GSK3 anpèchman pa fosforilasyon nan Ser389 kontwole neroenflamasyon

Résumé: Anpèchman Glycogen Synthase Kinase 3 (GSK3) pa fosforilasyon Ser9 afekte anpil pwosesis fizyolojik, ki gen ladan repons iminitè a. Sepandan, konsekans GSK3 anpèchman pa fosforilasyon Ser389 altènatif rete mal karakterize. Isit la nou te egzamine neuroinflammation nan sourit GSK3 Ser389 knock-in (KI), nan ki fosforilasyon Ser389 GSK3 gen pwoblèm. Kantite microglia aktive / makrofaj enfiltre, astwosit, ak netrofil enfiltre yo te siyifikativman pi wo nan bèt sa yo konpare ak tokay C57BL / 6J sovaj (WT), ki sijere ke echèk la nan inaktive GSK3 pa fosforilasyon Ser389 rezilta nan soutni ba-klas. neroenflamasyon. Anplis, aktivasyon selil glial ak enfiltrasyon nan sèvo nan selil iminitè an repons a lipopolysaccharide (LPS) echwe nan sourit GSK3 Ser389 KI. Efè sa yo te espesifik nan sèvo, kòm iminite periferik pa te afekte menm jan an. Anplis de sa, fosforilasyon nan konplèks IkB kinaz (IKK) an repons a LPS echwe nan sourit GSK3 Ser389 KI, pandan y ap fosforilasyon STAT3 te konplètman konsève, sijere ke chemen an siyal NF-κB espesyalman afekte pa chemen regilasyon GSK3 sa a. An jeneral, rezilta nou yo endike ke inaktivasyon GSK3 pa fosforilasyon Ser389 kontwole repons enflamatwa nan sèvo, ogmante bezwen pou evalye wòl li nan pwogresyon nan patoloji neroenflamatwa.

cistanche tubulosa - Anti-enflamatwa

Mo kle: neroenflamasyon; mikroglia; astwosit; netrofil; NF-κB siyal; sikometri koule

Kisa zèb cistanche fè—Anti-enflamatwa

Klike la a pou w wè pwodwi Cistanche

【Mande pou plis】Imèl:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Entwodiksyon

