Travay nan konpoze fenolik soti nan vejetasyon oliv Dlo nan poul broiler: Efè sou mikrobyota zantray ak sou etajè lavi a nan file tete Pati 3

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

2.7.Lipid oksidasyon

Yo te etidye oksidasyon lipid atravè mezi segondè (TBARs) ak prensipal (D232 ak D270)oksidasyonkonpoze (Tablo 7). Pa gen okenn diferans enpòtan pami twa gwoup eksperimantal yo, byenke li vo anyen ke te gen yon ti ogmantasyon nan valè TBAR yo pou poul nan gwoup L2 a parapò ak sa yo ki nan gwoup L1 ak L0, pandan y ap D232. te montre tandans opoze a. De endikatè analyse sa yo te siyifikativman korelasyon (TBARs kont D232 r=-0.5,p<0.001 and="" tbars="" vs.="" d270r=""><0.05). the="" cooking="" treatment="" caused="" decreases="" in="" the="" primary="" oxidation="" products=""><0.01), which="" were="" followed="" by="" increases="" in="" the="" secondary="" ones="" (p=""><0.001). no="" interactions="" between="" diet="" and="" cooking="" were="" observed.="" on="" the="" contrary,="" [31]and="" [45]="" observed="" a="" significant="" reduction="" in="" tbars="" in="" the="" breasts="" from="" chickens="" whose="" diets="" were="" supplemented="" with="" either="" olive="" cake="" or="" omww.="" similarly,="" [46]="" observed="" a="" reduction="" in="" tbars="" in="" the="" quadriceps="" femoris="" of="" chickens="" whose="" diets="" were="" enriched="" with="" omww="" permeate="" and="" the="">

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Oke et al. [16] te ajoute volim diferan nan ekstrè fèy oliv (5, 10, ak 15 mL / lit) nan dlo pou bwè a bay pou broilers souch Abor akre, obsève yon efè enpòtan sou rediksyon nan nivo san nan malondialdehyde (MDA). Ibrahim et al. [42], obsève yon rediksyon enpòtan nan konsantrasyon MDA nan tete poul jwenn lè yo ajoute rejim alimantè a ak ogmante nivo nan fèrmante oswa anzimatik fèrmante pòs oliv sèk. Kontrèman ak lòt etid, yon efè pwoteksyon kont oksidasyon grès miskilè nan tisi nan misk pa te obsève nan youn nan prezan. Gen anpil faktè ki jenere varyasyon ak diferans ki genyen ant etid yo. Apa de kwaze bèt la ak longè peryòd la angrese, lòt faktè tankou konpozisyon an eleman nitritif nan rejim alimantè a, konsomasyon nan manje, tanperati anviwònman an ansanm ak lòt kondisyon estrès ka mennen nan rezilta trè diferan ki souvan yo difisil pou konpare. Pa dènye kalite matris ak ki rejim alimantè a anrichi ak fenol (gato oliv, pòs oliv, ekstrè fèy oliv, ekstrè dlo vejetatif, jis nan non kèk) akòz konsantrasyon nan konpoze aktif yo ak prezans nan sibstans ki sou adisyonèl. ak yon aksyon sinèrjetik oswa pwoteksyon prezan nan menm matris la, ka siyifikativman enfliyanse aksyon an antioksidan tou de nan vivo ak nan tisi vyann apre touye [47]. Benefis sante potansyèl ki genyen nan entegre aditif antioksidan nan vyann fre ak pwodwi vyann yo pa toujou pwouve [48]. Okontrè, anpil primè ak segondè lipid ak pwoteyin oksidasyon konpoze, tankouidroperoksid, epoksid,4-hydroxynonenal, malonaldeyidyo rekonèt kòm kanserojèn potansyèl oswa ka afekte transdiksyon siyal selilè tankou se ka a nan konpoze carbonyl [49]. Nan ka vyann fre, posibilite pou ogmante potansyèl antioksidan atravè rasyon bèt yo se yon pwospè trè sijesyon, espesyalman nan itilizasyon natirèl olye ke sibstans sentetik. An reyalite, kontrèman ak pwodwi vyann ki baze sou kote teknoloji ofri posiblite diferan nan entèvansyon ogmante potansyèl la antioksidan, nan vyann fre sèl altènatif nan entèvansyon nan rejim alimantè a nan bèt se sa yo ki nan yon tretman ki vize a sifas la nan pwodwi a ki sepandan yo dwe. ki konsistan avèk lejislasyon an vigè. Kantite rezidyèl nan fenol mezire nan vyann nan tete nan etid la prezan se fasil lakòz benefis sante dirèk men endirèkteman ka fè. Pou egzanp, kwit vyann lan lakòz yon pèt nèt nan defans antioksidan tisi yo, kidonk anrichi tisi vyann lan pa konpoze ki toujou aktif menm apre tretman chalè, tankou se ka a nan.fenol, se nan enterè aplikasyon gwo nan gade nan yon ogmantasyon nan lavi etajè a ak sekirite nan pwodwi nan tèt li. Rezon ki fè ni nan videyo ni ansyen efè videyo yo te obsève kòm yon konsekans jijman an manje ak CPC, merite plis envestigasyon eksperimantal, espesyalman konsènan entèraksyon ki genyen antpolifenol dyetetikak mikrobyota entesten nan poul la sou ki li ogmante yon pati enpòtan nan efè yo potansyèl byochimik nan fenol [9,10].

