Efè preparasyon plant èrbeuz nan Cistanche sou Ffects nan plant èrbeuz nan Cistanche sou Iin Vitro N vitro Ccytokine ekspresyon pa Rat Osteoblasts

Kontak: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com

ABSTRÈ

Osteoblasts (OB) jwe yon wòl enpòtan nan zo retire osteyoblast yo (OB) jwe yon wòl enpòtan nan zo remodeling nan liberasyon an nan cytokines tankou liberasyon an nan cytokines tankou osteyoprotegerin (OOPG), yon aktivite reseptè nan faktè nikleyè kappa-B ligand (RA PG), yon aktivite reseptè nan faktè nikleyè kappa-B ligand NKL) ak osteyopoontin (OPN). Objektif etid nou an se te evalye efè ekstrè zèb Chinwa yo nanSispann(Cistanche deserticola) sou ekspresyon an nan ekspresyon vitro nan sa yo cytokines nan kilti rat OB. OBs prensipal yo te izole soti nan zo tèt la rat pa tripsin ak dijesyon kolagen an. Fenèt selilè a te detèmine pa metòd la Swis, asid fosfatase tach, Von Kossa tach, ak Alizarin wouj tach. Ekspresyon jenetik la nan OPG, RANKL, ak OPN te analize pa quantitative an tan reyèl PCR. Tout tretman ak ekstrè plant èrbeuz nan Cistanche ogmante ekspresyon jenetik la nan OPG ak RANKL nan 72 èdtan nan kilti, espesyalman nan konsantrasyon nan 5×10-2 mg / mL, ki te siyifikativman diferan konpare ak kilti yo kontwòl. Tretman siyifikativman redwi ekspresyon rapò OPG / RANKL nan 48 èdtan ak ekspresyon an nan OPN MRNA nan 72 èdtan nan kilti. Ekspozisyon an nan vitro nan OB nan preparasyon an plant nan Cistanche ankouraje ekspresyon jenetik la nan OPG ak RANKL ak redwi ekspresyon jenetik la nan OPG / RANKL ak OPN, e konsa, te kapab kenbe balans lan nan fòmasyon zo ak responsablite pandan metabolis zo.

Mo kle:Cistanche, osteoblasts, osteoprotegerin, RANKL, osteopontin, rat

anti-osteyoblas:zèb cistanche

Entodiksyon

Fòs zo detèmine pa estrikti ak konpozisyon. Zo tisi adapte akomode yon varyete de charj pa modèl pandan faz kwasans lan ak remodeling nan tout lavi yo. Zo a retire diminye ak aje paske nan yon rediksyon nan volim nan zo ki fòme nan inite a miltiselilè debaz, defisyans òmòn sèks, ak diminye fòmasyon zo peryodik (SEEMAN, 2008). Balans nan remodeling zo ka lakòz maladi ki gen rapò ak zo, tankou osteyopowoz la, ak ogmante risk kase.

Osteyopowoz la, sa ki lakòz karakteristik, doulè, ak maladi nan lokosyon, afekte dè milyon de moun nan Etazini (NAYAK et al., 2012; SILVERMAN, 2010). Pwosesis kle a nan prevansyon an nan ensizisans la nan maladi ki gen rapò ak zo se kenbe kapasite zo remodeling.