Glycogen Synthase Kinase 3 (GSK3) se yon serine-threonine kinase ak spesifik laj. GSK3 kontwole pwosesis tankou enflamasyon, kwasans selil, diferansyasyon selil, ak metabolis enèji epi li enplike nan maladi ki gen rapò ak laj tankou dyabèt, maladi alzayme ak kansè [1]. Tou de izoform GSK3, GSK3 ak GSK3, yo eksprime omniprésente, men fonksyon yo pa konplètman sipèpoze [2]. GSK3 se konstititifman aktif, byenke aktivite li yo ka anpeche pa sechestrasyon nan konplèks sitosol ak fosforilasyon nan résidus Ser9 ak Ser389 [3]. Akt-induced fosforilasyon nan GSK3 nan Ser9 se yon chemen regilasyon GSK3 prezan nan pifò kalite selil, epi li se chemen an default yo limite deklanchman GSK3 ak anpeche lanmò selil. Kontrèman, nou te jwenn ke fosforilasyon Ser389 p38 MAPK-induit restriksyon nan tisi espesifik tankou sèvo, tim, ak larat [4] e ke ekspresyon nan sèvo fosfo-Ser389 GSK3 kontwole devlopman [5]. Fosforilasyon GSK3 pa Ser389 deklanche sitou pa repons ADN doub-strand kase epi li enpòtan pou pèmèt reparasyon ADN [6,7]. Kidonk, pandan fosforilasyon sou Ser9 se chemen prensipal pou inaktivasyon GSK3 sitoplasmik, fosforilasyon Ser389 yo itilize pou inaktive pisin nikleyè GSK3 pou ogmante siviv pandan reparasyon ADN DSB [8]. Si w pa inaktive GSK3 jiska fosforilasyon Ser389 an repons a DSB, sa lakòz yon ogmantasyon nan lanmò selil pa necroptosis [6,7]. Sa a trè enpòtan paske kalite nèkroptotik lanmò a se plis enflamatwa epi yo te jwenn nan maladi enflamatwa [9]. Sepandan, kontrèman ak fosforilasyon Ser9, enplikasyon fosforilasyon GSK3 sou Ser389 rete mal karakterize. Yon kantite etid yo te sipòte asosyasyon ki genyen ant GSK3 ak enflamasyon. Kidonk, deklanchman GSK3 pa stimuli enflamatwa tankou estrès, enfeksyon, oswa chòk ankouraje pwodiksyon cytokin pro-enflamatwa tankou IL-6, IL{-1, ak IFN, pandan y ap GSK3 anpèchman siprime sentèz la nan medyatè pro-enflamatwa ak ogmante pwodiksyon IL-10 pa selil iminitè [10]. GSK3 ka aktive pa lipopolysaccharide (LPS), youn nan prensipal endotoxins imunostimulatwa bakteri gram-negatif [11,12]. Lè yo fin mare LPS bakteri ak reseptè Toll-like (TLRs), GSK3 medyatè liberasyon cytokines enflamatwa nan selil sistèm iminitè natirèl la [13]. Anplis, li te rapòte ke administrasyon an nan inibitè GSK3 nan sourit trete ak yon dòz letal nan LPS siyifikativman ogmante siviv bèt [14]. Malgre efè pro-enflamatwa sa yo ki asosye ak GSK3, efè anti-enflamatwa yo te dokimante tou [15,16]. Kidonk, règleman GSK3 enpòtan pou kenbe balans ant sitokin pro- ak anti-enflamatwa apre aktivasyon TLR [17]. Faktè nikleyè kB (NF-kB) medyatè pwodiksyon cytokin pro-enflamatwa epi li se youn nan faktè prensipal transkripsyon aktive pa TLR yo. Plizyè otè konfime ke GSK3 kapab aktive siyal NF-kB atravè fosforilasyon konplèks IkB kinaz (IKK), ki fosforil IkB epi degaje NF-kB aktif. Yon lòt faktè transkripsyon fosforile pa GSK3 se yon transducer siyal ak aktivatè nan transcription -3 (STAT3), ki medyatè neroenflamasyon nan yon kontèks chòk septik [18]. Fosforilasyon STAT3 pa GSK3 rezilta nan translokasyon nikleyè ak aktivasyon. Anplis de sa, GSK3 inibit aktivite anti-enflamatwa CREB ak AP -1, sa ki anplifye ekspresyon sitokin proenflamatwa [10,19]. Selil Microglia yo se macrophages rezidan nan CNS la. Ansanm ak lekosit enfiltre, aktivasyon microglia jwe yon wòl enpòtan nan neroenflamasyon. Astwosit yo tou selil glial ak fonksyon neroiminitè yo menm jan yo kwaze ak microglia, leukocytes, ak selil endothelial, kidonk modulasyon tou de repons iminitè natirèl ak adaptasyon [20]. Aktivasyon microglia ak astwosit an repons a stimuli enflamatwa (glioz) karakterize pa gwo chanjman selilè ki gen ladan pwopagasyon, ipètrofi, ak liberasyon sitokin [21]. GSK3 te patisipe nan devlopman glioz an repons a LPS oswa pa ekspresyon GSK3 neral [22]. Genyen tou prèv ki montre reyaktivite glial ak neroenflamasyon pwovoke pa GSK3 ka medyatè pa aktivasyon nan chemen an NF-kB nan sèvo a [19,23]. Kontrèman, inaktivasyon GSK3 diminye reyaksyon glial, mete restriksyon sou repons nero-enflamatwa, ak ogmante aktivite CREB anti-enflamatwa nan selil neral [24]. Kontinwe, li te sijere ke GSK3 jwe yon wòl fondamantal nan pwogresyon nan maladi neroenflamatwa, tankou maladi alzayme a ak paralezi miltip [25]. Fosforilasyon se yon mekanis regilasyon nan aktivite GSK3 ak gwo enplikasyon pou kontwòl repons iminitè a. Se konsa, GSK3 anpèchman pa fosforilasyon klasik Ser9 upregulates pwodiksyon an nan medyatè anti-enflamatwa ak downregulates liberasyon an nan sitokin pro-enflamatwa [26], byenke li se tou patisipe nan rezolisyon an nan enflamasyon nan yon modèl nan kolit eksperimantal pwovoke pa trinitrobenzene sulfonic asid. [27]. Nan sèvo a, anpèchman defo nan GSK3 pa fosforilasyon Ser9 te gen rapò ak neropatoloji enflamatwa tankou maladi Parkinson la [28] ak eskizofreni [29]. Kontrèman, malgre nivo segondè yo nan fosfo-Ser389 GSK3 yo te jwenn nan sèvo a [4], li rete enkoni si chemen sa a pou inaktivasyon nan GSK3 jwe yon wòl nan akor neroenflamasyon. Isit la, nou mennen ankèt sou wòl posib nan inaktivasyon GSK3 fosforilasyon Ser389 nan neroenflamasyon lè l sèvi avèk sourit GSK3 KI nan ki GSK3 Ser389 te ranplase pa Ala pou anpeche fosforilasyon C-tèminal GSK3 [7,8]. Rezilta nou yo revele ke echèk nan GSK3 inaktif pa fosforilasyon nan Ser389 nan kondisyon fizyolojik mennen nan neuroinflammation kwonik ba-klas osi byen ke mank nan repons a stimuli enflamatwa tankou LPS. Enflamasyon kwonik sa a sanble espesifik nan sèvo a depi sistèm iminitè periferik la lajman afekte. Nou montre tou ke absans fosfo-Ser389 GSK3 nan sèvo sourit GSK3 KI kontwole siyal NF-kB, ki se yon evènman santral nan kontwòl neroenflamasyon. Se poutèt sa, rezilta nou yo bay sipò pou patisipasyon nan inaktivasyon GSK3 pa fosforilasyon Ser389 nan neropatoloji enflamatwa.