3. Materyèl ak Metòd 3.1. Enstalasyon eksperimantal

Jijman an te eskize nan kay bèt volay nan Farm eksperimantal nan University of Padova (Legnaro, Padova, Itali) apre 6 mwa nan D '. Kay poul la te ekipe ak yon sistèm refwadisman, vantilasyon fòse, chofaj radyan, ak sistèm limyè kontwole. Yo te itilize yon total de 12 plim fil (2.5 × 2.4 m; 6 m2), yo chak ekipe ak senk bwè pwent tete (distans: 20cm) ak yon feeder sikilè (dyamèt: 30 cm) pou distribisyon manyèl nan manje. Chak plim te gen yon etaj konkrè ki kouvri ak fatra bwa bab (pwofondè 5 cm, 2.5 kg / m).

Limyè a te bay 24 h / jou pou 2 premye jou yo apre poul yo te rive nan kay bèt volay la. Lè sa a, kantite èdtan limyè yo te piti piti redwi jiskaske yon fotoperyod 18L: 6D te reyalize, ki te Lè sa a, kenbe soti nan 12 jou ki gen laj ivè.

Cistanche ka amelyore iminite

3.2. Bèt, Gwoup Eksperyans, ak Anrejistreman In Vivo

Etid la te apwouve pa Komite Etik pou Animal Eksperyans (Organismo per la Protezione del Benessere Animale; OPBA) nan University of Padova (pwojè 17/2016; No 154392 nan 10 Me 2016). Tout bèt yo te okipe dapre prensip yo. nan Directive 2010/63/EU[50] konsènan pwoteksyon bèt yo itilize pou eksperimantal ak lòt rezon syantifik. Chèchè ki enplike nan manyen bèt yo te swa espesyalis bèt (PhD oswa Mèt nan Syans Animal) ak / oswa pratik veterinè.

