Plis Evalyasyon Salvia Haenkei kòm yon estrateji inovatè pou kontrekare foto-aje po ak retabli entegrite baryè a.

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

abstrè:Po se baryè esansyèl nan kò imen an ki fè plizyè fonksyon. Faktè andojèn, nan konsè ak atak ekstèn, kontinyèlman afekte entegrite po, ki mennen ale nan chanjman estriktirèl diferan ki enfliyanse pa sèlman aparans po a, men tou divès fonksyon fizyolojik li yo. Chanjman nan fonksyon baryè yo mennen nan yon risk ogmante pou devlope maladi ak reyaksyon segondè, kidonk enpòtans ki genyen nan kenbe entegrite nan baryè epidèm la ak ralanti pwosesis la aje po se evidan.kwasans penis cistancheSalvia hankie (SH) te dènyèman idantifye kòm yon potansyèl ajan anti-senescence; ekstrè li yo kapab diminye nivo a nan selil senesan pa afekte lage ll.1a ak diminye espès oksijèn reyaktif (ROS) jenerasyon. Nan etid sa a, yo te teste ekstrè SH sou yon liy selil keratinosit imen (HaCaT) ki ekspoze a faktè estrès ki gen rapò ak aje twò bonè nan selil tankou radikal gratis ak radyasyon iltravyolèt B. Nou te konfime ke SH aji kòm yon scavenger nan ROS epi li te jwenn kapasite li nan retabli entegrite baryè po a nan ranfòse estrikti nan sitoskelèt, sele junctions yo sere, ak ogmante pousantaj migrasyon nan selil yo. Bay rezilta sa yo, travay sa a vin enpòtan, idantifye Salvia hankie kòm yon konpoze itil pou tretman po anti-aje nan pèfòmans klinik.

Tanpri klike isit la pou konnen plis

Entwodiksyon

Po an sante ak fonksyone esansyèl pou pwoteje dezidratasyon ak pénétration nan divès kalite kont 100 pousan, mikwo-òganis, alèrjèn, irite, ak radyasyon. Ekspozisyon chak jou nan ajan ekstèn konbine avèk kèk faktè intrinsèques, tankou jenetik, metabolis selilè, òmòn, ak pwosesis metabolik, mennen nan aje natirèl la nan po a [1]. An patikilye, fenomèn aje po a gen anpil rapò ak radyasyon iltravyolèt, polisyon, itilizasyon repetitif nan misk, ak gravite [2, 3]. Se poutèt sa, aje po a soti nan chanjman kimilatif estriktirèl ak fizyolojik ak modulasyon pwogresif kouch po [2, 4, 5]. Menm si aje pa konsidere kòm yon kondisyon patolojik, men pito yon pwosesis byolojik ak inevitab, korelasyon li yo ak yon varyete de maladi po kounye a byen etabli. Lè nou konsidere ke maladi po ki pi enpòtan ki gen rapò ak laj yo se maladi dejeneratif, neoplasm benign ak malfezan, elatriye, enpòtans ki genyen nan swen po pou trete oswa anpeche sèten maladi po rezilta yo dwe evidan.[6-8]. Sèjousi, estrateji po anti-aje aji pou ranvèse siy po ak epidèm nan foto / aje kwonolojik. Dapre apwòch yo, yo ka klase jan sa a: swen kosmetolojik, ajan aktualite, pwosedi anvayisan, ajan sistemik, evite aje faktè ekzojèn, koreksyon nan fòm ak abitid, ak medikaman prevantif [9]. Gen de gwoup prensipal ajan ki ka itilize kòm eleman nan fòmilasyon anti-aje: 1. Regilatè selil yo, tankou retinol, peptides, ak faktè kwasans, dirèkteman aji sou metabolis kolagen an ak pwodiksyon; 2. Antioksidan, tankou vitamin, polifenol, ak flavonoid, yo kapab diminye degradasyon kolagen an [9].

Prèv sibstansyèl sipòte lide ke aje po se sitou kondwi pa ROS, ki te pwodwi pandan metabolis selil oksidatif andojèn [10,11]. Li konnen ke akimilasyon ROS responsab domaj selil ki gen ladan peroksidasyon lipid, domaj pwoteyin manbràn, ak mitasyon ADN ki mennen nan chanjman estriktirèl ak fonksyonèl po. Pandan tan an, selil imen yo sipòte yon ogmantasyon natirèl nan nivo ROS, ki asosye ak pèt pasyèl nan defans antioksidan yo. Kondisyon inevitab sa a se plis ankouraje pa iradyasyon iltravyolèt chak jou (UVR) ki pwovoke sentèz matris metaloproteinases (MMPs) ak, kidonk, destriksyon kolagen MMP-medyatè [12, 13]. Etid in vivo yo demontre relasyon kozatif ant domaj mitokondriyo oksidatif, senesans selilè, ak fenotip aje [10, 14].

