Feristatin II Enpeche yon fason efikas replikasyon SARS-CoV-2 nan selil Vero

Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Résumé

Sendwòm respiratwa egi grav coronavirus 2 (SARS-CoV-2) kontinye gen yon enpak enpòtan sou sante piblik mondyal la. Yo dekri plizyè mekanis pou antre selil SARS-CoV-2; sepandan, wòl reseptè transferrin 1 (TfR1) nan enfeksyon SARS-CoV-2 te resevwa ti atansyon. Nou itilize ferritin II pou pwovoke degradasyon TfR1 sou sifas selil Vero yo epi etidye konsekans tretman sa yo sou viabilite selil yo ak replikasyon SARS-CoV-2. Nou demontre ke ferritin II pa toksik pou selil Vero nan konsantrasyon jiska 400 µM. Dapre done mikwoskospi konfokal, distribisyon an transferin ki make ak domèn reseptè-obligatwa (RBD) nan pwoteyin Spike afekte anpil pa pretretman 18h ak 100 µM ferritin II nan yon mwayen kilti. Absorption nan pwoteyin RBD se prèske totalman anpeche pa tretman ferritin II, byenke pwoteyin sa a rete mare sou sifas selil la. Konklizyon yo te byen konfime pa anpèchman enpòtan nan enfeksyon SARS-CoV-2 nan selil Vero pa ferritin II ak valè IC50 nan 27 µM (pou viris Wuhan D614G) ak 40 µM (pou viris Delta). Yo te note yon rediksyon enpòtan nan tit enfektye varyant Omicron SARS-CoV-2 nan yon konsantrasyon ferritin II osi ba ke 6.25 µM. Nou fè ipotèz ke ferritin II bloke antre selil hôte SARS-CoV-2 TfR1-medyatè; sepandan, gen plis etid ki nesesè pou elicide mekanis konplè anpèchman viris sa a, ki gen ladan efè ferritin II sou lòt reseptè SARS-CoV-2, tankou ACE2, Neuropilin-1, ak CD147. Anpèchman antre viral lè yo vize reseptè a sou selil lame yo, olye ke pwoteyin ki gen tandans mitasyon viral la, se yon estrateji terapetik pwomèt COVID-19.

Mo kle: SARS-CoV-2;reseptè transferin 1; feritin II; domèn reseptè-obligatwa (RBD); Selil Vero

Alexey Sokolov , Irina Isakova-Sivak * , Natalia Grudinina , Daria Mezhenskaya , Elena Litasova , Valeria Kostevich , Ekaterina Stepanova , Alexandra Rak , Ivan Sychev , Olga Kirik ak Larisa Rudenko

Enstiti Medsin eksperimantal, 197376 Saint Petersburg, Larisi

1. Entwodiksyon

Pandemi maladi kowonaviris 2019 (COVID-19) ki te koze pa kowonaviris sendwòm respiratwa egi grav 2 (SARS-CoV-2) kontinye poze yon gwo fado sosyoekonomik pou popilasyon mondyal la. Anzim konvèti anjyotansin 2 (ACE2) konsidere kòm prensipal reseptè selil lame SARS-CoV-2 itilize pou antre nan selil [1–4]; sepandan, plizyè reseptè altènatif ak ko-reseptè ki kapab fasilite antre selil SARS-CoV-2 ak enfeksyon yo te idantifye, tankou Neuropilin-1, CD147, tirozin-pwoteyin kinaz reseptè UFO (AXL) ak lòt moun. [5–10]. Anplis de sa, de etap klivaj pwoteolitik obligatwa pou SARS-CoV-2 antre efikas nan selil apre angajman yon reseptè selil lame pa yon pwoteyin Spike viral (S). Premye etap la enplike nan klivaj fwontyè S1 a S2 pa furin proteaz nan yon selil ki enfekte, pandan y ap klivaj sit S20 a depann de proteaz selil sib, tankou TMPRSS2 ak cathepsin L, ki aktive pwoteyin S nan manbràn plasma a ak nan plas la. endolyzosome, respektivman (revize nan [11]).