Yon total de 144 1-poussins ki te gen yon jou (Ross 308) te delivre pa yon kamyon komèsyal, an konfòmite ak Konsèy Konsèy (EC) No.1/2005 [51], nan enstalasyon yo eksperimantal nan Inivèsite a. Tout ti poul te pran vaksen kont maladi Marek a, bwonchit enfektye ak maladi Newcastle nan kouve a. Poussen yo te peze endividyèlman nan jou yo te rive, yo te idantifye pa yon mak janm, yo te ale owaza pami 12 plim yo (12 zwazo pou chak plim ak 10 zwazo/m²).）,ak Lè sa a, peze yon fwa pa semèn pou mezire pwa vivan yo jiskaske abataj komèsyal yo. Konsomasyon manje plim te mezire chak jou pandan jijman an. Twa rejim komèsyal yo te administre nan fòm konfizyon pandan jijman an (Martini SpA Longiano, Forli-Cesena, Itali): rejim P1 soti nan 0a 23 d, rejim P2 soti nan 24 a 37 d, ak rejim P3 soti nan 38 d jiska abataj nan 48 jou (gade materyèl siplemantè pou done analyse, Tablo S1). Konsantre fenolik brit la (CPC) te jwenn jan sa dekri nan [12], yon ti tan, OVW yo te trete lè l sèvi avèk anzim ak aktivite pektinaz ak emicellulosic ak Lè sa a, sibi mikrofiltrasyon, ultrafiltrasyon, ak osmoz inverse. CPC te ajoute nan rejim yo jan sa a: i) L0 Kontwòl rejim alimantè (P3), (ii) L1 Kontwòl rejim alimantè plis CPC (220 mg / kg manje kòm fenol total teyorik), (i) L2 rejim alimantè kontwòl plis CPC (440 mg / kg manje kòm teyorik). fenol total). Kontni aktyèl la nan konpoze fenolik endividyèl nan CPC ak nan rejim yo te rapòte nan Tablo S2. Chak rejim te repwodui nan kat plim (omojèn pou premye pwa ak varyasyon). CPC a te apwovizyone soti nan 24 jou (d) ki gen laj jiskaske touye komèsyal nan 48 d (gade Materyèl siplemantè pou konpozisyon fenolik CPC). Tout bèt yo te manje ad libitum pandan tout esè a, ak rejim siplemantè yo te prepare chak semèn.

Pou detèmine konpozisyon kominote mikwòb zantray la, yo te kolekte prelèvman kloakal (4 bèt/plim) nan 23,34, ak 44 d nan laj pou yon total de 12 bèt (4 sou chak rejim) ki te teste twa fwa (36 prelèvman). echantiyon yo kolekte an total).

3.3. Abataj Komèsyal, ak Anrejistreman Kalite Kadav ak Vyann

Nan laj 48 jou, apre yo fin retire manje ak dlo (pou 7 ak 2 èdtan, respektivman), tout poul yo te touye nan yon labatwa komèsyal yo. Poul yo te peze endividyèlman anvan yo mete yo nan bwat. Tout poul ki soti nan yon plim yo te chaje nan yon kaj transpò (wotè, 62.5cm × 160 cm × 25.0 cm; zòn etaj, 1 m²）. Chajman ak transpò soti nan enstalasyon eksperimantal yo nan labatwa komèsyal la ak depo anvan labatwa te pran apeprè 3 èdtan. Poul yo te touye selon pratik estanda nan labatwa komèsyal la. Kadav yo te refè apre 2 èdtan nan refrijerasyon nan 2 degre epi yo te peze endividyèlman pou mezire pousantaj rad labatwa [52].

Vennkat èdtan apre touye, kadav yo te diseke pou jwenn gwo misk pectoralis yo separe ak tete yo [53].

Pandan jijman an, te gen yon pèt anrejistre 17.4 pousan (25 poul) akòz mòtalite. Nan 119 kadav yo, 72 yo te asiyen nan analiz mikrobyolojik pandan peryòd lavi etajè a (Seksyon 2.4 eksplike etablisman an nan konpozisyon mikrobyota tete a pa metòd ki depann de kilti ak endepandan), pandan y ap 47 rès yo te jele (-40 degre ) epi answit itilize pou evalyasyon konpozisyon pwòch yo ak pousantaj oksidasyon lipid vyann kri ak kwit (paragraf 3.5).

