Vezik ekstraselilè kòm jwè nouvo nan maladi ren

"Pipi ka bay nou chak jou, mwa pa mwa, ak ane pa ane ak yon istwa seri de evènman ki pi gwo nan ren an." Dr Thomas Addis, pyonye nan fizyoloji ren, te rive nan konklizyon sa a an 1948. Dekouvèt vesik urin ekstraselilè (uEVs) kòm molekilè repwodwi selil ren yo te pran pwennvi li nan yon nouvo nivo (Figi 1). uEV yo gen ladan vesik nano-gwosè ki boujon deyò nan manbràn plasma selil la nan selil ki an sante oswa ki mouri (mikrovesicles oswa kò apoptotik, respektivman) oswa yo elimine atravè kò multivesicular nan yon pwosesis reglemante (exosomes). Fidèl opinyon Dr Addis, uEV yo genyen makè espesifik maladi ak sit ki soti nan selil ki kouvri tubul ren yo ak aparèy urin yo, sa ki fè yo yon adisyon anpil valè nan makè malfonksyònman ren tankou kreyatinin serik ak proteinuri, ki pa espesifik ak an reta. manifeste. Prèv evolye demontre potansyèl uEV yo pou predi maladi pi bonè pase makè konvansyonèl yo. Vreman vre, premye biomarker ki baze sou uEV la te apwouve Food and Drug Administration nan domèn uroloji, kote yon siyati uEV RNA sèvi kòm yon metòd depistaj non-invasive pou kansè pwostat. Lòt pase wòl yo nan dyagnostik ak pronostik, uEV yo de pli zan pli etidye kòm mesaje roman nan mekanis maladi ren ak nan kontèks medikaman rejeneratif. Dènyèman, Gwoup Travay Pipi Sosyete Entènasyonal Vezik Ekstraselilè te pibliye yon deklarasyon pozisyon pou avanse rigueur ak normalisation analiz uEV ak akselere aplikasyon klinik uEV yo.

Klike sou saline cistanche pou ren

1 uEVs pou dyagnostik ak pwonostik

Itilizasyon uEVs pou dyagnostik ak pronostik nan byopsi likid depann sou lefèt ke vesik ekstraselilè (EVs) kenbe pwopriyete selil ki soti nan kote yo fòme. Etid dyagnostik uEV yo ka divize an de apwòch: (1) apwòch ki konsantre sou analiz sèl-EV (pa egzanp, pa analiz Tracking nanopartikul oswa sitometri koule) ak (2) apwòch ki konsantre sou analiz EV an gwo, tankou pwoteomik oswa profil RNA. . Konsantre nan apwòch sèl-EV se jeneralman enimerasyon uEV yo ak fenotip vize, tankou detekte selil orijin EV a ak kago espesifik ki soti nan selil glomerulè ak selil tubulaires. Etid bonè sijere ke elevasyon nan nivo uEV ka endike maladi ki kache. Pou egzanp, EV podocyte urin yo te ogmante nan maladi ren dyabetik davans albuminuria,2 ak elevasyon nan subpopulations uEV yo te rapòte nan preeklanpsi.3 Anpil etid bonè yo remakab pou eterojenite nan metodoloji ak defi ki vin apre ak validasyon ekstèn. Plizyè sèvi ak enstriman ki pa pi bon yo, yo manke kontwòl apwopriye oswa validasyon antikò, epi yo pa genyen ladan yo apwòch ortogonal pou konfime izolasyon vesik. Yon etid resan montre yon apwòch modèn pou evalyasyon uEV pa flow cytometry, ki pral esansyèl pou tranzisyon soti nan yon zouti rechèch nan yon tès klinik.

Yo itilize yon validation konplè nan izolasyon vesik ki gen ladan plizyè makè pwoteyin. Otè yo tou te etabli kontwòl kle yo: tanpon, tanpon plis réactifs, uEVs san réactifs, ak yon pweparasyon vesicul lysed pou redwi fo positifs osi byen ke "molécules de équivalent fluorochrome soluble" perles pou estandadize inite fluorescent entansite. Etap kle sa yo pral pèmèt pou konparezon rezilta entèlaboratwa kèlkeswa enstriman oswa lojisyèl. Dezyèm apwòch nan dyagnostik uEV se yon evalyasyon an gwo nan kontni uEV. Yon etid seminal pa Pisitkun et al.5 soti nan 2004 te etabli posibilite nan evalyasyon pwoteomik nan uEVs ak idantifye defi fondamantal, tankou entèferans nan pwoteyin Tamm-Horsfall. Yo dekri apwòch ki sanble ak evalyasyon kago EV pou asid nikleik, lipid, ak metabolit EV-bound. Yon sipozisyon kle lè w ap dedui chanjman ki fèt nan ren an nan men sa yo wè nan uEV yo se ke konpozisyon molekilè uEV yo reflete sa yo ki nan ren an. Travay resan Wu et al.6 parèt pou sipòte sa. Sèvi ak yon apwòch proteomik, otè yo te montre korelasyon solid ant pwoteyin uEV ak sa yo ki te jwenn nan ren antye. Chanjman nan ekspresyon pwoteyin nan ren antye apre yon eksitasyon fizyolojik (segondè K1) yo te reflete nan uEV yo bay gwo sipò pou itilize uEV kòm mezi ranplasan nan patoloji ren.