2. Rezilta

2.1. Si w pa inaktive GSK3 pa fosforilasyon Ser389 mennen nan Ogmante neroenflamasyon Bazal.

Inaktivasyon GSK3 pa fosforilasyon sou Ser9 te asosye ak yon etap anti-enflamatwa nan sèvo a [30]. Malgre ke inaktivasyon GSK3 pa fosforilasyon sou Ser389 enpòtan pou diminye lanmò newòn ki te koze pa kraze ADN doub-seksyon nan sèvo a, pa gen okenn etid ki te envestige si wi ou non chemen sa a ta ka kontwole tou repons neroenflamatwa. Se poutèt sa, nou te itilize sourit GSK3 Ser389 KI ki te dekri deja, kote Ser389 ranplase pa Ala, pou anpeche fosforilasyon Ser389. Nou egzamine selil iminitè rezidan yo ak enfiltre yo nan tout sèvo a (eksepte serebelo ak anpoul olfactif) nan sourit WT ak GSK3 Ser389 KI pa mekanik disosyasyon tisi a ak gradyan Percoll, apre yon pwotokòl te deja optimize pou jwenn yon melanj balanse nan selil rezidan ak enfiltre. nan sèvo a, ki gen ladan mikroglia / makrofaj, astwosit, netrofil enfiltre ak lenfosit [31]. Lè sa a, selil yo te analize pa sikometri koule lè l sèvi avèk makè estanda (Figi S1 nan Materyèl siplemantè) [31-33]. Aktive ak repo microglia / makrofaj yo te idantifye kòm CD11b + CD45high ak CD11b + CD45low, respektivman, tandiske popilasyon lenfositik la te make kòm CD 45+CD11b- [32,34]. Yo te karakterize netrofil kòm selil CD45+Ly6G+; ak astwosit yo te defini nan popilasyon CD45− a pa ekspresyon antijèn sifas selil -2 (ACSA-2). Yo itilize makè sa a pou deteksyon astrosit ki devlope ak granmoun [35]. Yo te obsève regilasyon ACSA -2 nan astwosit reyaktif ki asosye ak kondisyon enflamatwa, tankou demyelinasyon otoiminitè [36]. Nou te deja jwenn ke kantite ACSA-2+ astwosit nan sèvo sourit yo ogmante apre tretman LPS, sa ki endike plis nivo ekspresyon ACSA-2 korelasyon ak deklanchman astrosit an repons a stimuli enflamatwa [31]. Malgre ke ACSA-2 kapab eksprime tou nan yon ti sous-popilasyon mikroglia ak makrofaj [35], selil sa yo nan popilasyon CD45+ la. Flow cytometry analiz de selil nan sèvo izole nan sourit anba kondisyon fizyolojik revele yon ogmantasyon make nan fraksyon nan mikroglia aktive / makrofaj nan sourit GSK3 Ser389 KI konpare ak sourit WT (Figi 1a). Kontrèman, pousantaj microglia repoze diminye nan sèvo sourit GSK3 Ser389 KI (Figi 1b). Anplis de sa, te gen yon ogmantasyon make nan prezans ACSA -2+ astwosit (sa vle di, astrosit aktive) nan sourit GSK3 Ser389 KI (Figi 1c). Konsènan enfiltrasyon selil iminitè a nan sèvo a, te gen yon akimilasyon klè nan netrofil nan sèvo a nan sourit GSK3 Ser389 KI parapò ak sourit WT (Figi 1d), plis demontre prezans nan repons enflamatwa kontinyèl nan sèvo a nan sourit GSK3 Ser389 KI anba fizyolojik. kondisyon. Sepandan, frekans CD45+CD11b-leukocytes (predominasyon selil lenfositik) nan sèvo a pa te afekte nan sourit GSK3 Ser389 KI (Figi 1e). Ansanm, rezilta sa yo montre ke echèk pou anpeche GSK3 pa fosforilasyon nan Ser389 mennen nan yon repons enflamatwa natirèl kwonik nan sèvo a ki lakòz reyaksyon ant mikroglia ak astwosit.