Zo remodeling se balans lan dinamik nan fòmasyon zo ak responsablite (SEEMAN ak DELMAS, 2006). Pwosesis sa yo sitou kontwole pa osteyoblasts (OBS) ak osteyoclas nan zo granmoaj, ak pa ekspresyon an nan cytokines, faktè kwasans, ak òmòn (PARFITT, 2000). OBS, ki sòti nan selil mesenrik primè yo, yo jwenn sou sifas la zo. OBS yo responsab pou fòmasyon zo, ak endirèkteman endirèkteman enpak resorption zo (MACKIE, 2003). Cytokines yo eksprime pa OBS, tankou osteyopowotewoteji (OPG), aktivite reseptè nan faktè nikleyè kappa-B ligand (RANKL), ak osteopontin (OPN), ka ankouraje gerizon karakteristik ak ogmante fòmasyon zo nan osteyopowoz (LINKHART et al., 1996). Devlopman OB se yon pwosesis sekans ki gen ladan pwopagasyon osteyopowojèn, matris matris, ak mineralizasyon selilè (GIUSTINA et al., 2008). Pwosesis sa a kontwole pa plizyè jenewozite OB-ki asosye epi li trè ki asosye ak devlopman nan fòmasyon zo (HUNG et al., 2010). Pwogresyon mineralizasyon osteyogenik mineralizasyon zo pandan gerizon zo. Se konsa, rechèch nan ekspresyon an nan cytokines osteyogenik ak efè yo sou zo mineralizasyon se esansyèl nan chèche yon ajan inovatè ak efikas nan orijin natirèl pou prevansyon nan maladi ki gen rapò ak zo.

Medikaman tradisyonèl Chinwa yo te itilize pou dè milye ane nan tretman an nan maladi ki gen rapò ak zo. Plant la èrbeuz Cistanche, ki se lajman itilize pou envite ren yo ak nan terapi nan maladi zo, ki fè pati yon genus nan fanmi an Orobanchaceae. Li te rapòte ke konstitiyan yo nan espès Cistanche yo se: fenomèn glikozif (PhGs), iridoids, lignans, alditols, ak oligosaccharides (JIANG ak TU, 2009; Li et al., 2010). Plant Cistanche yo se remèd fèy parazit kontinuèl, ki sitou grandi nan dezè a oswa sou lik sèl barik, sitou distribiye nan dezè yo arid ak cho nan nòdwès Lachin. Nan Tradisyonèl Medsin Cistanche konsidere kòm yon tonik ekstraòdinè, epi yo rele "Ginseng nan dezè a". Yon etid fèt nan rat ovariectomized (LIANG et al., 2011) te montre saEkstrè Cistancheadministre oswa siyifikativman amelyore dansite zo mineral ak kontni zo nan yon fason dòz-depandan. Sepandan, mekanis yo detaye sou aksyon an nan Cistanche sou fòmasyon zo yo toujou klè. Se poutèt sa, objektif yo nan etid sa a te evalye efè yo nan Cistanche sou ekspresyon an nan vitro nan jèn pou OPG, RANKL, ak OPN cytokines pa kilti rat OB, ak evalye mekanis yo pa ki Cistanche ankouraje gerizon oswa anpeche / kontwòl maladi zo ki gen rapò ak.

Cistanche zèb pou prevansyon maladi ki gen rapò ak zo

Materyèl ak metòd

Preparasyon nan osteyoblast rat. Rat OBS yo te prepare soti nan neonatal rat calvarias (.<24 hours)="" and="" processed="" by="" the="" trypsin="" (sigma,="" usa)="" and="" collagenase="" ii（sigma,="" usa）digestion="" methods.="" the="" cells="" were="" cultured="" in="" dulbecco’s="" modified="" eagle="" medium="" (dmem,="" gibco,="" usa)="" supplemented="" with="" 15="" %="" inactivated="" fetal="" calf="" serum,="" penicillin="" (100="" iu/ml),="" streptomycin="" (100="" iu/ml)="" and="" l-glutamine="" in="" 6="" well="" culture="" plates,="" and="" incubated="" at="" 37="" °="" c="" with="" 5="" %="" co2="" in="" the="" air.="" the="" cellular="" phenotype="" was="" determined="" by="" the="" swiss="" dyeing="" method,="" alkaline="" phosphatase="" staining,="" and="" von="" kossa="" and="" alizarin="" red="" dye="">

Preparasyon nan ekstrè dlo nan Cistanche nan dilisyon seri. Cistanche a te itilize nan etid sa a te bay soti nan Famasi Tongrentang nan peyi Lachin. Moso Cistanche te tè nan yon poud. Ekstrè likid Cistanche yo te prepare pa dekote 50 g poud èrbal pou 1 èdtan. Apre sa, preparasyon an te konsantre a 100 mL lè l sèvi avèk yon evaporatè Rotary ak filtre nan 0.22 mm filtè. Filtra a te estoke nan 4 °C nan fènwa. Ekstrè likid nan Cistanche te dilye nan konsantrasyon seri sòti nan 5×10 -1 a 5×10-4 mg / mL ak likid la DMEM.

