Dekolorizasyon anzimatik nan melanin pa Lignin peroksidaz soti nan Phanerochaete Chrysosporium

Rezilta nwar po kòm yon konsekans akimilasyon melanin pigman po. Pou konbat sa a, anplitid la nan ajan eklèsi po yo disponib nan Commerce, pi fò nan yo ki anpeche sentèz melanin. Dekolorizasyon melanin se yon metòd altènatif pou eklèsisman po. Nan etid sa a, nou montre ke lignin peroksidaz (LiP), yon anzim ekstraselilè ki pirifye nan Phanerochaete chrysosporium NK-1 izole nan tè forè ka efektivman degrade ak dekolorize melanin nan vitro. Kondisyon dekolorizasyon ki gen ladan pH, tanperati, tan enkubasyon, konsantrasyon anzim, ak adisyon medyatè yo te envestige pou optimize kondisyon reyaksyon yo. Rezilta yo endike ke pH 3, 40 degre, 15 IU/ml, ak 10 h enkubasyon se te kondisyon ki pi bon pou dekolorizasyon melanin la. Itilize nan medyatè a, alkòl veratryl te jwenn tou efikas pou amelyore efikasite dekolonizasyon melanin, ak jiska 92 pousan dekolorizasyon. Rezilta mikwoskòp elèktron yo te montre espas vid sou granules melanin trete yo konpare ak echantiyon ki pa trete a, ki endike degradasyon melanin. Chanjman nan rejyon anprent melanin yo te obsève. Ant nimewo ond 1500-500 cm-1, pou egzanp, prezans nan nouvo pik nan melanin trete a nan 1513, 1464, ak 1139 cm-1 CH2, CH3 pliye, ak C-O-C detire reprezante chanjman estriktirèl. Yon nouvo pik nan 2144 cm-1 (alkynyl C≡C detire) te detekte tou nan melanin dekolorize a. Etid cytotoxisite la montre ke melanin trete a ak LiP gen efè cytotoxik ki ba; sepandan, medyatè a nan alkòl veratryl te kapab lakòz gwo mòtalite ki sijere ke itilizasyon li yo ta dwe metikuleu teste nan fòmile pwodwi sante ak swen pou po. Konklizyon yo nan etid la sijere ke LiP ki te pwodwi pa Phanerochaete chrysosporium gen potansyèl pou yo itilize nan endistri medikal ak kosmetik, patikilyèman pou devlopman nan ajan blanchi kosmetik biobased.

Dapre etid ki enpòtan, cistanche se yon zèb komen ke yo rekonèt kòm "zèb mirak ki pwolonje lavi". Eleman prensipal li se cistanoside, ki gen efè divès kalite tankou antioksidan, anti-enflamatwa, ak pwomosyon fonksyon iminitè. Mekanis ki genyen ant cistanche ak blanchiman po manti nan efè a antioksidan nan glikozid cistanche. Melanin nan po moun pwodui pa oksidasyon tirozin ki katalize pa tirozinaz, ak reyaksyon oksidasyon mande pou patisipasyon oksijèn, kidonk radikal oksijèn san yo nan kò a vin yon faktè enpòtan ki afekte pwodiksyon melanin. Cistanche gen cistanoside, ki se yon antioksidan epi li ka diminye jenerasyon radikal gratis nan kò a, kidonk anpeche pwodiksyon melanin.

where can i buy cistanche

Klike sou Cistanches Herba Pou Blanchiman

Pou plis enfòmasyon:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Melanin se yon gwoup konplèks, rekalsitran, ak omniprésente polisiklik bio-polymeric pigman po ki pwodui pa selil po espesyalize yo rele melanosit 1,2. Fonksyon prensipal li se pwoteje po a kont radyasyon UV danjere nan limyè solèy la lè li fòme bouchon supranukleyè alantou ADN nan selil po yo 3. Anplis, li responsab pou diferan koulè po pa absòbe divès radikal gratis nan sitoplasm la. Pifò nan ajan po-eklèjman sa yo jwenn nan resous natirèl anpeche pwodiksyon melanin nan selil po yo pa anpèchman nan anzim tirozinaz, repwesyon nan byosentèz pigman, ak atravè kèk chemen altènatif. Konpoze divès kalite tankou hydroquinone, mono-benzyl etè nan idrokinon, mèki, kortikoterapi, ak arbutin yo te itilize nan fòmilasyon komèsyal pou pwodui kosmetik blanchiman po, sepandan, aplikasyon yo te asosye ak efè segondè grav. Pou egzanp, yo rapòte mèki lakòz domaj nan ren, ak plon yo te rapòte lakòz enkyetid, depresyon, ak sikoz 4,5. Itilizasyon kortikoterapi ka lakòz sendwòm Cushing, dyabèt, tansyon wo, ensifizans adrenal, imunosuppresyon, eklèsi po, akne, dèrmatoz, ak ipètrikoz 6. Tain et al. (2009) rapòte ke itilizasyon arbutin nan pwodui kosmetik blanchiman po te efikas pou konsantrasyon jiska 3 pousan men yon ogmantasyon plis nan konsantrasyon an te lakòz efè sitotoksik. Lè ou konsidere limit sa yo, aplikasyon pou inhibiteurs sa yo nan pwodui kosmetik blanchiman po yo te lajman kritike pa otorite sante ak sekirite. Li te pwopoze ke pwodui kosmetik blanchiman po ka rive jiska 155.44 milya dola ameriken pa ane 2021 ak yon to kwasans anyèl 4.9 pousan. Akòz demann lan ogmante pou ajan blanchiman po san danje ak natirèl atravè lemond, dekolonizasyon melanin anzimatik te resevwa enterè konsiderab 7-9.