Figi 1. Inaktivasyon GSK3 pa fosforilasyon Ser389 afekte popilasyon selil nan sèvo ki enplike nan neroenflamasyon. Sèvo nan tou de sourit WT ak GSK3 Ser389 KI yo te retire epi trete pou analiz sikometri koule nan (a) CD11b++CD45high aktive microglia/macrophages, (b) CD11b++CD45low repoze microglia, (c) ACSA -2+ astrosit, (d) Ly6G+ netrofil, ak (e) CD11b− lenfosit. Istogram yo reprezante nimewo selil, ki eksprime kòm pousantaj selil CD45- (astrosit) oswa selil CD45+ (tout lòt popilasyon). Done yo montre kòm mwayen ± SEM (n=7–9). Elèv t-tès te aplike pou konpare jenotip. *, p < {{20}}.05; **, p <0.01. WT, kalite sovaj; KI, ak GSK3 Ser389 knockin.

2.2. Mank efè fosforilasyon GSK3 nan Ser389 sou selil larat

Pou eksplore si chanjman nan eta enflamatwa detekte nan sourit GSK3 Ser389 KI restriksyon nan sèvo a oswa si efè a se sistemik tou, nou fè analiz sikometri koule pou popilasyon selil yo diferan nan larat la. Netrofil yo te idantifye kòm selil Ly6G +. Ekspresyon Ly6G te trè varyab paske li depann de etap spirasyon selil yo, jan yo montre deja [37]. Anplis de sa, selil myeloid monositik yo te make kòm selil Ly6G–CD38+CD11b+. Monosit / makrofaj sa yo te prezante de popilasyon klèman diferan ki baze sou nivo ekspresyon CD38, jan yo te rapòte deja [38]. Selil CD8+, selil CD4+, ak selil B220+ (selil B) yo te evalye tou (Figi S2 nan Materyèl siplemantè).

Figi 2. Flow cytometry analiz montre popilasyon selil larat ki sanble nan sourit WT ak GSK3 Ser389 KI. Apre disosyasyon selil larat yo, yo te itilize sitometri koule pou evalye kantite (a) Ly6G+ netrofil, (b) CD38+CD11b+ monosit/makrofaj, (c) CD4+ selil, (d) Selil CD8+, ak (e) selil B220+. Istogram yo montre nimewo selil yo eksprime kòm yon pousantaj nan selil total yo. Done yo koresponn ak mwayen ± SEM (n=5–7). Elèv t-tès te aplike pou konpare jenotip. WT, kalite sovaj; KI, GSK3 Ser389 knockin.

