Elastin konstitye Pwoteyin elastik nan tisi epidèrmik konjonktif ak kolagen an

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

Résumé:Yon nouvo xanthone glycoside,135,6-tetrahydroxyxanthone-C-4-D-glucopyranoside te izole nan ekstrè metanòl nan fèy Mangifera Indica (Anacardiaceae) k ap grandi nan peyi Lejip. Estrikti a te klarifye pa done espektroskopik 1D ak 2D-NMR. Pwopriyete fizikochimik konpoze an tankou lipofilisite, solubilite, ak konsiderasyon fòmilasyon yo te prevwa atravè teknik ADMET in silico lè l sèvi avèk sèvè SwissADME la. Teknik sa a bay règ Lipinski a nan senk, tankou absòpsyon GIT, distribisyon, metabolis, ak pèmeyasyon po. Yo te evalye aktivite inibitè in vitro kont anzim aje-medyatè tankou kolagenaz, elastaz, hyaluronidase, ak tirozinaz. Konpoze an te montre remakab anti-kolagenaz, anti-elastaz, anti-hyaluronidase, ak anti-tirosinaz efè ak valè IC50 nan 1.06,419.10,1.65, ak 0.48 ug/mL, respektivman, konpare ak kontwòl pozitif la. Konpoze an te montre pwomèt prevwa solubility akeuz ak pénétration po rezonab sijere konvnab nan konpoze an pou fòmilasyon aktualite kòm yon ajan anti-aje pou preparasyon kosmetik.

Mo kle:xanton; Mangifera indica; aje; seolagenaz; elastase; tirozinaz; yaluronidaz; in silico ADMET

1. Entwodiksyon

Pwosesis aje a se yon pwosesis byochimik konplèks ki asosye ak estrès oksidatif kondwi pa oksijèn andojèn ak radikal gratis nitwojèn ki te pwodwi pandan esperans lavi a, ki ka kontribye nan pwogresyon manifestasyon ki asosye ak laj [1]. Patoloji po-aje tankou ondilasyon, ipèpigmantasyon, tach aje, ondilasyon, melasma, freckles, lentigo, efelid, nevus, browning, ak melanom yo kontinye pa aktivasyon nan espès oksijèn reyaktif (ROS) [2]. Radikal gratis oswa ROS ta ka potansyèlman pwovoke yon chanjman nan konpozisyon selil estriktirèl po yo ak domaje manbràn selilè yo pa ankouraje oksidasyon nan lipid ak pwoteyin, ki mennen nan domaj ADN ak lanmò selil [3,4]. Anplis, ROS jwe yon wòl enpòtan nan pwosesis aje po a lè li domaje gwo pwoteyin po tankou kolagen an ak elastin pa aktivasyon kolagenaz ak anzim elastaz. Anplis de sa, radikal gratis lakòz degradasyon asid hyaluronik atravè deklanchman hyaluronidases, ki mennen nan move idratasyon nan po a [5,6]. Antisipasyon nan pwosesis dinamik sa yo konsidere kòm yon pwoblèm kle pou zòn nan dermo-kosmetik ak travay rechèch sibstansyèl yo te depanse pou dekouvri nouvo fòmilasyon pwoteksyon [7]. Antioksidan yo se anzim defans natirèl ki prezan nan po a ak kontrekare twòp radikal gratis ki pwodui nan kò a. Sepandan, balans oksidatif la ka deranje pa plizyè faktè ki gen ladan rejim alimantè ak polisyon nan lè a ki mennen nan estrès oksidatif. Nan estrès oksidatif sa a, chaj la nan radikal gratis nan kò a se siyifikativman pi wo pase antioksidan natirèl. Se poutèt sa, li trè enpòtan pou itilize antioksidan ekstèn ki soti nan sous tankou rejim alimantè, pwodui kosmetik, oswa edikaman pou netralize radikal gratis ak kontrekare pwosesis la aje po [5,8]. Etid modèn yo te revele ke plizyè metabolit natirèl segondè, sitou flavonoid ak polifenolik kontribye anpil nan aktivite antioksidan total anpil plant [9]. Sa a te mennen nan enterè nan ankèt la nan aktivite a antioksidan nan anpil plant [10]. Fwi yo te rapòte pou richès yo nan sa yo fenolik ak flavonoid kòm byen ke vitamin [11].