cistanche pou vannpoukapasite iminitè

Apa de objektif antre selil hôte SARS-CoV-2 ki byen etidye, gen prèv ki montre reseptè transferrin 1 (TfR1) kapab yon ko-reseptè altènatif pou antre SARS-CoV-2 [12]. TfR1, yon glikoprotein manbràn homodimeric tip II 95 kDa, eksprime abondans sou manbràn plasma pifò selil imen yo epi li medyatè antre transferrin (Tf) nan selil yo pou livrezon fè [13]. Vreman vre, gen yon pakèt viris imen ak viris zoonotik ki ka anvayi selil lame atravè entèraksyon an ak TfR1 ak lòt faktè nan chemen an absòpsyon fè, tankou arenavirus New World, viris iminodefisyans imen, parvoviris, viris epatit C, alfaviris, ak lòt moun. [14]. Se poutèt sa, vize chemen antre viral TfR1- medyatè a reprezante yon estrateji terapetik pwomèt pou enfeksyon SARS-CoV-2. Etid tès depistaj byen bonè te idantifye de ti-gwosè konpoze (NCI11079 ak NCI306711) ki te gen yon efè inhibition enpòtan sou Tf-medyatè absorption fè pa selil HeLa. Konpoze NCI306711 vize TfR1 pa pwovoke entèrnalizasyon li yo ak degradasyon epi li te rele "feritin" akòz pwopriyete etranj li yo nan anpeche transpò fè nan chemen an kolestewòl-depandan [15]. Yon lòt ti molekil, ferritin II (NSC8679), aji yon fason ki sanble ak ferritin epi li degrade TfR1 atravè yon chemen radòt lipid ki sansib pou nistatin [16]. Nan limyè done sa yo, nou te eseye evalye kapasite ferritin II pou anpeche replikasyon SARS-CoV-2 nan selil Vero-CCL81 ak eksplore mekanis potansyèl anpèchman sa a.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Viris, Pwoteyin, ak Konpoze Chimik

SARS-CoV-2 izole hCoV-19/St_Petersburg-3524S/2020 (filiation Wuhan D614G), hCoV-19 /Russia/SPE-RII-32759V/2021 (Delta filiation), ak hCoV-19/Russia/SPE RII-6086V/2021 (lineage Omicron) yo te jwenn nan Enstiti Rechèch Smorodintsev nan Grip (Saint Petersburg, Larisi). Tout travay ak viris enfektye yo te fèt nan laboratwa nivo biosekirite 3 (BSL-3). BIOCAD JSC (St.Petersburg, Larisi) te eksprime yon pwoteyin recombinant ki koresponn ak domèn reseptè-obligatwa (RBD) SARS-CoV-2 S nan selil ekaryotik. Serom imen satire ak fè TF (Fe2-TF) te izole nan serom san imen pa chromatografi echanj iyon sou DEAE-Toyopearl, UNOsphere S, ak filtraj jèl sou Sephadex G-75 Superfine, jan sa te dekri deja. [17]. Feristatin II (Figi 1) te achte nan men Sigma (C-1144, St. Louis, MO, USA). Te konpoze an dilye nan 150 mM NaCl, 10 mM Na-fosfat tanpon, pH 7.4 (PBS) nan konsantrasyon final la nan 4 mm, epi yo te solisyon an filtre nan yon manbràn esteril ak yon gwosè pò nan 0.22 µm (Sartorius, Almay) .

2.2. Pwopagasyon viris SARS-CoV-2 ak evalyasyon kapasite anpèchman viris Ferristatin II

Viris yo te pwopaje sou selil Vero CCL81 lè l sèvi avèk DMEM konplete ak 1 × antibyotik-antimycotic, 10 mM HEPES, ak 2 pousan FBS (tout soti nan Capricorn, Ebsdorfergrund, Almay), (DMEM / 2 pousan FBS). Titer enfektye yo te detèmine pa 50 pousan tès Tissue Culture Infection Dose (TCID50), jan sa dekri nan [18] ak eksprime nan lgTCID50/mL.

