Devlopman nan krèm kosmetik multifonksyonèl lè l sèvi avèk materyèl byoaktif soti nan Streptomyces

Ram Hari Dahal1 , Tuan Manh Nguyen1,2, Dong Seop Shim3, Joon Young Kim4, Jangyul Lee4 ak Jaisoo Kim1,*

Résumé:Plizyè pwodui kosmetik ki gen yon sèl fonksyon yo ap itilize de pli zan pli, men pwodui kosmetik ki gen aktivite multifonksyonèl rete limite. Nou vize devlope yon krèm kosmetik multifonksyonèl ki genantioksidan, anti-tirozinaz, anti-aje ak aktivite anti-mikwòb. Aktivite antimikwòb yo te fèt pa metòd difizyon disk la. Toksisite selilè ak pwopagasyon selil yo te evalye nan yon plak 96-byen ak liy selil diferan tankou HaCaT, RAW264.7, CCD-986Sk, B16F1, ak B16F10. Anpèchman tirozinaz djondjon, anpèchman elastaz, ak aktivite 1,1-diphenyl{-2-picrylhydrazyl (DPPH) radikal scavenging yo te evalye epi yo te kalkile IC50. Mesoporous silica patikil te sentèz lè l sèvi avèk Pluronic P123 ak tetraethyl ortho-silicate (TEOS). Foto vizaj yo te kaptire pa VISIA-CR (Facial Imaging System for Clinical Research). Lojisyèl PRIMOS te analize brutality imaj la epi klète imaj la te analize pa Chromameter CR-400. Pwodwi brit nan souch T65 inibit diferan bakteri patojèn imen yo tankou Bacillus subtilis, Escherichia coli, Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, ak Staphylococcus epidermidis. IC50 nan pwodwi brut T65 pou djondjon tirosinaz, elastase, ak aktivite DPPH radikal scavenging yo te 58.73, 14.68, ak 6.31 ug / mL, respektivman. Pwodwi brut T65 pwopagasyon kolagen tip I nan selil CCD-986Sk jiska 145.91 pousan ± 9.11 pousan (mwayèn ± SD; mwayèn 24, 48, ak 72 h) nan 250 pg/mL. Patikil mesoporous sentèz (SBA-15) konfime pèfòmans dirab pa kontwòl-lage pou twa jou. Fòmile fonksyonèl krèm kosmetik ki gen T65 entegre SBA-15, siyifikativman diminye brutality po a pa 4.670 pousan ak ogmante klète po a pa 0.472 pousan apre aplikasyon an nan 4 semèn. Pwodwi brut T65 inibit tou de patojèn Gram-pozitif ak Gram-negatif. Patikil mesoporous sentèz, SBA-15, te konfime ke sibstans fizyolojik aktif la te lage nan kondisyon lage dirab. Pwodwi brit T65 te montre antimikwòb parfèt,antioksidan, anti-aje, ak blanchi aktivite ak efè ki pa cytotoxik nan liy selil diferan ki gen rapò ak po imen an.

Mo kle: antioksidan; sitotoksisite; anti-tirozinaz; anti-aje; antimikwòb; patikil silica mesoporous; fòmilasyon kosmetik; aplikasyon ayestetik

cistanche pèdi anpi zèbtou gen yonefè blanchiman po.

1. Entwodiksyon

Po a se pi gwo ògàn ak kouvèti ekstèn nan kò imen an. Aparans vizyèl po a pèmèt pou estimasyon laj, sèks, sante, plus, ak bote [1,2]. Pwodwi kosmetik yo anpil itilize pou amelyore aparans po a ak diminye aje po a. Anplis de sa, aplikasyon aktualite nan pwodui kosmetik demontre ki jan yo ogmante plus pa manipile faktè bote ki asosye ak kontras feminen [3,4]. Endistri kosmetik yo toujou ap chèche materyèl bioaktif roman ak natirèl ak pwopriyete anti-aje, antioksidan, anti-tirozinaz, ak pwopriyete antimikwòb pou fòmilasyon kosmetik pou amelyore apwòch swen po [5,6].

Aje po a se yon pwosesis byolojik konplèks ki te koze pa divès kalite faktè intrinsèques ak ekstèn ki mennen nan malfonksyònman fizyolojik ak pèt nan entegrite estriktirèl nan po a. Aje intrinsèque, jeneralman ke yo rekonèt kòm aje natirèl (aje kwonolojik) nan po a ki gen rapò ak chanjman ormon ki baze sou laj, tandiske aje extrinsèques ki asosye ak mouvman nan misk la, polisyon, nikotin, ekspoze a radyasyon solè, kafeyin, tanperati, fòm tankou. kòm rejim alimantè (nitrisyon), mank de dòmi, estrès, ak lòt kondisyon sante [7-9]. Elastin ede po retounen nan pozisyon orijinal li apre mouvman, tandiske elastaz ki pwodui nan selil asinè degrade elastin nan epi mennen nan aje po [9]. Anti-elastase inibit elastase a epi kenbe elastin nan estati inisyal li yo, ki anpeche po aje. Kosmetik oswa pwodwi swen pou po ak pwopriyete anti-aje afekte pozitivman aje po [10-13].

Radikal gratis yo anjeneral pwodwi pandan metabolis selilè. Espès oksijèn reyaktif (ROS) ak espès nitwojèn reyaktif (RNS), tankou anyon radikal, supèroksid, oksijene, radikal idroksil, oksid nitrique (NO), peroksinitrit, ak asid ipoklorik responsab pou domaj oksidatif nan selil yo, lipid, pwoteyin, ak ADN, ki mennen nan ateroskleroz, kanserojèn, maladi kadyovaskilè, aje selilè, enflamasyon kwonik, dyabèt, tansyon wo, mutajenèz, neurodegenerations, atrit rimatoyid, konjesyon serebral, chòk septik, ak lòt maladi dejeneratif [7,14-17]. Antioksidan anpeche oksidasyon pwoteyin ak jenerasyon ROS ak RNS ki ka diminye domaj radikal gratis nan tisi nòmal lè yo konbat estrès oksidatif [17-19].

Po a pwodui yon pigman nwa ke yo rekonèt kòm melanin. Pwodiksyon melanin anpeche po a soti nan domaj UV-pwovoke [9]. Sepandan, twòp pwodiksyon ak akimilasyon melanin lakòz ipèpigmantasyon kutane, ki mennen nan konplikasyon estetik tankou melasma, freckles, lentigins senil, nevus, ak ephelis [9,20]. Tirozinaz se yon glikoprotein yo jwenn nan manbràn melanosom yo ki responsab biosentèz melanin pa idwoksilasyon l-tirosinaz nan 3,4-dihydroxyphenylalanine (l-DOPA) ak oksidasyon ki vin apre l-DOPA nan dopaquinone [21]. Akòz polimerizasyon espontane a, dopaquinone finalman konvèti nan melanin [22]. Melanin twòp pwodwi yo ta dwe kontwole pou kenbe entegrite po. Se poutèt sa dekouvèt nouvo inibitè tirozinaz pou devlopman fòmilasyon kosmetik te resevwa yon enterè enpòtan [23-25].

Yo ajoute konsèvasyon antimikwòb nan pwodui kosmetik pou kenbe pite mikrobyolojik pandan tout peryòd aplikasyon yo [26]. Olye pou yo sèvi ak pwodui kosmetik préservatifs tankou methylparaben, konpoze natirèl antimikwòb ki gen lòt fonksyon yo pi bon ak pi benefik pou sante moun [27-29]. Metabolit segondè yo izole nan resous bakteri yo ka gen tou de pwopriyete konsèvatif ak antimikwòb ki anpeche kolonizasyon patojèn bakteri (Propionibacterium acnes, Staphylococcus epidermidis, ak Staphylococcus aureus) nan po a [9,26,28].