Izolasyon nan RNA ak ranvèse PCR. Twazyèm jenerasyon OBS kiltirèl yo te trete ak konsantrasyon diferan nan ekstrè Cistanche pou 24, 48, ak 72 èdtan. Tretman selil OB yo te fèt nan triplicate. Selil yo te lave ak saline fosfat (PBS) de fwa ak RNA te izole soti nan selil yo ak reyaksyon TransZol (Beijing TransGen Biotech co, Ltd; Beijing, Lachin) dapre enstriksyon manifakti a, ak ekstrè ak kloroform, presipite ak alkòl izopropyl, lave ak 75 % alkòl ethyl ak Lè sa a, fonn nan dlo. Transkripsyon ranvèse nan RNA (5 μL) te fèt lè l sèvi avèk Transskripsyon An Premye-Strand CDNA Synthesis Supermix (Trans, Beijing, Lachin).

Konfimasyon nan pwodwi an tan reyèl PCR. Apre elektwofòez sou 1.5 % agarose jèl, ADN sekans te fèt yo nan lòd yo pwouve ke pwodwi PCR yo te segman yo jenere nan OPG, RANKL, ak OPN nan rat OB.

Etablisman an nan yon plasmid ki gen jenere sib la. Sekans ADN lan nan 2% jèl agaz te pirifye ak refè pa E.Z.N.A. ekstraksyon jèl (Kangweishiji, Lachin) ak transfere nan yon twous pEASY-T3 klonaj (Beijing TransGen Biotech co, Ltd;; Beijing, Lachin). Transfòmasyon selil a te reyalize atravè yon plas konstwi ki gen jenewozite sib la. Koloni pozitif yo te fè tès depistaj pa tès depistaj la Blue-blan ak sekans imedyatman. Plasmid yo ekstrè soti nan koloni yo pozitif, ki gen jenetik la sib, yo te pwopòsyonèlman dilye ak dlo dezyèm reyalize yon koub estanda. Quantitative an tan reyèl PCR (RTQ PCR). Primè espesifik yo te konstwi dapre sekans yo pibliye (NCBI, Baz done Nikleyola) ak sentèz pa Liuhe - Nuada Gene (Beijing, Lachin) jan yo montre nan tablo 1.

Ekspresyon an nan mRNAs nan echantiyon yo te quantified lè l sèvi avèk koub la espesifik plamid ki dekri anwo a. Pwodwi yo te konpare ak kay la kenbe jenewozite β-actin. Kantite jenetik sib te kalkile pa RTQ PCR, lè l sèvi avèk SYBR Green RealMaster Mix (TIANGEN, Lachin) dapre pwotokòl manifakti a. Kondisyon PCR yo te jan sa a: 94 ° C pou 1 minit, 58 °C pou 30 segonn, 68 °C pou 1 minit epi yo te repete pou 40 sik. Done yo te kalkile lè l sèvi avèk 7500 Sistèm nan Tan Reyèl PCR (Aplike Biostems; Waltham, MA, USA).

Analis estatistik. Done yo te trete pa yon sèl-fason ANOVA, lè l sèvi avèk lojisyèl estatistik komèsyal (SPSS 17.0, IBM Kòporasyon; Armonk, NY, USA). Rezilta yo te eksprime kòm devyasyon estanda ± nan jenès yo sib ak β-actin rapò. Diferans yo te konsidere kòm siyifikatif nan P<0.05>

Benefis nan zèb cistanche: anpeche maladi zo

Rezilta

Idantifikasyon rat OBs. OBS yo te idantifye pa metòd selil espesifik epi yo te fenoticalman demontre jan yo montre nan Figi 1. (A, B, C, ak D)

Konfimasyon nan jèn yo sib. Gwosè yo gwoup nan jenès yo sib yo te analize nan 2% jèl agarose epi yo te jwenn yo dwe ki konsistan avèk gwosè a espere (Fig 2).