Senesans selilè defini kòm yon arè ki estab nan kwasans selil ki fèt nan tout selil imen pandan aje [15-17]. Kòm yon rezilta nan evènman estrès, tankou ekspresyon onkogene, jenerasyon ROS, ak domaj ADN (pa egzanp pwovoke pa UVR, an patikilye pa limyè UVB), selil yo ka prematireman vin senesan [18].benefis cistanche salsaNan senaryo sa a, li parèt evidan enpòtans ki genyen nan devlope estrateji inovatè ki kapab anpeche akimilasyon nan selil senesan oswa oaza touye yo, konsa kontrekare aje ak maladi ki asosye ak aje. Dènyèman, nou te idantifye Salvia hankie(SH), yon plant Bolivi ki rich nan vitamin B ak pwopriyete antioksidan, kòm yon potansyèl ajan anti-senesans [18].

Akimilasyon nan selil senesan sou tan se byen li te ye yo dwe youn nan mekanis ki pi enpòtan nan ki tisi yo sibi pwosesis la aje, ki parèt yo dwe prensipalman deklanche pa pèrsistans nan yon estati enflamatwa tipik. An reyalite, malgre selil senesan yo pa kapab pwopagasyon, yo posede gwo aktivite metabolik epi yo pwodui avèk efikasite plizyè molekil pro-enflamatwa [19]. Lè w itilize yon modèl epidèm po imen (EpiSkin), li te tout bon demontre ke ekstrè SH diminye nivo selil senesan yo lè yo afekte liberasyon ILla ak diminye jenerasyon ROS [18].

Anba kondisyon omeyostatik, po a se yon baryè efikas ki pwoteje kont atak ekstèn ak faktè andojèn epi kontwole pèt likid, elektwolit, ak pwoteyin. Travay enpòtan sa a se sitou atribiye nan epidèm la, yon dinamik, trè stratifye epitelyal. De pi gwo konstitiyan epidèm yo se stratum corneum la, kouch ekstèn lan, ak junctions sere (TJs), junctions entèselilè ki sele keratinosit adjasan nan granulosum nan strat [20]. Adhesion selil-selil yo nesesè pou kenbe entegrite epidèm-baryè.cistanche tubulosa dosage redditFonksyon enpòtan sa a akonpli pa junctions selil-selil espesyalize: junctions adherens (AJs), desmosomes, ak junctions sere. Estrikti sa yo pa sèlman pèmèt koneksyon fizik ant selil yo, men an jeneral òganize eleman cytoskeletal, epi modil chemen siyal ki enplike nan devlopman tisi, estrikti, ak fizyoloji. Dènye etid jenetik san atann revele yon wòl ki pa kanonik nan pwoteyin junctional, pote soti enpòtans ki genyen nan diafonis junctional, entèdepandans, ak konpansasyon pou pèmèt solidite tisi [21].

Isit la nou etidye aktivite yon ekstrè Salvia haenkei pou konprann mekanis molekilè ki responsab efè pwoteksyon li sou foto / kwonolojik aje po. Avèk pèspektiv sa a, yo te itilize keratinosit imen espontaneman imòtalize (HaCaT) kòm modèl in vitro, epi yo te analize mekanis SH nan aksyon anba yon rejim fondamantal kòm byen ke nan kondisyon estrès pwovoke pa H202 ak / oswa UVB iradyasyon.

REZILTA

Pwofil ki an sekirite nan ekstrè SH ak pwopriyete antiaging Estrès oksidatif nan po a jwe yon gwo wòl nan pwosesis la aje ak nan patojèn nan plizyè maladi po [22]. Matic et al. deja demontre aktivite anti-senesans nan Salvia haenkei tou ki gen rapò ak pwopriyete scavenging li yo [18]. Efè pwoteksyon sa yo ta ka eksplwate pou devlope yon nouvo tretman pou repare po ki kapab prezève entegrite baryè a. Avèk objektif pou envestige pwofondman pwopriyete SH, yo te verifye aktivite ekstrè sou viabilite selil ak jenerasyon ROS nan modèl selil HaCaT.