Tanpri klike isit la pou konnen plis

Elastin konstitye pwoteyin elastik nan tisi konjonktif epidèm ak kolagen an epi li reprezante yon wòl sibstansyèl nan prevansyon ondilasyon po ak determinasyon [12]. Pandan aje selilè, metaloproteinas matris tankou kolagenaz, elastase, ak hyaluronidase yo regilasyon [13]. Suppression anzim sa yo se youn nan estrateji ki ka geri ki pi efikas pou jere deteryorasyon kondisyon po yo pandan aje [14]. Konpoze fenolik ki sòti nan plant yo te dekri kòm medyatè blanchi ki pisan akòz pwopriyete inhibitor tirozinaz yo [15] ak kèk (nan yo ta ka jwe yon wòl nan renovasyon matris atravè yon efè inhibition elastase [16].

Mangifera indica L. se youn nan plant ki pi enpòtan manjab ki fè pati fanmi Anacardiaceae distribiye nan anpil peyi, patikilyèman rejyon twopikal [17]. Fwi mango yo te montre yon wòl enperatif nan jaden agrikòl, manje, pharmaceutique, ak nutraseutical pou plis pase 4000 ane [18]. Anplis de sa, fwi mango kanpe nan 2yèm pozisyon nan mitan rekòt endistriyèl yo, apre balana, an tèm de pwodiksyon ak pwoteksyon [19]. Diferan pati nan Mangifera indica reprezante yon sous rich nan diferan fitokonstitiyan ki gen ladan flavonoid, xanthonoids, asid fenolik, ak triterpenoid ki gen valè potansyèl kòm molekil fonksyonèl [18]. Anplis de sa, fwi bay kò imen an eleman enpòtan tankou idrat kabòn, pwoteyin, grès, mineral, vitamin, asid amine esansyèl, karotenoid, fib dyetetik, ak fenolik [20]. Tradisyonèlman, diferan kilti rapòte ke perfusion fèy yo te itilize pou plizyè maladi tankou dyare, disantri san, anemi, opresyon, bwonchit, tansyon wo, lensomni, rimatism, endijesyon, epatit, tetanòs, foskouch, ak emoraji [21]. Anplis de sa, lafimen fèy ki boule yo te respire pou okèt ak afeksyon gòj [18]. Ekòs la te itilize kòm yon dyurèz ak nan pansman antirheumatic. Grenn yo byen li te ye pou tretman rim sèvo, opresyon, dyare, ak pil senyen. Yo te rapòte aktivite antioksidan, gwo fenolik total (TPC), kontni total flavonoid (TFC), 2, 2-difenil-1-picrylhydrazyl (DPPH) aktivite dechaj, ak kapasite anpèchman linoleik nan pati plant Mangifera indica yo. 22].

Cistanche ka anti-aje

Etid sa a te fèt pou mennen ankèt sou pwopriyete inhibitor in vitro nan yon nouvo konpoze xanthone ki te jwenn nan ekstrè 70 pousan metanolik nan Mangifera indica L.leaves kont kolagenaz, elastase, tirosinaz, ak hyaluronidase. Anplis de sa, pwopriyete famakokinetik tankou absòpsyon, distribisyon, metabolis, ak toksisite (an silico ADMET prediksyon) yo te fèt lè l sèvi avèk SwissADME ak règ Lipinski a nan senk pou evalye solubility dwòg la, pèmeyabilite, ak fòmilasyon nesesite yo.

