRP3 te korelasyon ak faktè risk maladi ateroskleroz ak gravite maladi atè kardyovaskulèr [27], ak nivo NLRP3 inflammasome ki gen rapò ak plak te asosye ak plak ateroskleroz [28]. Aktivasyon NLRP3 inflammasome la te asosye tou ak renovasyon kadyak negatif. NLRP3 te aktive nan cardiomyocytes nan transverse aortic constriction (TAC) pwovoke sourit negatif modèl renovasyon kadyak, ak aktivasyon an nan NLRP3 inflammasome te pote transfòmasyon nan pro-caspase -1 nan fòm aktif li [29]. MCC950.a NLRP3 inflammasome inhibitor ta ka anpeche efè ateroskleroz, pwobableman nan yon fason pou anpeche adezyon monosit yo ak diminye akimilasyon macrophages intraplaque [30].
Tan IIA se yon gwo monomè ki soti nan Danshen, ki posede divès kalite pwopriyete byolojik. Tan ⅡA genyenanti-enflamatwa, antioksidanak ankouraje efè anjojenèz, e li te itilize lajman pou tretman maladi nan sistèm kadyo-serebrovaskilè [11]. Prèv k ap parèt yo montre ke Tan A te anpeche blesi nan kadyomiosit, fibroblast kadyak, ateroskleroz, akneroenflamasyon[13-16]. Etid anvan nou yo te montre ke Tan IIA te egzèse yon efè anti-enflamatwa lè yo anpeche chemen siyal TLR4-MyD{88-NF-KB a ak ajiste ekspresyon miRNA ki gen rapò ak nan selil RAW264.7 ki ankouraje LPS [31] . Anplis de sa, Tan IIA ta ka ankouraje polarizasyon makrofaj soti nan yon fenotip M1 pro-enflamatwa nan direksyon yon fenotip M2 anti-enflamatwa [32]. Sepandan, mekanis molekilè ki kache efè Tan IIA te toujou klè.
Rezilta nou yo te montre ke pwodiksyon an nan NO ogmante ansibleman nan selil RAW264.7 ankouraje ak LPS, ak tretman Tan IIA (nan 1 0, 1, ak 0.1 uM) siyifikativman diminye pwodiksyon NO nan selil yo. Selil RAW264.7 ki ankouraje ak LPS ka pwovoke deklanchman repons enflamatwa a, epi li ka amelyore pa Tan IIA, ki gen ladan ekspresyon mRNA NLRP3, IL-1, ak TNF-.ATP se yon dezyèm molekil siyal. Aktivasyon enflamasome NLRP3. Nan etid la, yo te itilize ATP pou pwovoke deklanchman NLRP3. Rezilta yo te montre ke LPS plis ATP-induit aktivasyon an nan ekspresyon pwoteyin NLRP3 epi li ta ka amelyore pa Tan IIA. Nan selil yo ankouraje ak LPS oswa LPS plis ATP ekspresyon pwoteyin IKBa, pp65/p65 te ogmante ansibleman; ak Tan IA tretman （nan 10μM） siyifikativman diminye regilasyon an. Nivo nan pwoteyin nan pp38 / p38 te upregulated nan selil ankouraje ak LPS plis ATP, ak upregulation a te inibit pa Tan IA (10uM). Anplis de sa, ekspresyon pwoteyin HMGB1 te amelyore tou nan selil ki pwovoke ak LPS oswa LPS plis ATP men pa te montre okenn diferans estatistik. Rezilta sa yo sijere ke LPS oswa LPS plis ATP pwovoke deklanchman nan NF-kB ak chemen p38 ta ka anpeche pa Tan IIA.
Tretman LPS plis ATP ogmante nivo ROS entraselilè anpil, ak Tan IIA anpeche ogmantasyon LPS plis ATP nan ROS entraselilè anpil. Acetylcysteine (N-acetyl-I-cysteine, NAC) se yon scavenger nan ROS. NAC ta ka anpeche IPS plis ogmantasyon ATP-induit nan nivo pwoteyin NLRP3 anpil. Rezilta sa yo sijere ke Tan IIA te gen kapasite antioksidan e ke efè regilasyon Tan IIA sou NLRP3 ta ka depann de yon chemen ROS-NLRP3.