3.4.Evalyasyon lavi etajè

3.4.1.Preparasyon tete poul pake

P gwo misk yo te pake endividyèlman nan ba-dansite plato polyethylene vlope nan yon fim PVC 12 μm-epè.（Weigel,KOEX412,Gwoup Fabbri,Vignola,Modena,Itali) ak estoke nan 4±1 degre .nan yon kabinè frijidè (Majolo" Plus 100 Seasoning Con-troller, Majolo, Cadoneghe, Padova, Itali). Ekspozisyon limyè te fiks soti nan 8:00 a 20:00 lè l sèvi avèk yon lanp fliyoresan 36 W [54]. Anviwònman depo yo te fèt ak entansyon pou imite kondisyon yo refrijerasyon pandan vant lan. Yo te pran echantiyon pakè yo owaza nan 24,72,120, 180, 216, ak 264 èdtan apati de la. dat labatwa

3.4.2. Analiz sansoryèl

Yo te fè yon evalyasyon sansoryèl tete fre dapre [37]itilize yon sistèm demerite 3-sòt pwen (1=pa akseptab,2=akseptab, 3=bon kalite). Endèks sansoryèl sentetik (SI) te kalkile kòm [(2 × nòt odè plis 2 × nòt koulè plis 1 × nòt teksti)/5], ak yon nòt nan 1.8 aji kòm papòt la defini echantiyon ki gate. Te analiz sansoryèl la fèt pa uit panelist ki resevwa fòmasyon.

3.4.3.Analiz mikrobyolojik vyann tete pandan peryòd etajè a

Analiz mikrobyolojik yo te fèt dapre pwosedi ki dekri nan [38]. Pectoralis gwo misk (apeprè 2 cm longè × 1 cm pwofondè × 2 cm lajè) yo te retire aseptik sou chak tete pou jwenn yon echantiyon reprezantan 25 pou chak tete. Echantiyon yo te melanje nan yon sache stomacher ak 225 mL dlo peptone tanpon epi analize apre dilusyon ki apwopriye yo. Pou fè ekstraksyon ADN, yo te kolekte 1 mL nan chak omojene nan 2 mL tib Eppendorf ak santrifuje nan 13,500 × g pou 1 min (Eppendorf santrifujeur 5425, Hamburg, Almay). Apre sa, yo te jete supernatant la epi yo te jele granules la nan -80 degre. Plizyè sib mikwòb yo te envestige pou dekri dinamik popilasyon mikwòb la pandan peryòd lavi etajè a jan sa a: Yo te evalye konte total solid (TVC) ak konte sikrotwofik total (TPC) sou Plak Count Agar (Biokar Diagnostics, Beauvais, Frans) , ak plak yo te enkube nan 30 degre pou 72 èdtan oswa nan 4 degre pou 10 jou. Enterobacteriaceae yo te enimere ak Violet Red Bile Glucose Agar (Biokar Diagnostics, Beauvais, Frans) nan 37 degre pou 24 èdtan. Bakteri asid laktik (LAB) te analize sou De Man, Rogosa, ak Sharpe Agar (Biokar Diagnostics, Beauvais, Frans) nan kondisyon anaerobik nan 30 degre pou 48 èdtan. Pseudomonas spp. konte a te evalye sou Pseudomonas Agar Base complétée ak cetrimide, fucidine, ak cephaloridine nan 25 degre pou 48 h (Oxoid Ltd., Basingstoke, Hampshire, UK). Konte bakteri ki pwodui H2S (Shewanella spp.) te pote sou agar fè (Lyngby, Laboratorios Conda, Torrejon de Ardoz, Espay) nan 25 degre pou 48 èdtan. Rezilta yo rapòte kòm log10 CFU/g vyann.