2.Rezilta ak Diskisyon

2.1. Elisidyasyon estrikti nan konpoze izole a

Te konpoze an jwenn kòm kristal jòn (18.29mg). Analiz chromatografik te revele yon tach pal-zoranj-jòn sou TLC anba limyè UV long (365 nm) nan DCM: MeOH (7:3) ak sistèm sòlvan BAW. Lè tach la te trete ak 1 pousan solisyon klori metanolik ferrik, li vire vèt fonse epi li te bay yon jòn ak flite solisyon amonyak. Done espèk lH-NMR, APT, ak HMBC nan konpoze an yo konpile nan Tablo 1. Analiz espèk lH-NMR (DMSO-dg, tanperati chanm) (Figi Sl ak S2) te revele prezans de siyal doublet aromat downfield nan oH. 7.57 ak 6.79 ak yon konstan kouple 8.24 Hz ki endike prezans de pwoton ortho-kouple. Anplis, rejyon aromatik nan spectre H-NMR te montre prezans yon siyal singlet nan Su 5.96, ki endike prezans yon sèl pwoton nan bag aromat la. Pwoton anomerik inite C-glucosyl la te detekte nan Su 4.60 ppm ak yon valè konstan kouple 7 Hz asiyen pou -anomer. Modèl sa a nan pwoton aromat nan spectre H-NMR nan konpoze izole a sanble ak estrikti nan xanthone. Anplis de sa, prezans nan yon pwoton -anomeric nan ou 4.60 ak chanjman chimik charaacteristic nan glikoz nan 3.21 a 4.60 nan lH-NMR (rejyon sik) endike ke gen yon lyen C-glycosidic ant sik la ak xanthone. Jan yo montre nan Figi S3, spectre APT nan konpoze an revele prezans nan diznèf siyal kabòn, ki reprezante xanthone a ak estrikti C-glukozid la.revizyon cistanche tubulosaEksperyans APT a te idantifye twa gwoup CH (C-8,131.95;C-7,115.10;C-2, 95.35 ppm) nan xanthone ak C-1' anomerik. nan C-glikoz la nan SH75.13 ppm. Nou te fè eksperyans RMN ki genyen de dimansyon (HMBC; Figi S4) pou konfime lyen glikozidik C-glikoz la nan C-4xanton an. Abondans 2,3JCH siyal korelasyon log-ranje korewore kolòn vètebral la xanthone ak obsève kwa-pik soti nan H-1'(6) 4.60) nan C{-4(6c 104.13 ppm) ak C-3 (6c 158.95).bioflavonoid CitrusPou mwatye xanthone, yo te detekte yon korelasyon alontèm 2,3JCH tou soti nan H-2(8) rive nan C-4(6c 104.13 ppm), C-3 (8c 158.95), ak C-4b(6c 107.45).Anplis de sa, te gen yon 2-37-korelasyon alontèm detekte soti nan H-8(8)7.57)a gwoup karbonil C-9( 6c 195.14), C-8a(6c 131.22), ak C-6 （6c161.87）.Pou menm bag la, aJcH siyal soti nan H-7（6μ 6.79) rive nan C{ {39}}a（6c 131.22） yo te obsève. Korelasyon sa yo ilistre nan estrikti konpoze an nan Figi 1. HSQC konpoze an te montre korelasyon 1JcH ant chak pwoton ak kabòn ki lokalize li jan yo montre nan Figi S5. Eksperyans H,H COSY a (Figi S6) te revele yon gwo korelasyon kwa-pik ant H-7 （δu 6.79）ak H-8（8H7.57）. Anplis de sa, konpoze an revele yon pik iyon pseudomolecular [MH]- nan m/z 421, ki endike yon fòmil molekilè CgHngOrin nan mòd negatif analiz ESI-MS (Figi S7). Done ki soti nan 1H-NMR, APT, IH, H COSY, HMBC, ak HSQC te fè nou postule ke konpoze an ta ka 1,3,5,6-tetrahydroxyxanthone-C-4- -D-glucopyranoside. Sa a te konfime pa konparezon ak done NMR rapòte nan isomangiferin nan literati a [23,24].

2.2.Nan Silico Pharmacokinetics Prediksyon nan konpoze izole a

Yo te itilize sèvè SwissADME sou entènèt la pou evalye kapasite dwòg la nan konpoze izole a pa estime règ Lipinski a nan senk (RO5) pou dwòg ki sanble [25]. Lipinski te rapòte ke 90 pousan nan dwòg aktif oralman ki te rive nan faz II kondisyon klinik yo gen MWT Mwens pase oswa egal a 500, logp Mwens pase oswa egal a 5, Donatè H-bond Mwens pase oswa egal a 5, ak akseptè H-bond Mwens pase oswa egal a 10[26].SwissADME predi yon lòt sis paramèt fizikochimik ki asosye ak resanblans dwòg tankou lipofilisite [27], gwosè, polarite [28], solubilite [29,30], fleksibilite, ak saturation [31,32] jan yo montre nan Figi 2 ak Tablo 2.cistanche UKKonplo SWISSADME ki sanble dwòg nan konpoze izole a te montre ke pi fò nan pwopriyete fizikochimik nan konpoze an se nan seri a dezirab [33] eksepte pou kantite moun ki aksepte H-bond, H-bond donatè, ak polarite nan konpoze an depi valè PSA a se 201.28 A2 (ranje dezirab (ant 20 ak 130 A2)[28]. Sa a ka polarite segondè dwe atribiye a prezans nan yon moyete sik. Konpoze nan izole te montre pwomèt prevwa topolojik solubility akeuz log S(Ali)[29 ] ak Log S (ESOL)[30]. Sa a pral fasilite fòmilasyon nan lavni nan konpoze sa a. Farmakokinetik yo prevwa te montre ke konpoze an gen absòpsyon GIT ki ba prevwa ki pa gen okenn pèmeyasyon nan BBB dapre modèl ze bouyi Dania [34] adopte pa sèvè a sou entènèt SwissADME[33].cistanche wirkungAnplis de sa, konpoze an pa te montre okenn efè inhibitor sou senk izoform cytochrome P450 (1A2,2C19,2C9,2D6, ak 3A4) [35], ki endike yon posibilite ki ba pou entèraksyon dwòg-dwòg. Yo prevwa pèmeyasyon po a kalkile pa yon modèl regresyon lineyè miltip ki korelasyon gwosè molekilè ak lipofilisite ak pèmeyabilite po [36]. Plis negatif log Kp la (ak Kp an cm/s), mwens pèmanan po se molekil la [33,36].ekstrè cistanche tubulosaJounal pèmeyasyon po a prevwa Kp an cm/s se -9.14 cm/s.