2.3. LPS pa kapab ogmante neroenflamasyon nan sourit GSK3 Ser389 KI

Apre sa, nou te envestige si aboli fosforilasyon Ser389, san konte sa ki lakòz enflamasyon tonik fondamantal, ta ka afekte tou repons enflamatwa deklanche pa LPS. Sourit WT ak GSK3 Ser389 KI yo te enjekte intraperitoneally ak yon dòz subletal (0.5 mg / kg) nan lipopolysaccharide bakteri (LPS). Repons enflamatwa nan sèvo a te egzamine twa jou apre depi tretman sa yo te deja montre yo pwodui enflamasyon ki ba-klas nan sèvo sourit [39,40]. Repons LPS sa a tou sanble ak eta enflamatwa kwonik yo obsève nan plizyè maladi newolojik, tankou depresyon, enkyetid, ak maladi Parkinson la [41,42]. Kòm espere, LPS pwovoke reyaktivite glial nan sourit WT, jan sa detèmine pa ogmantasyon nan frekans aktive microglia / makrofaj (Figi 3a) ak diminye frekans nan repoze microglia (Figi 3b). Kontrèman, LPS echwe pou pou deklanche okenn repons enflamatwa plis nan sourit GSK3 Ser389 KI (Figi 3a, b). Tablo 1 dirèkteman konpare grandè repons LPS ant de jenotip yo. Anplis de sa, tretman LPS sa a te ogmante pousantaj ACSA -2+ astwosit nan sourit WT, jan yo te deja rapòte [31], men se pa nan sourit GSK3 Ser389 KI (Figi 3c). Konsènan enfiltrasyon nan sèvo nan selil iminitè, LPS te lakòz yon akimilasyon netrofil nan sourit WT men pa te gen okenn efè nan sourit GSK3 Ser389 KI (Figi 3d). Finalman, administrasyon LPS pa t ankouraje akimilasyon lenfosit nan sèvo a nan swa sourit WT oswa GSK3 Ser389 KI (Figi 3e). Ansanm, obsèvasyon sa yo endike ke inaktivasyon GSK3 pa fosforilasyon Ser389 esansyèl pou anpeche yon eta enflamatwa tonik nan sèvo a men kontribye nan enflamasyon egi nan sèvo an repons a stimuli tankou LPS.

Tablo 1. Diferans nan efè LPS ant sourit WT ak GSK3 Ser389 KI. Valè yo reprezante nimewo selil apre tretman LPS nan chak jenotip epi yo eksprime kòm yon ogmantasyon parapò ak kontwòl machin yo trete (mwayèn ± SEM). Asteris yo endike diferans estatistik enpòtan ant efè LPS nan bèt WT ak GSK3 Ser389 KI. WT, kalite sovaj; KI, GSK3 Ser389 knockin; LPS, lipopolisakarid. *, p < 0.05; **, p <0.01.

Figi 3. Selil neroiminitè ki soti nan sourit GSK3 Ser389 KI pa reponn a LPS. Sourit adilt WT ak GSK3 Ser389 KI yo te enjekte intraperitoneally ak LPS (0.5 mg / kg). Twa jou apre, popilasyon nan sèvo (a) CD11b++CD45wo aktive microglia/macrophages, (b) CD11b + CD45low repoze microglia, (c) ACSA-2+ astrosit, (d) Ly6G + netrofil, ak ( e) Lenfosit CD11b- yo te evalye pa sikometri koule. Istogram yo montre efè LPS sou nimewo selil yo nan tou de jenotip yo. Done yo prezante kòm pousantaj selil CD45- (astrosit) oswa selil CD45+ (tout lòt popilasyon), ak valè yo koresponn ak mwayen ± SEM (n=7-9). Elèv t-tès te aplike pou evalye siyifikasyon chanjman LPS pwovoke nan chak jenotip. ** p < 0.01. WT, kalite sovaj; KI, GSK3 Ser389 knockin; LPS, lipopolisakarid.

Apre sa, nou egzamine enfliyans posib nan fosforilasyon ipokanp GSK3 Ser389 sou deklanchman glial fondamantal ak repons glial la nan stimuli enflamatwa. Pou objektif sa a, yo te evalye etikèt Iba-1 pa mikwoskopi nan gyrus dante (Figi 4a). Premyèman, yo te evalye sourit WT. Mikrograf revele aktivasyon glial fondamantal ki ba, men yon ogmantasyon solid nan iminoreaktivite glial an repons a piki LPS (0.5 mg / kg, 3 jou) (Figi 4b). Kantite dansite entegre pou Iba-1 imunostaining te montre valè ki te 53% pi wo nan sourit WT apre tretman (Figi 4d). Chanjman sa yo te estatistik enpòtan epi yo konsistan avèk ipèrtrofi selilè enpòtan ki te koze pa LPS nan ipokanp sourit yo te rapòte deja [43,44].