Pou rezime. Tan IIA ta ka anpeche repons enflamatwa a ak ekspresyon NLRP3 ankouraje pa LPS oswa LPS plis ATP, ak NAC te kapab anpeche LPS plis ogmantasyon ATP-induit nan nivo NLRP3. Kidonk, li ta ka espekile ke mekanis ki kache efè Tan IIA ka enplike règleman ROS-NF-kB/P38-NLRP3 chemen an. Etid sa a te karakterize mekanis molekilè Tan IA a epi li te bay nouvo panse nan terapi klinik li yo.
Referans
1 M.DeBerge.SJ. Shah, L. Weilbacher, et al Macrophages nan ensifizans kadyak ak redwi kont prezève fraksyon ekspilsyon. Tandans Mol. Med 2019, 25: 328-340.
2. GH. Gislason, S. Jacobsen, JN Rasmussen, et al. Risk pou lanmò oswa re-enfaktis ki asosye ak itilizasyon inibitè cyclooxygenase-2 selektif ak dwòg antienflamatwa non-selektif non-steroyid apre enfaktis myokad egi. Sikilasyon 2006, 113: 2906-2913
3. DM McNamara, R. Holubkov, RCStarling, et al. Esè kontwole nan globilin iminitè nan venn nan kadyomyopati dilate ki fèk kòmanse. Circulation 2001, 103:2254-2259.
4. PM Ridker, BMEverett, T.Thuren, et al. Terapi anti-enflamatwa ak canakinumab pou maladi ateroskleroz. N Engl J Med 2017,377:1119-1131. PMRidker, JG MacFadyen, T. Thuren, et al.
5. Efè entèleukin-1beta anpèchman ak canakinumab sou kansè nan poumon ensidan nan pasyan ki gen ateroskleroz: rezilta eksplorasyon nan yon esè owaza, doub avèg, ki kontwole plasebo. Lancet 2017,390:1833-1842. H. Guo, JB Callaway, JP Ting.
6. mekanis nan aksyon, wòl nan maladi, ak terapetik. Nat Med 2015,21:677-687.
7. L.Minutoli.D.Puzzolo,M.Rinaldi, et al. ROS-medyatè aktivasyon NLRP3 inflammasome nan sèvo a. kè. ren, ak tèstikul ischemi/reperfusion blesi.Oxid Med Cell Longley 2016.2016:2183026.
8. M.KawaguchiM.TakahashiTHata, et al. Aktivasyon enflamasome nan fibroblast kadyak esansyèl pou blesi myokad ischemi/reperfusion. Circulation 2011, 123:594-604. G. Trendelenburg. Règleman molekilè nan sò selil yo
9. nan ischemi serebral: wòl inflammasome a ak koneksyon chemen. J Cereb Blood Flow Metab 2014,34:1857-1867.
10.C. Jin, RAFlavell. Mekanis molekilè nan aktivasyon NLRP3 inflammasome.J Clin Immunol 2010,30: 628-631.
11.Y. Cai. W, Zhang, Z.Chen, et al. Dènye Sur nan aktivite byolojik yo ak sistèm livrezon dwòg nan tanshinones. Int J Nanomedicine 2016,11:121-130.
12. M.Akaberi, M.Iranshahi, S. Mehri. Chemen siyal molekilè dèyè efè byolojik diterpèn espès salvya nan nerofarmakoloji ak kadyoloji. Phytother Res2016.30:878-893.
13. D. Wang, Y.Liu, G.Zhong, et al. Konpatibilite nan tanshinone IIA ak astragaloside IV nan atenuasyon ipoksi-induit blesi cardiomyocytes. Ethnopharmacol 2017,204:67-76.
14. W. Chen, X.Li, S.Guo, et al.Tanshinone IIA amonize crosstalk nan otofaj ak polarizasyon nan macrophages atravè miR-375/KLF4 chemen pou diminye ateroskleroz. Int Immunopharmacol 2019,70:486-497.
