Gomisin N anpeche Melanogenesis atravè reglemante chemen siyal PI3K/Akt ak MAPK/ERK nan melanosit.

Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Résumé: Gomisin N, Youn nan konpoze lignan yo te jwenn nan Schisandra Chinensis yo te montre yo posede aktivite anti-oksidatif, anti-tumorigenic, ak anti-enflamatwa nan etid divès kalite. Isit la nou rapòte, la pou premye fwa, efikasite nan anti-melanogenic nan Gomisin N nan mamifè. selil osi byen ke nan anbriyon pwason zèb. Gomisin N siyifikativman redwi kontni an melanin san toksisite selilè. Malgre ke li pa t 'kapab modulation aktivite a katalitik nan djondjontirozinazan vitro,Gomisin Ndownregulated nivo ekspresyon nan pwoteyin kle ki fonksyone nanmelanogenesis. Gomisin N downregulated melanocortin 1 reseptè (MC1R), adenylyl cyclase 2, faktè transkripsyon ki asosye ak mikroftalmi (MITF), tirozinaz,tirozinaz-pwoteyin ki gen rapò-1(TRP-1), ak pwoteyin ki gen rapò ak tirozinaz-2 (TRP-2). Anplis de sa, Gomisin N-trete Melan-A selil yo te montre ogmante nivo p-Akt ak p-ERK, ki vle di ke aktivasyon an nan chemen PI3K/Akt ak MAPK/ERK ka fonksyone pou anpeche.melanogenesis. Nou te valide tou ke Gomisin te redwi pwodiksyon melanin nan reprime ekspresyon MITF,tirozinaz, TRP-1, ak TRP-2nan selil sourit ak imen ak nan devlope anbriyon pwason zèb. Kolektivman, nou konkli keGomisin Ninibit sentèz melanin pa reprime ekspresyon MITF ak melanogenicenzymes, pwobableman atravè modil chemen PI3K/Akt ak MAPK/ERK.

Mo kle:Schisandra Chinensis;Gomisin N; lignan;melanogenesis; blanchiman po

cistanche gen fonksyon blanchiman po

1. Entwodiksyon

Melanin se yon pigman yo jwenn nan pifò ògàn bèt tankou po, cheve, je, zòrèy enteryè, zo, kè, ak sèvo [1,2].Melanogenesisse yon pwosesis konplèks kote plizyè chemen siyal yo enplike. Melanocortin 1 reseptè a (MC1R) se yon regilatè kle nanmelanogenesis, signalingthrough ligans li yo tankou melanosit-stimulating òmòn (MSH) ak adrenocorticotropic hormone (ACTH) [3]. Melanin po biosintetize pa melanosit nan epidèm la epi li transfere nan keratinosit, kote yo jwe wòl enpòtan nan pwoteksyon po lè yo absòbe radyasyon UV nan limyè solèy la ak elimine radikal gratis reyaktif [4,5]. Melanin sentèz ak transfè nan po a ak hairfollicles reglemante pa disponiblite a nan précurseur li yo [6]. L-tirosin ak L-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA), pi gwo substrats nan anzim melanogenic, fonksyone tou kòm regilatè ki tankou òmòn nan melanogenesis [7]. Nan lòt men an, twòp pwodiksyon melanin rezilta nan enkyetid po endezirab tankou freckles ak melasma [8,9]. Melanogenesis ka afekte konpòtman melanosit nòmal ak malfezan pa modulation pwopriyete elastik selil yo [10]. Malgre ke reseptè yo pou serotonin ak melatonin ki eksprime nan selil kutane yo jwe yon wòl kle nan kenbe omeyostazi selilè, pwodiksyon an twòp nan melanin atravè chanjman ormon san kontwòl ka lakòz kondisyon patolojik nan po a [11].

Kidonk, te gen anpil efò pou elicide mekanis molekilè ki kontwole melanogenesis kòm etap prensipal la pou trete maladi po ipèpigmantè. Anplis de sa, divès kaliteblanchiman poajan ki anpeche sentèz melanin yo te idantifye nan ekstrè plant ak ki pa plant ak komèsyal yo itilize nan cosmeceuticals [12,13]. Ajan blanchi ki pi lajman itilize yo enkli idrokinòn, mequinol, arbutin, asid kojik, asid ascorbic, ak retinoicasid [12,14]. Sepandan, gen divès limit nan itilizasyon yo nan trete sentòm ipèpigmantasyon egi oswa kwonik nan imen. Pou egzanp, idrokinòn, byenke li te itilize depi lontan pou depigmantasyon depi ane 1960 yo, ka lakòz iritasyon po ak dèrmatit kontak [15,16]. Li tou mennen nan domaj ADN nan ogmante pwodiksyon an nan espès oksijèn reyaktif ak devlopman nan okronoz eksojèn nan selil mamifè [17,18]. Lòt byen konitirozinazinibitè tankou asid kojik ak asid ascorbic pa sèlman gen move pénétration po, estabilite, ak blanchi efikasite, men tou ka lakòz sitotoksisite, dèrmatoz, ak eritem nan itilizasyon alontèm [19,20]. Nan sans sa a, gen yon bezwen ogmante yo devlope pi an sekirite ak pi efikas ajan blanchiman pou trete ipèpigmantasyon po moun. Remèd fèy natirèl yo itilize nan medikaman tradisyonèl yo ka bay sous altènatif pou idantifye nouvo ajan blanchi ki kontwole etap kle yomelanogenesisak mwens oswa pa gen okenn efè segondè [21].