Konpoze byoaktif ki pwodui nan tè oswa bakteri maren, espesyalman aktinobakteri, yo pa eksplwate epi yo toujou enkonu [23,30]. Divès konpoze bioaktif ki aplikab nan endistri kosmetik ak kosmetik, ki gen ladan sa yo ki gen anti-aje, antioksidan, anti-tirosinaz, antimikwòb, ak pwopriyete ki pa cytotoxik, gen gwo potansyèl pou itilizasyon roman.

Gen anpil etid sou materyèl bioaktif ki izole nan plant ki kounye a yo itilize nan fòmilasyon kosmetik, men trè kèk etid sou materyèl bioaktif soti nan bakteri ki disponib [9,21,24-27,31]. Etid sa a te vize pou evalye potansyèl cosmeceutical ekstrè acetate etil ki soti nan souch bakteri Streptomyces sp. T65 pou aktivite antioksidan, anti-aje, anti-tirozinaz, ak anti-bakteri ak nenpòt efè sitotoksik sou diferan sourit ak liy selil imen. Anplis de sa, nou vize fè sentèz patikil silica mesoporous. Finalman, objektif prensipal etid sa a se te devlope pwodwi kosmetik final la pou aplikasyon aktualite lè l sèvi avèk materyèl byoaktif ki sòti nan mikwo-òganis tè.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Reyaktif, liy selilè, ak ekipman

Tout solvang yo te itilize yo te nan klas analyse. Liy selil B16-F10 melanom, liy selil B16-F1 sourit melanom, ak liy selil keratinosit imen (HaCaT) te achte nan men American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA). Dulbecco a modifye Eagles 'medyòm (DMEM), penisilin-streptomycin, ak chalè-inaktive fetis serom bovine (HI FBS) te achte nan men Gibco (Thermo Fisher Scientific Korea Ltd., Seoul, Kore di sid). Twous konte selil-8 (CCK-8) te achte nan men Dojindo (Kumamoto, Japon). Yon liy selil macrophage sourit RAW264.7 ak CCD-986Sk fibroblast imen yo te achte nan men Korean Cell Line Bank (Seoul, Kore di Sid). Lipopolysaccharide (LPS, Escherichia coli, serotip O11:B4), sulfanilamid, naphthyl ethylenediamine dihydrochloride, djondjon tirozinaz, elastaz pankreyas kochon, l-tirosin, asid ascorbic, arbutin, N-Succ-(Ala)-{16}anilp{16} , 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromur (MTT), kolagen tip I, Tween 20, tetramethylbenzidine (TMB) ), tetraethyl ortho-silicate (TEOS), pluronic P-123 (poly (ethylene glycol) -block-poly (propylene glycol) -block-poly (ethylene glycol); PEG-PPG-PEG), ak -melanocyte -stimulating òmòn (-MSH) yo te achte nan men Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA). 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) ak asid oleanolik yo te achte nan men Aldrich (St. Louis, MO, USA). COL1A1 (Collagen, tip I, alfa 1) antikò prensipal ak antikò segondè konjige ak HRP (Horseradish peroxidase) yo te achte nan men Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA). Yo te itilize yon SpectraMax 340PC384 Microplate Reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) pou 96-byen lekti plak.

2.2. Tansyon bakteri patojèn

Staphylococcus epidermidis KACC 13234 ak Pseudomonas aeruginosa KACC 10185 yo te achte nan Koleksyon Kilti Agrikilti Koreyen an (KACC, Jeonju, Kore di Sid); Bacillus subtilis KEMB 51201-001, Escherichia coli KEMB 212-234, ak Staphylococcus aureus KEMB 7301-069 yo te jwenn nan Korea Environmental Microorganisms Bank (KEMB, Suwon Kore di Sid); ak Propionibacterium acnes KCTC 3314 te achte nan Koleksyon Koreyen an pou Kalite Kilti (KCTC, Jeongeup, Kore di Sid).

2.3. Izolasyon ak konsèvasyon

Echantiyon tè diferan yo te kolekte nan preri rekipere nan Hwaseong (37◦16′10" N 126◦45′43" E), ak forè Inivèsite Kyonggi (37◦18′1" N 127◦2′20" E) nan Kore di. Bakteri yo te izole lè l sèvi avèk yon metòd ki te deja dekri [9]. Koloni yo te trase sou plak R2A chak semèn 1 pou konsèvasyon kout tèm epi estoke nan -80 ◦C kòm yon sispansyon nan bouyon R2A konplete ak 20 pousan (v/v) gliserin pou prezèvasyon alontèm.

2.4. Depistaj, Idantifikasyon, ak Pozisyon Filogenetik souch izole yo

Depistaj pou pwodui kosmetik ak aktivite antimikwòb nan tansyon izole te konplete jan sa te dekri deja [9]. Yo te idantifye bakteri ki gen fonksyon lè l sèvi avèk sekans jèn 16S rRNA. ADN jenomik tansyon yo te ekstrè lè l sèvi avèk yon twous InstaGene Matrix (Bio-Rad, Hercules, CA, USA), epi yo te anplifye jèn 16S rRNA pa PCR lè l sèvi avèk inivèsèl 27F ak 1492R [32]. Pwodwi PCR la te pirifye ak yon plak multiscreen-filtre (Millipore Corp., Bedford, MA, USA), epi yo te sekans ak yon analizè ADN Applied Biosystems 3770XL lè l sèvi avèk yon twous sekans sik BigDye Terminator v.3.1 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Yon sekans prèske konplè respekte lojisyèl SeqMan (DNASTAR Inc., Madison, WI, USA). Yo te idantifye souch ki pi pre nan tansyon fonksyonèl izole lè l sèvi avèk EzBioCloud [33] ak baz done NCBI GenBank [34]. Gen sekans rRNA 16S ki gen rapò yo te jwenn nan GenBank, epi yo te akonpli analiz filogenetik lè l sèvi avèk MEGA7 [35].

2.5. Kilti Bakteri

P. acnes te kiltive pa enkubasyon nan 37 ◦C pou 3-4 jou anaerobik nan bouyon anaerobi Schaedler (Oxoid). Pou kilti anaerobik la, yo te itilize bokal anaerobik BBL ak GasPak EZ Gas Generating Container System (Becton Dickinson, NJ, USA). S. epidermidis ak S. aureus te kiltive nan mwayen TSB (Tryptic soy broth) (Oxoid) nan 37 ◦C pou 24 èdtan aerobically. E. coli, P. aeruginosa, ak B. subtilis yo te kiltive nan mwayen LB (Luria-Bertani) (Oxoid). Tansyon bakteri izole yo te kiltive nan R2A nan 28 ◦C pou 4-5 jou.

2.6. Fèmantasyon

Pou pwosesis fèmantasyon an, yo te prepare inoculum nan nan bouyon R2A nan 28 ◦C pou 4-5 jou nan 150 pm. Souch T65 te fèrmante lè l sèvi avèk 1-2 pousan inoculum nan mwayen ISP2 (International Streptomyces Project 2) nan 28 ◦C pou 1 semèn a 140 pm.