cistanche sold near me

Anzim mikwòb ekstraselilè tankou lakaz, peroksidaz Manganèz, ak peroksidaz lignin (LiP) te deja teste pou dekolorizasyon melanin epi yo konsidere kòm yon altènatif potansyèl ekolojik-zanmitay nan pwodwi chimik toksik yo 1. Pami sa yo, LiP te jwenn trè efikas pou dekolorizasyon an. nan melanin paske nan gwo potansyèl redox li yo oksidasyon veratryl alkòl (VA) pase lòt anzim yo ki gen rapò. Malgre gwo potansyèl oksidasyon ak kataliz efikas nan melanin, pwodiksyon volumetrik ak difikilte nan pirifikasyon se limit yo pi gwo pou aplikasyon komèsyal nan LiP nan ajan blanchiman po. Anplis de sa, LiP pèdi aktivite anzimatik li pou dekolonizasyon melanin anba oksijene idwojèn depase, ki konsidere kòm kritik pou oksidasyon melanin. Anplis wòl enpòtan li yo, H2O2 inaktive LiP konsa diminye pèfòmans katalitik anzim la.

Chanpiyon blan-pouri, Phanerochaete chrysosporium te rapòte kòm yon resous byolojik efikas pou pwodiksyon LiP. Sepandan, kounye a, pi gwo obstak nan aplikasyon an nan anzim sa a gen ladan devlopman nan pwosesis fèmantasyon pri-efikas, izolasyon nan tach pwodiktif, ak pirifikasyon nan anzim la depi chanpiyon an pwodui yon melanj de 17 isoenzymes. Pou adrese pwoblèm pwodiktivite ki ba ak sansiblite anzim yo, etid prezan an te fèt pou devlope yon pwosesis pri-efikas ak efikas pou pwodiksyon LiP soti nan yon izole endijèn Phanerochaete chrysosporium. Chanpiyon an pwodui yon konsantrasyon relativman wo nan LiP ak pi bon efikasite katalitik nan konsantrasyon anzim relativman pi ba pase deja rapòte. Pwodiksyon an te pote soti nan fèmantasyon submerged lè l sèvi avèk VA kòm medyatè a. Yo te envestige kondisyon reyaksyon pi gwo pou dekolonizasyon melanin ak LiP pirifye ansanm ak detèminasyon efè sitotoksisite anzim pirifye a.

Rezilta yo

Dekolorasyon melanin pa Phanerochaete chrysosporium NK-1.Tansyon chanpiyon yo te teste pou dekolorasyon melanin. Yo te bay fongis yo tach sou mwayen solid ki gen melanin ak VA kòm induktè LiP. Apre sèt jou enkubasyon, Phanerochaete chrysosporium NK-1 te montre kapasite pou dekolorize melanin, jan yo montre nan Fig. 1.

cistanche flaccid

Kondisyon pou dekolorasyon melanin optimal.pH. Yo te itilize anzim nan pirifye pou dekolorizasyon melanin sentetik nan vitro. Yo te obsève efè diferan kondisyon sou dekolorasyon melanin 10. Efè pH sou dekolorasyon melanin pa LiP yo te egzamine an premye. Pou sa, dekolorizasyon melanin te fèt nan diferan kondisyon pH varye ant 2.0 ak 6.0 nan yon tanperati 30 degre tou de nan prezans ak absans VA pou yon peryòd enkubasyon nan 6 èdtan. Rezilta nan Figi 2 montre ke an jeneral, dekolorizasyon melanin nan prezans VA te pi wo nan tout kondisyon pH. Patikilyèman, li pi enpòtan nan kondisyon pH ki pi wo. VA ka ede nan fòmasyon radikal cation 11. Radikal sa yo gen pi wo potansyèl redox pou atake lyezon C-C ki pa espesifikman nan melanin ak rezilta nan dekolorizasyon 12. Nan prezans VA, dekolorasyon melanin ki pi wo a 88 pousan te reyalize. nan pH 3 ki te swiv pa 71 pousan nan pH 2, tandiske dekolorasyon melanin ki pi ba a nan 39 pousan te obsève nan pH 6. Nan absans VA, dekolorasyon melanin ki pi wo nan 86 pousan te obsève nan pH 3 tandiske pi ba a. dekolorasyon melanin nan 35 pousan ak 36 pousan te obsève nan pH 5 ak 6, respektivman. Melanin dekolorasyon pa LiP nan etid sa a te trè efikas nan pi ba kondisyon pH, sa vle di, 2 ak 3 (Fig. 2), byenke lòt etid te montre yon kondisyon pH optimal nan 4 1.

Tanperati. Dekolorizasyon Melanin pa LiP te etidye nan diferan tanperati ki sòti nan 20-60 degre tou de nan prezans ak absans VA nan yon peryòd enkubasyon nan 6 èdtan. Nan absans VA, pousantaj menm jan an (19 pousan) nan dekolorasyon melanin yo te obsève nan tanperati 20 ak 30 degre (figi 3). Dekolorasyon melanin ki pi wo ak pi ba a nan absans VA te obsève nan 40 ak 50 degre, respektivman. Sepandan, ak VA nan solisyon an, dekolorasyon melanin ogmante soti nan 20 a 40 degre ak diminye jiska 60 degre. Nan prezans VA, dekolorasyon melanin ki pi wo a se apeprè 60 pousan nan 40 degre. Dekolorizasyon an jeneralman pi ba paske eksperyans lan te fèt nan yon kondisyon pH pi modere.