Cistanche ka anti-aje

Yo te fè tès viabilite selil la pou adrese posib efè sitotoksik ekstrè Salvia haenkei sou keratinosit yo. Selil HaCaT yo te trete ak ekstrè SH （0.01-10 ug/ml） pou 24 ak 48 èdtan. Vitabilite selil yo te evalye pa Trypan blue Exclusion Assay. Figi 1A ak 1B montre ke tretman ak ekstrè SH pa afekte viabilite selil ki konfime pwofil sekirite ekstrè a sou selil HaCaT anba kondisyon eksperimantal yo itilize yo.

Aktivite ekstrè Salvia haenkei sou jenerasyon ROS yo te teste nan selil HaCaT apre 3-24 èdtan tretman ak anvan ak apre ekspoze H2O2.

Rezilta nan Figi 2A montre ke SH kapab diminye nivo ROS fondamantal nan selil yo, patikilyèman pandan tan tretman an 3-èdtan. Anplis yon ogmantasyon siyifikatif nan nivo ROS apre eksitasyon H-Oz (Figi 2C), SH kapab anpeche pwodiksyon ROS. Ekstrè SH (0.01 ug/ml) siyifikativman redwi (-25 pousan) jenerasyon ROS pwovoke pa estimilis oksidatif la (Figi 2B), ki montre yon efè ki konparab ak NAC apre 3 èdtan nan tretman an. 24 èdtan nan tretman SH parèt pi plis ROS efikas kontrekare enkreman, nan siyifikativman diminye nivo ROS nan 1 ak 10 ug / ml (Figi 2B). Rezilta sa yo konfime Salvia haenkei

efè antioksidan, jan yo te obsève deja [18], montre yon efè fondamantal antioksidan ki deja kòmanse nan tretman kout; efè a nan anpeche ogmantasyon estimilis oksidatif-induit se pi enpòtan pou tan tretman pi long.

Yo rapòte ke radyasyon iltravyolèt pwovoke yon ogmantasyon nan nivo entraselilè ROS nan po moun ki lakòz domaj ak aje twò bonè ak lòt patoloji [23-25]. Se poutèt sa, efè ekstrè SH sou UVB-medyatè pwodiksyon ROS yo te evalye. Kòm espere, rezilta nan Figi 3C montre yon ogmantasyon siyifikatif nan nivo ROS intraselilè apre eksitasyon UVB. Tretman ak SH, ki pwovoke yon tandans diminye nivo ROS fondamantal nan selil yo (Figi 3A), se kapab anpeche ogmantasyon nan pwovoke pa eksitasyon UVB (Figi 3B). 3 èdtan nan tretman SH pwovoke yon tandans diminye nivo ROS; yon tretman SH pi long pi efikas nan kontrekare estrès oksidatif la, ki montre yon diminisyon enpòtan jan yo rapòte nan Figi 3A. Done sa yo souliye aktivite antioksidan Salvia haenkei tou nan estrès oksidatif UVB-medyatè.

Kòm mansyone, ogmante prèv sijere ke selil senesan akimile nan po kwonolojik ak foto ki gen laj, kontribiye nan laj ki gen rapò ak chanjman po ak patoloji [26]. Se poutèt sa, efè Salvia hankie te evalye sou makè senesans p21 ak p27 (ki anpeche fosforilasyon pwoteyin retinoblastom (Rb) ak aktivite inhibition sou CDK2-cyclin E, respektivman [27]) apre foto-estrès pwovoke pa radyasyon iltravyolèt. Rezilta nan Figi 4 montre ke UVB iradyasyon pwovoke yon ogmantasyon siyifikatif nan nivo p21 ak p27 mRNA an konparezon ak kontwòl la unstimulated.cistanche แอ ม เว ย์Yon tandans menm jan an nan prevansyon ogmantasyon yo obsève nan selil trete ak SH. SH 1 ug/ml pwovoke yon rediksyon enpòtan nan nivo p21 konpare ak kontwòl UVB ankouraje, pandan ke lòt konsantrasyon yo pwovoke yon tandans diminye (Figi 4A). Nivo P27 siyifikativman redwi pa pretretman ak SH 0.01,0.1 ak 10 ug/ml (Figi 4B).