3.4.4.pH ak pèt degoute

Yon mèt pH (Portamess 910, Knick, Bèlen, Almay), ekipe ak yon elektwòd espesifik (Mettler Toledo, Milano, Itali), yo te itilize pou mezire valè pH pa ensèsyon nan misk yo pi gwo pectoralis an triple sou bò ventral yo. Pèt degoute te evalye an akò ak metòd la prezante pa [55] lè l sèvi avèk metòd la sak. Apeprè 2.5 cm tranch koupe soti nan sifas dorsal tete yo te antre nan sache an polietilèn epi yo te sispann lannwit lan nan 2±1 degre C. Pèt la degoute (pousan) te kalkile pa ekwasyon sa a: [(inisyal pwa - final pwa) / premye pwa. ].

3.4.5. Konsantrasyon fenol nan rejim alimantè a ak nan misk la tete

Ekstraksyon fenol yo te fèt sou 5 g echantiyon rejim mens melanje ak 5 0 mL metanol / dlo (80/20 (o/o) solisyon ki gen 20 mg / L butyl hydroxy-toluene (BHT), melanj lan. te homogenized lè l sèvi avèk yon disperser baton (IKA, T50 Ultra-Turrax, Werke, Staufen, Almay) pou 1 min nan 7000 rpm, santrifuje nan 9327 × g pou 10 min ak supernatant la refè. Pwosedi a te repete de fwa, ak ekstrè a kolekte. Lè sa a, te konsantre pa yon evaporateur rotary (Buchi Rotavapor, R-210, Swis) jiskaske yo rive nan yon volim final 20 mL.Yon katouch SPE Bond Elut Jr-C18,1 g (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). ), te deja aktive ak 10 mL metanol ak 10 mL dlo, yo te chaje ak 1 mL ekstrè akeuz elisyon an te fèt ak 50 mL metanol.Apre retire sòlvan anba vakyòm, ekstrè fenolik la te solubilize nan 1 mL nan yon solisyon. konpoze de metanol/dlo (50:50 v/v) ak filtre nan yon filtè sereng polyvinylidene fliyò (PVDF) (0.2 mm). analiz kalitatif ak quantitative nan konpoze yo fenolik nan ekstrè a te fèt dapre [31] pa

HPLC (Mod. 1100 Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA), ekipe ak yon kolòn C18 (Spherisorb ODS-1(250 mm × 4.6 mm) 5 um gwosè patikil, apwovizyone pa Waters SpA (Milan, Itali) . Yo te detekte konpoze fenolik yo lè w itilize DAD ki te fikse nan 280 nm. Yo te detèmine kantite polifenol yo lè w itilize yon sèl koub kalibrasyon pou chak konpoze epi rezilta yo eksprime kòm mg kg-1. Hydroxytyrosol (3,{{ 10}}DHPEA) te jwenn nan Cabru SpA (Milan, Itali), tyrosol p-HPEA te achte nan men Merck Life Science Srl (Milan, Itali), epi verbascoside te pran nan Extrasynthese (Genay, Frans). Fòm dialdehyde nan de-carboxymethyl oleuropein aglycone (3,4-DHPEA-EDA) te ekstrè soti nan lwil oliv jenn fi dapre pwosedi a rapòte nan [56].

Yon total de 10gram vyann yo te melanje ak 50 mL nan metanol ak dlo（80/20,o/ø）ki gen asid fòmik {{0}}.2 pousan ak 20 mg/L BHT. Solisyon an te omojeneize lè l sèvi avèk yon disperser baton (IKA, T50 Ultra-Turrax, Werke, Staufen, Almay) pou 1 min nan 7000 rpm, santrifuje nan 4146 × g pou 10 min ak supernatant la refè. Operasyon an te repete de fwa, ak de aliquot yo nan ekstrè a te kolekte epi metanol la te retire pa evaporateur rotary (Buchi Rotavapor, R-210, Swis). Ven mL ekstrè akeuz la te chaje nan katouch SPE Bond Elut HF Mega BE-C18,5g (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA), deja aktive ak 20 mL metanol ak 20 mL dlo; elisyon an te fèt ak 50 mL metanol. Apre retire sòlvan anba vakyòm, ekstrè fenolik la te refè ak 0.5 ml nan yon solisyon ki konpoze de metanol / dlo.（50∶50 o/ø）epi filtre atravè yon fliyò polivinilidèn（PVDF）filtè sereng (0.2 mm). Analiz HPLC nan ekstrè fenolik yo te fèt dapre [56] ak ekipman an menm jan yo rapòte pi wo a. Hydroxytyrosol la te detekte lè l sèvi avèk detektè fluoresans (FLD) ki te opere nan yon longèdonn eksitasyon nan 280 nm ak yon emisyon nan 313 nm. Kantifikasyon hydroxytyrosol te fè lè l sèvi avèk koub kalibrasyon an epi rezilta yo eksprime kòm ug/kg.

