Epigallocatechin-3-Galat ankouraje spirasyon in vitro ak devlopman anbriyon apre IVF nan ovosit kochon Pati 2

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

Rezilta yo

Efè EGCG sou Endèks ekspansyon Cumulus la

Mòfoloji oosit ki gen matirite ak oosit ak premye ekstrizyon kò polè yo montre nan Figi Siplemantè S1A ak S1B, respektivman. Premyèman, nou egzamine endèks ekspansyon cumulus nan ovosit yo apre yo fin trete ak diferan konsantrasyon EGCG, epi jan yo montre nan tablo 1, EGCG nan 5 ak 10 uM ogmante siyifikativman endèks ekspansyon cumulus la lè yo konpare ak gwoup kontwòl la. (Gwoup 5uM kont gwoup 0uM: 2.989 ±0.{068 kont 2.438±0.081;10 gwoup μM kont {{30}} gwoup uM: 3.079±0.110 kont 2.438±0.081). Sepandan, EGCG nan 20 uM pa te gen okenn efè sou endèks ekspansyon cumulus la lè yo konpare ak gwoup kontwòl la (gwoup 20 uM kont gwoup 0μM ∶2.879±0.076 kont 2.438±0.081).

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Efè EGCG sou pousantaj IVM nan ovosit yo

Yo te detèmine plis efè EGCG sou pousantaj spirasyon in vitro nan ovosit yo. Jan yo montre nan Tablo 2, pousantaj spirasyon ovosit la te pi wo nan gwoup 5 ak 20μM yo lè yo konpare ak gwoup kontwòl EGCG 0 μM; pandan ke diferans lan pa t 'estatistik enpòtan (Tablo 2). Nan lòt men an, 10 μM EGCG tretman siyifikativman ogmante pousantaj spirasyon oosit la lè yo konpare ak 0 μM EGCG gwoup kontwòl la (10 μM gwoup kont 0 μM gwoup ∶58.63±2.79 pousan kont 46.27±3.25 pousan ;P).<>

Efè EGCG sou estrès oksidatif nan ovosit yo

Pwodiksyon ROS nan ovosit trete EGCG yo te detèmine pa tès pwodiksyon ROS la. Imaj reprezantan siyal fliyoresan ROS yo nan ovosit apre tretman ak diferan konsantrasyon EGCG yo te montre nan Figi 1A. Quantification nan tach imuno-fluoresan an te montre ke EGCG nan 5μM echwe pou pou afekte pwodiksyon an ROS nan oosit yo lè yo konpare ak gwoup la kontwòl 0 μM （Figi 1B）.EGCG nan 10 ak 20 μM. siyifikativman redwi nivo ROS nan ovosit yo lè yo konpare ak gwoup kontwòl EGCG 0μM (Figi 1B).

Cistanche ka amelyore iminite

Kòm EGCG nan 10 μM te kapab ogmante endèks ekspansyon cumulus la ak pousantaj spirasyon oosit, epi tou redwi nivo ROS nan oosit yo, EGCG nan 10 μM te chwazi pou etid ki vin apre yo. Jan yo montre nan Figi 1C, EGCG nan 10 uM siyifikativman ogmante aantioksidankapasite nanoositlè yo konpare ak gwoup kontwòl 0 uM (Figi 1C). Anplis de sa, nivo glutatyon te ogmante pandan ke nivo MDA te diminye nan ovosit yo trete ak 10 μM EGCG (Figi 1D ak E). Anplis de sa, qRT-PCR la te fèt pou detèmine nivo ekspresyon mRNA nanoksidatifjèn ki gen rapò ak estrès ki gen ladan catalase (CAT), glutatyonperoksidaz（GPx）, ak superoksid dismutase（SOD）. EGCG nan 10 μM siyifikativman kontwole nivo ekspresyon mRNA CAT, GPx, ak SOD lè yo konpare ak gwoup kontwòl 0 uM (Figi 2A-C).

Efè EGCG sou nivo ekspresyon mRNA yoApoptoz-Jèn ki gen rapò nan Oosit yo

Yo te fè qRT-PCR la pou detèmine nivo ekspresyon mRNA jèn ki gen rapò ak apoptoz ki gen ladan

Bax, Bcl{{0}} ak kaspas-3. EGCG nan 10 uM siyifikativman diminye nivo ekspresyon mRNA Bax ak caspase -3 epi ogmante nivo ekspresyon mRNA Bcl-2 lè yo konpare ak gwoup kontwòl 0 μM (Figi 3A-C).