Li etabli tou ke selil senesan afekte mikwo-anviwònman an pa sekrete yon melanj pro-enflamatwa nan chemokin, sitokin, òmòn kwasans ak proteaz, ke yo rekonèt kòm fenotip sekretè senescence-asosye (SASP) [28]. Rezilta nan Figi 5 montre ke UVB eksitasyon pwovoke yon ogmantasyon siyifikatif nan ILla (A), IL6 (B), ak IL18 (C) mRNA nivo ki gen rapò ak kontwòl la unstimulated. Pretretman ak SH prezante yon aktivite fò nan kontrekare ogmantasyon nan nivo cytokine. Jan yo montre nan Figi 5A, SH 10 ug/ml siyifikativman diminye nivo ILla; ogmantasyon nan IL6 siyifikativman kontrekare pa SH 0.01,0.1 ak 10 ug / ml (Figi 5B) pandan ke tout konsantrasyon yo teste yo kapab siyifikativman diminye nivo IL18 (Figi 5C). Antretyen baryè po Bay rezilta yo rapòte pi wo a sou yon liy selil epitelyal, efè ekstrè SH sou plizyè pwoteyin ak pwosesis ki enplike nan antretyen baryè po ak reparasyon domaj tisi yo te evalye.

Sirtuin-1 ekspresyon

Plizyè etid in vitro rapòte ke radyasyon UVB pwovoke yon diminisyon nan nivo pwoteyin Sirtuinl (SIRT1) nan fibroblast imen, ki endike patisipasyon SIRT1 nan domaj UVB-medyatè [29]. Se konsa, efè ekstrè Salvia haenkei sou ekspresyon pwoteyin Sirtuinl te evalye pa tès Western blot (Figi 6). Kòm espere, eksitasyon UVB pwovoke yon diminisyon enpòtan nan ekspresyon pwoteyin SIRTI nan selil HaCaT. Se poutèt sa, aktivite ekstrè SH sou nivo SIRT1 te envestige. Enteresan, rezilta yo montre ke 1 ug/ml ekstrè SH, an konparezon ak kontwòl, pwovoke yon ogmantasyon nan ekspresyon SIRTl (plis 40 pousan) nan kondisyon fondamantal, ki endike yon efè enteresan potansyèl sou nivo SIRT1. Kòm espere, eksitasyon UVB pwovoke yon rediksyon enpòtan nan nivo SIRT1. Rezilta yo montre ke pretreatman an ak 0.01 ug/ml SH ekstrè montre yon efè amelioratif nan nivo Sirtuin 1, an konparezon ak kontwòl UVB-trete a.

Esè gerizon blesi

Keratinosit yo se eleman prensipal yo nan epidèm la, ki bay yon baryè ant òganis lan ak anviwònman an. Se poutèt sa, pwopagasyon yo ak migrasyon yo jwe yon wòl kle nan antretyen nan yon baryè efikas ak nan geri blesi apre blesi [30, 31]. Kidonk, yo te evalye efè SH sou migrasyon selil HaCaT. Imaj nan Figi 7A montre ke tretman ak SH mennen nan yon rediksyon nan epesè nan grate a ki endike yon efè sou migrasyon selil HaCaT. Figi 7B rapòte konstriksyon kimogram nan vitès migrasyon selil HaCaT yo; imaj yo montre yon ogmantasyon depandan de konsantrasyon nan migrasyon selil yo. Grafik nan Figi 7C endike yon ogmantasyon siyifikatif nan vitès migrasyon selil apre 4-8 èdtan tretman ak 0.01 ug/ml ekstrè SH. Ogmantasyon maksimòm lan rive nan entèval 8-12 èdtan, kote pousantaj nan selil vitès migrasyon selil yo apeprè 165 pousan parapò ak kontwòl la. Done sa yo, kòm rezilta yo jwenn sou pwopagasyon selil, ki endike ke konsantrasyon ki pi ba nan ekstrè SH se kapab pwovoke yon ogmantasyon nan vitès migrasyon selil ki pa gen rapò ak yon fenotip hyperproliferative.

Sere junctions'maintenance

Osi byen ke stratum corneum, junctions sere (TJs) jwe yon wòl enpòtan nan entegrite po, aji kòm yon baryè pou dlo ak solute, epi yo patisipe nan diferansyasyon, pwopagasyon, polarite selil, ak pwosesis transduction siyal nan selil yo. Etid resan yo te demontre ke UV-limyè chanje ekspresyon an ak lokalizasyon nan pwoteyin sèl nan estrikti TJ, ki an vire deranje fonksyon an baryè nan po [32].