Rezilta yo jwenn pou OPG, RANKL, OPN ak β-actin segman jenetik ki gen sekans yo jenere plamid yo te konpare ak sekans yo ki koresponn deja pibliye nan GENBANK la pa analiz BLAST-N, epi yo te jwenn yo dwe: 100%, 100 %, 100 % ak 99 % idantik, respektivman.

Efè ekstrè likid nan Cistanche sou OPG, RANKL ak OPN ekspresyon. Nivo MRNA OPG yo te desann-reglemante lè OBS yo te ekspoze a tout konsantrasyon yo aplike nan Cistanche pou 24 h ak 48 h (Tab 2).

Diferans enpòtan yo te obsève nan konsantrasyon 5×10-1, 5×10-2 ak 5×10-4 mg / mL apre 24 èdtan, ak nan konsantrasyon nan 5×10-1 ak 5×10-2 mg / mL apre 48 èdtan nan kilti (P<0.05). however,="" when="" compared="" with="" control="" cultures,="" the="" expression="" of="" opg="" was="" significantly="" increased="" after="" treatment="" with="" cistanche="" for="" 72="" hours,="" cistanche="" concentrations="" of="" 5×10-2="" mg/ml="" and="" 5×10-3="" mg/ml="" had="" particularly="" increased="" opg="" expression=""><0.01). in="" contrast,="" the="" rankl="" mrna="" expression="" was="" down-regulated="" after="" 24="" hours="" with="" the="" concentration="" of="" 5×10-1="" mg/ml="" and="" 5×10-2="" mg/ml="" cistanche="" extracts="" compared="" to="" the="" controls.="" however,="" rankl="" mrna="" was="" up-regulated="" after="" culturing="" with="" cistanche="" extracts="" for="" 48="" hours="" and="" 72="" hours,="" especially="" the="" cistanche="" extract="" concentrations="" of="" 5×10-2="" mg/ml,="" 5×10-3="" mg/mland="" 5×10-4="" mg/ml="" (table="" 3).="" the="" rankl="" content="" continued="" to="" increase="" signifi="" cantly="" after="" 72="" hours="" of="">

Diskisyon

Osteoblasts (OBS) pa sèlman jwe yon wòl esansyèl nan kreye achitekti zo, men tou nan kay kalsyòm, pa kontwole aktivite osteyoclastik (MACKIE, 2003). Gen sèten maladi zo ki asosye ak fonksyon OB oswa malfonksyònman, tankou osteyopowoz la. Makè yo fenomèn nan OB aparans yo se sitou pwopagasyon yo ak diferansyasyon, epi, dezyèmman, mineralizasyon nan nodules zo (PAN et al., 2005). OPG ak RANKL yo se manm nan faktè a necrosis timè (TNF) fanmi cytokines, epi yo se pwoteyin yo OB-sòti enpòtan pou règleman an ak antretyen nan mas zo (HUMPHREY et al., 2006; REINHOLZ et al., 2002). RANKL kontwole diferansyasyon osteyoclast, deklanchman, ak siviv. RANKL ka ogmante tou resorption zo pa kominike avèk reseptè li yo sou manbràn osteyoclastik (SODEK et al., 2000). OPG se reseptè a dekourajman pou RANKL la ak anpeche RANKL soti nan obligasyon reseptè li yo (RANK). RANKL / RANKL / OPG relasyon kontwole balans ki genyen ant fòmasyon zo ak responsablite, pa kontwole OB ak aktivite osteyoclas (SODEK et al., 2000; HUMPHREY et al., 2006; MAZZIOTI et al., 2012). An konsekans, li ta ka konkli ke yon rapò OPG / RANKL ka pwovoke resorption zo pa ogmante deklanchman osteyoclast.