cong rong cistanche

LiP konsantrasyon. Dekolorizasyon melanin te egzamine tou ak varyasyon nan konsantrasyon anzim yo. Senk konsantrasyon diferan, sa vle di, 5, 10, 15, 20, ak 25 IU / mL nan LiP yo te egzamine pou dekolorasyon melanin nan prezans ak absans VA, jan yo montre nan Fig. 4. Surprenante, konsantrasyon anzim ki pi efikas te 15. IU/ml pou tou de solisyon ak ak san VA. Apre yon peryòd enkubasyon 6 èdtan, dekolorasyon melanin ki pi wo a te 92 pousan nan prezans VA ak 70 pousan nan absans medyatè a lè l sèvi avèk yon konsantrasyon anzim nan 15 IU/mL, tandiske dekolorasyon melanin ki pi ba a nan 23 pousan te obsève nan absans VA lè l sèvi avèk 5 IU/mL LiP. Li pa klè ke dekolorizasyon an mwens efikas ak gwo konsantrasyon anzim, sa vle di, 20 ak 25 IU / ml (figi 4).

Tan enkubasyon. Eksperyans dekolorizasyon yo te pote soti nan 2, 4, 6, 8, ak 10 èdtan nan enkubasyon. Reyaksyon sa yo te pote tou nan prezans ak absans VA. Rezilta yo te montre ke efikasite nan dekolorizasyon pozitivman korelasyon ak tan an enkubasyon, jan yo espere (Fig. 5). Ogmantasyon limit delokalizasyon an te pi enpòtan nan enkubasyon inisyal la. Dekolorasyon melanin ki pi wo a (68 pousan) te obsève apre yon peryòd enkubasyon nan 10 èdtan nan prezans VA ak 59 pousan nan absans VA. Melanin dekolorizasyon an te osi ba ke 15 pousan apre 2 èdtan nan enkubasyon san VA. Se poutèt sa, baze sou rezilta tès yo, nou te konkli ke kondisyon yo pi bon yo se pH 3, 40 degre, 15 IU / ml, ak 10 h enkubasyon.

maca ginseng cistanche sea horse

Analiz SEM (Scanning Electron Microscope) ak FTIR (Fourier-transform enfrawouj spectroscopy).Chanjman mòfolojik ak estriktirèl nan melanin yo te karakterize pa SEM ak FTIR, respektivman. Melanin dekolorize a te analize pa SEM pou obsève nenpòt chanjman sifas mòfolojik. Melanin sentetik san okenn tretman anzim te itilize kòm kontwòl la. Jan yo montre nan Fig. 6, te gen espas vid sou granules melanin trete yo konpare ak echantiyon ki pa trete a, ki sijere patikil melanin yo te atake pa anzim la.

cistanche tubulosa adalah

Melanin dekolorize te analize tou pa FTIR ak melanin ki pa trete kòm kontwòl la (figi 7). Anprent molekilè melanin dekolorize ak melanin ki pa trete yo te jwenn epi yo konpare yo pou konfime nenpòt chanjman estriktirèl nan melanin trete a 13. FTIR spectre melanin (C18H10N2O4) te montre yon spectre absòpsyon laj nan 3272 cm-1 ki ta ka atribiye a karakteristik O a. –H etann oswa N–H etann vibrasyon asid karboksilik la, ak gwoup fenolik. Chanjman yo nan spectre FTIR nan melanin trete a te aparan. Band laj nan nimewo ond 3000–3500 cm−1 endike prezans gwoup -NH ak -OH nan echantiyon kontwòl ak echantiyon trete. Sepandan, entansite echantiyon trete a siyifikativman pi wo pase echantiyon kontwòl la, sigjere ke tretman an te ajoute gwoup fonksyonèl sa yo nan estrikti a pa atak anzimatik. Pik yo nan 2884.4 cm-1 ak 2822 cm-1 endike prezans nan gwoup alkil nan kontwòl la pandan y ap nan melanin dekolorize a, pik la nan nimewo ond 2884.4 cm-1 te absan. Pik la nan 2822 cm-1 devye nan longèdonn 2835.92 cm-1 ki reprezante chanjman estriktirèl nan melanin trete nan rejyon sa a tou. Pik la nan nimewo ond 1710 cm-1 nan kontwòl la te atribiye a prezans asid karboksilik. Pik sa a te tou absan oswa redwi nan yon gwo limit nan melanin dekolorize, ankò konfime chanjman yo estriktirèl nan melanin nan trete. Te gen tou kèk chanjman nan rejyon anprent. Ant nimewo vag 1500-500 cm-1, pou egzanp, prezans nan nouvo pik nan melanin trete a nan 1513, 1464, ak 1139 cm-1 reprezante chanjman estriktirèl. Yon nouvo pik nan 2144 cm-1 te detekte tou nan melanin dekolorize a.

cistanche powder bulk

Efè sitotoksisite.Sitotoksisite melanin degrade ak LiP te envestige lè l sèvi avèk metòd sitotoksisite kribich Eau 14,15. Nan etid la prezan, efè cytotoxik melanin trete ak LiP yo te ba ak pousantaj lav kribich solid ki pi gran pase oswa egal a 90 pousan (Tablo 1). Ogmantasyon nan konsantrasyon LiP pa te gen okenn enpak sou rantabilite nan lav kribich la pou jiska 80 ul / ml (~80 IU / ml), sijere aktivite ki ba cytotoxik li yo. Nan kontwòl pozitif ak VA, to mòtalite a te 100 pousan, sa ki sijere ke yo ta dwe pran prekosyon pandan aplikasyon an nan LiP nan prezans VA kòm yon medyatè nan domèn medikal ak kosmetik.