3.5. Konpozisyon apwoksimatif, pèt pou kwit manje, ak analiz asid gra

Konpozisyon pwòch la, pwofil asid gra, ak estabilite oksidatif yo te evalye sou tou de echantiyon kri (bò dwat P. major) ak kwit (bò gòch P. maijor). Apre yo fin dekonjle, yo te evalye pèt pou kwit manje a dapre[53] ak modifikasyon sa yo: Yo te peze mwatye gòch chak tete, yo te mete yo nan vakyòm, epi yo te kwit nan yon beny dlo a 80 degre pou 45 min. Apre sa, tete yo te refwadi jiska 4 degre epi yo te kenbe nan frijidè a (4 degre) pou 72 èdtan anvan yo depale epi yo te peze yo ankò pou kalkile pèt la pou kwit manje kòm [(vyann kri pwa-pwa vyann kwit) / pwa vyann kri. ]×100). Misk la, tou de kri ak kwit, te tise byen mouye (de fwa 2500rpm × 10 s, Retsch, Düsseldorf, Almay) epi yo te soumèt nan imidite, pwoteyin brit, ak sann [57] analiz, pandan ke yo te detèmine kontni an grès brit ak metòd la prezante. pa [58]. Yon ti tan, yo te ajoute 200 mL nan melanj dichloromethane/methanol 1:1 nan 5g echantiyon an, omojeneize nan 11,000/min pou 1 min (Ultraturrax T25 Basic, Ika Werke. Staufen, Almay), epi enkubate nan 60 C nan yon fou (sistèm PID, M120-VF, enstriman MPN, Bernaggio, MB, Itali) pou 20 min. Apre sa, yo te ajoute yon lòt 100 mL dichloromethane, epi apre omojènizasyon (11,000/min pou 1 min) yo te filtre echantiyon an (papye filtre rapid) epi yo te ajoute 100 mL KCl 1 M nan pèmeat la. Apre santrifugasyon (AvantiJ-E, Beckman Coulter, Brea, CA, USA) nan 1000 × g pou 30 m nan 4 degre, supernatant la te egzeyate ak ekstrè òganik la te filtre nan silfat sodyòm anidrid. Yo te itilize yon alikòt (apeprè 10 g) pou detèminasyon gravimetrik pousantaj grès la, rès la te distile (Rotavapor"R-210, Büchi, Essen, Almay), epi yo te itilize grès anidrid la pou plis analiz. Ester metil (FAME) yo te prepare lè yo peze 0.015 g grès anidrid nan yon tib an vè ak yon bouchon vis [39], ki te solubilize ak 1 mL 3 M HCl metanolik (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) epi enkube pou 2 èdtan nan 60 degre. Lè sa a, 1 mL dlo deyonize yo te ajoute ak,apre melanje,FAME yo te refè nan 1 mL n-hexane. FAMEs（1 μL）yo te analize pa yon gaz chromatograph (Shimadzu Italia Srl, modèl 2014, Milano, Itali) ekipe ak yon detektè iyonizasyon flanm dife (mete nan 250 degre) ak yon enjektè fann-splitless (mete nan 280 degre). Chanm nan tèmik, ki te kenbe kolòn nan kapilè (Supelco SP -2560; 100 m × 0.25 mm × 0.2 um), te kenbe nan 60 degre pou 8 min. Lè sa a, tanperati a te ogmante a 120 degre pou 1 min nan yon pousantaj de 10 degre / min, ak Lè sa a, soti nan 120 a 240 degre nan yon pousantaj de 2.5 degre C / min. Yo te kenbe izotèm final la nan 240 degre pou 20 minit. Asid gra yo te idantifye lè l sèvi avèk yon melanj estanda ekstèn (37 Component FAME Mix, Supelco, Almay). Analiz yo te fè an kopi.