Nan etid sa a, tout tretman ak preparasyon èrbeuz nan Cistancheincreasegene ekspresyon an nan OPG ak RANKL nan 72 èdtan, espesyalman nan konsantrasyon yo nan 5×10-2 mg / mL ak 5×10-3 mg / mL, ki te siyifikativman diferan konpare ak kilti yo kontwòl.

Nan contrast, OPG ekspresyon te siyifikativman desann-reglemante apre 24 ak 48 èdtan nan kiltirèl ak ekstrè Cistanche. Ekspresyon an nan rapò OPG / RANKL te siyifikativman desann-reglemante lè OBS yo te trete ak Cistanche pou 24 èdtan ak 48 èdtan. Epitou, ekstrè Cistanche a pa te gen okenn efè enpòtan sou kilti OB apre 72 èdtan nan tretman. Nou ipotèz ke ekstrè likid nan Cistanche ka amelyore deklanchman osteyoclast apre 24 èdtan ak 48 èdtan nan ekspresyon reglemante OPG / RANKL, men ka pa gen okenn efè sou aktivasyon osteyoclast apre 72 èdtan. OPN gen plizyè divèsite fonksyonèl nan fòmasyon zo ak remodeling ki gen rapò ak wòl fondamantal OPN nan lame defans ak reparasyon tisi. Wòl prensipal la nan OPN parèt yo dwe règleman nan fidbak negatif nan nivo sistematik, pwomosyon nan Adezisyon selil OB, endiksyon nan evènman kalifikasyon bonè, epi tou li kontwole nan gwosè a ak fòm nan kristal yo mineral (SODEK et al., 2000). Anplis, li te konfime ke OPN ka reprezante yon pwoteyin pon, ogmante rèd ateryèl pandan enflamasyon, epi yo ka konsekan lakòz domaj jwenti ak ogmante risk kadyovaskilè nan pasyan ki gen atrit rimatism (BAZZICHI et al., 2009).

Nan etid nou an, nou te montre ke yon ekstrè likid nan Cistanche desann-reglemante ekspresyon an nan OPN. Tandans nan diminye konsantrasyon OPN nan kilti yo OB konpare ak kilti yo kontwòl obsève nan 24 èdtan ak 48 èdtan nan kilti, ak siyifikativman pi ba nivo anrejistre nan 72 èdtan, sijere ke Cistanche ka amelyore fòmasyon zo, jan sa demontre pa eksperyans nan vitro.

Ekspozisyon an nan kilti OBG / RANKL apre 24 èdtan ak 48 èdtan, ak diminye ekspresyon an nan OPN apre 72 èdtan nan kilti.

zèb cistanchese toujou itilize kòm yon preskripsyon ki gen ladan remèd fèy miltip Chinwa, Se poutèt sa efikasite nan klinik nan Cistanche itilize nan etid sa a ak eleman yo nan ekstrè likid yo konplèks epi yo poko klè. Rezilta etid nou an demontre ke Cistanche ekstrè afekte OPG ak RANKL ekspresyon lè aplike nan rat OB nan kilti selil, men nivo a nan varyete ekspresyon, tou depann de konsantrasyon an nan ekstrè Cistanche ak dire a nan kilti. Konsantrasyon ki apwopriye a nan ekstrè likid nan Cistanche deserticola, an konbinezon ak dire ki apwopriye a ekspoze a rat OBS, ka kenbe balans lan nan fòmasyon zo ak responsablite pandan metabolis zo.

Plis rechèch nesesè yo nan lòd yo amelyore konesans nou sou engredyan yo byoaktif nan Cistanche ak konsantrasyon yo nan preparasyon, pou yo dwe valide kòm modilatè cytokine pou restorasyon zo ak reparasyon.

sipleman cistanche: anpeche pèt zo

Referans

BAZZICHI, L., L. GHIADONI, A. ROSSI, M. BERNARDINI, M. LANZA, F. DE FEO, C. GIACOMELLI, I. MENCARONI, K. RAIMO, M. ROSSI, A. M. MAZZONE, S. TADDEI, S. BOMBARDIERI (2009): Osteopontin ki asosye ak ogmante rèd atè nan atrit rimatism. Mol. Med 15, 402-406.