cistanche nutrilite

Diskisyon

Toksisite aditif chimik yo itilize nan fòmilasyon po blanchiman te soulve enkyetid grav epi li mande apwòch altènatif ki ofri benefis sante ak sekirite. Nan etid la prezan, yo te evalye yon apwòch anzimatik ak posiblite pou ranplase pwodwi chimik piman bouk yo ak pwodwi natirèl ekolojik-zanmitay. Itilize nan anzim kòm yon engredyan aktif nan po blanchi fòmilasyon ka trè avantaje akòz espesifik substra segondè yo epi pa gen okenn efè sitotoksik 16. Yo te itilize yon izole endijèn nan Phanerochaete chrysosporium pou pwodwi LiP anba kondisyon fèmantasyon submerged. Précédemment, P. chrysosporium te rapòte sekrete anzim ekstraselilè, ki kapab degrade melanin 17. Pwosesis pou pwodiksyon optimal LiP te etidye lè l sèvi avèk konsepsyon Placket-Burman. Anplis nivo optimal nan eleman mwayen (done siplemantè), pH ak tanperati jwe yon wòl enpòtan tou de an tèm de pwodiksyon anzim ak aktivite katalitik li yo. Yo te jwenn pH la pi bon pou pwodiksyon maksimòm LiP soti nan P. chrysosporium asid (pH 3). Li te rapòte ke pandan kwasans lan nan chanpiyon an, li sekrete asid òganik ki mennen nan yon gout pH osi ba ke 2 ki ankouraje pH-induit asid-catalyzed idroliz nan biopolymers konplèks. Anplis de sa, P. chrysosporium pwodui LiP asid ki estab ki lakòz dekolorasyon melanin. Rezon posib pou amelyore kataliz melanin pa LiP ka atribiye a wòl entèraksyon supramolekilè ki ede kenbe konfòmasyon pwoteyin apwopriye nan pi wo konsantrasyon pwoton 1.

how to use cistanche

Nan ka tanperati a, pi gwo kwasans chanpiyon an ak pwodiksyon anzim te reyalize nan 40 degre, ki koresponn ak abita natirèl P. chrysosporium. Kapasite LiP pou degrade melanin baze sou resanblans estriktirèl ant melanin ak lignin 18. Efikasite degradasyon melanin pa LiP in vitro te gen rapò ak plizyè faktè tankou pH, tanperati, konsantrasyon anzim, ak tan enkubasyon tou. kòm egzistans VA. Yon liP ka oksidasyon VA nan radikal kasyon li yo (VA∙ plis) epi sèvi kòm yon medyatè redox ki plis dekolorize melanin, jan yo montre nan Fig. 8.

H2O2 se yon substra esansyèl kòm yon aseptè elèktron final pandan dekolorizasyon melanin. LiP fasil inaktive nan konsantrasyon depase yo ki pwovoke rupture nan estrikti heme a oswa fòmasyon nan konpoze inaktif III a. Yo rapòte ke efè inhibition sa a ka soumèt pa oksidasyon VA VA cation radikal 1. LiP oksidasyon VA nan radikal kasyon VA, ki aji kòm yon medyatè redox pou dekolorize melanin. VA se yon konpoze natirèl ki pwodui nan fongis blan-pouri ki espere gen mwens efè segondè. Sepandan, prezans medyatè VA a te lakòz gwo mòtalite nan òganis teste yo, konpare ak efè sitotoksik ki ba nan melanin trete ak LiP. Li ta dwe ak anpil atansyon teste nan fòmilasyon an nan pwodwi sante ak swen pou po.

rou cong rong benefits

Nou te jwenn 88 pousan dekolonizasyon lignin nan pH 3 ki endike ke pH ba favè kontak dirèk nan anzim nan ak VA. Konklizyon menm jan an te rapòte tou pa Sung et al. (2019), ki te jwenn ke pH ba dwe kenbe pou efikasite katalitik optimal. Dekolorizasyon an ogmante tou dousman nan fen tanperati ki anba a (20-40 degre) epi li diminye rapidman pandan tanperati enkubasyon an ap kontinye ogmante, sa ki sijere denaturasyon ka rive nan tanperati ki pi wo. Li jeneralman espere ke to degradasyon melanin ogmante ak ogmante konsantrasyon anzim yo. Surprenante, rezilta nou yo te montre yon diminisyon nan efikasite dekolorizasyon ak ogmante konsantrasyon anzim yo. Nan gwo konsantrasyon, aktivite ki ba a ta ka atribiye nan lòt kondisyon reyaksyon, tankou tanperati ak pH. Chanjman nan kondisyon sa yo ta ka lakòz chanjman nan achitekti supramolekilè pwoteyin nan konpwomèt efikasite nan anzim-substra obligatwa epi mennen nan yon pousantaj reyaksyon diminye 1. Sepandan, aspè patikilye sa a bezwen plis envestigasyon. Okontrè, degradasyon nan melanin ogmante ak ogmantasyon nan tan enkubasyon sijere anzim la te estab pandan peryòd tretman an. Nan tout kondisyon eksperimantal yo, yo te jwenn dekolorizasyon pi efikas nan prezans VA paske li fasilite fòmasyon nan radikal ki gen gwo potansyèl redox ki ta ka pa espesifikman atake lyezon kabòn-kabòn. Analiz yo SEM ak FTIR konfime tou ke tretman an anzimatik te rann chanjman mòfolojik ak estriktirèl nan melanin.