2.7. Ekstraksyon

Bouyon kilti rekòlte a te santrifuje nan 11,305 × g pou 20 min nan 4 ◦C ak yon santrifujeur gwo kapasite nan 1736R (LABOGENE, Seoul, Kore di). Sipènatant kilti a te filtre ak papye filtre gwosè 150 mm (Whatman 1001-150, GE Healthcare, Maidstone, UK) pou elimine debri selil yo epi konsantre ak yon evaporator rotary nan 40 ◦C. Lè sa a, pwodui brit konsantre yo te ekstrè de fwa ak volim egal lè l sèvi avèk senk solvang diferan (n-hexane, di-etil etè, dichloromethane, klowofòm, ak acetate etil). Acetate etil yo te jwenn pi bon sòlvan an, ak plis analiz yo te fèt lè l sèvi avèk ekstrè acetate etil. Kouch òganik la te separe pa yon antonwa separasyon epi evapore nan sèk. Finalman, pwodui brut sèk la te fonn nan metanol pou plis evalyasyon.

extrait cistanche

2.8. Koleksyon Fraksyon Aktif pa Preparative HPLC (Prep-HPLC)

Fraksyon aktif nan ekstrè kilti brut nan T65 yo te kolekte lè l sèvi avèk HPLC preparasyon (Agilent 1200 seri). Shim-pack-PREP-ODS (K) C18 ranvèse kolòn (30 mm id × 25 cm) ak yon gwosè patikil 15 μm te itilize kòm faz nan estasyonè. Pou faz mobil lan, yo te itilize 0.1 pousan HCHOOH dlo (sòlvan A) ak asetonitrile (sòlvan B). Solvant B konsantrasyon te 10 pousan a 100 pousan soti nan 0 min a 60 min ak 100 pousan soti nan 60 min a 75 min yo te itilize. Pousantaj koule a te 15 mL / min. Detektè milti-vag (MWD) te itilize ak 208, 230, 254, ak 280 nm. Fraksyon kolekte soti nan 14 min rive 21 min yo te evapore nan sechrès ak fonn nan metanol (T65 pwodwi brit) pou plis evalyasyon.

2.9. Viabilite selil HaCaT selil

Yo te detèmine viabilite selil HaCaT ak yon tès CCK-8 (Cell Counting Kit-8) dapre enstriksyon manifakti a. Selil HaCaT yo te simen nan 96-plak byen nan 104 selil pou chak pi epi apre sa yo te enkube nan 37 ◦C pou 24 èdtan nan mwayen Dulbecco a modifye Eagles '(DMEM) ki gen 10 pousan serom fetal bovine (FBS). Selil yo te trete ak diferan konsantrasyon nan pwodwi brut T65 (10 mg/mL, 1 mg/mL, 100 ug/mL, 10 ug/mL, 1 ug/mL, 100 ng/ml, ak 1 ng/mL), ak enkubasyon. nan tanperati chanm pou 2 èdtan nan yon atmosfè imidite ki gen 5 pousan CO2 ak adisyon 10 μL reyaktif CCK-8. Yo te mezire absorbans melanj reyaksyon an ak yon espektrofotomèt mikwoplak nan 450 nm epi yo te kalkile pousantaj nan viabilite selil.

2.10. Evalyasyon Aktivite Antioksidan

2.10.1. Evalyasyon toksisite nan selil RAW264.7

Selil RAW264.7 yo te kenbe nan DMEM ki gen 10 pousan FBS, 100 U/mL penisilin, ak 100 ug/mL streptomycin nan 37 ◦C nan yon enkibatè 5 pousan CO2. Selil RAW264.7 yo te simen nan yon plak microtiter 96-byen plat-anba nan yon dansite 104 selil pou chak pi ak diferan konsantrasyon (0-1 mg/mL) nan pwodwi brit T65 ak enkubasyon nan 37 ◦C pou 24. h nan yon enkibatè 5 pousan CO2. Apre 24 èdtan enkubasyon, selil yo te lave de fwa ak saline tampon fosfat (PBS), ak 190 μL nan mwayen fre ak 10 μL nan solisyon k ap travay MTT (5 mg / mL) yo te ajoute nan chak pi, epi yo te plak la Lè sa a, enkubasyon nan. 37 ◦C pou 4 h nan yon enkibatè 5 pousan CO2. Lè sa a, yo te retire supernatant la, epi kristal formazan ki te fòme yo te solubilize lè yo ajoute 150 μL DMSO (dimethyl sulfoxide) nan chak pwi pou 10 min nan 37 ◦C nan yon enkibatè 5 pousan CO2. Entansite kristal formazan ki fonn yo te mezire lè l sèvi avèk yon lektè microplate nan 570 nm.

2.10.2. Detèminasyon oksid nitrique

Selil RAW264.7 yo (105 selil/mL) yo te pretrete ak divès kalite konsantrasyon nan pwodwi brut T65 (15.5-125 ug/mL) pou 30 min, ki te swiv pa eksitasyon ak 1 ug/mL LPS pou 24 èdtan. Konsantrasyon NO ki soti nan selil yo te detèmine pa reyaktif Griess lè l sèvi avèk koub estanda NO2- [36]. Yo te enkube yon santèn mikrolit sipènatant kilti ak 100 μL reyaktif Griess (melanj N-1-naphthyl ethylenediamine dihydrochloride (NEDHC) ak sulfanilamid) nan tanperati chanm pou 20 minit nan fè nwa. Absorbans la te mezire nan 540 nm.

2.10.3. DPPH Free Radical Scavenging Assay

Aktivite DPPH gratis radikal yo te fèt dapre yon metòd ki dekri deja [9]. Yo te dilye pwodwi brit ekstrè kilti T65 nan konsantrasyon 600, 200, 100, 20, ak 4 ug/mL nan metanol. Te melanj reyaksyon 180 μL fèt ak 90 μL 0.1 mM DPPH (fonn nan MeOH) ak 90 μL solisyon echantiyon diferan konsantrasyon (Tablo S1). Reyaksyon tès yo te byen melanje nan 96-plak byen, enkubasyon nan 37 ◦C pou 30 min, epi yo te mezire absòpsyon nan 516 nm ak yon espektrofotomèt. Yo te kalkile pousantaj anpèchman DPPH jan sa a:

Anpèchman (pousan)=[1 − (ODexp − ODcon) / (ODstd − ODbln)] × 100 (1)

kote ODexp se absòbe echantiyon eksperimantal la; ODcon se absòbe kontwòl la; ODstd, absòbe estanda a; ak ODbln, absorpsyon nan vid la.

2.11. Evalyasyon aktivite anti-aje

2.11.1. Evalyasyon Sitotoksisite nan CCD-986Selil Sk

Sitotoksisite selil nan divès konsantrasyon (0-1 mg/mL) nan pwodwi brit T65 nan selil fibroblast po moun (CCD-986Sk) te detèmine pa tès MTT jan yo dekri deja pou tès MTT nan RAW264.7. selil yo.

2.11.2. Pwoliferasyon Fibroblast Imèn lè l sèvi avèk Selil CCD-986Sk

Yo te detèmine pwopagasyon selil fibroblast po imen (HDF) nan selil CCD{{0}}Sk lè l sèvi avèk yon tès CCK-8. Selil CCD-986Sk yo te simen nan 96-plak byen nan 5 × 103 selil/pi epi answit enkubasyon nan 37 ◦C pou 24 èdtan nan DMEM ki gen 10 pousan FBS. Selil yo te trete ak diferan konsantrasyon nan pwodwi brut T65 (0-1 mg/mL) ak enkubasyon nan tanperati chanm pou 2 èdtan nan yon atmosfè imidite ki gen 5 pousan CO2 ak adisyon a nan 10 μL nan CCK-8 reyaktif. Yo te mezire absorbans melanj reyaksyon an ak yon lektè microplate nan 450 nm epi yo te detèmine pousantaj selil solid an konparezon ak absorpsyon selil ki pa trete yo.