Figi 4. Gliosis an repons a LPS chanje nan sourit GSK3 Ser389 KI. Sourit adilt WT ak GSK3 Ser389 KI yo te enjekte intraperitoneally ak LPS oswa machin (C). Apre 3 jou, sèvo yo te trete pou mikwoskòp fliyoresan. (a) Yon seksyon ipokanp koronèl adapte nan atlas sèvo sourit [45] endike lokalizasyon imaj yo, ki gen ladann gyrus dante a. (b) Seksyon nan sèvo yo te gen imunolabeled pou makroglia / makrofaj Iba -1. Grafik yo montre dansite entegre iminoreaktivite Iba-1, ki se yon mezi reyaksyon glial ki reflete tou de entansite ak ekstansyon tach glial la. (c) Konparezon kontwòl WT ak KI bèt yo. (d) Repons LPS nan chak jenotip sourit. Tout valè yo eksprime ak plis respè pou kontwòl WT trete ak machin (mwayèn ± SEM, n=4-5). Elèv t-tès te aplike. *, p < 0.05. Ba echèl, 100 µm. WT, kalite sovaj; KI, GSK3 Ser389 knockin; C, machin; LPS, lipopolisakarid.

Analiz ipokanp sourit Ser389 KI a te revele diferans ki genyen nan deklanchman microglial fondamantal ki gen rapò ak sourit WT. Kidonk, byenke enspeksyon vizyèl nan mikrografi te montre yon deklanchman glial modere nan bèt mutan (Figi 4b), mezi dansite entegre endike ke ogmantasyon nan iminoreaktivite glial te estatistik enpòtan (Figi 4c). Enteresan, sourit Ser389 KI pa te montre okenn siy deklanchman plis apre tretman LPS (Figi 4b), ak analiz quantitative konfime ke LPS pa t kapab ogmante Iba-1 imunostaining nan ipokanp la (Figi 4d), ki sijere ke aktivasyon selil glial pa LPS gen pwoblèm nan absans fosforilasyon GSK3 Ser389.

benefis sipleman cistanche—Anti-enflamatwa

2.5. Repons iminitè periferik nan LPS pa te afekte nan sourit GSK3 Ser389 KI

Eksperyans anvan nou yo revele konsekans pwofon inaktivasyon GSK3 pa fosforilasyon Ser389 sou repons nan sèvo a LPS. Apre sa, nou te adrese si efè menm jan an prezan nan iminite sistemik. Depi yo konnen LPS lakòz aktivasyon selil iminitè natirèl larat [46], popilasyon selil larat ki soti nan tou de sourit WT ak GSK3 Ser389 KI yo te evalye 3 jou apre piki LPS (0.5 mg/kg). kantite Ly6G+ netrofil (Figi 5a) ak CD38++CD11b{++Ly6G− monosit/makrofaj (Figi 5b) te ogmante anpil nan sourit WT an repons a tretman LPS. Efè LPS sa yo, espere nan sourit WT, yo te obsève tou nan sourit GSK3 Ser389 KI (Figi 5a, b). Pa gen diferans ant jenotip yo te jwenn ni lè popilasyon lenfosit ki soti nan larat yo te analize, kòm pousantaj yo nan selil CD4+ larat (Figi 5c) ak CD8+ selil (Figi 5d) te redwi pa LPS tou nan tou de seksyon sourit (rediksyon an nan sourit mutan te estatistik enpòtan sèlman pou selil CD4+); ak B220+ selil B yo pa te afekte pa LPS poukont genotip (Figi 5e). Obsèvasyon sa yo kontrèman ak efè diferans LPS yo te jwenn nan sèvo tou de jenotip yo. Kidonk, pandan ke sourit GSK3 Ser389 KI yo rezistan a neuroinflammation deklanche pa LPS, sourit sa yo pa sistemik desensibilize nan LPS. Se poutèt sa, efè fosforilasyon GSK3 Ser389 sanble yo selektif nan sèvo a.