Ki baze sou rezilta nou yo, li sijere ke P. chrysosporium ka itilize kòm yon resous byolojik ki pisan pou pwodiksyon komèsyal LiP pou aplikasyon li yo nan endistri medikal ak kosmetik, patikilyèman pou devlopman nouvo ajan blanchi kosmetik.

Materyèl ak metòd

Izolasyon ak idantifikasyon souch chanpiyon.Yo te fè izolasyon chanpiyon an nan yon sit ki kontamine itilize kòm yon sit jete pou materyèl bwa pou yon tan long. Yo te pran echantiyon an nan boutèy esteril epi transfere nan laboratwa a pou pirifye. Pirifikasyon te fè sou yon mwayen agar dextrose seaboard. Kat koloni chanpiyon diferan yo te izole ak pirifye nan echantiyon an. Yo te fè tès depistaj pou pi bon souch la ki baze sou dekolorasyon melanin ak pwodiksyon byomass nan prezans melanin kòm sèl sous kabòn nan mwayen sèl mineral (MSM). Dapre tès depistaj la, yo te idantifye òganis chwazi a nan sekans ADN 5.8S rRNA ak 18S rRNA lè l sèvi avèk primè inivèsèl ITS-1 ak ITS-4 10. ADN jenomik yo te ekstrè dapre metòd Anderson et al. 19. Apre pirifikasyon, sekans pwodwi PCR yo te fèt. Sekans yo te aliyen lè l sèvi avèk zouti BLAST nan NCBI a epi yo te analize homolog pou filojeni lè l sèvi avèk Molecular Evolutionary Genetic Analysis (MEGA). Dapre yon posiblite maksimòm, yo te konstwi yon pye bwa vwazen pou idantifikasyon souch chanpiyon izole a. Sekans yo te soumèt bay NCBI GenBank la ak yon nimewo asansyon nan KX064682.1. Analiz filogenetik te revele ke izole KX064682.1 se te yon souch Phanerochaete chrysosporium NK-1.

Esè plak pou dekolorizasyon melanin.Chanpiyon blan-pouri an, Phanerochaete chrysosporium NK-1, te itilize pou dekolorasyon melanin. Phanerochaete chrysosporium li te ye pou pwodui LiP. Melanin sentetik (B049-97–6) te itilize kòm melanin modèl nan tout eksperyans dekolorizasyon melanin yo. Yo te itilize yon mwayen modifye ak VA 2 kòm induktè LiP pou teste kapasite melanin dekolorizasyon chanpiyon an. Plak Petri yo te itilize pou kiltive Phanerochaete chrysosporium NK-1. Yo te prepare mwayen an nan fonn 1 0 g glikoz, 2 g ekstrè malte, 4 g MgSO4·7H2O, 1 g KH2PO4, 0.01 g FeSO4, 0.005 g ZnSO4, 0.2 g melanin sentetik, ak 15 g agar nan 1-L dlo distile. Plak Petri yo te enkubate nan tanperati chanm nan fènwa. Nan ki pwen melanin te dekolorize anba ak alantou koloni chanpiyon an te obsève. Li te jwenn ke chanpiyon an se kapab dekolorize melanin epi li se plis itilize yo prepare solisyon anzimatik.

Preparasyon anzim pou dekolorasyon melanin.Mwayen likid kilti a te genyen 10 g glikoz, 0.2 g ekstrè ledven, 0.07 g VA, 3.{{13 }} g asid tartrik, 1 g tween 80, 0.2 g KH2PO4, 0.146 g CaCl2·2H2O, 0.157 g nan K2HPO4, 0.05 g MgSO4·7H2O, 42.5 mg ZnSO4·7H2O, 7.0 mg CoCl2·6H2O, 7.0 mg nan CuCl2·2H2O, 0.54 mg FeCl3, 0.9 mg NaCl ak 0.2 mg melanin sentetik pou chak lit dlo distile 20. pH mwayen an te ajiste a 4.0 ak solisyon NaOH ak HCl. 250 ml flakon ki gen aliquot nan 100 ml mwayen kilti yo te otoklav ak vaksinen ak yon inoculum 5 ml. Lè sa a, flakon yo te enkube sou yon shaker wotasyon nan 30 degre pou 15 jou. Yo te kolekte echantiyon kopi pou tès aktivite LiP nan yon entèval 24 èdtan.

Esè anzim.Reyaktif pou tès LiP a enkli 250 mM tanpon tartrat sodyòm pH 5.5, 10 mM VA, ak 4 mM H2O2 (30 pousan). Egzamen anzim lan te fèt nan yon kivèt silica, epi yo te mezire absorbans nan 310 nm pa yon espektrofotomèt UV-vizib (Shimadzu, Kyoto, Japon). Absorbans te kontwole nan fwa 0-30 s nan kondisyon anbyen. Aktivite anzim la te kalkile dapre Lwa Beer a, Eq. (1) 21.

c = A/εd （1）

kote c, se konsantrasyon espès atenuasyon yo; A se absòpsyon optik la; ε se koyefisyan atenuasyon molè; d se longè chemen optik la. Mezire aktivite anzim enplike nan detèminasyon an nan chanjman nan konsantrasyon sou tan, Eq. (2).

cistanche root supplement

Optimizasyon pou pwodiksyon amelyore LiP ak dekolorizasyon melanin nan vitro.Optimizasyon pou pwodiksyon amelyore LiP soti nan Phanerochaete chrysosporium NK-1 lè l sèvi avèk melanin kòm substra a te fèt ak yon konsepsyon Placket Burman. Yon Placket plen longè te baze sou lefèt ke li mine efè entèaktif ant diferan varyab tandiske li konsidere sèlman tandans lineyè, Eq. (3) 22.