Cistanche se anti-aje.

2.11.3. Kolagen Kalite I Essay Sentèz

Kalite kolagen I sentèz te teste pa yon tès imunosorban ki lye ak anzim (ELISA). Selil CCD-986Sk yo te simen nan 96-plak byen nan yon dansite 5 × 103 selil/po nan DMEM ki gen 10 pousan FBS epi yo te enkube nan 37 ◦ C pou 24 h. Divès konsantrasyon pwodwi brut T65 (31.25–25 {{30}} pg/mL) te ajoute nan yon mwayen FBS-gratis pou 24 èdtan. Answit, yo te ajoute 100 μL mwayen kilti ak kalite kolagen I nan plak 96-pi ki kouvri ak kolagen an epi yo te enkube a 37 ◦C pou 24, 48, ak 72 èdtan. Chak pi yo te lave ak 0.05 pousan saline fosfat-tanpon ak 0.1 pousan Tween 20 (PBST) epi yo te ajoute antikò prensipal COL1A1 la epi enkube pou 1 èdtan. Yon fwa ankò, pwi yo te lave ak 0.05 pousan PBST, epi yo te ajoute yon antikò segondè konjige ak HRP (peroksidaz refor) epi enkube pou 1 èdtan. Chak pi yo te lave ak 0.05 pousan PBST, epi yo te ajoute TMB (tetramethylbenzidine). Apre yo fin jwenn entansite koulè vle a (ble), yo te sispann reyaksyon an lè yo ajoute 0.5N H2SO4, ki te vire koulè solisyon an jòn. Yo te mezire absorpsyon an nan 450 nm ak yon lektè microplate, epi yo te detèmine pwodiksyon kolagen an tip I.

2.11.4. Elastase anpèchman tès

Aktivite anpèchman elastaz pankreyas pòsin (PPE) yo te teste dapre yon pwosedi ki dekri deja [9]. Yo te dilye pwodwi brit T65 la nan yon konsantrasyon 30{{10}}0, 1000, 500, ak 100 ug/mL nan metanol. Yo te prepare melanj reyaksyon an ak 0.2 M Tris-HCl tanpon (pH 8.0), 0.5 mM N-Succ-(Ala)3-ρ-nitroanilide (SANA) kòm yon substrate, elastaz pankreyas kochon (3.5 U/mL nan). 0.2 M Tris-HCl tanpon; pH 8.0), ak inibitè a (echantiyon). Chak echantiyon te pre-enkube nan 37 ◦C pou 15 min, epi melanj reyaksyon total la te enkube a 37 ◦C pou 20 min. Yo te mezire absòpsyon nan 400 nm. Melanj reyaksyon total 150 μL te prepare jan yo montre nan Tablo S2. Konsantrasyon final echantiyon an nan melanj reyaksyon an te 300, 100, 50, ak 10 ug/mL. Pousantaj anpèchman PPE yo te kalkile lè l sèvi avèk Fòmil (1).

2.12. Evalyasyon Aktivite Blanchiman

2.12.1. Evalyasyon sitotoksisite nan selil B16F1

Sitotoksisite nan pwodwi T65 brit nan selil melanom B16F1 te detèmine pa yon tès MTT. Selil B16F1 yo te simen nan 96-plak byen nan 104 selil pou chak pi epi apre yo te enkube a 37 ◦C pou 24 èdtan nan DMEM ki gen 10 pousan FBS. Selil yo te trete ak diferan konsantrasyon nan pwodwi brit T65 (0-1 mg / mL) ak enkubasyon nan tanperati chanm pou 2 èdtan nan yon atmosfè imidite ki gen 5 pousan CO2. Yo te mezire absorbans melanj reyaksyon an ak yon espektrofotomèt mikwoplak nan 450 nm epi yo te kalkile pousantaj nan viabilite selil.

2.12.2. Anpèchman sentèz Melanin nan selil B16F10

Selil B16F10 yo te pretrete ak -MSH nan plak 6-byen nan 105 selil pou chak pi epi yo te enkube nan 37 ◦C pou 24 èdtan nan DMEM ki gen 10 pousan FBS pou ankouraje sentèz melanin. Selil yo te enkube ak divès kalite konsantrasyon T65 brut pwodwi (31.25-125 ug/mL) ak 100 ug/mL arbutin kòm yon kontwòl pozitif nan prezans oswa absans -MSH pou 48 èdtan. Yo te obsève anpèchman sentèz melanin nan selil melanom B16F10.

Cistanche anpeche fòmasyon melanin.

2.12.3. Djondjon Tyrosinase anpèchman essai

Aktivite anpèchman tirozinaz djondjon yo te detèmine jan sa te dekri deja [9]. Pwodwi brut T65 la te dilye nan konsantrasyon 3000, 1000, 500, ak 100 ug/mL nan metanol. Te melanj reyaksyon an prepare ak 0.1 M tanpon fosfat potasyòm (pH 6.8), 3 mM l-tirozin solisyon [fonn nan DW (dlo distile)], ak 2000 U / mL djondjon tirozinaz (fonn nan 0.05 M tanpon fosfat potasyòm, pH 68). ; Sigma) nan 96-plak byen yo. Melanj total tès 150 μL (120 μL tanpon fosfat, 10 μL l-tirozin, 15 μL solisyon echantiyon, ak 5 μL tirozinaz djondjon; Tablo S3) te enkube nan 37 ◦C pou 10 min ak absòpsyon yo te mezire nan 475 nm. Konsantrasyon final echantiyon an nan melanj reyaksyon an te 300, 100, 50, ak 10 ug/mL. Estanda a te san solisyon echantiyon an, kontwòl la te san l-tirosin, ak vid la te san l-tirosin ak solisyon echantiyon an. Pousantaj anpèchman tirozinaz te kalkile lè w aplike Fòmil (1).

2.13. Analiz de asid amine

Asid amine gratis nan pwodwi brut T65 te detèmine pa metòd la GC-FID (kwomatografi gaz - flanm dife ionizasyon detektè) nan Kore di Polymer Tès ak Rechèch Enstiti (Koptri). Pou metòd GC-FID la, machin yo te itilize a se yon Agilent 6890N GC-FID; kolòn, ZB-AAA (10 m × 0.25 mm); tanperati pati piki, 250 ◦C; kolòn piki, 2 μL; rapò fann, 5:1; kondisyon tanperati, 110 ◦C → 32 ◦C/min → 320 ◦C; detektè, FID @ 320 ◦C; konpayi asirans, gaz nitwojèn, 1.5 mL / min; Maker, Phenomenex; estanda asid amine; ak konsantrasyon, 200 μmol / L.

Yo te detèmine asid amine konpoze yo nan pwodwi brit T65 pa metòd GC-FID (detektè gaz chromatografi-flanm dife ionizasyon) nan Kore di Polymer Tès ak Rechèch Enstiti (Koptri). Pou GC-FID, machin yo te itilize a se te yon Agilent 6890N GC-FID; kolòn, ZB-AAA (10 m × 0.25 mm); tanperati pati piki, 250 ◦C; kolòn piki, 2 μL; rapò fann, 5:1; kondisyon tanperati, 110 ◦C → 32 ◦C/min → 320 ◦C; detektè, FID @ 320 ◦C; konpayi asirans, gaz nitwojèn, 1.5 mL / min; Maker, Phenomenex; estanda asid amine; ak konsantrasyon, 200 μmol / L.