Schisandra chinensis, ke yo rele tou bè gou nò, yo jwenn natirèlman nan nòdès Lachin, byen lwen lès Larisi, Japon, ak Kore di [22]. Plant sa a te itilize depi lontan pou tretman avèg lannwit, boule po, enflamasyon aseptik, ak maladi fwa nan medikaman oriental tradisyonèl [23,24]. Ekstrè fwi S. chinensis ak konpoze lignan li yo te montre yo posede divès efè farmakolojik nan liy selil murin yo. Pou egzanp, Schisandra A ak C gen efè anti-oksidatif, pandan y ap Schisandra B gen anti-fibrotik, anti-enflamatwa, anti-oksidan, ak aktivite anti-apoptotik [25]. Yon lòt konpoze lignanGomisin N(Figi 1A) yo te rapòte apoptoz sipresyon estrès pwovoke pa anpeche liberasyon cytochrome C soti nan mitokondri a cytoplasm, klivaj la nan caspase 3 ak PARP, ak Ca2 plis-induced permeabilitytransition mitokondriyo nan H9c2 rat cardiomyocytes [7, 8]. Enteresan, plizyè etid ki itilize modèl sourit ak liy selil po moun te revele potansyèl terapetik S. chinensis pou trete maladi po. Lee et al. rapòte ke ekstrè nan metanol nan fwi S. chinensis soulaje sentòm dèrmatit kontak pa diminye pwodiksyon an nan sitokin pro-enflamatwa tankou TNF- ak IFN- lè topically aplike [8,24]. Kang et al. te montre ke ekstrè dlo Schisandra Fructus inibit deklanchman IκB, kidonk siprime pwodiksyon TNF-, IL-6, ak GM-CSF nan liy selil mast imen HMC -1 [26]. ke S. chinensis lignans ta ka afekte fonksyon selil po yo pi laj.Nan etid sa a, nou t'ap chache mennen ankèt sou wòl yo sipozeGomisin N, youn nan pi gwo lignancompounds nan S. Chinensis, nan reglemantemelanogenesis, kidonk evalye itilizasyon potansyèl li kòm ajan acosmeceutical. Isit la, nou rapòte saGomisin Nanpeche biosentèz melanin san toksisite selilè nan selil imen ak sourit, osi byen ke nan anbriyon pwason zèb.

2. Rezilta yo

2.1. Efè Gomisin N sou fòmasyon Melanin ak viabilite selil

Pou verifye efè Gomisin N soumelanogenesis, nou trete melanosit sourit ak diferan konsantrasyon nanGomisin Npou 72 h, ak Lè sa a, evalye chanjman nan kontni melanin. Gomisin Ntreatment redwi kontni an melanin tou de nan liy selil melanosit nòmal Melan-A ak nan selil B16F10melanoma nan yon fason ki depann de dòz san toksisite selilè (Figi 1B, C). Nou te obsève ke Gomisin N inibit -MSH-pwovoke pwodiksyon melanin nan selil B16F10, ki te konparab ak rezilta yo jwenn nan tretman PTU [27] (Figi 1C). Pou evalye si rediksyon nan melanin souGomisin Ntretman se akòz aktivite diminye nan tirozinaz, nou fè yon tès L-DOPAstaining nan selil nòmal melanosit epidèrmal imen (NHEM). Jan yo montre nan Figi 1E, selil NHEM ki te trete ak Gomisin N te montre yon nivo diminye nan L-DOPA konpare ak selil ki pa trete yo.Sepandan, efè inhibition Gomisin N sou pwodiksyon melanin pa t enpòtan nan selil imen melanoma MNT -1 (Figi 1D) .

2.2. Efè Gomisin N sou Aktivite Tirozinaz

Pou egzamine siGomisin Ninibittirozinazaktivite nan vitro, nou te itilize djondjon tyrosinaseand B16 melanom selil lysates. Kojik asid, yon inibitè tirozinaz ki byen koni, te itilize kòm yon kontwòl pozitif. Lè yo trete djondjon tirozinaz, tandiske asid Kojik redwi siyifikativman aktivite anzimatik la, Gomisin N pa t pwovoke okenn chanjman nan konvèsyon L-DOPA nan dopachrome (Figi 2A).Sepandan, lè yo trete selil B16 melanom, Gomisin N te lakòz yon diminisyon. nantirozinazaktivite lysate selil la nan yon fason ki depann de dòz (Figi 2B). Anplis, lè yo ko-trete ak -MSH nan selil B16,Gomisin Nranvèse ogmantasyon nan fòmasyon dopachrome ankouraje pa -MSH (Figi 3C). Miyò, Gomisin N te parèt pi efikas pase asid Kojik pou anpeche selilè a.aktivite tirozinaznan selil B16 sou estimilis -MSH. Konklizyon sa yo vle di ke efè inhibition GomisinN sou pwodiksyon melanin yo obsève nan selil sourit ak imen (Figi 1) se pa akòz fonksyon li dirèkteman anpeche aktivite katalitik tirozinaz la. Sepandan, li toujou posib ke Gomisin N kontwole ekspresyon de tirozinaz oswa lòt pwoteyin ki jwe wòl kle nanmelanogenesis.

2.3. Efè Gomisin N sou inaktivasyon chemen siyal MC1R la

Nou te chache elicide mekanis ki kache ki responsab pou efè inhibition GomisinN sou pwodiksyon melanin. Nou rezone saGomisin Nta ka kontwole pwoteyin siyal ki enplike nanmelanogenesisepi kidonk anpeche sentèz melanin. Melanocortin 1 reseptè (MC1R) se reseptè amelanocytic G pwoteyin ki makonnen ki fonksyone kòm yon regilatè kle nan sentèz melanin. Aktivasyon MC1R pa ligand li -MSH oswa òmòn adrenocorticotropic (ACTH) mennen nan yon ogmantasyon nan adenylyl cyclase, ki an vire kontwole nivo cAMP intraselilè [2,3]. Kontinwe, nivo transkripsyon MITF ogmante atravè wout Protein kinase-C (PKA)/repons element-bindingprotein (CREB) [2,28]. Pou evalye efè regilasyon Gomisin N sou chemen siyal MC1R la, nou tcheke nivo ekspresyon MC1R ak molekil siyal en li yo apre yo fin trete selil Melan-A ak Gomisin N. Nou te obsève ke Gomisin N te siyifikativman desann nivo pwoteyin MC1R ak adenyl cyclase 2. nan yon fason ki depann de dòz la (Figi 3A–C). Jan nou espere,Gomisin Nselil trete yo te montre tou diminye nivo pwoteyin MITF ak tiwozinaz li yo, TRP -1, ak TRP -2 (Figi 3A, D-G). Konklizyon sa yo sijere ke Gomisin N inibit anzim ki pwodui melanin pa inaktive MITF atravè chemen siyal MC1R la.