Pou evalyasyon kapasite netralizasyon viris ferritin, nou te itilize yon analiz mikroneutralizasyon modifye. Jou anvan eksperyans yo, selil Vero yo te simen nan {{0}}plak kilti byen (3 × 104 selil pou chak pi) nan DMEM siplemantè ak 1 × antibyotik-antimikotik ak 10 pousan FBS. Nan demen, yo te retire mwayen an, epi selil yo te enfekte ak 100 TCID50 SARS-CoV-2 ki te prepare sou DMEM/2 pousan FBS pou 2 èdtan nan 37 ◦C, 5 pousan CO2. Plizyè pwi yo te rete san enfekte kòm yon kontwòl negatif. Lè sa a, yo te retire inokil la, epi selil yo te kouvri ak 150 µL nan dilusyon de-pliye ferritin II ki te prepare sou DMEM/2 pousan FBS, tandiske pwi kontwòl negatif ak pozitif yo te kouvri ak medya sèlman. Chak dilution ferritin II te evalye an triple. Plak yo te enkube pou 48 èdtan (pou viris Wuhan G614D) oswa 72 èdtan (pou viris Delta ak Omicron) nan 37 ◦C, 5 pousan CO2, jiskaske yo te wè yon efè sitopatik klè nan pwi kontwòl pozitif. Supernatant yo te ak anpil atansyon kolekte nan tib 0.2 mL pou quantification tit viral epi selil yo te fiks ak 10 pousan fòmaldeyid nan 4 ◦C pou 24 èdtan.

Plak fiks yo te transfere nan laboratwa BSL{{0}} pou yon pwosedi ELISA ki baze sou selil. Sa enkli lave ak PBST (PBS ak 0.05 pousan nan Tween 20), pèmeabilizasyon selilè ak 0.1 pousan Triton X-100 nan tanperati chanm pou 15 min, bloke ak 3 pousan lèt ekreme nan 37 ◦C. pou 1 h, ak lave entansif ak PBST. Lè sa a, pirifye poliklonal lapen anti-RBD antikò (BIOCAD JSC, Saint Petersburg, Larisi) te ajoute nan yon konsantrasyon nan 1.5 µg / mL pou 1 èdtan, ki te swiv pa lave ak PBST ak adisyon nan segondè anti-lapen anti-IgG HRP- antikò konjige (BioRad, Hercules, CA, USA) pou 1 èdtan nan 37 ◦C. Plak yo te devlope ak yon 1-Step Ultra TMB-ELISA Substrate Solution (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Reyaksyon an te sispann ak solisyon 1M H2SO4, epi rezilta yo te li nan 450 nm lè l sèvi avèk xMark Microplate Spectrophotometer (BioRad, Hercules, CA, USA). Pou kalkile tit IC50 la, yo te itilize yon analiz regresyon kat parametrik ki pa lineyè, ki baze sou valè OD450 selil viris negatif ak viris pozitif, jan sa dekri nan [18].

ki kote pou achte cistanche

Yo te kalkile tit SARS-CoV-2 nan supernatant selil yo pa RT-PCR an tan reyèl. RNA a te pirifye soti nan 100 µL nan mwayen kilti selil, osi byen ke soti nan SARS-CoV-2 ak tit li te ye pou jenerasyon an nan koub estanda tès yo. Echantiyon RNA yo te pirifye ak yon twous ekstraksyon RNA (Biolabmix, Novosibirsk, Larisi) dapre pwotokòl manifakti a. Reyaksyon RT-PCR la te fèt an kopi ak premye transmisyon 50 -CAATGGTTTAACAGGCACAGG-30 ak primè ranvèse 50 -CTCAAGTGTCTGTG GATCACG-30 [19] lè l sèvi avèk yon RT-PCR SYBR One-Tube. twous (Evrogen, Moskou, Larisi) sou Quantstudio 1 Real-Time PCR System (Thermofifisher Scientific, Waltham, MA, USA), ak adisyon a nan 50x Rox kòm yon lank referans.

Sik papòt la (Ct) te kalkile pou chak echantiyon ak QuantStudio Design and Analysis Software v1.5.1, epi yo te pwodwi koub estanda a sou chak plak reyaksyon. Tit viris la nan chak pi yo te kalkile lè l sèvi avèk valè Ct nòmalize nan koub estanda kalkile sou baz titrasyon viris estanda ak eksprime nan lgTCID50/mL. Pou detèmine si ferritin II ka anpeche premye etap atachman viral yo nan selil yo, yo te melanje 100 TCID50 SARS-CoV-2 ak dilusyon ferritin II, epi apre 1 èdtan enkubasyon nan 37 ◦C, yo te ajoute melanj sa a nan Vero. selil yo, ki te swiv pa yon lòt 1h enkubasyon nan 37 ◦C. Apre absòpsyon viral, yo te retire inokil la, epi selil yo te kouvri ak 150 µL fre DMEM/2 pousan medya FBS. Apre 48 èdtan nan enkubasyon nan 37 ◦C, 5 pousan CO2, ak CPE vizib nan selil kontwòl pozitif, plak yo te fiks epi yo te sibi ELISA ki baze sou selil jan sa dekri pi wo a.