2.14. Asid gra

Asid gra nan pwodwi brut T65 te detèmine pa metòd la GC-FID (kwomatografi gaz-flanm dife ionizasyon detektè) nan Kore di Polymer Tès ak Rechèch Enstiti (Koptri). Pou GC-FID, machin yo te itilize se Agilent 6890N GC-FID; kolòn, Supelco SP–2500 (100 m × 0.25 mm × 0.20 μm); tanperati pati piki, 250 ◦C; kolòn piki, 1 μL; rapò fann, 50:1; kondisyon tanperati, 100 ◦C (4 min) → 3 ◦C/min → 240 ◦C (15 min); detektè, FID @ 285 ◦C; konpayi asirans, gaz nitwojèn, 0.8 mL / min; Maker, SUPELCO 37 Component FAME Mix; ak konsantrasyon, 0.5 mg/mL.

2.15. Aktivite antimikwòb

Anpèchman nan bakteri patojèn te fèt pa metòd la difizyon disk. Yon santèn mikrolit kilti P. acnes nan 108 CFU (inite k ap fòme koloni)/mL te gaye epi enkubate nan 35 ◦C anaerobik pou 2-3 jou sou plak Schaedler agar ansanm ak yon disk 6 mm (Whatman) ki gen 15 ug. nan ekstrè bit fonn nan metanol, ak zòn yo nan anpèchman yo te mezire. Menm jan an tou, 100 μL S. epidermidis, S. aureus, B. subtilis, E. coli, ak P. aeruginosa nan 108 CFU/mL yo te gaye ak enkubasyon nan 35 ◦C aerobically sou plak R2A oswa LBA pou 1-2 jou ak zòn anpèchman yo te mezire.

2.16. Sentèz Mesoporous Silica Patikil

Polymère ki pwovoke estrikti a te fonn nan dlo deyonize pou prepare yon solisyon micelle. Materyèl silica mesoporous yo te sentèz dapre metòd ki dekri nan literati a [37]. Pou sentèz patikil silica mesoporous (SBA-15), 10 g Pluronic P123 (EO20PO70EO20, BASF Corporation, Florham Park, NJ, USA), te fonn nan 55 mL 2 M HCl, ki te swiv pa brase nan chanm. tanperati pou 30 min. Anplis de sa, yo te ajoute 22 g nan tetraethylorthosilicate (TEOS) nan solisyon an ak plis brase pou 30 min epi yo mete yo nan 36 ◦C pou 24 èdtan ak Lè sa a, mete nan dife pou chofe fou a, nan ki tanperati a te kenbe nan 100 ◦C, epi yo te kite pou 4 jou anba kondisyon estatik la. Apre 4 jou, solisyon an chanje nan yon solisyon twoub nan boutèy la. Yo te filtre solisyon an twoub ak de kouch yo nan papye filtre seluloz epi lave ak EtOH (de fwa) ak dlo DI (deyonize) (de fwa). Poud filtraj ki kapab lakòz yo te cheche nan fou a konveksyon 120 ◦C epi li te mete nan gwo founo dife a (Hanyang Scientific Equipment Co., Ltd., Seoul, Kore di sid). Sis echantiyon yo te sentèz ak menm kondisyon yo men nan yon pakèt diferan. Mikwoskòp elèktron transmisyon (TEM) nan sentèz SBA-15 yo te pran nan Inivèsite Nasyonal Seoul pa mikwoskòp elèktron transmisyon (Talos L120C; FEI).

2.17. BET analiz zòn sifas

Gwosè patikil silica te mezire pa Mastersizer 2000 (Malvern Instruments Lt., Malvern, Wayòm Ini). Pou preparasyon echantiyon analiz BET (Brunauer–Emmett–Teller), yo te ajoute 5 g P-123 nan 76 g 2M HCl epi yo te brase nan 250 rpm pou 24 èdtan. Apre 24 èdtan, lè P-123 te konplètman fonn, yo te ajoute 160 mL dlo DI (deyonize) ak TEOS yon fason inifòm (15 mL/min) epi yo te brase nan 750 rpm pou 24 èdtan. Apre sa, yo te separe poud ki te fòme a pa filtraj epi yo te mete poud ki separe a nan yon kouto epi lave ak Soxhlet pou 24 èdtan. Lè sa a, li te lave ak dlo DI ak boule nan yon gwo founo dife (Hanyang Scientific Equipment Co., Ltd., Kore di sid). Analiz sifas BET yo te fèt pou konfime pèfòmans poud ki te pwodwi pa sentèz SBA-15. Analiz BET yo te konplete pa Inha University ak Changwon National University.

Analizè gaz sorption (Autosorb iQ, Quantachrome Instruments, Ashland, OR, USA) te anplwaye pou egzamine zòn sifas ak distribisyon pò yo nan materyèl silica mesoporous prepare. Sifas sifas ak distribisyon gwosè pò yo te kalkile lè l sèvi avèk lojisyèl ASiQwin (Anton Paar Quanta Tech Inc., Boynton Beach, FL, USA) ki baze sou izotèm adsorption-desorption. Patikil sentèz primitif yo te degaze nan 300 ◦C/3h, Lè sa a, N2 adsorption ak izotèm desorption yo te mezire nan yon tanperati -196 ◦C. Analiz Multipoint BET te aplike pou kalkil total sifas la.

2.18. Evalyasyon dirabilite

Pou konfime prezans T65 nan SBA entegre-15, yo te fè pèfòmans sa a jan sa a: 12 g SBA-15 ak 1.2 g T65 brut pwodwi yo te melanje nan 500 mL asetonitrile. Solisyon an te brase pou 18 èdtan anba 30 ◦C. Apre filtraj, nan melanj lan te filtre ak patikil filtre yo te cheche nan yon fou konveksyon 100 ◦C. Pou jwenn patikil T65 nan tèt li nan SBA-15, yo te fonn 1 g T65 sèk ki entegre nan SBA-15 nan asetonitrile epi yo te ajoute 25 mL asid fliyò 3M. Yo te brase melanj lan nan tanperati chanm pou 24 èdtan jiskaske solisyon an vin klè. Lè sa a, yo te filtre solisyon an, epi yo te itilize solisyon an filtraj kòm echantiyon. Echantiyon yo te jwenn nan eksperyans ki anwo yo te analize pa HPLC.

Pou detèmine pwopriyete lage kontwole, yo te vide 35 mL SBA-15 entegre nan 50 mL lwil mineral (M3516; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) epi melanje byen. Lè sa a, 50 mL dlo DI te ajoute nan melanj la ak souke anba tanperati chanm pou 6 èdtan, ak Lè sa a, kite sou biwo a pou 12 èdtan. Lè kouch likid la separe, yo te jete kouch dlo a, epi yo te kolekte 1 mL kouch lwil oliv kòm yon echantiyon pou analiz HPLC. Yo te repete menm eksperyans nan dezyèm ak twazyèm jou a epi yo te analize echantiyon an ankò lè l sèvi avèk HPLC.

2.19. Fòmilasyon ak aplikasyon kosmetik

2.19.1. Tès fòmilasyon ak estabilite

Yon pwodui kosmetik te formul nan yon krèm emulsifyan-kalite. Estabilite fòmilasyon kosmetik te detèmine pa kenbe pwodwi kosmetik la nan divès tanperati (37, 45, ak 60 ◦C) ki gen ladan nan frizè a, frijidè, ak nan tanperati chanm pou jiska 28 jou. Yo te obsève estabilite nan krèm kosmetik nan premye, dezyèm, twazyèm, ak katriyèm semèn yo.