uEVs POU FONKSYON AK REGENERATION

Gen plis enterè nan wòl fonksyonèl ak rejeneratif uEV yo. Selil yo kapab kominike lè yo lage EV yo, ki modile pwosesis nan selil k ap resevwa yo.7–9 Yo dekri twa kalite kominikasyon sa yo nan ren an: (1) kominikasyon intranephron ki ka eksplike kijan glomerulè (egzanp, domaj podosit ak proteinuri) ak domaj tubulaires (egzanp, ipoksi) lakòz fibwoz entèstisyèl,9 (2) kominikasyon intratubular (ant segman tubulaires),7 ak (3) sikilasyon kominikasyon nan ren, ki te demontre nan pasyan ki gen vaskulit aktif epi yo montre yo pote B{{7} }reseptè kinin.8 Konprann chemen siyal ki sòti nan uEV ta ka finalman mennen nan nouvo objektif terapetik nan maladi ren. Sepandan, pou etid fonksyonèl, li enpòtan pou etidye preparasyon EV pi bon kalite epi konpare fraksyon sa yo ak materyèl izole ki pa EV ("EV corona" oswa ki pa EV eluate).1

Chèchè a ap kòmanse tradui rezilta in vitro yo nan modèl in vivo, ki gen ladan itilizasyon EV ki make oswa ki make, ak valide rezilta nan kowòt imen. Pou egzanp, Lv et al.10 te itilize yon sistèm kilti transwell pou demontre ke selil epitelyal tubulaires ankouraje pa albumin pwodui EVs ki gen sitokin enflamatwa CC Motif Chemokine Ligand 2 (CCL2). Yo te enjekte EV ki soti nan selil epitelyal tubulaires sa yo ki te trete albumin nan sourit epi yo te pwovoke blesi tubulaires nan yon modèl in vivo. Anplis de sa, CCL2 mesaje RNA nan uEV yo te jwenn nan pasyan ki gen nefropati IgA proteinurik, sipòte potansyèl la tradiksyon. Trè dènyèman, yo te demontre wòl rejeneratif uEVs ki soti nan donatè ki an sante nan yon modèl AKI glycerol-induced.11 uEVs amelyore rekiperasyon ren, ankouraje pwopagasyon selil tubulèr, ak redui ekspresyon de makè enflamatwa ak blesi, restore pèt andojèn Klotho. Otè yo te fè etap pirifikasyon siplemantè pou jwenn pi bon kalite EV, bon jan karakterizasyon EV nan EV (CD81, CD63), ak pwoteyin ki pa gen rapò ak EV (calreticulin). Otè yo te enkli tou plizyè kontwòl kle, ki gen ladan fraksyon ki pa EV ak EV ki soti nan sous nonrenal.

DIREKSYON POU LAVINI

uEV yo te etidye pou .17 ane depi Pisitkun et al.5 piblikasyon an 2004. Poukisa enterè nan uEVs kòm jwè roman nan maladi ren tout tan tout tan ogmante? An reyalite, 2004 te lanse yon epòk nan ogmante rigor nan etid uEV, kote jaden an progresivman simonte blokaj kle nan aplikasyon klinik. Byoloji ak chajman kago nan EV yo te etabli; Nouvo metòd izolasyon yo te devlope, ki mennen ale nan pi bon kalite izolasyon EV yo.1 Yo te devlope makè bon jan kalite, yo te fè rechèch sou metòd nòmalizasyon uEV yo ak valide, epi yo te mete 12 ak kondisyon minimòm rapò (revize nan ref. 1). Pandan se tan, rechèch uEV te janm ogmante akòz pwomès ke uEV yo kenbe. Sa ki pi enpòtan, uEV yo se "panye" ki gen enfòmasyon sou pwosesis molekilè ak chemen ki ka remonte nan yon sèl kalite selil. Kidonk, yo potansyèlman pi sansib pase pwoteyin sekrete oswa RNA nan pipi, epi yo ka pi espesifik tou. Vreman vre, yo te fè plizyè tantativ pou etidye EV espesifik nan sèten segman tubul. Sepandan, sa a rete difisil, kòm anpil makè pwoteyin rekonèt sèlman epitop intraselilè, ki ka bezwen pèmeabilizasyon uEVs pa detèjan.12 Yon lis pwoteyin ki ka itilize pou objektif sa a jan sa endike nan papye pozisyon uEV ki fèk pibliye a.1 Malgre ke izolasyon an. nan uEV yo toujou pran anpil tan ak travay entansif, yo ap devlope ak karakterize metòd karakterizasyon uEV ki gen gwo pwodiksyon12 ak potansyèl pou akselere pwosesis pou jwenn biomaketè ren ki aplikab klinikman, tankou makè rejè transplantasyon ki ta ka kontoune nesesite pou byopsi ren.13 Anpil nan avansman sa yo ogmante konpleksite enfòmasyon ki ka jwenn nan uEV yo. Se poutèt sa, defi aktyèl yo te deplase soti nan jwenn metòd izolasyon ak karakterizasyon ase sansib pou etidye mesaje roman sa yo nan amelyore espesifik nan (plis) optimize metòd nòmalizasyon, kontwòl kalite, ak bon jan rapò. Isit la, nou pwolonje rekòmandasyon ki soti nan papye pozisyon uEV1 ak yon koleksyon resous chwazi pou rechèch uEV (Tablo 1). Finalman, adrese defi sa yo ap mennen nan metòd rapid ak egzat ak varyasyon ki ba ki nesesè pou aplikasyon klinik. Pwochen etap sa yo ta ka fè li posib pou apwòch ki baze sou uEV ranplase byopsi ren nan pwochen deseni kap vini an.

pou plis enfòmasyon:ali.ma@wecistanche.com