Yo nan lòd yo evalye efè Salvia haenkei ekstrè kòm yon ajan pwoteksyon posib kont dezòd TJs, ekspresyon occludin te mezire pa imunositochimi apre ekspoze a radyasyon UVB. Imaj nan Figi 8A, ak 8B montre ke tretman ak tou de konsantrasyon nan SH pwovoke yon ogmantasyon nan ekspresyon pwoteyin occludin, ankouraje fòmasyon junction itil nan antretyen nan entegrite nan baryè epidèm. Kòm espere, apre ekspoze a radyasyon UVB, selil yo montre yon bag manbràn iregilye epi ki pa defini (Figi 8A). Tretman SH, espesyalman nan konsantrasyon ki pi wo a, prezève mòfoloji manbràn nan kenbe estrikti a ki konparab ak kontwòl unstimulated la. Ekstrè SH ankouraje ranfòsman junction ak anpeche domaj la pwovoke pa ekspoze UVB, kenbe fonksyonalite baryè po a.

Filaggrin ekspresyon

Efè ekstrè Salvia haenkei sou ekspresyon pwoteyin filaggrin (FLG) te evalye pa imunositochimi. Filaggrin se yon pwoteyin estriktirèl fondamantal nan devlopman ak antretyen nan baryè po a. Rezilta nan Figi 9A, ak 9B montre yon ogmantasyon depandan konsantrasyon nan ekspresyon pwoteyin filaggrin apre tretman pou 24h ak ekstrè SH. Anplis de sa, ekspresyon an nan pwoteyin F-aktin endike yon distribisyon regilye nan selil yo, apre tretman an ak SH, ki mennen nan yon kontinwite estriktirèl byen òganize nan baryè epitelyal la. Done sa yo endike ke SH gen yon enpak benefik sou baryè po a, amelyore ekspresyon filaggrin, ki esansyèl pou fòmasyon kòrèk la ak fonksyon po a.

Ekspresyon metaloproteinaz

Ekspozisyon po a radyasyon iltravyolèt pwovoke defisyans nan matris ekstraselilè (ECM) ki lakòz pli, afesman, ak laksite, karakteristik prensipal yo nan aje po. Matrix metaloproteinases (MMPs) se prensipal responsab pou degrade eleman ECM yo tankou kolagen an, elastin, fibronectin, ak proteoglycans [33].konbyen cistanche pranYon gwo kantite etid souliye ke ekspoze po a iradyasyon UV pwovoke ogmantasyon nan diferan MMPs, ki afekte aparans po ak sante [34-37].

Rezilta nan Figi 10 montre radyasyon UVB ogmante ekspresyon mRNA jelatinaz MMP-2 ki degrade kolagen manbràn sousòl ak kolagen estriktirèl denatire [38]. Tretman ak SH kapab redwi siyifikativman MMP-2 nivo mRNA (SH 0.01-0.1-10 ug/ml) ki endike aktivite ekstrè SH nan antretyen entegrite estriktirèl la. po, domaje pa foto-estrès.

DISKISYON

Aje po a se efè kimilatif faktè intrinsèques ak ekstrèm ki mennen nan yon bès nan po a, pwovoke eklèsi, redisman, ak pèt fleksibilite. Po se premye baryè ant òganis lan ak anviwònman an, kidonk antretyen entegrite fonksyonèl ak anatomik li esansyèl. Anplis pwosesis natirèl aje ak kondisyon ki gen rapò ak aje tankou dyabèt, menopoz, elatriye, faktè ekstrèm ka dakò nan afekte estrikti po; an patikilye fotodomaj, polisyon, oswa faktè fòm (fimen, rejim alimantè, estrès emosyonèl, elatriye) ka anpeche estrikti ak fonksyon po [39,40]. Keratinosit yo se pi gwo eleman nan epidèm la, ki bay baz selilè pou baryè ki pi eksteryè a; nan travay sa a, liy selil keratinosit imen HaCaT te ekspoze a faktè estrès, tankou radikal gratis ak radyasyon iltravyolèt B, yo nan lòd yo imite natirèl po-aje aje, kidonk chanje fonksyon an baryè. Salvia hankie te dènyèman idantifye kòm yon potansyèl ajan anti-senesans sijere aplikasyon posib li nan aje po ak maladi ki gen rapò ak aje; Se poutèt sa, efè a nan yon ekstrè nan plant sa a te pwofondman envestige sou paramèt ki gen rapò ak aje po, antretyen nan entegrite po, ak kondisyon fizyolojik. Pwodiksyon espès oksijèn reyaktif oswa radikal gratis atravè pwosesis metabolik nòmal andojèn oswa UVR ak polisyon yo panse pou kontribye nan pwosesis aje po. Po se vilnerab a yon varyete de reyaksyon redox, ak balans redox la esansyèl nan antretyen nan omeyostazi po. Ba konsantrasyon ROS fè egzèsis aktivite fizyolojik, men nivo ogmante nan espès sa yo patisipe nan aktivasyon an nan chemen ki lakòz ogmante degradasyon nan kolagen an, akimilasyon nan elastin, aktivasyon nan metaloproteaz ki degrade matris, elatriye [41]. Anplis, ROS jwe yon wòl enpòtan nan pwosesis patolojik ki gen ladan aje, enflamasyon, blesi, ak patojèn plizyè maladi po tankou psoriasis ak vitiligo [42]. Enteresan, yo montre Salvia haenkei ekstrè diminye nivo ROS nan kondisyon fondamantal, kondisyon estrès oksidatif, ak kondisyon estrès pwovoke pa iradyasyon UVB, ki endike yon efè pwoteksyon potansyèl kont chanjman ROS-medyatè [22].