2.4. Efè Gomisin N sou fosforilasyon Akt ak ERK1/2 nan selil Melan-A

Yo konnen chemen PI3K/Akt ak MAPK/ERK yo patisipe nan melanogenesis bytranscriptionally oswa post-transcriptionally reglemante MITF [29,30]. Pou evalye si GomisinN afekte chemen siyal sa yo, nou te evalye estati fosforilasyon Akt ak ERK1/2 pa analiz Western blot. Jan yo montre nan Figi 3H–J, tretman gwo dòz (30 µM) nanGomisin Nsiyifikativman amelyore fosforilasyon tou de Akt ak ERK. Done sa yo endike ke efè inhibitor Gomisin N soumelanogenesisgen chans rive nan asosye ak chemen P13K/Akt ak MAPK/ERK.

2.5. Gomisin N Inhibit Melanogenesis nan anbriyon Zebrafish

Nou pwochen te vize egzaminen si Gomisin N efikas nan anpechemelanogenesisan vivo. Nan fen sa a, nou te trete anbriyon pwason zèb ak Gomisin N pou 72 èdtan nan konsantrasyon 1, 10, 20, ak 30 µM, epi answit nou mezire nivo ekspresyon pwoteyin melanojèn yo. Nou te obsève ke tretman Gomisin N anpeche fòmasyon melanin nan devlope anbriyon pwason zèb.Gomisin Nanbriyon trete yo te montre yon rediksyon nan kontni melanin nan yon fason ki depann de konsantrasyon konpare ak kontwòl ki pa trete (Figi 4). Nou te jwenn tou ke nivo pwoteyin nantirozinaz, MITF, TRP-1, ak TRP-2 te diminye pa tretman Gomisin N (Figi 5). Rezilta sa yo demontre ke Gomisin N inibit melanogenesis nan vivo pa reglemante faktè transkripsyon MITF ak objektif li yo.tirozinaz, TRP-1,ak TRP-2.

2.6. Gomisin N ranvèse Melanogenesis Rapamicin-induit nan MNT imen -1

Malgre ke Gomisin N siyifikativman inibitmelanogenesisnan selil Melan-A ak B16 ansanm ak anbriyon inzebrafish, nou pa t obsève efè li sou selil melanom MNT-1 imen yo. Nou te espere ke efè Gomisin N ta ka detekte nan selil MNT-1 nan kondisyon kote melanogenesis regilasyon pa yon estimilis apwopriye. Yo montre rapamicin pwovoke melanogenesis nan ogmante aktivite tirozinaz ak nivo pwoteyin MITF, tirozinaz, TRP-1, ak TRP-2 [31], pasyèlman atravè aktivasyon otofaji [32]. Nou kontwole nivo yo nantirozinaz, MITF, TRP-1, ak TRP-2 nan selil MNT-1 pa analiz Western blot, apre ko-tretman ak Gomisin N andrapamycin. Tretman Rapamicin pwovoke siyifikativman MITF, TRP-1, ak TRP-2 nivo men li pa te gen okenn efè soutirozinaznivo (Figi 6). Sepandan, tretman Gomisin N siyifikativman ranvèse efè rapamisin sou MITF, TRP-1, ak TRP-2 nan yon fason ki depann de konsantrasyon. Efè a ranvèse nanGomisin Nkont rapamicin te pi pwomèt nan konsantrasyon 20 ak 30 µM pase 10 µM. Rezilta sa yo sijere ke Gomisin N inibitmelanogenesisnan selil melanom MNT-1 imen yo pa reglemante faktè transkripsyon MITF ak sib li yo TRP-1 ak TRP-2.

3. Diskisyon

Fonksyon prensipal melanin se pwoteje selil po yo kont radyasyon UV [33-35].Ipèpigmantasyon, rezilta yon twòp pwodiksyon melanin nan po a, lakòz enkyetid kosmetik endezirab epi li asosye ak dèrmatoz ak kansè po. Plizyè rapò te sijeremelanogenesiskòm yon sib enpòtan pou trete melanom metastatik [36,37]. Kidonk, gen yon bezwen ogmante pou devlope ajan anti-melanogenic ki kontwole melanogenesis san toksisite selilè [38]. Gen plizyè chemen ki enplike nan melanogenesis po [39,40]. Lè ligand ligand, MC1R amelyore aktivite adenylyl cyclase, ki answit ogmante nivo intraselilè nan cAMP [41,42]. Aktivasyon ki depann de cAMP nan chemen PKA / CREB yo te rapòte anpil pou ogmante nivo transkripsyon MITF, kidonk amelyore sentèz melanin [43]. MITF fonksyone kòm yon regilatè prensipal twa pi gwo anzim melanogenic tirozinaz, TRP-1, ak TRP-2nan vertebre [3,21,44]. Anzim sa yo se pwoteyin transmembrane ki sitiye nan melanosomalmembrane melanosit yo. Tirozinaz kontwole etap ki limite vitès lamelanogenesispa konvèti L-tirozinaz nan L-DOPA [23]. TRP-1 ak TRP-2 jwe wòl enpòtan tou nan sentèz melanin, byenke fonksyon yo pa fin konprann.

Nan etid sa a, Gomisin N, yon konpoze lignan nan S. chinensis te montre aktivite depigmantasyon san toksisite selilè. Gomisin N anpeche sentèz melanin nan liy selil mamifè kiltive yo ak nan anbriyon pwason zèb. Gomisin N te sanble pi efikas pase kontwòl pozitif PTU ki anpeche pwodiksyon melanin nan selil Melan-A (Figi 1B). Gomisin N redwi kontni melanin nan yon fason ki depann de konsantrasyon. Konpare ak gwoup kontwòl la ki pa trete, 10 µM nanGomisin Nredwi kontni an melanin pa apeprè 40 pousan, san toksisite selilè. Aktivite anti-melanogenic 10-µM Gomisin N te konparab ak sa ki nan 100-µM PTU nan selil Melan-A yo. Menm jan an tou, Gomisin te parèt pi pisan pase PTU nan selil B16F10 aktive -MSH, kote efè 5- ak 10-µM Gomisin N te konparab ak sa ki nan 10- ak {{12. }}µM PTU, respektivman (Figi 1C). Selil NHEM yo trete ak Gomisin N montre nivo redwi L-DOPA, ki sijere ke GomisinN inibit.tirozinazaktivite nan selil kiltive (Figi 1E). Konklizyon sa yo te mennen nou plis envestige mekanis ki kache kote Gomisin N inibit melanogenesis.