GIUSTINA, A., G. MAZZIOTTI, E. CANALIS (2008): Kwasans òmòn, ensilin-tankou faktè kwasans, ak eskèlèt la. Andocr. 29 devan, 535-559.

HUMPHREY, E. L., J. H. WILLIAMS, M. W. DAVIE, M. J. MARSHALL (2006): Efè dezosekirize glikokòk sou OPG ak RANKL nan selil osteyoblastik yo. Zo 38, 652-661.

HUNG, T. Y., T. L. CHEN, M. Liao, W. P. HO, D. Z. LIU, W. C. CHUANG, R. M. CHEN (2010): Drynaria fortunei J. Sm. ankouraje matirite osteyoblast pa pwovoke diferans ki gen rapò ak ekspresyon jenetik ak pwoteje kont estrès oksidantal-pwovoke ensilt apoptolojik. J. Ethnopharmacol. 131, 70-77.

JIANG, Y., P. TU (2009): Analiz de konstitiyan chimik nan espès Cistanche. J. Chromatogr. 1216, 1970-1979.

LI, Y., Y. SONG, H. ZHANG (2010): Avans nan rechèch nan konstitiyan chimik ak aktivite medsin nan cistanche. Resous Plant Chinwa 29, 7-11.

LIANG, H., F. YU, Z. TONG, Z. HUANG (2011): Efè Cistanches Herba ekstrè sou pèt zo nan ovariectomized rat. Int. J. Mol. Sci. 12, 5060-5069.

LINKHART, T. A., S. MOHAN, D. J. BAYLINK (1996): faktè kwasans pou kwasans zo ak reparasyon: IGF, TGF beta ak BMP. Zo 19, S1-S12.

MACKIE, E. J. (2003): Osteoblasts: wòl woman nan orkestrasyon nan achitekti skeletal. Int. J. Biochem. Selil Biol. 35, 1301-1305.

MAZZIOTTI, G., J. BILEZIKIAN, E. CANALIS, D. COCCHI, A. GIUSTINA (2012) : Nouvo konpreyansyon ak tretman pou osteyopowoz la. Andokrin 41, 58-69.

NAYAK, S., M. ROBERTS, S. L. GREENSPAN (2012): Enpak nan pri jenerik alendronate sou pri-efikasite nan tès depistaj ak tretman. PLOS YON SÈL 7(3): e32879. doi:10.1371/journal.pone.0032879.

PAN, W., L. D. QUARLES, L. H. CHANTE, Y. H. YU, C. JIAO, H. TANG, C. H. JIANG, H.

W. Deng, Y. J. LI, H. ZHOU, Z. S. XIAO (2005): Genistein stimulation diferansyasyon osteyoblastik atravè NO / cGMP nan kilti mwèl zo. J. Selil Biochem. 94, 307-316.

PARFITT, A. M. (2000): Mekanis nan koudeta: yon wòl pou vaskilè a. Zo 26, 319-323. REINHOLZ, M., S. J. ITURRIA, J. N. INGLE, P. ROCHE (2002) : Jenèz diferansyèl

ekspresyon nan manm fanmi TGF-β ak osteyopontin nan analiz timè timè nan tete pa analiz an tan reyèl PCR. Breast Cancer Res. Treat. 74, 255-269.

SEEMAN, E. (2008): Bon jan kalite zo: baz materyèl la ak estriktirèl nan fòs zo. J. Bone Miner. Metab. 26, 1-8.

SEEMAN, E., P. D. DELMAS (2006): Bone-materyèl la ak baz estriktirèl nan fòs zo ak frajil. N. Engl. J. Med. 354, 2250-2261.SILVERMAN, S. L. (2010): terapi Osteyopowoz: prèv ki soti nan baz done swen sante ak syans popilasyon obsèvasyon. Kalsyòm. Tisi Int. 87, 375-384.

SODEK, J., B. GANSS, M. D. MCKEE (2000): Osteopontin. Crit. Rev. Oral Biol. Med. 11, 279- 303.