kote Y reprezante repons lan epi senbòl yo endike koyefisyan regresyon an epi k se kantite faktè etidye. Yo te etidye yon total 9 faktè pou reyalize pi gwo konsantrasyon LiP nan Phanerochaete chrysosporium NK-1 pou dekolorizasyon melanin ki prezan nan mwayen an. Yo te konstwi konsepsyon Placket-Burman ak 12 total eksperimantal, jan yo montre nan Tablo 2. Eksperyans yo te fèt pou yon total 35 jou epi yo te mezire repons lan (LiP aktivite IU/mL). Done eksperimantal yo te analize lè l sèvi avèk lojisyèl estatistik 'Design Expert 9'. Yo te itilize mwayen optimize a pou pwodiksyon an amelyore nan LiP ak pirifye pa presipitasyon amonyòm.

cistanche lost empire

Optimizasyon pwodiksyon anzim ak pirifikasyon.Yo te itilize yon mwayen submerged pou detèmine tan enkubasyon optimal an tèm de aktivite LiP. Jan yo montre nan Figi Siplemantè 1, solisyon kilti a gen yon aktivite anzimatik maksimòm nan 8yèm jou a, yo te 140 IU / ml. Se poutèt sa, yo te itilize yon tan enkubasyon nan 8 jou pou pwodwi solisyon an anzim.

Yo te fè yon total 12 eksperyans eksperyans pou detèmine faktè (9) ki gen enpak sou aktivite LiP yo. Pami tès yo, valè repons aktivite LiP yo varye ant 171 IU/ml rive 576 IU/ml, jan yo montre nan Figi siplemantè 2. Kouri yo ak aktivite LiP ki pi wo a te kouri 3 (576 IU/ml) ki te swiv pa kouri. 10 (547 IU/ml). Dapre analiz regresyon, tanperati, tan, konsantrasyon glikoz, konsantrasyon substra, ak medyatè a gen efè pozitif sou aktivite LiP. Efè ekstrè ledven yo te jwenn neglijab. Lòt faktè gen efè negatif. Kondisyon yo pi bon pou pwodiksyon LiP yo se tan: 35 jou, tanperati: 40 degre, glikoz (pou chak lit): 20 g, fruktoz: 10 g, ekstrè ledven: 2 g, peptone: 2 g, inoculum: 10 ml, medyatè substrate: 0.1 ml. Lè sa a, kondisyon sa yo te itilize pou pwodiksyon an amelyore nan LiP ki te pirifye pa presipitasyon amonyòm ak kwomatografi jèl (Sephadex G-75) metòd.

Ekstraksyon anzim nan pH optimize, tanperati, ak tan enkubasyon te fèt. Sephadex G75 kolòn filtraj jèl te itilize pou separe fraksyon nan kontni an pwoteyin soti nan lysate selil la konsènan gradyan dansite selon enstriksyon manifakti a. Abondans nan pwoteyin nan ekstrè brit la te endike tou atravè kantite gwoup ki te parèt sou yon analiz sodyòm dodecyl polyacrylamide jèl (SDS-PAGE). Pwa molekilè anzim pirifye a te 46. 0 kDa jan yo kalkile nan analiz SDS-PAGE (figi siplemantè 3). Aktivite anzimatik apre presipitasyon amonyòm ak pirifikasyon pa kwomatografi jèl yo se 684.0 ak 957.6 IU/ml, respektivman.

Yo te itilize anzim nan pirifye pou dekolorizasyon melanin nan diferan kondisyon fizyochimik, ki gen ladan pH, tanperati, tan enkubasyon, ak konsantrasyon anzim. Melanin sentetik (B049-97-6) te itilize kòm melanin modèl nan tout eksperyans dekolorasyon melanin yo dapre 23.

Eksperyans dekolorizasyon.Efè pH sou dekolorasyon melanin. Pou obsève efè pH yo sou dekolorasyon melanin pa LiP, reyaksyon dekolorasyon melanin yo te fèt nan pH ki soti nan 2.0-6.0. Melanj reyaksyon an te genyen 10 µl anzim brit ki te fonn nan yon tanpon TE ak 1990 µl 0.02 pousan w/v melanin. Reyaksyon sa yo te fèt tou de nan prezans ak absans VA. Melanj reyaksyon yo te enkube nan yon tanperati 30 degre pou 6 èdtan. Eksperyans kontwòl yo te fè an paralèl lè yo ranplase LiP aktif ak anzim denatire ki te bouyi a 95 degre. Melanj reyaksyon yo te kontwole pou dekolorasyon melanin lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt nan yon longèdonn 540 nm anvan ak apre enkubasyon. Efikasite dekolorizasyon anzim la te eksprime an pousan (pousan). Melanin dekolorizasyon te kalkile pa Eq. (4) 11.

kote DC pousan reprezante yon pousantaj dekolorizasyon; A0 ak Af reprezante absòbe anvan ak apre tretman anzim yo.

Efè tanperati sou dekolorasyon melanin. Reyaksyon dekolorizasyon melanin yo te fèt nan tanperati ki soti nan 20-60 degre. Melanj reyaksyon an genyen 10 µl anzim brit ki fonn nan yon tanpon ak 1990 µl 0.02 pousan w/v melanin nan pH 4 tou de nan prezans ak absans VA. Melanj reyaksyon yo te enkube pou yon peryòd de 6 èdtan epi yo te jwenn pousantaj melanin dekolorasyon.