Nou egzamine si wi ou nonGomisin Ndirèkteman modile aktivite a katalitik nantirozinazan vitro.Kontrèman ak asid Kojic, Gomisin N pa t 'montre efè inhibition sou aktivite tirozinaz djondjon (Figi 2A). Sepandan, aktivite tirozinaz selilè nan B16 melanom selil lysates te siyifikativman downregulated pa Gomisin N tou de ak ak san tretman -MSH (Figi 2B, C). Anpèchman aktivite tirozinaz selilè Gomisin N sou estimilis -MSH yo te jwenn pi enpòtan pase asid kojik kontwòl pozitif (Figi 2C).

Nou te postule ke fonksyon anti-melanogenic nan Gomisin N ta ka rive atravè regilasyon transcriptional oswa post-transcriptional nan tirozinaz ak pwoteyin ki gen rapò ak tirozinaz (TRPs). Pou valide sa a, nou mezire nivo ekspresyon nan molekil siyal nan chemen an MC1R, yon detèminan enpòtan kantite ak kalite pwodiksyon melanin nan melanosit. Nou te espere, nou te obsève ke Gomisin N redwi nivo MC1R ak adenylyl cyclases 2 nan selil Melan-A (Figi 3A-C). Anplis de sa,Gomisin Ndownregulated ekspresyon MITF ak pwoteyin sib li yo ki gen ladan tirozinaz, TRP -1, ak TRP -2 (Figi 3A, D-G). Rezilta sa yo sijere ke nivo redwi nan kontni melanin sou tretman Gomisin N rezilta nan dezaktivasyon nan chemen an MC1R.

Nan lòt men an, chemen PI3K/Akt ak MAPK/ERK yo ka fosforil MITF, epi kidonk yo ka modil aktivite li yo apre transkripsyon [45]. Sepandan, efè jeneral aktivasyon chemen PI3K/Akt ak MAPK/ERK nanmelanogenesisse kontwovèsyal. Tou de chemen PI3K/Akt ak MAPK/ERK yo aktive konstititivman nan melanom imen akòz mitasyon akimile [46]. Yo konnen depigmantasyon C2-seramid nan selil Mel-Ab yo rive nan yon rediksyon nan nivo p-Akt [47]. Gen plizyè konpoze natirèl ki aktive melanogenesis pa upregulating nivo p-ERK nan selil B16 melanom [28]. Kontrèman, gen prèv ki montre nivo p-ERK ak p-Akt ki wo yo anpeche sentèz melanin [28,48]. Konpleksite inregulation melanogenesis ka pasyèlman eksplike pa lefèt ke fosforilasyon amelyore aktivite transkripsyon MITF, men an menm tan pwovoke ubiquition-proteosome-dependentdegradation nan MITF [26,49-51]. Done nou yo te montre ke tou de nivo p-Akt ak p-ERK yo te ogmante nan Gomisin N-trete selil Melan-A (Figi 3H-J). Sa vle di ke PI3K/Akt ak MAPK/ERKpathways ka kontribye nan anpèchman pwodiksyon melanin.

Nou plis valide aktivite anti-melanogenic nan Gomisin N nan modèl la zebrafish in vivo.Gomisin N-trete anbriyon zebrafish te montre yon rediksyon enpòtan nan pigmantasyon melanin (Figi 4). Anplis de sa, Gomisin N ansibleman diminye nivo yo nantirozinaz, MITF, TRP-1, ak TRP-2 nan devlope anbriyon pwason zèb. Konklizyon sa yo kolektivman sijere saGomisin Npwovoke depigmantasyon pa downregulating ekspresyon MITF ak anzim melanogenic nan vivo.Aktivite anti-melanogenic nan Gomisin N te konfime plis nan selil melanom imen MNT-1 stimuled pa rapamicin. Malgre ke Gomisin N te lakòz sèlman ti chanjman nan kontni melanin nan selil MNT-1 (Figi 1D), li te efikas pou ranvèse regilasyon MITF, TRP-1 ak TRP-2 ki te pwovoke rapamisin nan. yon fason ki depann de konsantrasyon (Figi 6A, C–E). Ansanm, efè regilasyon anGomisin Nsou MITF ak anzim melanogenic yo te jwenn repwodiktif nan sourit ak selil imen byen ke nan anbriyon pwason zèb.

Pou rezime, travay sa a sijere ke Gomisin N ka gen yon gwo potansyèl kòm yon womanpo-blanchimanajan. Gomisin N parèt pou anpechemelanogenesispa reprime ekspresyon MITF atravè chemen MC1R la, olye pou yo modil dirèkteman aktivite katalitik la.tirozinazak TRPs. Malgre ke mekanis detaye rete yo dwe elisid, Gomisin N-pwovoke depigmantasyon gen anpil chans yo dwe asosye ak aktivasyon an nan chemen yo PI3K / Akt ak MAPK / ERK (Figi 7).

4. Materyèl ak Metòd

4.1. Materyèl

RPMI1640 te achte nan men Gibco-BRL (Gaithersburg, MD, USA). Mwayen Dulbecco a modifyeEagle (DMEM), serom fetal bovine (FBS), ak penisilin-streptomycin (PS) yo te achte nan Hyclone (Carlsbad, CA, USA). Melanocyte kwasans mwayen te achte nan men PromoCell (Heidelberg, Almay). Phenylmethylsulfonyl fliyò (PMSF), 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA), asid kojik, 1-phenyl-2-thiourea (PTU), djondjon tirozinaz, 3,{{ 9}} dihydroxy-l-phenylalanine (L-DOPA), -MSH, dimethyl sulfoxide (DMSO), ak paraformaldehyde yo te achte nan men SigmaChemical Co (St Louis, MO, USA).Gomisin Nkonpoze te founi pa Chul Young Kim (Hanyang University, Ansan, Kore di). Rapamicin te achte nan men Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).