2.3.Evalyasyon Pwopriyete Anti-Po aje

2.3.1.Detèminasyon Aktivite Anti-Collagenase ak Anti-Elastase

Kolagen ak elastin se pwoteyin estriktirèl vital nan epidèm la ki kenbe elastisite, ton kapilè, ak fòs nan shkin la ansanm ak asid hyaluronik [39]. Pandan pwosesis la aje, estrès oksidatif, ak ekspoze twòp nan limyè UV mennen nan aktivasyon an nan anzim idrolize tankou elastase, kolagenaz, ak hyaluronidase, kidonk fòs ak fleksibilite po a pèdi, ak ondilasyon parèt[40] . Anpèchman aktivite kolagenaz ak elastaz se youn nan estrateji efikas pou pwoteje po a kont manifestasyon po aje [41]. Kòm klarifye nan Figi 3A, konpoze an te montre pwopriyete modere anti-kolagenaz pa ak valè ICso nan 419.10 ug/mL, konpare ak fenantrolin (IC50=182.80ug/mL) kòm yon estanda. Konsènan efè inhibition elastase (Figi 3B), li te montre yon efè remakab ak yon valè ICso nan 1.06 ug/mL, pandan y ap kontwòl pozitif la, N-methoxysuccinyl-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone, egzèse yon valè ICso nan 0.63 ug. /mL.An akò ak rezilta sa yo, yon etid anvan te rapòte ke ekstrè nan fèy metanol nan mango se te yon 10-pliye ki pisan inibitè elastaz pase tokoferol estanda a atribiye nan pwopriyete a anpèchman ki pa konpetitif nan mangiferin [42]. Pli lwen, rapò anvan yo te pwouve aktivite anti-elastaz konpoze polifenolik akòz prezans gwoup idrofil tankou hydroxyl oswa carboxyl ki ta ka enfliyanse pozitivman anpèchman konpetitif nan anzim [43].

2.3.2.Detèminasyon Aktivite Anti-Hyaluronidase ak Antityrosinase

Asid yaluronik se glikozaminoglikan ki pi popilè nan po a ki prezève kontni imidite li yo [44]. Li se idrolize anzimatik pa hyaluronidase sa ki lakòz yon pann nan entegrite nan estrikti po a ak dezòd la nan pèmeyabilite tisi [45]. Suppression hyaluronidase kenbe entegrite po, reta pwogresyon nan aje po a, epi kenbe idratasyon po [13]. Etid pi bonè yo te enfòme ke inibitè natirèl hyaluronidase te kapab sèvi byen kòm ajan anti-aje pou devlopman pwodwi ki gen rapò ak sante po [46]. Kòm ilistre nan Figi 4A, konpoze izole a ta ka konsiderableman diminye aktivite hyaluronidase ak yon valè ICso 1.65 ug/mL, konpare ak 6-O-palmitoyl L-ascorbic asid kòm yon kontwòl pozitif （2.55 ug/mL）.