Efè tan enkubasyon sou dekolorizasyon melanin. Pou optimize tan enkubasyon, reyaksyon dekolorasyon melanin yo te fèt nan tan enkubasyon ki soti nan 2-1 0 h. Melanj reyaksyon an genyen 10 µl anzim brit ki fonn nan yon tanpon ak 1990 µl 0.02 pousan w/v melanin nan pH 4 nan prezans ak absans VA. Lè sa a, melanj reyaksyon yo te enkube nan yon tanperati 30 degre epi yo te jwenn pousantaj melanin dekolorasyon.

Efè konsantrasyon anzim sou dekolorasyon melanin. Pou optimize konsantrasyon anzim lan, reyaksyon dekolorizasyon melanin yo te fèt nan diferan konsantrasyon anzim ki soti nan 5-25 IU / ml nan melanj reyaksyon yo. 2 ml melanj reyaksyon ki gen 5, 10, 15, 20, ak 25 IU/ml anzim brit la ak 0.02 pousan w/v melanin yo te prepare tou de nan prezans ak absans VA. Lè sa a, melanj reyaksyon yo te enkube nan yon tanperati 30 degre pou 6 èdtan epi yo te mezire dekolorasyon melanin la.

SEM analiz de melanin degrade. Sifas chanjman mòfolojik melanin yo te analize pa mikwoskòp elektwonik (JEOL JSM-5910, Peabody, MA, USA) 24. Melanin ki pa trete yo te itilize kòm kontwòl la. Echantiyon yo te cheche ak fiks sou souch kwiv (10 × 10mm2) ak kasèt kabòn doub-sided (kolan sou tou de bò). Souch yo te lave ak detèjan epi cheche ak yon sechwa zam chalè (KADA 85U/SMD) nan 200 degre pou 2 minit anvan fikse echantiyon. Yo te itilize kondiksyon keratin ajan (SPI-CHEM, West Chester, PA, USA) pou asire kondiksyon gwo bout bwa elèktron. Lò te depoze sou echantiyon an ak plasma ki te kreye ak gwo vòltaj (25 mA aktyèl pou 50 s) ak kondisyon vakyòm (10-2 ATM). Mòfoloji sifas echantiyon yo te egzamine nan 3000 pouvwa agrandisman.

cistanche chemist warehouse

Analiz FTIR de melanin dekolorize.Reyaksyon yo oswa echantiyon ki te montre dekolorizasyon ki pi wo nan melanin nan eksperyans optimize yo te analize plis pa FTIR (Modèl No 56, Merlin, Almay) espektroskopi. Echantiyon yo te santrifuje (10,000 rpm pou 1 min) epi yo seche lè yo kòm yon etap preparasyon pou analiz FTIR 20. Yo te fè yon analiz kalitatif nan echantiyon melanin lè l sèvi avèk espektwomèt UV-Vis tou pre-enfrawouj (NIR). Lambda 900/Perkin Elmer Instruments. Spectre yo te anrejistre nan ranje 1000 a 3500 cm-1. Echantiyon yo te prepare nan granules KBr ak dispèsyon poud. Melanin sentetik ki pa trete yo te itilize kòm kontwòl nan analiz sa a.

Sitotoksisite nan melanin degrade ak LiP.Yo te fè tès letalite kribich Eau pou tcheke sitotoksisite melanin degrade 14,15 la. Ze kribich nan sèl yo te kale nan yon plat rektangilè ki gen dlo lanmè atifisyèl. Plat la te genyen yon divizyon plastik ak ti twou epi li divize plat la an de konpatiman inegal. Ze yo te mouche nan pi gwo lòj la epi yo kouvri pou evite okenn pénétration limyè, tandiske lòj ki pi piti a te eklere ak yon lanp sou tèt li. Lav yo kale yo te atire pa limyè a nan direksyon ti lòj la. Apre 48 èdtan nan enkubasyon, yo te kolekte naupli yo ki gen matirite nan lòj la limen lè l sèvi avèk yon pipèt pasterize.

Yo te teste senk dilusyon diferan (20, 40, 60, 80, ak 100 µL/ml) nan melanin degrade ak LiP pou efè sitotoksisite. Melanin ki degrade a te ajoute nan ti tib tès yo chak ki gen 2 mL dlo lanmè ak 10 lav kribich Eau vivan. Kontwòl negatif la te solisyon pou gen dlo lanmè atifisyèl ak lav kribich Eau. Kontwòl ki pozitif nan pye bwa yo te prepare pou genyen melanin ki pa trete nan dlo lanmè atifisyèl la ak lav.

Analiz estatistik.Done eksperimantal yo te analize lè l sèvi avèk lojisyèl estatistik 'Design Expert 9'. Imaj grafik yo te trase lè l sèvi avèk vle di nan twa esè eksperimantal ak kalkile devyasyon estanda. Siyifikasyon estatistik kouri eksperimantal la te kalkile pa ANOVA.

Done disponiblite

Otè yo konfime ke done ki sipòte rezilta etid sa a disponib nan atik la [ak/oswa] materyèl siplemantè li yo.

Referans

1. Sung, HJ, Khan, MF & Kim, YH Recombinant lignin peroxidase-catalysed dekolorizasyon nan melanin lè l sèvi avèk H2O2 in-situ pwodwi pou aplikasyon nan blanchi pwodui kosmetik. Ent. J. Biol. Macromol. 136, 20–26 (2019).

2. d'Ischia, M. et al. Melanin ak melanogenesis: soti nan selil pigman nan sante moun ak aplikasyon teknolojik. Pigman Cell Melanoma Res. 28, 520–544 (2015).