Nan sipò efè antiaging Salvia hankie te deja obsève, nan travay sa a, nou te pwouve kapasite ekstrè SH diminye senesans nan keratinosit ankouraje pa radyasyon UVB. Rezilta yo montre ke SH kapab redwi ekspresyon jèn p21 ak p27 makè senesans, ki ankouraje pa radyasyon UVB. Enteresan, ekstrè SH montre aktivite pwomèt nan diminye repons enflamatwa ankouraje pa fotodamaj nan selil yo, pa bese transkripsyon interleukins. Anplis de sa, nou te curieux demontre ke Salvia haenkei ekstrè pwovoke ekspresyon pwoteyin Sirtuinl pa sèlman apre estrès, men tou nan kondisyon fondamantal, ki montre aktivite pwomèt nan ralanti pwosesis aje. Fanmi Sirtuin, ak an patikilye SIRT1, yo te montre yo jwe yon wòl nan aje-photoaging, espesyalman nan anpèchman nan MMPs ak degradasyon kolagen an ki vin apre; syans miltip souliye wòl pwoteksyon li nan fotoaging UVB-medyatè. Konpoze natirèl tankou juglone (5-hydroxy-1,4-napthalenedione) yo te montre retabli SIRT1 nan nivo nòmal apre tretman UVB, sijere ke SIRTI ta ka jwe yon wòl nan anpeche UVB-induit kanserojèn. [29]. Rezilta nou yo endike tou, patisipasyon posib nan sirtuin nan pwosesis reparasyon apre estrès UVB ak wòl yo nan antretyen nan omeyostazi epidèm.

Enflamatwa maladi po komen, tankou dèrmatoz atopik ak psoriasis, osi byen ke pwosesis aje, montre diminye fonksyon baryè, ak repons selil epidèm yo nan dezòd baryè ka agrave, kenbe, oswa menm kòmanse kondisyon sa yo. Rezilta travay sa a revele yon gwo kapasite SH pou retabli entegrite baryè po a pa modulasyon plizyè pwoteyin ki enplike nan pwosesis sa yo. An patikilye, li te obsève eksitasyon nan occludin ak transcription filaggrin endike yon aksyon ranfòsman sou adezyon ant selil yo. Defisi filagrin eritye ak akeri afekte baryè epidèm la, chanje òganizasyon an nan

cytoskeleton filaman keratin ak estrikti nan anvlòp la cornified nan po a [43]. Anplis de sa, defo nan ekspresyon FLG pwovoke yon diminisyon nan kantite keratohyalin granules, yon otòn ki make nan konsantrasyon faktè natirèl idrate (NMF), ak alkalinizasyon nan pH la po [44]. Anplis, chanjman nan pwoteyin claudins ak occludin, ki fè pati pwoteyin Tight junctions (TJs), yo byen dekri konsènan pwosesis aje. TJ yo responsab pou sele espas entèselilè ant selil epitelyal yo, pou fòme yon baryè fonksyonèl, epi yo patisipe nan pwopagasyon selilè ak diferansyasyon [45]. Ekstrè Salvia haenkei yo te montre amelyore ekspresyon filaggrin ak prezève lokalizasyon occludin sou manbràn selilè, andikape pa radyasyon UVB. Yon aktivite adisyonèl nan ekstrè SH nan antretyen an nan po an sante te pwouve pa kapasite li nan diminye matris metaloproteinases 2(MMP-2)transcription, ankouraje pa radyasyon UVB. Regilasyon MMP yo fasilite aje ak patoloji po, lè yo degrade kolagen an ak elastin ki lakòz andikap nan matris ekstraselilè (ECM) [33, 38], kidonk yon rediksyon nan proteinaz sa yo vo nan yon kontèks aje po.