3.6.Lipid oksidasyon

Konpoze oksidasyon prensipal yo te detèmine kòm dièn konjige pa analiz espektrofotometrik nan jaden an iltravyolèt lè l sèvi avèk yon vèsyon modifye nan metòd ki endike nan anèks la nan Konsèy Reg.EU/2015/1833 [59]. Yon ti tan,0.01±0.001g fatwa anidrid peze nan yon flacon gradye 10 mL epi li fonn pa siklohexane klas espektrofotometrik jiska mak la. Yo te itilize yon espektrofotomèt UV/Vis (Mod. 7800 Jasco UV/VIS, Oklahoma City, OK, USA) pou detèmine valè disparisyon espesifik nan 232 (dièn konjige) ak 270 nm (trièn konjige) lè l sèvi avèk menm sòlvan ak referans. Pwodwi segondè nan oksidasyon lipid yo te detèmine dapre metòd la prezante pa [60] ak modifikasyon, jan sa a: nan yon tib santrifujeur, 8 mL nan yon solisyon akeuz nan 5 pousan (m/v) asid trichloroacetic ak 5 mL nan n-hexane. yo te ajoute nan apeprè 2g echantiyon omojènize a. Apre homogenization ak Ultraturrax pou 30s yo nan gwo vitès. echantiyon an te santrifuje pou 3 min nan 3000 × g nan 4C(Eppendorf 5810R; Eppendorf, Hamburg, Almay), epi yo te retire supernatant la. Yo te filtre echantiyon an atravè yon filtè papye rapid, epi yo te ajoute 2.5 ml filtraj nan 2.5 ml nan yon solisyon akeuz 0.02 M asid thiobarbituric epi enkube pou 35 minit nan 95 degre C nan yon beny thermostated (travay ED {{31} }; Seelbach, Baden-Württemberg, Almay). Apre refwadisman, yo te pran absorbans la lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt mete nan yon longèdonn 532 nm. Done yo eksprime kòm miligram malondialdehyde pou chak kilogram vyann. Mezi yo te fèt an kopi sou tou de tete poul kwit ak kri.

3.7.DNA Ekstraksyon ak Preparasyon Bibliyotèk NGS

ADN te ekstrè lè l sèvi avèk yon Twous Izolasyon ADN DNeasy PowerSoil (Qiagen, Hilden, Almay). Granules omojene vyann tete yo te dekonjle ak 600 uL tanpon Lysis ki bay twous la. Yo te koupe prelèvman kloakal ak sizo esteril, yo te mete yo nan yon mikwotib ki gen 600 uL tanpon Lysis ak 6 uL 2-mercaptoethanol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). Tib yo te melanje byen lè l sèvi avèk vortex pou 5 min epi yo te retire prelèvman. Pou toude echantiyon kloakal ak granules vyann tete yo te ajoute yon total de 100 mg pèl esteril 0.1 mm (BioSpec, Bartlesville, OK, USA), epi yo te itilize yon moulen pèl (TissueLyser, Qiagen, Hilden, Almay) pou fè dezòd nan etap souke gwo vitès (2 × 30 s nan 30 Hz). Yon total de 40 uL nan proteinase K (Qiagen, Hilden, Almay) te ajoute ak enkubasyon nan 56 degre pou 90min. Apre etap sa a, yo te swiv enstriksyon manifakti DNeasy PowerSoil9DNA Isolation Kit la. Konsantrasyon ak pite ADN yo te analize lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt (NanoDrop ND-1000, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA).