Efè EGCG yo itilize pandan IVM ak IVF sou potansyèl devlopman ovosit yo

Imaj reprezantan pou anbriyon yo ak blastosist yo te montre nan Figi Siplemantè SIC-S1E.

tretman pandan IVF ogmante siyifikativman to klivaj ak to blastosist lè yo konpare ak gwoup kontwòl la (Tablo 3). Tretman EGCG pandan IVM siyifikativman ogmante pousantaj blastocyst la, men se pa to klivaj la lè yo konpare ak gwoup kontwòl la (Tablo 3). Anplis, tretman EGCG pandan tou de IVM ak IVC siyifikativman ogmante pousantaj la klivaj ak pousantaj blastosist lè yo konpare ak twa lòt gwoup yo (Tablo 3). Rezilta sa yo endike ke EGCG pandan IVM ak IVF te kapab ankouraje potansyèl devlopman oosit yo.

Efè EGCG yo itilize pandan IVM ak VC sou potansyèl devlopman ovosit yo

Tretman EGCG pandan IVC te redwi siyifikativman to cleaved ak to blastocyst nan oosit yo lè yo konpare ak gwoup la san tretman EGCG (Tablo 4). Nan lòt men an, tretman EGCG pandan IVM siyifikativman ogmante to a klivaj ak to blastosist nan oosit yo lè yo konpare ak gwoup la san yo pa tretman EGCG (Tablo 4). Tretman EGCG pandan IVM ak IVC siyifikativman diminye to a klivaj ak to blastosist nan oosit yo. lè yo konpare ak gwoup la san tretman EGCG ak gwoup la ak tretman EGCG pandan IVM (Tablo 4). Ansanm, rezilta sa yo endike ke tretman EGCG pandan IVM ogmante potansyèl devlopman oosit la pandan tretman EGCG pandan IVC diminye potansyèl devlopman oosit la.

Diskisyon

The IVM technique for the COC has been developed and applied to produce offspring in mammals including pigs, however, the rate of blastocytes formation following IVF is still low using IVM oocytes compared with that of in vivo-matured oocytes such as pigs. In pigs, the COCs are usually collected from medium size antral follicles(>3 mm dyamèt) kote ovosit la gen kapasite pou pwovoke spirasyon ovosit, tandiske selil somatik folikulèr pa jwenn kapasite pou reponn a stimuli ovilasyon. Anplis de sa, anviwònman an vitro anjeneral ogmante pwodiksyon selil ROS, ki te enplike kòm kòz prensipal domaj selilè. Nan etid la prezan, yo te ajoute diferan konsantrasyon EGCG nan mwayen kilti IVM, IVF, ak IVC pou obsève bon jan kalite spirasyon oosit yo. EGCG nan 10 uM siyifikativman amelyore IVM nan ovosit porsin. Nan etid sa a, sipleman EGCG pandan IVF ak IVC pwodui de efè diferan. Sipleman 10 μM EGCG pandan IVF ka ankouraje to klivaj ovosit yo, ki te konsistan avèk rezilta Spinaci et al, ki montre ke sipleman 10 μM EGCG pandan IVF men pa IVM ogmante siyifikativman to fètilizasyon an.17 Efè adisyon EGCG a. pandan IVF ta ka akòz aksyon li sou espèm nan pa sou OOcyte la.

Nan pwosesis la nan kilti vitro, ovosit ak anbriyon yo inevitableman ekspoze a limyè ak pi wo konsantrasyon oksijèn pase nan vivo, ki ka mennen nan pwodiksyon amelyore nan ROS (anyon superoksid, oksijene, ak idroksil trè reyaktif). Yon gwo kantite etid yo te montre ke sipleman an nan antioksidan nan mwayen IVM la ka amelyore kapasite nan devlopman nan anbriyon an. EGCG aji kòm yon antioksidan yo te jwenn modere efè yo danjere nan ipètermi matènèl sou ovosit pileu ki fèmen nan sourit.' Barberino et al te demontre ke EGCG atenye apoptoz nan folikulèr preantral atravè chemen siyal fosfatidilinositol -3-kinase / pwoteyin kinaz B apre kilti in vitro nan tisi ovè mouton."Huang et al sijere ke 50 μM EGCG ka amelyore spirasyon ovocyte bovine, ak wòl nan pwoteksyon nan EGCG ka korelasyon ak pwopriyete antioksidatif li yo. degre An konbinezon ak etid anvan yo, rezilta nou yo endike ke efè yo nan EGCG sou IVM nan ovosit kochon yo ka gen rapò ak efè a antioksidan ak anti-apoptoz, ki te pi lwen. eksplore nan etid prezan an.