2.19.2. Esè klinik, volontè, ak metòd aplikasyon

Krèm kosmetik fonksyonèl ki gen pwodwi brut T65 te aplike nan 21 volontè fi pou detèminasyon amelyorasyon ondilasyon ak efikasite blanchi nan po brut ak klète po. Tout pwosedi eksperimantal pou patisipasyon imen pou etid sa a te apwouve pa Elad Institutional Review Board (IRB) (EL-P-7400). Yo te jwenn konsantman enfòme nan tout patisipan yo. Tès yo te fèt anvan aplikasyon an nan pwodwi a, apre 2 semèn ak apre 4 semèn. Apeprè 5 mg nan pwodui kosmetik te aplike de fwa pa jou (maten ak aswè) sou figi a apre netwaye figi a, epi li te dousman gaye dapre teksti po a. Volontè yo pa te pèmèt yo sèvi ak okenn lòt krèm oswa pwodwi 1 semèn anvan jijman an ak pandan jijman an.

2.19.3. Metòd kaptire imaj ak pwosesis

Foto yo te pran pa VISIA-CR. Lojisyèl PRIMOS te analize brutality imaj yo (PRIMOS vèsyon 5.8E, Canfield Scientific, Inc., Parsippany-Troy Hills, NJ, USA). Yo te kalkile brutality mwayèn (Ra) ak pwofondè maksimòm (Rmax) lè l sèvi avèk fòmil sa a:

Ra oswa Rmax pousantaj (pousan)=(valè anvan tretman - valè apre tretman)/valè anvan tretman × 100 (2)

Chromameter CR-400 te analize klète imaj yo. L* se paramèt klète a epi li mezire pa fòmil sa a:

L* ogmantasyon pousantaj (pousan)=(valè anvan tretman - valè apre tretman)/valè anvan tretman × 100 (3)

2.20. Analiz estatistik

Lojisyèl estatistik OriginPro 8.5 (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) te fè kalkil estatistik valè IC50 la. Tout eksperyans yo te fèt an triple, ak tout rezilta yo te prezante kòm vle di ± SD nan twa eksperyans separe. Done yo te analize pa echantiyon endepandan t-tès analiz yon sèl-fason nan divèjans (yon-fason ANOVA), ki te swiv pa tès post-hoc Tukey a lè l sèvi avèk OriginPro 8.5. Diferans yo te konsidere kòm enpòtan nan p <>

3. Rezilta ak Diskisyon

3.1. Izolasyon, Seleksyon, ak Filojeni nan Souch aktif Chwazi

Yon total de 2285 tansyon bakteri yo te izole nan echantiyon tè yo kolekte. Rezilta tès depistaj yo te montre 102 tansyon bakteri te gen fonksyon ki aplikab pou pwodui kosmetik yo (Tablo S4). Sou baz tès depistaj prensipal, Streptomyces sp. T65 te jwenn pi wo aktivite pou tout aplikasyon kosmetik, sètadi, anti-oksidan, anti-elastaz, anti-tirosinaz, ak aktivite anti-mikwòb. Finalman, souch T65 te chwazi pou plis evalyasyon pou idantifye aplikasyon potansyèl li nan cosmeceuticals. Analiz filogenetik te montre ke souch T65 te fòme yon clade ak Streptomyces bungoensis DSM 41781T (souch ki pi pre a sou baz sekans jèn 16S rRNA) ak yon valè bootstrap fò (Figi S1).

3.2. Deteksyon ak koleksyon materyèl byoaktif

Materyèl bioaktif melanje ki soti nan ekstrè kilti acetate etil T65 yo te kolekte nan Prep-HPLC. Materyèl byoaktif yo te mezire nan 208, 230, 254, ak 280 nm pa detektè. Fraksyon yo te kolekte sou baz tan (ki soti nan 14 min rive nan 21 min). Fraksyon yo kolekte yo te evapore nan sechrès ak fonn nan metanol (T65 pwodwi brit) epi yo te itilize pou tout evalyasyon yo, ki gen ladan aktivite antimikwòb.

3.3. Sitotoksisite nan selil HaCaT

Selil viabilite nan liy selil keratinosit imen an (selil HaCaT) pa te afekte pa pwodwi brit T65 jiska 10 mg / mL. Nan lòt men an, viabilite selil la ogmante nan yon fason ki depann de dòz lè yo te aplike konsantrasyon nan 10 ng / mL a 10 mg / mL nan pwodwi brit T65 (Figi S2). Ranje konsantrasyon sa a te lakòz plis pase 100 pousan viabilite selilè, ki endike ke li ankouraje pwopagasyon selil HaCaT epi li te, kidonk, ki pa toksik nan liy selil HaCaT la.

3.4. Aktivite antioksidan

3.4.1. Sitotoksisite nan selil RAW264.7

Sitotoksisite nan pwodwi brut T65 te evalye pa viabilite selil nan macrophages RAW264.7 pa metòd la tès MTT. Pwodwi brut T65 pa montre okenn efè cytotoxik sou liy selil RAW264.7.

Okontrè, pwodwi brit T65 te ede pwopagasyon selil RAW264.7 nan yon fason ki depann de dòz lè yo te trete ak 13.5 a 1000 ug/mL. Lè yo te itilize 1000 ug/mL T65 pwodwi brit, viabilite selil RAW264.7 selil yo te 118.7 pousan (p <0.05). rezilta="" sa="" yo="" te="" montre="" ke="" konpoze="" brut="" t65="" la="" pa="" toksik="" jiska="" 1="" mg/ml="" epi="" yo="" ka="" itilize="" nan="" fòmilasyon="">

3.4.2. Anpèchman pwodiksyon oksid nitrique (NO).

Yo te itilize reyaktif Griess pou detèmine nivo NO yo. Pou detèmine anpèchman NO a, RAW264.7selil yo te trete ak 1 ug / mL LPS (lipopolysaccharide) ansanm ak divès kalite konsantrasyon nan pwodwi T65 brit. Selil RAW264.7 yo te aktive pa LPS, epi NO pwodiksyon te mezire kòm konsantrasyon nitrite nan mwayen kilti a. Konpare ak LPS pou kont li, pwodwi brit T65 siyifikativman (p <{5}}.001) anpeche="" konsantrasyon="" nitrite="" nan="" selil="" raw264.7="" ki="" ankouraje="" lps="" yo="" nan="" yon="" fason="" ki="" depann="" de="" konsantrasyon="" lè="" yo="" itilize="" soti="" nan="" 15.5="" a="" 125="" ug/ml="" (figi).="" 2).="" makwofaj="" yo="" te="" ekspresyon="" lps-toll-tankou="" nan="" no="" synthase="" (inos)="" endizibl="" lè="" yo="" siyal="" aktivasyon="" selil="" atravè="" reseptè="" [38].="" lps="" se="" yon="" aktivateur="" nan="" makrofaj="" epi="" li="" jwe="" yon="" wòl="" enpòtan="" nan="" pwodiksyon="" no="" nan="" selil="" mamifè="" [39].="" no="" se="" yon="" radikal="" lib="" ki="" pwodui="" pa="" selil="" imunokonpetan="" tankou="" makrofaj="" [40].="" pwodiksyon="" no="" gen="" yon="" efè="" fagositik="" sou="" makrofaj.="" se="" konsa,="" liy="" selil="" macrophage="" raw264.7="" te="" chwazi="" pou="" tès="" antioksidan.="" pou="" yon="" tan="" long,="" yo="" te="" bay="" konsiderab="" atansyon="" a="" demand="" pou="" antioksidan="" natirèl="" anpeche="" pwodiksyon="" no="" [41].="" nan="" 125="" ug/ml,="" pwodwi="" brut="" t65="" ase="" diminye="" nivo="" no="" yo="" pa="" 57.4="" pousan="" konpare="" ak="" no="" ki="" te="" pwodwi="" pa="" 1="" ug/ml="" lps.="" sou="" baz="" anpèchman="" no="" pwodwi="" nan="" liy="" selil="" macrophage="" raw264.7="" lps-induit,="" ekstrè="" kilti="" t65="" ta="" ka="" konsidere="" kòm="" yon="" antioksidan="" ki="">