2.3. Evalyasyon Efè Sitotoksik Ferristatin II

Sitotoksisite feritin II pou selil Vero yo te evalye pa {{0}}(4,5-Dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromur ( MTT) rediksyon tès [20]. Yo te prepare dilusyon de fwa nan ferritin II nan mwayen DMEM/2 pousan FBS apati de 400 µM konsantrasyon epi yo te ajoute nan pwi yo nan 96-plak byen ak monokouch selil Vero. Apre 48h enkubasyon, medya yo te retire epi selil yo te dousman lave ak PBS cho. Yo te ajoute reyaktif MTT 0.5 mg/mL nan chak pi nan yon volim 100 µL, epi yo te enkube plak la plis nan 37 ◦C pou 2 èdtan. Lè sa a, yo te retire reyaktif la epi yo te lave selil yo ak PBS ak lè sèk, ki te swiv pa adisyon a nan 100 µL nan 96 pousan etanòl pou fonn kristal formazan. Entansite koulè a ​​te anrejistre lè l sèvi avèk yon espektrofotomèt nan yon longèdonn 535 nm. Wells nan plak la ki pa simen ak selil Vero yo te itilize kòm kontwòl negatif. Anpèchman 50 pousan nan viabilite selil (CC50) te kalkile pa kat-parametrik analiz regresyon ki pa lineyè lè l sèvi avèk lojisyèl GraphPad Prizm.

2.4. Etikèt Transferrin serik imen ak pwoteyin RBD recombinante

Reyaksyon etikèt la te fèt nan plis 4 ◦C pou 12 èdtan lè w ajoute 5 mM solisyon NHS-estè 5-TAMRA (Lumiprobe, #47120) nan dimethylsulfoxide nan 30 µM Fe2- solisyon TF oswa RBD. nan 200 mM NaHCO3, kenbe rapò 5-TAMRA: pwoteyin=8:1 (mol/mol). Apre yo fin retire koloran depase, yo te estime degre etikèt la pa rapò A541 ak A280, ki te 3.5 ak 3.2 mol TAMRA pou chak mol Fe2-TF ak RBD, respektivman.

2.5.Etid Ferristatin II efè TF ak RBD absòpsyon pa selil Vero

Selil Vero yo te kiltive pou 18 èdtan nan DMEM/2 pousan FBS san feritin Il epi ak adisyon 100 uM ferritin Il ak kouvèti pou mikwoskopi yo te deja mete sou pati anba a nan plak kilti yo. Lè sa a, mwayen an te ranplase pou 15 èdtan ak yon mwayen san FBS ki gen 1.2 μM Fe2-TF-TAMRA (0.25 mg/mL) oswa 1.2 μM RBD-TAMRA (0.1 mg/mL). Apre enkubasyon, selil yo te dousman lave de fwa ak PBS, fiks ak 4 pousan paraformaldehyde (w/) nan PBS pou 10min, lave de fwa ak PBS pou 30min. Lè sa a, nwayo selil yo te tache ak 360nM DAPI pou 5min, lave ak PBS ak kouvèti, epi monte sou glisad yo lè l sèvi avèk yon résine polymerizing pou mikwoskòp fluoresans (DAKO, Glostrup, Denmark). Imaj yo te akeri lè l sèvi avèk yon Axio Observer.Z1/7 konfokal lazè optik mikwoskòp (Carl Zeiss, Jena, Almay), ak yon objektif Plan-Apochromat 63 × / 1.40 lwil oliv DIC M27. Yo te itilize lazè A561 nm pou eksite fluoresans TAMRA, yon { {28}} filtè nm te itilize pou anrejistre fluoresans, yo te itilize yon lazè 405 nm pou eksite DAPI. epi yo te itilize yon filtè 400-570 nm pou anrejistre fliyoresans. Imaj yo te akeri ak trete lè l sèvi avèk lojisyèl ki bay ak mikwoskòp la.