4.2. Kilti Selil

Liy selil melanom sourit B16F10 la te bay nan Bank Kore Selil Selil (Seoul, Kore). Selil Melan-A nan melanosit murin [52] se te yon kado jenere nan men Dr Byeong Gon Lee (Enstiti SkinResearch, Amore Pacific Co., Yongin). -si, Kore di). Selil melanom imen MNT-1 Aeyeong Lee (Kolaj Medsin nan Dongguk University, Goyang-si, Kore di) te bay san mank. Prensipal nòmal melanosit epidèm imen (NHEM) yo te achte nan men PromoCell (Heidelberg, Almay). Melan-A selil yo te grandi nan mwayen RPMI 1640 (Gibco, Carlsbad, CA, USA) ak 10 pousan FBS, 1 pousan PS, ak 200 nM TPA. Yo te itilize DMEM ak 10 pousan FBS ak 1 pousan PS pou kenbe selil Melan-A ak selil NHEM yo. Tout selil yo te enkube a 37 ◦C nan yon enkibatè 5 pousan CO2.

4.3. Mezi nan Melanin kontni

Selil Melan-A yo te simen nan yon plak 24-byen (1 × 105 selil/pou), trete akGomisin N, epi answit enkube pou 72 èdtan. Apre 72 èdtan, yo te mezire kontni melanin la jan sa te dekri anvan an [53]. Yon ti tan, apre yo fin retire medya kilti yo, yo te lave selil yo twa fwa ak PBS. Apre sa, solisyon idroksid sodyòm (1 mL, 1 N) te ajoute nan chak pi pou fonn melanin. Yo te mezire absorpsyon nan 405 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate. Yo te repete tès sa a ak selil B16F10 (2 × 104 selil/byen) ak selil MNT-1 swiv menm metòd la.

4.4. Analiz Western Blot

Melan-A selil yo te simen nan asyèt 100 mm (1 × 106 selil / plat) epi yo te trete ak 1, 5, oswa 10 µM.Gomisin Npandan twa jou nan 37 ◦C. Selil yo te lave ak PBS ak Lè sa a, rekòlte lè l sèvi avèk yon grate. Selil detache yo te mete nan 1 ml PBS ak santrifuje nan 75 00 rpm pou 5 min. Apre yo fin retire solisyon siperyè a, granules selil yo te lysed ak tanpon liz (50 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.1 pousan SDS, 150 mM NaCl, 1 pousan NP-40, 0.02 pousan azid sodyòm, 0.5 pousan deoxycholate sodyòm, 100 µg/mL PMSF, 1 g/mL aprotinin) pou 24 èdtan nan 4 ◦C. Pwoteyin total yo te ekstrè lè l sèvi avèk yon ultracentrifuge nan 12, 000 rpm pou 30 min nan 4◦C. Kontni pwoteyin yo te mezire lè l sèvi avèk tès Bradford la. Pwoteyin (30 µg) yo te separe lè l sèvi avèk yon 10 pousan sodyòm dodecyl sulfat-polyacrylamid gel electrophoresis (SDS-PAGE) jèl epi transfere nan manbràn anitrocellulose. Manbràn an te bloke pou 1 èdtan ak 5 pousan lèt ekreme nan saline ki gen Tris-tampon ak Tween-20 (TBST), epi answit enkube pou 12 èdtan nan 4 ◦C ak antikò prensipal ki vize -tubulin (Santa Cruz, CA, USA). ), MITF (Siyal selilè, Danvers, MA, USA), tyrosinase (Siyal selilè), ERK (Siyal selilè), phospho-ERK (Siyal selilè), AKT (Siyal selilè), phospho-AKT (Siyal selilè), MC1R ( Santa Cruz), adenylyl cyclases 2 (Santa Cruz), TRP-1 (Santa Cruz), ak TRP-2 (Santa Cruz). Apre yo fin retire antikò prensipal yo, manbràn yo te lave twa fwa ak TBST epi yo te enkube ak segondè. antikò (lapen anti-kabrit IgG-HRP; sourit anti-lapen HRP, Santa Cruz) pou 1 h.Manbràn yo te trete ak reyaktif chemiluminescence amelyore lè l sèvi avèk ChemiDoc XRS plis sistèm D '(Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Analiz densitometrik bann yo te fè avèk lojisyèl Image MasterTM 2D Elite (vèsyon 3.1, GE Healthcare, Chicago, IL, USA).

4.5. Tirozinaz Aktivite Essay

Pou estime efè inhibition Gomisin N sou djondjontirozinazaktivite, tirozinaz te enkube ak 1, 5, oswa 10 µMGomisin Noswa asid kojik kontwòl pozitif. Chak echantiyon te fonn nan metanol. L-DOPA (8.3 mM) ak djondjon tirozinaz (125 U) yo te dilye nan 80 mM phosphatebuffer (pH 6.8). Yo te melanje 40 µL chak echantiyon ak 120 µL L-DOPA nan yon 96-plak byen, epi yo te ajoute 40 µL nan tirozinaz djondjon dilye. Lè sa a, plak yo te enkube pou 15 minit, epi yo te mezire absorpsyon nan 490 nm lè l sèvi avèk yon lektè mikroplak.

Tirozinazaktivite nan lisat selil melanom B16 te mezire avèk oswa san tretman -MSH, jan Ohguchi et al te dekri deja. [54], ak modifikasyon ti tay. Lysate selil yo te prepare jan sa dekri pi wo a nan pati analiz Western Blot la. Pwoteyin total nan supernatant la te mezire pa tès Bradford lè l sèvi avèk albumin serik bovin kòm yon estanda [55]. Yon kantite egal pwoteyin te dilye epi yo itilize pou tès aktivite tirozinaz la.

anpeche aktivite tirozinaz

4.6. Tach L-DOPA nan selil NHEM

Selil NHEM yo te simen nan yon plak {{0}}byen epi yo te enkube pou 72 èdtan ak Gomisin N. Selil yo te fikse ak 4 pousan paraformaldeyid pou 40 minit, ki te swiv pa tretman ak 0.1 pousan Triton X{ {6}} pou 2 min.L-DOPA (0.1 pousan) te ajoute nan chak pi, ki te swiv pa enkubasyon pou 2 èdtan. Apre yo fin retire solisyon an, selil yo te lave de fwa ak PBS. Imaj yo te foto pa mikwoskòp.