DPPPHrRaaddiciacal lsScacvaveennggininggpAerccteivnitayges nan diferan konsantrasyon ak valè IC50 nan pwodwi brut T65 yo bay nan Tablo S5. Asid ascorbic (vitamin C) te itilize kòm yon estanda paske yo itilize li nan losyon, krèm, serom, ak plak, ki byen li te ye pou gen aktivite antioksidan pwisan pou aplikasyon aktualite [42]. IC50 pou aktivite DPPH scavenging radikal pou vitamin C ak T65 pwodwi segondè yo te jwenn yo dwe 5.01 ak 6.31 ug / mL, respektivman (Figi 3).

Gen sèlman kèk etid sou aktivite antioksidan ki soti nan izole bakteri konpare ak sa yo ki soti nan materyèl plant ak pifò etid yo te konsantre sou pwodwi plant ki byen etabli [43-49]. Yon konsantrasyon nan 10 ug/mL pwodwi te kapab scavenge 68.66 ± 2.83 pousan nan DPPH-gratis radikal. IC50 nan pwodwi brut T65 te prèske konparab ak sa yo ki pi fò antioksidan vitamin C a, ki te montre ke li ta ka itilize kòm yon ajan antioksidan nan fòmilasyon nan kosmeceuticals.

3.5.1. Sitotoksisite nan selil CCD-986Sk

Yo te evalye sitotoksisite nan konpoze brut T65 nan selil fibroblast imen (HDF) nan liy selil CCD-986Sk lè l sèvi avèk tès MTT la. Lè yo te bay konsantrasyon nan pwodwi brut T65 soti nan 0 1 mg/mL, selil HDF yo pwopagasyon nan yon fason ki depann de dòz jiskaske konsantrasyon an nan 500 ug/mL. Rezilta sa a te montre ke konpoze brit ki soti nan T65 yo pa t 'sitotoksik nan selil HDF yo. Sepandan, yo te jwenn yon konsantrasyon plis pase 1 mg/mL cytotoxik, epi sèlman 81.34 pousan nan selil yo te siviv konpare ak kontwòl la (Figi 4).

3.5.2. Pwoliferasyon HDF

Pwopagasyon selil HDF yo te detèmine lè l sèvi avèk liy selil CCD{{0}}Sk. Pwodwi brut T65 pwopagasyon selil HDF yo nan yon fason ki depann de konsantrasyon soti nan 0 a 500 ug/mL (Figi 5). Sepandan, li te cytotoxik nan yon konsantrasyon nan 1 mg / mL. Kwasans selil epitelyal po imen an konfime kapasite amelyorasyon rid atravè chanjman nan selil prensipal kiltive yo izole nan selil po imen ak kolagen an sekrete [50,51].

3.5.3. Kolagen Kalite I Sentèz

Sentèz kalite kolagen I te detekte pa ELISA. Pwodwi brit T65 nan 250 pg/mL ogmante konsantrasyon kolagen an tip I nan yon fason ki depann de dòz jiska 145.91 pousan ± 9.11 pousan (mwayèn ± SD; vle di 24, 48, ak 72 h). Rezilta a nan twa eksperyans nan 24, 48, ak 72 h te montre sentèz la nan kolagen an tip I (Figi 6) .. Kidonk, sekresyon selil po nan kolagen an akonpaye pa kwasans selil epitelyal imen po konfime kapasite nan amelyorasyon rid nan konpoze T65.

3.6. Aktivite blanchiman

3.6.1. Sitotoksisite nan selil B16F1

Rezilta cytotoxicity nan pwodwi brut T65 sou selil melanom B16F1 pa tès MTT yo montre nan Figi 8. Rezilta enkubasyon pwodwi brut T65 nan selil B16F1 te montre efè ki pa toksik jiska 1 mg/mL konsantrasyon. Selil B16F1 pwopagasyon nan yon fason ki depann de dòz jiska yon konsantrasyon 62.5 ug/mL, men yo te evalye yon diminisyon enpòtan (p <0.05) dòz-depandan="" nan="" viabilite="" selilè="" soti="" nan="" 125="" a="" 1000="" ug/ml.="" sepandan,="" nan="" yon="" konsantrasyon="" nan="" 1="" mg="" ml,="" 99.12="" pousan="" ±="" 4.16="" pousan="" nan="" selil="" solid="" yo="" te="" obsève="" (figi="" 8).="" rezilta="" eksperimantal="" yo="" te="" montre="" ke="" ekstrè="" acetate="" etil="" nan="" kilti="" souch="" t65="" te="" ki="" pa="" cytotoksik="" nan="" liy="" selil="" melanom="" b16f1="" la="" epi="" yo="" ka="" itilize="" nan="" fòmilasyon="" pwodui="" kosmetik="" pou="" blanchi="" po="">

3.6.2. Anpèchman sentèz Melanin nan selil B16F10

Pou konfimasyon nan efè a blanchi, selil B16F10, yon liy selil ki sekrete ak pwoduimelanin nan selil yo, yo te itilize. Pou ankouraje sentèz melanin, B16F10 te konplete ak 1 ug nan -MSH. Arbutin (100 ug/mL; yon ajan blanchi komèsyalize) te itilize kòm kontwòl pozitif. Obsèvasyon an mikwoskopik nan eksperyans sa a te montre prèske konplè anpèchman nan melanin pa aplikasyon nan 125 ug / mL nan ekstrè kilti T65 nan 48 èdtan (Figi 9A, B). Eksperyans sa a te pwouve ke ekstrè kilti T65 gen potansyèl pou anpeche sentèz melanin nan yon fason ki depann de dòz epi li ka itilize kòm yon ajan blanchiman pou fòmilasyon pwodwi kosmetik pou aplikasyon aktualite.

3.7. Materyèl silica mesoporous

Materyèl mesoporous se yon materyèl ki genyen porositë ak yon dyamèt 2 a 50 nm dapre nomanklati IUPAC (Inyon Entènasyonal Chimi Pi ak Aplike), e konsa materyèl silica mesoporous se yon materyèl silica ki gen porositë ki se 2-50 nm an dyamèt. Materyèl sa a te rapòte nan ane 1970 yo premyèman nan patant US, men yo pa te byen remake nan domèn ki gen rapò yo, e konsa materyèl menm jan an te fè rechèch poukont yo ak sentèz pa Japon ankò an 1990 [69]. Mobil Corporation Laboratories te swiv rechèch ki pi detaye, epi yo te nonmen materyèl sa a MCM (Mobil crystalline material), ak egzanp tankou MCM-41 oswa MCM-48, ki dyamèt mesopore a varye ant 2 a 6. nm [70,71]. Yon lòt gwoup rechèch nan University of California, Santa Barbara, te reyisi sentèz yon pi gwo gwosè pò (5-30 nm) silica mesoporous 6 ane pita, epi yo te rele li SBA (Santa Barbara amorphous material) -15 [72] . Mesopore silica materyèl te fèt nan premye yo itilize kòm yon Van molekilè akòz pwòp karaktè estriktirèl li yo, men dènyèman li te jwenn yon pakèt aplikasyon nan livrezon dwòg, katalis, biocapteur, depo enèji, ak sou sa.