3. Rezilta yo

Nou te itilize de souch antijenik SARS-CoV-2 pou evalye kapasite ferritin II pou anpeche replikasyon viral nan selil Vero yo. Nan premye etap la, nou evalye anpèchman viral nan prezans konstan nan konpoze an nan mwayen kilti a. Deteksyon antijèn viral nan ELISA ki baze sou selil yo te jwenn ke valè IC50 pou ferritin II yo te 26.5 ak 40.4 µM pou viris Wuhan D614G ak Delta, respektivman (Figi 2A). Quantification nan tit viris yo nan medya kilti konfime ke liberasyon an nan viris la soti nan selil ki enfekte yo nan mwayen kilti a te inibit pa ferritin II, kòmanse soti nan 25 µM konsantrasyon, ak valè IC50 kalkile nan rediksyon an nan tit TCID50 yo te 24.0 ak 25.2. µM pou viris Wuhan D614G ak Delta, respektivman. Anplis, lè yo te ajoute konpoze an nan yon konsantrasyon 100 µM, pa gen okenn replikasyon viral ki te fèt nan selil Vero (Figi 2B).

cistanche ak tongkat ali

Akòz diferans enpòtan ki genyen nan pwoteyin RBD nan Wuhan D614G ak variants Omicron SARS-CoV-2 yo, lèt la pa t 'kapab detekte nan ELISA ki baze sou selil lè l sèvi avèk antikò anti-RBD ki disponib, jan li te ogmante a. RBD souch orijinal SARS-CoV-2 la. Men, rediksyon nan tit viral enfektye nan prezans ferritin II te menm plis pwononse nan varyant Omicron an konpare ak de lòt tansyon SARS-CoV-2 yo: yon diminisyon dis fwa nan tit viral la te note nan yon ferritin II. konsantrasyon osi ba ke 6.25 µM, pa gen okenn replikasyon viris ki rive nan konsantrasyon 50 µM ak pi wo (Figi 3). Li enpòtan pou sonje ke anpèchman SARS-CoV-2 sa a te fèt sèlman lè ferritin II te toujou prezan nan mwayen kilti a, tandiske efè sa a pa te obsève lè selil yo te pretrete ak konpoze an oswa lè yon viris/feritin. Yo te itilize melanj II nan etap adsorption ki te swiv pa enkubasyon san sibstans la (done yo pa montre).

We further assessed the cytotoxic effect of ferritin II on Vero-CCL81 cells. The presence of this compound in the culture medium at a concentration up to 400 µM had no negative effect on the viability of the cells, suggesting that the inhibition of SARS-CoV-2 replication was not due to the cell's metabolic dysfunctions (Figure 4). Therefore, the selectivity indices (determined as a ratio of CC50 to IC50 values) for ferritin II were >10, >15, and >64 pou Wuhan D614G, Delta, ak Omicron SARS-CoV-2 tansyon, respektivman.

Pou eksplore mekanis posib pou anpèchman SARS-CoV-2 pa ferritin II, nou etidye efè sibstans la sou antre viral pa yon tès absòpsyon RBD ranplasan. Kidonk, nou te detèmine ki jan 100 µM konsantrasyon ki pa toksik nan ferritin II ka afekte absòpsyon nan tetramethylrhodamine ki make (TAMRA) RBD pa selil Vero. TfR1, yon sib pou aksyon ferritin II, yo konnen kòm medyatè antre Tf; Se poutèt sa, TF ki make TAMRA a te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Kilti selil Vero nan prezans 100 µM ferritin II pou 18 èdtan san yo pa ajoute pwoteyin ki make pa te gen okenn efè enpòtan sou mòfoloji nwayo selil yo (Figi 5, panèl tèt (Mock)), endirèkteman ki endike absans selil nèkwoz ak apoptoz. Enkubasyon selil ak TF-TAMRA san tretman ferritin II te lakòz akimilasyon pwoteyin ki make andedan selil yo, san yo pa afekte rejyon nikleyè DAPI-tache (yon triyad mitan gòch imaj (TF-TAMRA) nan Figi 5). Tretman selil yo ak 100 µM ferritin II te lakòz yon rediksyon enpòtan nan enklizyon TF ki make (yon triyad mitan dwa imaj (TF-TAMRA) nan Figi 5). Enkubasyon selil ak RBD-TAMRA san tretman ferritin II, tankou nan ka TF ki make, te lakòz akimilasyon pwoteyin ki make nan sitoplasm selil la, san yo pa afekte rejyon nikleyè a (triyad anba gòch (RBD-TAMRA) nan Figi 5). ). Lè selil yo te trete ak 100 µM ferritin II, yon redistribisyon siyal TAMRA te fèt. Olye pou yo enkòpore RBD ki make nan selil yo, siyal TAMRA a te distribye respire sou sifas selil la, ak sèlman yon ti pòsyon nan etikèt la fòme grap ki pasyèlman sipèpoze tach DAPI nan nwayo yo, ki endike yon lokalizasyon sifas nan etikèt la TAMRA (anba. triyad dwat (RBD-TAMRA) nan Figi 5). Rezilta yo montre nan Figi 5 endike ke tretman an nan selil Vero ak 100 µM ferritin II afekte enkòporasyon nan RBD ki make nan selil yo. Lè ou konsidere ke pa gen okenn done ki disponib kounye a sou efè a nan ferritin II sou reseptè ACE2 a, li pa ka eskli ke efè a obsève se akòz obligatwa nan ki make RBD nan sifas selil la, men absans la nan TfR1 sou selil yo anpeche enkòporasyon an. nan RBD nan selil yo trete ak ferritin II.