Pami manifestasyon senesans po klinik, ipèpigmantasyon po a ka akselere pa anzim tirozinaz la nan prezans espès oksijèn reyaktif (ROS) [46]. Tirozinaz, yon glycoprotein ki gen kwiv, jwe yon fonksyon enpòtan nan sentèz melanin atravè idwoksilasyon L-tirozin nan 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA), ki te swiv pa oksidasyon DOPA nan DOPAquinone [47]. Se poutèt sa, repwesyon nan aktivite tirozinaz potansyèlman diminye ipèpigmantasyon po [48]. Soti nan opinyon sa a, konpoze an potansyèlman inibit tirosinaz ak yon valè ICso nan 0.48 ug/mL, konpare ak asid kojik kòm yon kontwòl pozitif (0.82 ug/mL) jan yo montre nan Figi 4B. Yon etid anvan sou ekstrè grenn Mangifera indica te montre rezilta eksepsyonèl anti-tirosinaz ak anti-hyaluronidase ki gen rapò ak kontni polifenolik [47]. Nan nivo molekilè, tou de tirozin ak DOPA gen gwoup idroksil ki eksprime kòm donatè proton esansyèl pou aktivasyon tirozinaz [49]. Menm jan an tou, konpoze an kenbe kat moyet idroksil nan kilè eskèlèt li yo ki ka konpòte kòm inibitè konpetitif lè yo reyaji kòm substrats nan tirozinaz.

3.Materyèl ak Metòd

3.1.Plant Materyèl

Fèy fre nan Mangifera indica L.fey yo te jwenn nan etap nan fruktifikasyon nan yon jaden prive nan zòn nan Abo-Zabal (N 30 degre 1743.5336 "E 3128.254), Gouvènman Qualiobya, peyi Lejip, sou 20 Jiyè 2021. Yo te dousman otantifye pa Madam Treize Labib, espesyalis taksonomi nan El-Orman Botanical Garden, Giza, peyi Lejip. Yo te mete espesimèn bon ak kòd PHG-P-MI-362 nan galri Depatman Farmakognosy, Fakilte Famasi, Inivèsite Ain Shams.

3.2.Ekstraksyon ak izolasyon kwomatografik

Fèy Mangifera indica L. (1.56 kg) seche lè yo te koule nan 70 pousan metanol (27L) pou 5 jou, epi yo te filtre. Filtrate a te totalman evapore nan vacuo nan 47 degre jouk sèk yo pwodwi yon rezidi sèk (9 0.36 g; 5.79 pousan w / w); yo te kalkile pwodiksyon ekstraksyon an kòm ekwasyon sa a: [pwa total ekstrè sèk/pwa total plant fresh] × 100. Apre sa, yo te aplike ekstrè yo jwenn sou fraksyon Diaion HP-20. Elisyon gradyan an (dlo/metanòl) te itilize. Yo te jwenn senk fraksyon pi gwo: 100 pousan dlo, 25 pousan metanol, 50 pousan metanol, 75 pousan metanol, ak 100 pousan metanol. Fraksyon 50 pousan metanol-idrosolubl (26.38 g) te ekspoze a poliamid ak elite okòmansman ak 100 pousan dlo, Lè sa a, gradyan eluye ak dlo / metanol (de 100:0 a 0:100, w / o) pou jwenn sis subfraksyon: 100. pousan dlo, 20 pousan, 40 pousan, 60 pousan, 80 pousan ak 100 pousan metanol. Yo te aplike 40 pousan subfraksyon metanol-idrosolubl (2.36 g) sou Sephadex LH-20 lè l sèvi avèk MeOH (elusyon izokratik) Fraksyon ki sanble yo te konbine epi evapore pou jwenn kat soufraksyon prensipal (A1-A4), Soufraksyon an. A3(0.86 g) te aplike sou plak preparasyon kwomatografi kouch mens (TLC) lè l sèvi avèk asid butanolacetik: dlo (BAW; 4:1:5) kòm yon devlopè faz mobil izole konpoze an kòm yon limyè- jòn poud amorphe.