Efè pozitif tretman SH yo te obsève nan etid sa a sou paramèt molekilè po ki pi komen yo te konfime tou pa yon esè klinik resan, egzekite nan yon gwoup senkant fanm Blan ki gen laj ant 45 ak 60 [46]. Salvia hankie te administre nan yon fòmilasyon krèm ak plizyè paramèt, tankou woujè po ak elastisite, pwofondè rid, ak potansyèl antioksidan, yo te evalye pa tou de evalyasyon klinik ak enstrimantal kòm byen ke oto-evalyasyon pa matyè yo. Rezilta etid sa a revele efikasite SH nan amelyore bès po a lè yo aplike chak jou nan yon kontèks aje modere po. An reyalite, apre 84 jou aplikasyon an, po fanm yo te vin pi elastik epi li te prezante yon kantite pi ba nan zòn wouj ak ondilasyon ki pi fon. Anplis, etid la demontre yon ogmantasyon pwogresif nan kapasite antioksidan po apre aplikasyon an chak jou nan krèm nan [46].

Kòm yon abri pwoteksyon pou kò a soti nan anviwònman an ekstèn, po a toujou ekspoze a blesi potansyèl, e konsa geri blesi se yon pwosesis esansyèl pou siviv nan tout òganis. Lè nou konsidere kapasite pwouve SH nan kenbe po an sante ak san tach, nou sipoze ke ekstrè sa a ta ka ede tou amelyore rejenerasyon po lè yo te itil nan reparasyon nan blesi po. Se konsa, aktivite SH sou migrasyon keratinosit yo, yo te yon etap kle nan restorasyon baryè po a apre blesi, te finalman konsidere. Tretman SH ekstrè te revele yon aktivite enteresan ke yo te kapab ogmante vitès HaCaT nan migrasyon, demontre yon efè fò sou re-etabli nan aksidan epitelyal apre blesi. Kòm migrasyon se yon eleman kritik nan pwosesis gerizon blesi a, done nou yo, konsidere tou aktivite ki pa ipèproliferatif nan ekstrè a, endike yon efè potansyèl nan ekstrè SH nan pi vit kontrekare efè a nan yon aksidan nan baryè a po, diminye risk pou yo. enfeksyon.

Done nou yo montre ekstrè Salvia haenkei kòm yon konpoze itil pou swa ede re-etabli baryè oswa diminye repons estrès epidèm. An menm tan ak esè ki sot pase a sou imen, travay sa a bay plis Sur nan mekanis ki enplike nan efè pozitif ekstrè a sou aje po.

Travay sa a, nan sipò travay anvan yo [18, 46], idantifye nan yon fason ki pi spesifik mekanis molekilè ki lye ak efikasite nan Salvia hankie nan modile paramèt po, souliye enpòtans Salvia hankie kòm yon ajan atire itil pou anti-aje. ak maladi po ki gen rapò ak aje.

MATERYÈL AK METÒD Kilti selilè ak iradyasyon UVB

Selil HaCaT (keratinosit imen espontaneman imòtalize) yo te kiltive nan mwayen Eagle's modifye Dulbecco a (DMEM) ki gen anpil glikoz ki te konplete ak 10 pousan serom fetal bovine (Life-Technologies, Waltham, MA, USA), 2 mM glutamin, 100 U / ml penisilin ak 100 ug/ml streptomycin (Lonza, Basilea, Swis). Selil yo te kenbe anba yon atmosfè imidite 5 pousan CO2 nan lè a ak enkubasyon nan 37 degre.

Lè pwotokòl eksperimantal la te mande, selil yo te ekspoze a 30 KJ/m²UVB radyasyon, apwovizyone pa yon lanp Philips Medical Narrowband UVB PL-S. Pou anpeche absòpsyon limyè pa mwayen tisi-kilti, sa a te retire anvan iradyasyon, epi ranplase ak DMEM FBS ak wouj fenol-gratis, swiv pwotokòl la iradyasyon [47]. Apre UVB iradyasyon, selil yo te manje ak yon mwayen kwasans fre oswa yo te itilize pou eksperyans swiv pwotokòl la.