4. Diskisyon

SARS-CoV-2 itilize plizyè mekanis pou anvayi selil lame yo epi lakòz enfeksyon viral siksè, epi kounye a yo evalye yon pakèt inibitè antre selil lame kòm estrateji terapetik COVID-19 [21]. Nan etid aktyèl la, nou rapòte rezilta preliminè pou anpeche SARS-CoV-2 replikasyon an vitro pa tretman selil sib yo pa ferritin II, yon molekil ti gwosè ki ka selektivman degrade reseptè transferrin 1. Transferrin satire fè. (Fe2-Tf oswa holo-Tf) posede yon gwo afinite ak reseptè li yo, ki eksprime sou sifas pifò selil imen yo epi li entènalize nan konplèks ak holo-Tf pa andositoz reseptè-medyatè. Fòmasyon nan konplèks ant fè ak Tf, osi byen ke ant holo-Tf ak TfR, se pH-depandan epi li bay liberasyon an fè soti nan Tf ak Tf soti nan TfR nan anviwònman an asid nan endosome. Resiklaj la nan endosome rezilta nan TfR retounen nan manbràn plasma a ak divilge apo-fòm nan Tf pou yon lòt wonn nan livrezon fè nan selil la. Absorption an fè pa selil mamifè yo se yon pwosesis enpòtan pou kontwole kwasans selil kansè yo ki manke ajan famasi ak mekanis aksyon li te ye. Yon tès depistaj 2000 ti-gwosè konpoze ki soti nan bibliyotèk Divèsite Enstiti Nasyonal Kansè a te idantifye 10 inibitè transpò fè ak valè IC50 ki sòti nan 5 a 30 µM [22]. Ferristatin II te itilize kòm yon bloke nan TfR1 nan etid nan enfeksyon selil atravè TfR1 ak viris epatit C [23,24], viris gastroanterit transmissible [25], ak reoviris [26] (Tablo 1). Li ta dwe remake ke eksperyans sou degradasyon TfR1 ak ferritin II yo prèske toujou te pote soti nan prezans pèmanan nan sibstans la nan mwayen an.

Nan yon konfigirasyon tès menm jan an, nou te jwenn ke ferritin II te nòmalman pa toksik pou selil Vero pandan 48h ekspoze a yon konsantrasyon 400 µM. Konsantrasyon sa a ase pou degradasyon konplè TfR1 sou sifas selil kiltive yo [16]. Sou yon bò, efè sa a te konfime pa absorption redwi nan etikèt Fe2-Tf pa selil Vero pretrete ak 100 µM nan ferritin II pou 18 èdtan. Ka bloke ki pa konplè nan absorption Tf ki make, nan ka sa a, ka eksplike pa absans ferritin II nan moman adisyon a nan pwoteyin ki make. Nan lòt men an, tretman an nan selil Vero pa ferritin II dramatikman chanje absorption nan RBD nan Spike pwoteyin. Nan etid preliminè sa a, nou pa t 'evalye nivo ekspresyon lòt reseptè SARS-CoV-2 anba tretman ferritin II epi nou pa t' pwovoke knock-out nan reseptè li te ye sa yo pou pwouve wòl endepandan TfR nan medyatè SARS. -CoV-2 antre selil, ki se yon domèn nan rechèch plis nou an.