3.3.Nikleyè rezonans mayetik (NMR) Spectrometer

Yo te itilize yon espektwomèt Bruker Ascend 400/R (Burker Avance Ⅲ, Fallanden, Swis) nan Sant pou Dekouvèt, Rechèch, ak Devlopman Dwòg, Fakilte Famasi, Inivèsite Ain Shams. 3.4.Mas Spectrometry

Yo te itilize yon espektwomèt mas Finnigan LCQ-DECA (San Jose, CA, USA) ki konekte ak yon detektè PDA pou analiz mas spectrometric. Echantiyon yo te fonn nan HzO:MeOH kòm yon melanj epi yo te sou fòm piki dirèkteman nan sistèm HPLC/ESI-MS. Tou de negatif ak pozitif ESI ionizasyon mòd ion yo te aplike nan kondisyon sa yo: siye ak nebulizing gaz, N2; tanperati kapilè, 250 degre; vòltaj espre, 4.48 kV; vòltaj kapilè, 39.6 V; vòltaj lantiy tib,10.00 V; ak mòd eskanè konplè nan ranje mas m/z 100-2000. Analiz ESI-MS pou konpoze izole a te fèt sou yon espektromèt mas Waters Xevo TQD ak mòd UPLC Acquity (Milford, CT, USA) nan Sant pou Dekouvèt Dwòg, Rechèch ak Devlopman, Fakilte Famasi, Inivèsite Ain Shams.

3.5.In-Silico Pharmacokinetics Prediksyon

Règ Lipinski nan senk, paramèt fizikochimik tankou lipofilisite, solubilite, ak pwopriyete farmakokinetik kòm absòpsyon GIT, distribisyon, metabolis, ak pèmeksyon po nan konpoze izole a te fèt lè l sèvi avèk SwissADME sou entènèt sèvè a [36]. 3.6. Evalyasyon Pwopriyete Anti-Po aje

3.6.1.Detèminasyon Aktivite Anti-Collagenase

Yo te evalye kapasite inibisyon konpoze izole a kont aktivite kolagenaz lè l sèvi avèk yon twous depistaj fliyometrik inibitè kolagenaz (BioVision, katalòg No. # K833-100) dapre metòd ki dekri anvan an [50]. Kontwòl referans lan te (1,10)-phenanthroline. Konpoze tès la ak kontwòl referans yo te prepare nan konsantrasyon 1,10,100, ak 1000 ug/mL pou analiz la. Konpoze tès la te prepare nan yon plak 96-byen ak yon fon plat. Premyèman, yo te fonn substra kolagenaz la nan tanpon kolagenaz (CAB). Echantiyon an pou analiz te prepare pa melanje konpoze an ak tou de kolagenaz ak CAB. Preparasyon echantiyon kontwòl inibitè yo te fèt pa melanje inibitè a ((1,10)-phenanthroline (80 mM)) ak anzim nan kolagenase dilye ak tanpon CAB. Kontwòl anzim te prepare pa melanje kolagenaz dilye a ak CAB. Yo te itilize tanpon CAB la kòm kontwòl background. Tout echantiyon yo te enkube nan tanperati chanm pou 15 minit. Pandan tan sa a, melanj reyaksyon an te prepare pa melanje kolagenaz la ak CAB. Nan etap sa a, melanj reyaksyon an te byen melanje ak echantiyon yo prepare. Yo te mezire fliyoresans imedyatman nan longèdonn eksitasyon 490 nm ak longèdonn emisyon 520 nm lè l sèvi avèk yon lektè mikroplak (FilterMax F5, Thermo Fisher). Mezi a te fèt nan mòd sinetik nan 37 degre pou 60 min. Echantiyon yo te prepare an kopi epi yo te kalkile efè inhibitor kolagenaz nan konpoze teste a lè w ap aplike ekwasyon sa a:

3.6.2.Detèminasyon Aktivite Anti-Elastase

Yo te envestige aktivite anti-elastaz nan konpoze an lè l sèvi avèk EnzChek§Elastase Assay Twous (E-12056) dapre metòd la te rapòte deja [51]. Konpoze tès la ak kontwòl referans yo te prepare nan konsantrasyon nan 0.1,10, ak 100 ug/mL pou analiz la. Yo te prepare konpoze an nan 96-plak byen ak fon klè pou tès fliyometrik la. Yon ti tan, solisyon anzim elastase, substra elastase, ak kontwòl inhibitor yo te prepare jan yo rekòmande. Lè sa a, yo te ajoute solisyon elastase dilye nan pwi yo. Konpoze teste, kontwòl inhibitor, ak kontwòl anzim yo te ajoute nan pwi ki vin apre yo. Echantiyon yo te melanje sou yon shaker epi yo te enkube pou 5 minit nan 37 degre. Tanpon tès yo te melanje ak substra a pou prepare melanj reyaksyon fliyometrik, ki te ajoute epi melanje byen ak chak echantiyon. Fluoresans la te mezire imedyatman nan 400 nm longèdonn eksitasyon ak 505 nm longèdonn emisyon lè l sèvi avèk yon lektè mikroplak (FilterMax F5, Thermo Fisher, Waltham, MA, USA). Yo te fè mezi a nan mòd sinetik nan 37 degre pou 30min pwoteje soti nan limyè. Tout echantiyon teste yo te prepare ak analize an kopi epi yo te kalkile efè elasstaz inhibitor konpoze tès la nan aplike ekwasyon sa a:

kote:

△RFU=yon chanjman nan inite fluoresans relatif EC=kontwòl anzim

3.6.3.Detèminasyon Aktivite Anti-Tyrosinase

Aktivite inhibitor lwil yo te teste kont kolagenaz lè l sèvi avèk Abcam@Tyrosinase Inhibitor Screening Colorimetric Assay Twous (katalòg # ab204715). Yo te fè tès la dapre manyèl yo bay la. Inibitè a estanda tirozinaz te asid kojik. Konpoze tès la te prepare nan konsantrasyon sòti nan 0.1 a 10 ug/mL pou analiz la. Apeprè 2 uL nan tirozinaz bay yo te melanje ak 48 uL nan tanpon tès tirozinaz. Echantiyon yo nan lwil esansyèl oswa kanpe (20 uL) yo te melanje ak melanj anzim la (50 μL) ak enkubasyon nan 25 degre pou 10 min. Lè sa a, 30μL nan solisyon substrate tirosinaz te ajoute nan pwi yo nan lwil esansyèl ak estanda. Apre sa, yo te mezire plak la espektwofotometrik nan yon longèdonn 510 nm pou 30-60 min nan 25 degre.

3.6.4.Detèminasyon Aktivite Anti-Hyaluronidase

Aktivite Hyaluronidase te evalye spectrophotometrically pa mezire kantite N-acetylglucosamine ki te fòme nan hyaluronate sodyòm [52]. Konpoze tès la ak kontwòl referans yo te prepare nan konsantrasyon ki sòti nan 0.1 a 10 ug/mL pou analiz la. Yo te melanje senkant mikrolit hyaluronidase bovine (7900 inite mL-1,(Sigma, St. Louis, MO, USA)) ki fonn nan 0.1 M tanpon acetate （pH=3.5） melanje ak 100 μL nan yon deziyen. konsantrasyon nan konpoze an fonn nan 5 pousan DMSO ak Lè sa a, enkube nan yon beny dlo nan 37 degre pou 20min. Yo te trete gwoup kontwòl la ak 100 μL nan 5 pousan DMSO olye pou yo echantiyon an. Yo te mezire dansite optik melanj reyaksyon an nan 585 nm. pa espektrofotometri.

3.7.Estatistik analiz

Tout eksperyans yo te fèt an triple. Done yo pou ICso nan aktivite anzim nan-ibitwa yo te estatistik egzamine lè l sèvi avèk yon analiz yon sèl-fason nan divèjans (ANOVA). Yo te fè analiz estatistik lè l sèvi avèk GraphPad Prism 5.0. 4. Konklizyon ak pèspektiv nan lavni

Pwodui natirèl ki sòti nan plant yo nan gwo demann nan mache mondyal la pou devlopman nouvo ajan pou desen kosmetik [4]. Nan etid sa a, yo te izole yon nouvo konpoze xanthone, 1.3.5,6-tetrahydroxyxanthone-C-4- -D-glucopyranoside, nan ekstrè fèy M. indica. Ki baze sou tès inhibition anzim, konpoze sa a ta ka pètèt montre bon anti-kolagenaz, anti-elastaz, aanti-hyaluronidase, ak anti-tirozinaz pwopriyete, kidonk konfere yon efè atenuasyon konplè kont anzim ki gen rapò ak aje po. Anplis de sa, yon paramèt fizikochimik nan silico ak etid ADME sipòte enkòporasyon li nan fòm dòz aktualite paske li montre pwomèt solubilite akeuz ak rezonab prevwa pénétration po. Se poutèt sa, konpoze sa a ta ka aplike kòm yon ajan bioaktif miltifonksyonèl favorab pou fòmil nutraceutical ak cosmeceutical. Men, evalyasyon toksikolojik ak klinik yo potansyèlman pwomèt.

Atik sa a soti nan Molecules 2022, 27, 2609. https://doi.org/10.3390/molecules27092609 https://www.mdpi.com/journal/molecules