4.7. Eksperyans pwason zèb

Zebrafish anbriyon yo te jwenn nan Zebrafish Resource Bank (Daegu, Kore di). Anbriyon yo te trete ak Gomisin N pou 72 èdtan. Efè depigmantasyon nanGomisin Nsou anbriyon pwason zèb yo te obsève anba stereomikwoskòp la. Pou analiz Western blot, Gomisin N-trete anbriyon yo te lysed lè l sèvi avèk lysis tanpon, ki soti nan ki pwoteyin total yo te prepare jan mansyone pi wo a.

5. Konklizyon

Rezilta nou an sipòte opinyon ke Gomisin N gen yon gwo potansyèl pou itilize kòm yon manje ak fonksyonèlpo-blanchimanajan.Gomisin Nse youn nan pi gwo konpoze lignan nan S. Chinensis. An reyalite, S. Chinensis se yon medikaman èrbal yo itilize pou geri anpil maladi imen. Sepandan, plis etid epidemyolojik yo nesesè pou pwouve sekirite Gomisin N sou po a. Kontinwe, etid in vivo ak esè klinik yo pral kapab demontre pi klè efikasite nan GomisinN. An konklizyon, etid sa a sijere keGomisin Nka yon potansyèl ajan hypo-pigmentary ak natirèlpo-blanchimankandida pou endistri kosmetik.

cistanche amelyore blanchiman

Referans

1. Alaluf, S.; Atkins, D.; Barrett, K.; Blount, M.; Carter, N.; Heath, A. Enpak epidèm melanin onobjective mezi koulè po moun. Pigman selil Res. 2002, 15, 119–126. [CrossRef] [PubMed]

2. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, BC; Askarian-Amiri, ME Siyal Pathways nan Melanogenesis. Ent. J.Mol. Sci. 2016, 17, 1144. [CrossRef] [PubMed]

3. Slominski, A.; Tobin, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Melanin pigmantasyon nan po mamifè ak règleman ormonal. Fizyol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [CrossRef] [PubMed]

4. Herrling, T.; Jung, K.; Fuchs, J. Wòl melanin kòm yon pwoteksyon kont radikal gratis nan po a ak wòl li kòm yon endikatè freeradical nan cheve. Spectrochim Acta A Mol. Biomol. Spectrosc. 2008, 69, 1429–1435. [CrossRef] [PubMed]

5. Brozyna, AA; Jozwicki, W.; Roszkowski, K.; Filipiak, J.; Slominski, AT Melanin kontni nan melanomametastaz afekte rezilta a nan radyoterapi. Oncotarget 2016, 7, 17844–17853. [CrossRef] [PubMed]

6. Slominski, A.; Wortsman, J.; Plonka, PM; Schallreuter, KU; Paus, R.; Tobin, DJ Pigmantasyon pileu cheve.J. Investig. Dermatol. 2005, 124, 13–21. [CrossRef] [PubMed]

7. Slominski, A.; Zmijewski, MA; Pawelek, J. L-tirosin, ak L-dihydroxyphenylalanine kòm òmòn-like regilatè nan fonksyon melanosit. Pigman Cell Melanoma Res. 2012, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]

8. Lee, AY Pwogrè resan nan patojèn melasma. Pigman Cell Melanoma Res. 2015, 28, 648–660. [CrossRef][PubMed]9. Speeckaert, R.; van Gele, M.; Speeckaert, MM; Lambert, J.; van Geel, N. byoloji a nan hyperpigmentationsyndromes. Pigman Cell Melanoma Res. 2014, 27, 512–524. [CrossRef] [PubMed]

10. Slominski, RM; Zmijewski, MA; Slominski, AT Wòl pigman melanin nan melanom. Eksp. Dermatol.2015, 24, 258-259. [CrossRef] [PubMed]11. Slominski, A.; Wortsman, J.; Tobin, DJ Sistèm serotoninerjik/melatoninerjik la: Sekirize yon kote anba solèy la. FASEB J. 2005, 19, 176–194. [CrossRef] [PubMed]

12. Sarkar, R.; Arora, P.; Garg, KV Cosmeceuticals pou Hyperpigmentation: Ki sa ki disponib? J. CutaneousAesthet. Surg. 2013, 6, 4–11. [CrossRef] [PubMed]

13. Miyamura, Y.; Coelho, SG; Wolber, R.; Miller, SA; Wakamatsu, K.; Zmudzka, BZ; Ito, S.; Smuda, C.;Passeron, T.; Choi, W.; et al. Règleman pigmantasyon po moun ak repons a radyasyon iltravyolèt.Pigment Cell Res. 2007, 20, 2–13. [CrossRef] [PubMed]

14. Davis, EC; Callender, VD Postinflammatory hyperpigmentation: Yon revizyon nan epidemyoloji a, karakteristik klinik, ak opsyon tretman nan po koulè. J. Clin. Estetik. Dermatol. 2010, 3, 20–31. [PubMed]

15. Komèsyal-Campos, H.; Souza, PR; Peghini, BC; da Silva, JS; Cardoso, CR Yon BECA de efè modulatory asid oleik nan sante ak maladi. Mini. Rev Med. Chem. 2013, 13, 201–210. [CrossRef] [PubMed]

16. Parvez, S.; Kang, M.; Chung, HS; Cho, C.; Hong, MC; Shin, MK; Bae, H. Sondaj ak mekanis nan ajan skindepigmenting ak eklèsisman. Phytother. Res. 2006, 20, 921–934. [CrossRef] [PubMed]

17. Luo, L.; Jiang, L.; Geng, C.; Cao, J.; Zhong, L. Hydroquinone-induit jenotoksisite ak oksidatif DNAdamage nan selil HepG2. Chem. Biol. Entèaksyon. 2008, 173, 1–8. [CrossRef] [PubMed]