Selil viabilite-Trypan blue esklizyon tès 35 x10³ selil yo te plake sou 12 plak byen epi, apre enkubasyon lannwit lan, yo te ekspoze a diferan konsantrasyon nan ekstrè idroetanoli Salvia haenkei dapre pwotokòl eksperimantal. Ekstrè a te byen bay pa IBSA Farmaceutici Italia (Lodi, Itali) ak prezante yon kontni nan makè asid rosmarinic nan 0.6 pousan w / w pa HPLC. Apre tretman, selil yo te lave, detache ak 0.25 pousan trypsin-0.2 pousan EDTA, epi yo te sispann nan ble tripan (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) nan yon rapò l: I nan yon solisyon mwayen. Selil yo te konte lè l sèvi avèk yon emositomèt chanm Burker.

ROS fluoresans tès

ROS te quantifye lè l sèvi avèk 2',7'-dichlorofluorescein-diacetate (Hz-DCF-DA, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), jan yo dekri deja [48]. Yon ti tan, selil yo (5x10') yo te simen nan 96-plak byen, yo te pèmèt yo konfòme yo lannwit lan, epi yo te ekspoze a ekstrè SH pou 3 oswa 24 èdtan. N-acetylcysteine ​​5mM (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) te itilize kòm yon kontwòl pozitif.

Pou kondisyon estrès oksidatif, yo te mezire nivo ROS apre adisyon 50 μM Hz-DCF-DA nan absans oswa prezans H2Oz [48]. Entansite fluoresans DCF te mezire nan eksitasyon 485 nm-emisyon 535 nm, lè l sèvi avèk yon Multilabel Plate Reader VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

Pou evalyasyon nivo ROS nan kondisyon estrès UVB, pwotokòl la te yon ti kras modifye, pa enkubasyon selil nan tretman SH - 50 μM Hz-DCF-DA solisyon nan PBS. Apre 25 minit enkubasyon nan 37 degre, plak la te ekspoze a radyasyon UVB epi yo te mezire entansite fluoresans DCF imedyatman nan eksitasyon 485 nm-emisyon 535 nm, lè l sèvi avèk yon Multilabel Plate Reader VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

Mikwoskopi imunofluoresan

10selil x104 yo te simen sou kouvèti vè pre-kouvwi ak kolagen an nan 24-plak byen, yo te pèmèt yo tache lannwit lan, epi yo te trete ak ekstrè SH dapre pwotokòl. Pou deteksyon nan pwoteyin -catenin ak occludin, selil yo te ekspoze a radyasyon UVB, jan sa dekri nan pwotokòl ki pi wo a. Apre iradyasyon, selil yo te manje ak yon mwayen kwasans fre oswa yo te itilize pou eksperyans swiv pwotokòl la. Pou tès imunofluoresans, 4 èdtan apre iradyasyon UVB, selil yo te lave, fikse ak fòmaldeyid 4 pousan, pèmeabilize ak 0.1 pousan Triton X-100 nan PBS, epi tache pou 1 èdtan nan 37 degre ak diferan antikò espesifik pwoteyin: sourit monoklonal anti-occludin (Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA), sourit anti-filaggrin (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). Apre lave PBS, selil yo te enkube ak antikò segondè/fluorescein isothiocyanate (Alexa Fluor 488 anti-sourit oswa Alexa Fluor 536 anti-lapen imunoglobulin G, Molecular Probes, Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA) ak phalloidin pou 1 èdtan nan tanperati chanm. Apre 10 minit nan tretman ak RNase, kouvèti yo te monte sou glisad vè lè yo itilize Mowiol 40-88 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) epi yo te ajoute yodid propidium. Imaj yo te akeri atravè mikwoskòp konfokal LSM 800, agrandisman 60X, lojisyèl ZN 2.1 edisyon ble (Carl Zeiss, Jena, Almay) ak quantifye lè l sèvi avèk lojisyèl ImageJ.

Analiz estatistik

Analiz estatistik la te fèt lè l sèvi avèk GraphPad Prism vèsyon 7.02 pou Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Sòf si yo di otreman, rezilta yo prezante kòm mwayen plis SEM. Yo te itilize tès t Elèv la ak valè p<0.05 were="" considered="" statistically="">

Abreviyasyon yo

AJ:adherens junction; ECM: matris ekstraselilè;FLG: filagrin; Hz-DCF-DA: 2',7'-dichlorofluorescein-diacetate; H2Oz: oksijene idwojèn; MMP: matris metaloproteinase; NAC: N-acetylcysteine; NMF:faktè; ROS: reyaktif oksijèn natirèl idratan

espès; SIRTl: Sirtuinl; SH: Salvia hankie; TJ: junction sere; UVB: Radyasyon iltravyolèt B.

Atik sa a soti nan www.aging-us.com