3. Brenner, M. & Hearing, VJ Wòl pwoteksyon melanin kont domaj UV nan po moun. Photochem. Photobiol. 84, 539–549 (2008).

4. Clarkson, TW, Magos, L. & Myers, GJ Te toksikoloji mèki—ekspozisyon aktyèl yo ak manifestasyon klinik yo. N. Engl. J. Med. 349, 1731–1737 (2003).

5. Lynde, C., Kraf, J. & Lynde, C. Tretman aktualite pou melasma ak ipèrpigmantasyon postinflammatory. Terapi po Lett. 11, 1–6 (2006).

6. Hughes, J. & Rustin, M. Kortikoterapi. Clin. Dermatol. 15, 715–721 (1997).

7. Płonka, P. & Grabacka, M. Melanin sentèz nan mikwo-òganis: aspè biotechnologique ak medikal. Acta Biochim. Pol. 53, 423–443 (2006).

8. Lim, Y.-J. et al. Efè inhibition arbutin sou biosentèz melanin nan -melanocyte eksitan ipèrpigmantasyon òmòn-induit nan kiltive tisi po kochon Gine mawon. Arch. Res famasyen. 32, 367–373 (2009).

9. Petit, L. & Pierard, G. Pwodui pou eklere po yo revize. Ent. J. Cosmet. Sci. 25, 169–181 (2003).

10. Rättö, M., Chatani, M., Ritschkof, A.-C. & Viikari, L. Depistaj mikwo-òganis pou dekolorizasyon melanin ki pwodui pa fongis tach ble. Appl. Microbiol. Biotechnol. 55, 210–213 (2001).

11. Nagasaki, K. et al. Pirifikasyon, karakterizasyon, ak klonaj jèn nan Ceriporiopsis sp. souch MD-1 peroksidaz ki dekolorize melanin cheve imen. Appl. Anviwònman. Microbiol. 74, 5106–5112 (2008).

12. Ruiz-Dueñas, FJ & Martínez, Á. T. Degradasyon mikwòb nan lignin: ki jan yon polymère rekalsitran ankonbran se efikasite resikle nan lanati ak ki jan nou ka pran avantaj de sa a. Mikwòb. Biotechnol. 2, 164–177 (2009).

13. Holmes, EW & Tompson, KD (Google Patents, 2014).

14. Baravalia, Y., Vaghasiya, Y. & Chanda, S. Brine kribich sitotoksisite, pwopriyete anti-enflamatwa ak analgesic nan Woodfordia fruticosa Kurz fowers. Iran. J. Pharm. Res.: IJPR 11, 851 (2012).

15. Milhem, MM, Al-Hiyasat, AS & Darmani, H. Tès toksisite nan materyèl dantè restorative lè l sèvi avèk lav kribich Eau (Artemia salina). J. Appl. Oral Sci.

16, 297–301 (2008). 16. Falade, AO et al. Lignin peroksidaz fonksyonalite ak aplikasyon potansyèl yo. Microbiologyopen 6, e00394.

17. Sung, HJ Dekolorizasyon melanin pa peroksidaz lignin ak H2O2 ki te pwodwi an plas pou aplikasyon kosmetik blanchiman (2020).

18. Pérez, J., Munoz-Dorado, J., De la Rubia, T. & Martinez, J. Biodegradation ak tretman byolojik nan seluloz, emizeluloz, ak lignin: yon BECA. Ent. Microbiol. 5, 53–63 (2002).

19. Anderson, MJ, Gull, K. & Denning, DW Sezisman molekilè pa anplifikasyon o aza nan ADN polimòfik ak M13 ibridasyon sid nan izolasyon pè ki gen rapò ak Aspergillus fumigatus. J. Clin. Microbiol. 34, 87–93 (1996).

20. Sabar, MA et al. Degradasyon nan chabon ki ba pa Rhizopus oryzae izole nan yon min chabon Pakistani ak degaje amelyore li yo nan sibstans òganik. Gaz 253, 257–265 (2019).

21. Yadav, M., Singh, S. & Yadava, S. Pirifikasyon, karakterizasyon ak aktivite depolymerization chabon nan peroksidaz lignin soti nan Lenzitus betulina MTCC -1183. Appl. Byochim. Microbiol. 48, 583–589 (2012).

22. Mohan, S., Viruthagiri, T. & Arunkumar, C. Aplikasyon nan konsepsyon Plackett-Burman pou tès depistaj konpozan medya yo pou pwodiksyon tanaz soti nan kale pwogram lè l sèvi avèk fèmantasyon submerged. Ent. J. Pharm. Res. Rev. 2, 24–29 (2013).

23. Woo, SH, Cho, JS, Lee, BS & Kim, EK Dekolorizasyon melanin pa peroksidaz lignin ki soti nan Phanerochaete chrysosporium. Biotechnol. Bioprosesis. Eng. 9, 256 (2004).

24. Karp, JM et al. Kiltivasyon nan selil souch anbriyon imen san etap nan kò anbriyon amelyore osteogenesis nan vitro. Selil souch 24, 835-843 (2006).

Rekonesans

Otè yo renmen rekonèt Fondasyon Syans Pakistan an paske li bay finansman anba sibvansyon rechèch PSF/Biotech-99.

Kontribisyon otè

BS, NK, AYM, AJ, UF, MIA, te vin ansent lide eksperyans nan epi yo te responsab pou konsepsyon etid, entèpretasyon rezilta yo, ak ekri maniskri. BS, NK, ZH, ak QW te prepare ak revize figi yo ak tablo ki nan maniskri a. ZH te enplike tou nan ekri maniskri orijinal yo. HH, FJL, HG, ak MU te diskite, revize, ak kòmante sou bouyon yo nan maniskri nan diferan etap. Tout otè yo te revize maniskri a.