18. Enguita, FJ; Leitao, AL Hydroquinone: Polisyon anviwònman an, toksisite, ak repons mikwòb.BioMed Res. Ent. 2013, 2013, 542168. [CrossRef] [PubMed]

19. Draelos, ZD Po eklèsisman preparasyon ak konfli a hydroquinone. Dermatol. La. 2007, 20,308–313. [CrossRef] [PubMed]

20. Koo, JH; Lee, mwen; Yun, SK; Kim, HU; Park, BH; Park, JW Saponified Evening Primrose lwil oliv diminye melanogenesis nan selil melanom B16 epi redwi pigmantasyon po UV-induit nan imen. Lipid 2010,45, 401-407. [CrossRef] [PubMed]

21. Cordell, GA; Colvard, MD Pwodwi natirèl ak medikaman tradisyonèl: vire sou yon paradigm. J. Nat. Prod.2012, 75, 514–525. [CrossRef] [PubMed]

22. Panossian, A.; Wikman, G. Pharmacology of Schisandra Chinensis Bail: Yon BECA de rechèch ak itilizasyon Ris nan medikaman. J. Ethnopharmacol. 2008, 118, 183–212. [CrossRef] [PubMed]

23. Chen, P.; Pang, S.; Yang, N.; Meng, H.; Liu, J.; Zhou, N.; Zhang, M.; Xu, Z.; Gao, W.; Chen, B.; et al. Efè benefis Schisandrin B sou fonksyon kadyak nan sourit modèl enfaktis myokad. PLoS ONE 2013, 8,e79418. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, HJ; Jo, S.; Ryu, J.; Jeong, HS; Lee, G.; Ryu, MH; Jung, MH; Kim, H.; Kim, BJ Efè SchisandraChinensis Turcz. fwi sou dèrmatoz kontak pwovoke pa dinitrofluorobenzene nan sourit. Mol. Med. Rapò 2015,12, 2135–2139. [CrossRef] [PubMed]

25. Chun, JN; Cho, M.; Donk mwen.; Jeon, JH Efè pwoteksyon Schisandra Chinensis fwi ekstrè ak itslignans kont maladi kadyovaskilè: Yon revizyon nan mekanis molekilè yo. Fitoterapia 2014, 97, 224–233.[CrossRef] [PubMed]

26. Kang, OH; Chae, HS; Choi, JH; Choi, HJ; Park, PS; Cho, SH; Lee, GH; Se konsa, HY; Choo, YK;Kweon, OH; et al. Efè ekstrè dlo Schisandra Fructus sou liberasyon cytokine nan yon liy selil humanmast. J. Med. Manje 2006, 9, 480–486. [CrossRef] [PubMed]

27. Poma, A.; Bianchini, S.; Miranda, M. Anpèchman nan L-tirozin-pwovoke pwodiksyon mikronukle byphenylthiourea nan selil melanom imen. Mutat. Res. 1999, 446, 143–148. [CrossRef]

28. Kim, HJ; Kim, IS; Dong, Y.; Lee, IS; Kim, JS; Kim, JS; Woo, JT; Cha, BY Melanogenesis-inducingeffect of cirsimaritin atravè ogmantasyon nan faktè transkripsyon ki asosye ak mikroftalmi ak ekspresyon tyrosinase. Ent. J. Mol. Sci. 2015, 16, 8772–8788. [CrossRef] [PubMed]

29. Busca, R.; Abbe, P.; Mantoux, F.; Aberdam, E.; Peyssonnaux, C.; Eychene, A.; Ortonne, JP; Ballotti, R. Rasmediates aktivasyon kAMP-depandan nan kinaz ekstraselilè ki kontwole siyal (ERKs) nan melanosit.EMBO J. 2000, 19, 2900-2910. [CrossRef] [PubMed]

30. Busca, R.; Ballotti, R. Cyclic AMP yon mesaje kle nan règleman an nan pigmantasyon po. Pigman selil Res.2000, 13, 60-69. [CrossRef] [PubMed]

31. Ha, YS; Cho, HY; Lim, TY; Park, DH; Kim, HM; Yoon, J.; Kim, JG; Kim, CY; Yoon, TJ Endiksyon nan melanogenesis pa rapamisin nan selil melanom MNT-1 imen yo. Ann. Dermatol. 2012, 24, 151–157. [CrossRef][PubMed]

32. Yun, WJ; Kim, EY; Park, JE; Jo, SY; Bang, SH; Chang, EJ; Chang, SE Microtubule ki asosye proteinlight chèn 3 patisipe nan melanogenesis atravè règleman ekspresyon MITF nan melanosit. Sci. Rapò.2016, 6, 19914. [CrossRef] [PubMed]

33. Spritz, RA; Tande, VJ, Jr. Maladi pigmantè jenetik. Adv. Hum. Genet. 1994, 22, 1–45. [PubMed]

34. Kadekaro, AL; Chen, J.; Yang, J.; Chen, S.; Jameson, J.; Swope, VB; Cheng, T.; Kadakia, M.; Abdel-Malek, Z.-melanocyte-stimulating òmòn siprime estrès oksidatif atravè ap53-chemin siyal nan melanosit imen. Mol. Kansè Res. 2012, 10, 778–786. [CrossRef] [PubMed]

35. Wasmeier, C.; Hume, AN; Bolasco, G.; Seabra, MC Melanosomes Yon ti koutje sou. J. Cell Sci. 2008, 121,3995–3999. [CrossRef] [PubMed]

36. Brozyna, AA; Jozwicki, W.; Carlson, JA; Slominski, AT Melanogenesis afekte an jeneral ak siviv san maladi nan pasyan ki gen melanom etap III ak IV. Hum. Patòl. 2013, 44, 2071–2074. [CrossRef] [PubMed]

37. Slominski, A.; Kim, TK; Brozyna, AA; Janjetovic, Z.; Brooks, DL; Schwab, LP; Skobowiat, C.; Jozwicki, W.;Seagroves, TN Wòl melanogenesis nan règleman an nan konpòtman melanom: Melanogenesis mennen nan ekspresyon HIF-1 ekspresyon ak chemen asistan HIF-depandan. Arch. Byochim. Biophys. 2014, 563,79–93. [CrossRef] [PubMed]