15. YT Tsai, SHLoh, CY Lee, et al. Tanshinone A anpeche sentèz kolagen an gwo glikoz ki pwovoke atravè faktè nikleyè erythroid 2-faktè 2 ki gen rapò ak fibroblast kadyak. Cell Physiol Biochem 2018,51:2250 2261.
16.N. Huang, Y.Li, Y. Zhou, et al. Efè neropwotektif nan tanshinone IA-enkube selil mesenchymal tij Abeta 25-35-pwovoke 5C Sou neuroinflammation.Behav Brain Res 2019,365:48-55.
17.T. Heidt. G Koutwazi, P Dutta, et al.Kontribisyon diferan nan monosit nan makrofaj kè nan eta fiks ak apre enfaktis myokad. Circ Res 2014,115:284-295.
18. S. Steffens,F. Montecucco, F. Mach. Repons enflamatwa a se yon objektif pou diminye iskemi myokad ak blesi repèfizyon. Tromb Haemost 2019,102:240-247.
19.J. MacMicking, OW Xie. C. Nathan oksid nitrique ak fonksyon makrofaj Annu Rev Immunol 1997,15: 323-350.
20.SHHH. W, WU NON at Work.Cell 1994.78: 919-925.
21. L. Franchi, T. Eigenbrod, R. Munoz-Planllo, et al The inflammasome: yon caspase -1-platfòm aktivasyon ki kontwole repons iminitè ak patojèn maladi. Nat Immunol 2009,10:241-247.
22. X. Dong Z. Zheng, P. Lin, et al ACPAs ankouraje pwodiksyon IL-1beta nan atrit rimatoyid pa aktive NLRP3 inflammasome la. Cell Mol Immunol 2019.
23. PJ. Murray, TA Wynn. Fonksyon pwoteksyon ak patojèn nan subsets macrophage. Nat Rev Immunol 2011,11:723-737.
24. G Pascual, AL Fong, S.Ogawa, et al.A SUMOylation-depandan chemen medyatè transrepresyon nan jèn repons enflamatwa pa PPAR-gamma. Nature 2005,437:759-763.
25.X. Zhang G.Wang, ECGurley, et al. Flavonoid apigenin inibit repons enflamatwa lipo polisakarid-induit atravè mekanis miltip nan macrophages. PLoS One 2014,9:e107072.
26. Z. Yuan, MA Syed, D. Panchal, et al. Curcumin medyatè modulasyon epigenetik anpeche ekspresyon TREM-1 an repons a lipopolysaccharide. Int J Biochem Cell Biol 2012,44:2032-2043.
27.F.Zheng.S, Xing. Zhong, et al NLRP3 inflammasomes montre gwo ekspresyon nan aorta pasyan ki gen ateroskleroz. Heart Lung Circ 2013, 22:746-750.
28. G Paramel Varghese, L. Folkersen, RJ Strawbridge, et al. Ekspresyon NLRP3 inflammasome ak aktivasyon nan ateroskleroz imen. J Am Heart Assoc 2015,5.
29.T. Suetomi, A. Willeford, CSBrand, er al Enflamasyon ak deklanchman NLRP3 inflammasome inisye an repons a surcharge presyon pa Ca (2 plis )/kalmodulin-depandan pwoteyin kinase II delta siyal nan kardyomiosit yo esansyèl pou renovasyon kadyak negatif. Circulation 2018, 138:2530-2544.
30. T. van der Heijden, E. Kritikou, W. Venema, et al. NLRP3 inflammasome anpèchman pa MCC950 diminye devlopman blesi ateroskleroz nan apolipoprotein E-defisi sourit-rapò kout. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2017,37:1457-1461.
31. G Fan.X. Jiang. X. Wu, e1 al. Anti-enflamatwa aktivite tanshinone IIA nan macrophages RAW264.7 ki ankouraje LPS atravè miRNA ak chemen TLR4-NF-kappaB. Enflamasyon 2016,39: 375-384.
32. S. Gao, Y. Wang, D. Li, et al. Tanshinone IIA soulaje repons enflamatwa ak dirije polarizasyon makrofaj nan selil RAW264.7 lipopolysaccharide ki ankouraje. Enflamasyon 2019, 42: 264-275.