Men, yon koneksyon relativman inifòm nan RBD nan sifas selil yo trete ak ferritin II ka endike ke kèk nan reseptè SARS-CoV-2 yo sou selil Vero yo rete fonksyonèl epi mare viris la, men nan absans TfR1, viris la pa ka antre nan selil la. Reseptè sa a gen plis chans ACE2 depi Prabhakara et al. demontre yon ogmantasyon nan absorption nan RBD ki make ansanm ak transferin ki make pa selil ki overexpressing ACE2, sijere ke ACE2 ankouraje absorption RBD atravè andositoz clathrin-medyatè, ki se eksplwate pa TfR1 [28]. Anplis de sa, gen prèv ki montre SARS-CoV-2 ka enfekte selil ACE2-negatif lè l sèvi avèk chemen altènatif pou antre [29]; Se poutèt sa, yon analiz pi pwofon sou aksyon ferritin II sou divès kalite selil pèmèt pou enfeksyon SARS-CoV-2 pral fè limyè sou wòl TfR1 nan sik lavi viris la. Pou w konprann kijan sibstans sa a pwomèt pou terapi enfeksyon SARS-CoV-2 alavni, li enpòtan pou w konnen ki jan konpoze sa a metabolize nan vivo. Rat ki te trete ak ferritin II te gen pi ba nivo TfR1 nan fwa a, epi redwi serik fè ak saturation Tf san chanjman nan fwa ki pa heme fè [16].

Anplis de sa, ferritin II pwovoke ekspresyon hepcidin [16,30]. Nan yon lòt etid, ekspresyon jèn yo te evalye apre administrasyon Ferritin II (nan lwil mayi) nan vant rat Wistar nan yon dòz 146 mg / kg / jou pou 7 jou. Pami jèn pwoteyin fè-reglemante yo, yo te obsève yon ekspresyon HFE diminye ak ogmante ekspresyon CP, GDF15, ak HAMP apre administrasyon ferritin II [31]. Nòt, efè ferritin II sou chemen siyal p53-depandan an te gen plis chans pou baryè ki limite itilizasyon li sèlman kòm yon inibitè TfR1 sou kilti selil yo [31].

Feristatin II konnen tou kòm nwa dirèk 38, Chlorazol nwa E, CI 30235, oswa CAS 1937- 37-7 epi li souvan itilize kòm yon lank pou tach granulosit ak onychomycosis [32,33]. Sa ki enpòtan, benzidine-metabolit nan nwa dirèk 38 ki genyen yon risk potansyèl pou kansè nan blad pipi yo te obsève nan echantiyon pipi nan travayè nan yon inite ti-echèl ki te fabrike lank sa a [34]. Malgre ke ferritin II pa ka itilize dirèkteman nan imen, pou rezon sa a, gen yon agiman ke estrateji nan anpeche SARS-CoV-2 antre nan selil la pa bloke TfR1 se pwomèt, paske apwòch sa a vize reseptè a sou lame a. selil olye ke pwoteyin ki gen tandans mitasyon viral yo. Anplis de sa, plis etid yo jistifye pou idantifye konpoze chimik ki aji tankou molekil ferritin II a, men san fòmasyon metabolit ak risk potansyèl pou sante yo.

cistanche malfonksyònman erectile

Referans

1 Sciolo, F.; Daniele, A.; Amato, F.; Pastore, L.; Matera, MG; Cazzola, M.; Castaldo, G.; Bianco, A. ACE2: Gwo Reseptè Antre Selil pou SARS-CoV-2. Lung 2020, 198, 867–877. [CrossRef] [PubMed]

2. Ni, W.; Yang, X.; Yang, D.; Bao, J.; Li, R.; Xiao, Y.; Hou, C.; Wang, H.; Liu, J.; Yang, D.; et al. Wòl anzim konvèti anjyotansin 2 (ACE2) nan COVID-19. Crit. Care 2020, 24, 422. [CrossRef] [PubMed]

3. Shang, J.; Wi, G.; Shi, K.; Wan, Y.; Luo, C.; Aihara, H.; Geng, Q.; Auerbach, A.; Li, F. Baz estriktirèl nan rekonesans reseptè pa SARS-CoV-2. Nature 2020, 581, 221–224. [CrossRef] [PubMed]

4. Wan, Y.; Shang, J.; Graham, R.; Baric, RS; Li, F. Rekonesans reseptè pa nouvo kowonaviris la soti nan Wuhan: yon analiz ki baze sou etid estriktirèl ki dire lontan sou SARS kowonaviris. J. Virol. 2020, 94, e00127-20. [CrossRef] [PubMed]