Yo te itilize yon apwòch anplifikasyon de etap pou konstwi bibliyotèk ADN 16S la. Echantiyon yo te anplifye nan reyaksyon 20-μL,chak konpoze de 5 μL ADN dilye,{{0}}.4 uM chak primè (Tablo 1), 0.25 mM deoxynucleotide (dNTP), 1 × Phusion HF tanpon, ak 1 U Phusion High-Fidelity DNA polymerase (New England BioLabs, Inc., Ipswich , MA, USA). PCR te fèt nan yon Thermal Cycler 2720 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) ak 25 sik 95 degre pou 30 s, 60 degre oswa 49 degre C pou 30 s, 72 degre C pou 45s. ak yon ekstansyon final nan 7 min nan 72 degre. Yo te fè twa kopi PCR pou chak echantiyon.

Pwodwi yo te pirifye lè l sèvi avèk SPRIselect Pirifikasyon Twous (Beckman Coulter Life Sciences, Indianapolis, IN, USA) epi, apre pirifikasyon chaplèt, gwoup sib la te konfime lè l sèvi avèk jèl agarose 1.8 pousan. Kod bar yo te entwodwi pa yon dezyèm analiz PCR ak primè ki bay platfòm espesifik. Chak 50-uL reyaksyon PCR te genyen pwodwi PCR la, 0.2 μMof chak primè（Tablo 1）,0.3 mMdNTP,1 × Phusion HFbuffer,ak1UPhusion-wo fidelite ADN polymerase. Yo te fè dis sik pwofil PCR ki dekri anwo a.

Pwodwi PCR yo te pirifye lè l sèvi avèk twous pou pirifye SPRIselect (Beckman Coulter Life Sciences, Indianapolis, IN, USA). Apre pirifikasyon final la, yo te mezire chak echantiyon lè l sèvi avèk yon Fluoromèt Qubit 2.0 (Invitrogen, Life Technologies, Monza, Itali). Kalite bibliyotèk anplikon yo te teste lè l sèvi avèk yon Bioanalyzer Agilent 2100 (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA). Bibliyotèk yo te sekans lè l sèvi avèk platfòm Illumina MiSeq ak yon kouri 300-sik (Macrogen Inc., Seoul, Kore di).

4. Konklizyon

Anrichisman alimantasyon poul ak fenol yo te jwenn nan filtraj ak konsantrasyon dlo vejetasyon moulen lwil oliv pandan 24 jou pa te asosye ak diferans ki genyen nan kwasans bèt, to konvèsyon manje, oswa sede kadav la. Etid la nan mikrobyota entesten an te montre yon efè enpòtan nan tan manje, men se pa nan rejim alimantè per se sou altènasyon nan gwoup mikwòb. Nan lòt men an, konpozisyon mikrobyota vyann lan pandan peryòd etajè a te montre pi gwo kwasans Pseudomonas nan echantiyon poul ki te manje manje ki rich ak fenol. Finalman, pa gen okenn diferans ki te obsève nan mitan rejim alimantè yo ki gen rapò ak makè yo analyse (TBARs ak dienes konjige) nan pwosesis la oksidasyon lipid. Olye de sa, yo te idantifye hydroxytyrosol nan tisi nan misk echantiyon yo soti nan poul ki konsome manje ak fenol ajoute, ki montre absòpsyon entesten depann de dòz la. Depi pwosesis oksidatif la sitou fèt nan estrikti manbràn selil misk yo, plis etid yo nesesè pou pi byen konprann distribisyon HT nan konpatiman selilè ak ekstraselilè.

Atik sa a soti nan Molecules 2021, 26, 4307. https://doi.org/10.3390/molecules26144307 https://www.mdpi.com/journal/molecules