38. Kim, HJ; Lee, JH; Shin, MK; Hyun Leem, K.; Kim, YJ; Lee, MH Inhibitory effect of Gastrodia elata extracton melanogenesis in HM3KO melanom cells. J. Cosmet. Sci. 2013, 64, 89–98. [PubMed]

39. Hemesath, TJ; Pri, ER; Takemoto, C.; Badalian, T.; Fisher, DE MAP kinaz lye faktè transcriptionMicrophthalmia ak siyal c-Kit nan melanosit. Nati 1998, 391, 298–301. [PubMed]

40. Pri, ER; Ding, HF; Badalian, T.; Bhattacharya, S.; Takemoto, C.; Yao, TP; Hemesath, TJ; Fisher, DELineage-espesifik siyal nan melanosit. C-kit eksitasyon rekrite p300/CBP nan microphthalmia.J. Biol. Chem. 1998, 273, 17983–17986. [CrossRef] [PubMed]

41. Bertolotto, C.; Abbe, P.; Hemesath, TJ; Bille, K.; Fisher, DE; Ortonne, JP; Ballotti, R. Microphthalmiagene pwodwi kòm yon transducer siyal nan diferansyasyon cAMP-induit nan melanosit. J. Cell Biol. 1998, 142,827–835. [CrossRef] [PubMed]

42. Pogenberg, V.; Ogmundsdottir, MH; Bergsteinsdottir, K.; Schepsky, A.; Phung, B.; Deineko, V.; Milewski, M.;Steingrimsson, E.; Wilmanns, M. Limite leucine zip dimerization ak espesifik nan rekonesans ADN nan MITF nan regilatè mèt melanosit. Genes Dev. 2012, 26, 2647–2658. [CrossRef] [PubMed]

43. Flaherty, KT; Hodi, FS; Fisher, DE Soti nan jèn yo nan dwòg: Estrateji vize pou melanom. Nat. Rev. Cancer2012, 12, 349–361. [CrossRef] [PubMed]

44. Lee, TH; Seo, JO; Baek, SH; Kim, SY Efè inibisyon resveratrol sou sentèz melanin nan pigmantasyon iltravyolètB-induit nan po kochon Gine. Biomol. La. 2014, 22, 35–40. [CrossRef] [PubMed]

45. Su, TR; Lin, JJ; Tsai, CC; Huang, TK; Yang, ZY; Wu, MO; Zheng, YQ; Su, CC; Wu, YJ Inhibitionof melanogenesis pa asid galik: Patisipasyon posib nan chemen yo PI3K/Akt, MEK/ERK ak Wnt/-cateninsignaling nan selil B16F10. Ent. J. Mol. Sci. 2013, 14, 20443–20458. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Yajima, I.; Kumasaka, MWEN; Thang, ND; Goto, Y.; Takeda, K.; Yamashita, O.; Iida, M.; Ohgami, N.;Tamura, H.; Kawamoto, Y.; et al. RAS/RAF/MEK/ERK ak PI3K/PTEN/AKT Siyal nan Pwogresyon ak Terapi MalignantMelanom. Dermatol. Res. Pratike. 2012, 2012, 354191. [CrossRef] [PubMed]

47. Kim, DS; Kim, SY; Lalin, SJ; Chung, JH; Kim, KH; Cho, KH; Park, KC Ceramide inibit pwopagasyon selil atravè inaktivasyon AKT / PKB ak diminye sentèz melanin nan selil Mel-Ab. Pigman Cell Res. 2001, 14, 110–115. [CrossRef] [PubMed]

48. Kim, JH; Baek, SH; Kim, DH; Choi, TY; Yoon, TJ; Hwang, JS; Kim, MR; Kwon, HJ; Lee, CHDownregulation nan sentèz melanin pa gen A ak aplikasyon li nan modèl zèklè in vivo. J.Envesti. Dermatol. 2008, 128, 1227–1235. [CrossRef] [PubMed]

49. Hartman, ML; Czyz, M. MITF nan melanom: Mekanis dèyè ekspresyon li yo ak aktivite. Cell Mol.Life Sci. 2015, 72, 1249–1260. [CrossRef] [PubMed]

50. Kim, DS; Hwang, ES; Lee, JE; Kim, SY; Kwon, SB; Park, KC Sphingozin-1-fosfat diminye sentèz melanin atravè deklanchman ERK soutni ak degradasyon MITF ki vin apre. J. Cell Sci. 2003, 116,1699–1706. [CrossRef] [PubMed]

51. Xu, W.; Gong, L.; Haddad, MM; Bischof, O.; Campisi, J.; Yeh, ET; Medrano, EE Règleman nan nivo pwoteyin MITF faktè transkripsyon ki asosye ak mikroftalmi pa asosyasyon ak anzim theubiquitin-konjige hUBC9. Eksp. Selil Res. 2000, 255, 135–143. [CrossRef] [PubMed]

52. Bennett, DC; Cooper, PJ; Hart, IR Yon liy de melanosit sourit ki pa tumorigenic, syngeneic ak theB16 melanom epi ki mande yon pwomotè timè pou kwasans. Ent. J. Kansè 1987, 39, 414–418. [CrossRef][PubMed]

53. Meira, WV; Heinrich, TA; Cadena, SM; Martinez, GR Melanogenesis inibit respirasyon nan B16-F10melanoma selil tandiske amelyore kontni selil mitokondriyo. Eksp. Selil Res. 2017, 350, 62–72. [CrossRef][PubMed]

54. Ohguchi, K.; Tanaka, T.; Iliya, mwen .; Ito, T.; Iinuma, M.; Matsumoto, K.; Akao, Y.; Nozawa, Y. Gnetol kòm yon inibitè potenttyrosinase nan genus Gnetum. Biosci. Biotechnol. Byochim. 2003, 67, 663–665. [CrossRef] [PubMed]

55. Uchida, R.; Ishikawa, S.; Tomoda, H. Anpèchman aktivite tirozinaz ak pigmantasyon melanin pa 2-hydroxytyrosol. Acta Pharm. Sinica B 2014, 4, 141–145. [CrossRef] [PubMed]