5. Zhang, Q.; Chen, CZ; Swaroop, M.; Xu, M.; Wang, L.; Lee, J.; Wang, AQ; Pradhan, M.; Hagen, N.; Chen, L.; et al. Silfat Heparan ede SARS-CoV-2 nan antre nan selil epi li ka vize pa dwòg apwouve an vitro. Cell Discov. 2020, 6, 80. [CrossRef]

6. Wang, K.; Chen, W.; Zhang, Z.; Deng, Y.; Lian, JQ; Du, P.; Wei, D.; Zhang, Y.; Solèy, XX; Gong, L.; et al. CD147-spike protein se yon nouvo wout pou enfeksyon SARS-CoV-2 pou ale nan selil lame yo. Transduct siyal. Sib. La. 2020, 5, 283. [CrossRef]

7. Wei, C.; Wan, L.; Yan, Q.; Wang, X.; Zhang, J.; Yang, X.; Zhang, Y.; Fan, C.; Li, D.; Deng, Y.; et al. HDL-scavenger reseptè B tip 1 fasilite SARS-CoV-2 antre. Nat. Metab. 2020, 2, 1391–1400. [CrossRef]

8. Daly, JL; Simonetti, B.; Klein, K.; Chen, KE; Williamson, MK; Anton-Plagaro, C.; Shoemark, DK; Simon-Gracia, L.; Bauer, M.; Holland, R.; et al. Neuropilin-1 se yon faktè lame pou enfeksyon SARS-CoV-2. Science 2020, 370, 861–865. [CrossRef]

9. Wang, S.; Qiu, Z.; Hou, Y.; Deng, X.; Xu, W.; Zheng, T.; Wu, P.; Xie, S.; Bian, W.; Zhang, C.; et al. AXL se yon reseptè kandida pou SARS-CoV-2 ki ankouraje enfeksyon nan selil epitelyal poumon ak bwonch. Selil Res. 2021, 31, 126–140. [CrossRef]

10. Cantuti-Castelvetri, L.; Ojha, R.; Pedro, LD; Djannatian, M.; Franz, J.; Kuivanen, S.; van der Meer, F.; Kallio, K.; Kaya, T.; Anastasia, M.; et al. Neuropilin-1 fasilite antre nan selil SARS-CoV-2 ak enfeksyon. Syans 2020, 370, 856–860. [CrossRef]

11. Jackson, CB; Farzan, M.; Chen, B.; Choe, H. Mekanis SARS-CoV-2 antre nan selil yo. Nat. Rev Mol. Selil Biol. 2022, 23, 3–20. [CrossRef] [PubMed]

12. Tang, X.; Yang, M.; Duan, Z.; Liao, Z.; Liu, L.; Cheng, R.; Fang, M.; Wang, G.; Liu, H.; Xu, J.; et al. Reseptè transferrin se yon lòt reseptè pou antre SARS-CoV-2. bioRxiv 2020. [CrossRef]

13. Hentze, mw; Muckenthaler, MU; Andrews, NC Balans aksyon: kontwòl molekilè nan metabolis fè mamifè. Cell 2004, 117, 285–297. [CrossRef] 14. Wessling-Resnick, M. Crossing the Iron Gate: Poukisa ak Ki jan Reseptè Transferrin Mediate Antre Viral. Ann. Rev Nutr. 2018, 38, 431–458. [CrossRef] [PubMed]

15. Horonchik, L.; Wessling-Resnick, M. Ti-molekil fè transpò inhibiteur ferritin/NSC306711 ankouraje degradasyon reseptè transferrin la. Chem. Biol. 2008, 15, 647–653. [CrossRef]

16. Byrne, SL; Buckett, PD; Kim, J.; Luo, F.; Sanford, J.; Chen, J.; Enns, C.; Wessling-Resnick, M. Ferristatin II ankouraje degradasyon reseptè transferrin -1 nan vitro ak nan vivo. PLoS ONE 2013, 8, e70199. [CrossRef]

17. Sokolov, AV; Voynova, IV; Kostevich, VA; Vlasenko, AY; Zakharova, ET; Vasilyev, VB Konparezon entèraksyon ant Ceruloplasmin ak Lactoferrin/Transferrin: Pou mare oswa pa mare. Byochim. Biokhimiia 2017, 82, 1073–1078. [CrossRef]