Gen diferan diferans nan SBA-15 ak MCM-41 materyèl mesoporous. Sepandan, fason ki pi senp yo fè distenksyon ant de sa yo se epesè miray silica yo. SBA-15 ak yon miray silica pi epè gen yon estrikti ki pi estab ak rijid konpare ak sa ki nan MCM-41, ki gen yon epesè miray mens. Anplis, metòd sentetik SBA-15 pi senp pase MCM-41. Akòz diferans sa yo, yo te chwazi SBA-15 pou pote pwodwi bit bioaktif T65 andedan mesopore materyèl silica a.

3.8. Sentèz Mesoporous Silica Patikil

Apre pwosesis kalsinasyon an te pote anba 200 ◦C pou 2 h ak 600 ◦C pou 3 h toujou, yo te jwenn poud mesoporous silica blan ki kapab lakòz. SBA-15 nan porositë 8 nm yo te sentèz nan pwosesis sa a. Gwosè patikil SBA-15 yo te jwenn 11.539-13.630 mm an dyamèt (Figi S4) epi yo te detèmine pa de enstalasyon diferan: Inha University Laboratory ak Changwon National University Laboratory. Anplis de sa, tout sis echantiyon yo nan Figi S4 yo te sentèz pa menm metòd la men yon pakèt diferan.

Lè yo te kenbe melanj lan nan 60 ◦C epi kite pou 4 jou nan kondisyon estatik apre metòd ki pi wo a, SBA -15 nan 5 nm pò yo te konnen. Anplis de sa, lè tanperati a te kontwole nan 120 ◦C, SBA-15 nan 10 nm te sentèz. Dapre rezilta yo, gwosè mesopore ka kontwole depann sou pwosesis la aje [73]. SBA-15 nan pò 10 nm (Figi 11) te itilize pou plis pwosesis paske nanomateryèl silica mesoporous gwo pò yo gen pi bon aksyon livrezon pou biomolekil pase pò etwat la [74].

3.9. Evalyasyon Pèfòmans Dirab

Pou detèmine si SBA-15 mesoporous la gen yon kapasite pou lage kontwole, SBA-15 ak pwodwi brit T65 la te konbine ansanm nan dlo DI, metanol, asetonitrile, oswa sòlvan ethylene glycol. Lè SBA-15 ak dlo yo te melanje, solisyon an te vin tounen yon sispansyon akòz koagulasyon ki genyen ant sifas la silica ak dlo. Methanol se te yon bon sòlvan pou tou de silica ak pwodwi brit T65. Sepandan, akòz toksisite, metanol te ranplase acetonitrile. Patikil yo pou rapò imèsyon T65 yo te detèmine pa valè PV a (Tablo S13). Jan yo montre nan Tablo S13, valè PV SBA-15 diminye apre imèsyon ak pwodwi brit T65 la. Sa a te montre ke materyèl T65 yo te benyen byen andedan patikil yo silica mesoporous.

Pou detèmine si te gen T65 andedan patikil la, HPLC te envestige T65 tèt li (Figi S5). Jan yo montre nan done yo, te gen de pik espesifik (andedan bwat wouj la) ki te toujou vizib nan ka a nan ekstrè kilti T65 yo, menm si pakèt la preparasyon T65 te chanje. De pik sa yo te gen tan retansyon 10 min ak 12 min nan 230 nm. Yo te envestige echantiyon filtraj la nan HPLC pou detèmine si T65 te prezan andedan SBA entegre -15. Jan yo montre nan Figi S6, de pik espesifik yo te obsève tou pre 10 min ak 12 min. Anplis de sa, yo te obsève yon ti pik tou pre 18 min nan tan retansyon, ki trè enpòtan pou trase pwodwi T65 yo ki tan-lage.

Figi 12 reprezante liberasyon kontwole tès dirab T65 entegre SBA-15 soti nan 0 jiska 3 jou. Pik espesifik T65 la te vizib tou pre 15 ak 20 min soti nan jou 0 a 3. Pwodwi brut T65 yo te byen benyen epi yo te sekrete piti piti sou tan. Anplis de sa, materyèl silica mesoporous (SBA-15) yo pwopoze nan etid sa a te kapab pote sibstans ki sou fizyolojik aktif nan pwodwi brit T65 la epi konfime ke sibstans ki sou fizyolojik aktif yo te lage nan yon fason ki lage soutni apre chaje. Anplis, materyèl silica mesoporous pwopoze nan etid sa a ta ka, nan lavni an, dwe itilize kòm yon bon konpayi asirans pou enpreye divès kalite materyèl fonksyonèl ak kòm yon materyèl soutni-lage pa sipòte divès kalite sibstans ki sou fizyolojik aktif.

4. Konklizyon

Materyèl segondè byoaktif ki soti nan mikwo-òganis tè yo enterese nan aplikasyon kosmetik akòz antimikwòb, antioksidan, anti-rid, blanchiman po, ak aktivite antimikwòb yo. Etid sa a dekri aktivite roman ekstrè acetate etil nan kilti souch T65 pou engredyan fonksyonèl nan fòmilasyon kosmetik. Pwodwi brut T65 la pa t toksik pou diferan liy selil yo, tankou HaCaT (keratinosit imen), RAW264.7 (selil makrofaj), CCD-986Sk (selil fibroblast po imen), ak selil melanom B16F1 ak B16F10. . Anplis de sa, pwodwi brut T65 la te montre regilasyon nan sentèz kolagen an tip I, ki trè enpòtan pou diminye ondilasyon sou po a. Anplis de sa, pwodwi brit T65 a ase anpeche bakteri patojèn imen yo tankou B.subtilis, E. coli, P. acnes, S. aureus, ak S. epidermidis, ki ka ede anpeche gate pwodwi kosmetik la ak kolonizasyon bakteri patojèn. fòme akne vulgaris sou po moun. Anplis, pwodwi brut T65 inibit tirosinaz djondjon pou efè blanchiman ak elastaz pankreyas pòsin pou aktivite anti-aje, ak anpeche NO ak scavenged radikal DPPH pou aktivite antioksidan. Sentèz patikil silica mesoporous, SBA-15, te pwouve ke pwodwi brit T65 a ta efikas nan fòmilasyon kosmetik ak pwopriyete efikas lage kontwole. Finalman, aplikasyon an vivo fòmil pwodui kosmetik ansanm ak pwodwi brut T65 sou figi volontè yo te pwouve efè blanchiman ak anti-rid nan T65. Sepandan, chimi diferan konpoze bioaktif ak mekanis molekilè ki gen rapò ak aktivite anpèchman anzim diferan ak aktivite anpèchman patojèn yo rete yo dwe dekouvri. An konklizyon, etid nou an fòtman sipòte lide ke resous bakteri yo ka ajoute nan pwodwi kosmetik aplike lokalman pou efè blanchiman, fòmasyon anti-rid, efè anti-oksidan, ak aktivite antimikwòb.

cistanche pharma special

Pou plis detay, tanpri klike isit la.