Twòp akimilasyon ROS ka mennen nan estrès oksidatif, ak rezilta nou yo te montre ke EGCG ka ogmante kapasite total antioksidan epi redwi nivo ROS ak MDA nan oosit kochon yo. Sa a ka akòz ke EGCG ka dirèkteman elimine ROS ak / oswa EGCG ka aji sinèrjetik ak sistèm nan antioksidan. Sistèm ki pa anzimatik yo konte sou molekil yo dirèkteman pasè ROS, pandan y ap sistèm anzimatik yo konpoze de anzim espesifik ki dezentoksike ROS. Nan lèt la, fanmi SOD a enpòtan nan règleman estrès oksidatif. SOD se sèlman anzim li te ye ki dirèkteman scavenges radikal gratis pa katalize dismutation anion superoksid nan oksijene idwojèn. SOD anzim kontwole nivo supèroksid ak oksijene idwojèn ki pwodui nan selil yo, ak Lè sa a, kontwole transdiksyon siyal selil yo." Catalase se yon antioksidan enpòtan ak yon anzim makè nan peroxisomes. Li konte pou 40 pousan nan anzim yo peroxisome total. Li se yon oligomè antioksidan. -itilize ak kat subinite ki idantik ki ranje nan tetraèd epi li se yon anzim enpòtan ki pwoteje selil yo kont domaj oksidatif ROS. fonksyon epi li gen yon efè antioksidan. Glutathione peroxidase(GPXs) konbine oksidasyon GSH ak H, O, dezentoksikasyon. 2 Etid nou yo toujou montre ke EGCG redwi nivo ROS ak kontni MDA nan oosit yo pandan y ap ogmante intr la. kontni GSH aselilè ak kapasite total antioksidan.

Pwosesis apoptoz la ka afekte bon jan kalite ak pousantaj siviv oosit yo epi konsa enfliyanse devlopman anbriyon. Bcl-2 pwoteyin fanmi jwe yon wòl kle nan reglemante lanmò selil atravè entèraksyon ekilibre ant manm pwoteyin pro-apoptotik ak anti-apoptotik. 24 Pwoteyin pro-apoptotik Bax la se nwayo apoptoz mamifè ki depann de mitokondriyo. Caspase-3 jwe tou yon wòl iranplasabl nan apoptoz selil. Caspase -3 se anzim splicing tèminal ki pi enpòtan nan pwosesis apoptoz selilè, ak kaspas aktive -3 se egzekitè kle nan apoptoz selil. Rezilta nou yo montre ke EGCG te kontwole nivo ekspresyon mRNA Bcl-2, men li te diminye nivo ekspresyon mRNA Bax ak caspase-3. Ansanm, rezilta sa yo vle di ke efè antioksidan ak anti-apoptotik EGCG nan oosit kochon yo lajman ki gen rapò ak règleman SOD1, CAT, ak GPX ansanm ak jèn ki gen rapò ak apoptoz yo.

An rezime, rezilta nou yo sijere ke EGCG ankouraje spirasyon an vitro ak devlopman anbriyon apre IVF nan ovosit porsin. Efè pwoteksyon EGCG sou oosit yo ka asosye ak pwopriyete antioksidan ak anti-apoptoz li yo.

Finansman

Etid sa a te sipòte pa sibvansyon nan Syans Natirèl Fondasyon pwovens Guangdong (2020Al515010976), Pwojè lokal inovatè ak ekip rechèch nan Guangdong Pearl River Talents Program (2019BTO2N630), Syans ak Teknoloji Inovasyon StrategyProjects nan pwovens Guangdong (2018B020203002).

Atik sa a soti nan Atik sa a te pibliye nan jounal Dove Press sa a: Drug Design, Development, and Therapy.