Figi 5. Menm jan repons iminitè periferik nan LPS nan GSK3 Ser389 KI ak sourit WT. Sourit granmoun WT ak GSK3 Ser389 KI yo te enjekte ip ak LPS. Apre 3 jou, yo te ekstrè ak trete selil larat yo pou evalye, pa sikometri koule, kantite (a) Ly6G+ netrofil, (b) CD38+CD11b+ monosit/makrofaj, (c) CD8+, (d) CD4+, ak (e) B220+ selil yo. Istogram yo montre efè LPS sou nimewo selilè yo, tankou sourit WT ak KI. Elèv t-tès te aplike pou evalye siyifikasyon chanjman LPS pwovoke nan chak jenotip. Yo montre mwayen ± SEM (n=5–7). *, p < 0.05; **, p <0.01. WT, kalite sovaj; KI, GSK3 Ser389 knockin; ip, intraperitoneal; C, machin; LPS, lipopolisakarid.

2.6. Aktivasyon chemen NF-κB ki te pwovoke LPS nan ipokanp la aboli nan sourit GSK3 Ser389 KI

NF-κB se yon faktè transcriptional esansyèl pou LPS pwovoke enflamasyon [47]. Anplis de sa, NF-κB yo te montre yo dwe reglemante pa GSK3 nan sèvo a [2,19,23]. Se poutèt sa, nou te egzamine aktivasyon NF-κB nan sèvo a an repons a LPS pa analiz fosforilasyon IKK, yon etap byen bonè nan chemen aktivasyon NF-kB. Sourit WT ak GSK3 Ser389 KI yo te administre ip ak LPS (0.5 mg / kg) epi apre 4 èdtan, yo te rekòlte ipokanp la. Ekstrè selil antye yo te itilize pou egzamine fosfo-IKK / ak total IKK / pa Western blotting. Kòm espere, LPS ogmante fosforilasyon IKK nan ipokanp la nan sourit WT (Figi 6a, b). Kontrèman, LPS echwe pou pou pwovoke fosforilasyon IKK nan sourit GSK3 Ser389 KI (Figi 6a, b). Aktivasyon STAT3 te asosye tou ak enflamasyon LPS-induit [48]. Se poutèt sa, nou te egzamine fosforilasyon STAT3 pa analiz Western blot. Kontrèman ak aktivasyon NF-kB, fosforilasyon STAT3 te pwovoke fòtman nan ipokanp tou de sourit WT ak GSK3 Ser389 KI an repons a LPS (Figi 6a, c). Kidonk, anpeche inaktivasyon GSK3 pa fosforilasyon Ser389 seleksyonman afekte siyal NF-κB, ki konsistan avèk yon wòl pou GSK3 kòm yon regilatè en nan chemen NF-κB nan ipokanp la. Rezilta sa yo sijere ke chemen GSK3 enfliyanse neuroinflammation pa kontwole medyatè enflamatwa kle, tankou NF-κB.

Figi 6. Si w pa inaktive GSK3 pa fosforilasyon Ser389 yon fason diferan afekte siyal NF-κB ak STAT3 nan sourit ki trete LPS. Aktivasyon nan chemen NF-κB ak STAT3 yo te egzamine nan lisat selil antye ki soti nan ipokanp la 4 èdtan apre piki ip nan LPS ({{10}}.5 mg / kg) oswa machin (C) nan tou de. Sourit WT ak GSK3 Ser389 KI. Blots ilistre analiz Western blot fosfò-IKK / , total IKK / , fosfò-STAT3, ak total STAT3. (a) deteksyon -tubulin te enkli kòm yon kontwòl loading. Grafik ki asosye yo koresponn ak (b) fosfo-IKK / /IKK / ak (c) rapò fosfo-STAT3/STAT3, yo jwenn nan analiz densitometrik bann Western blot. Elèv t-tès te aplike pou konpare kontwòl ki pa trete (C) ak bèt trete LPS nan chak jenotip (mwayèn ± SEM, n=5-6). *, p < 0.05; ***, p <0.001. Done yo reprezante kat eksperyans endepandan pou pIKK/IKK ak twa eksperyans endepandan pou pSTAT3/STAT3. WT, kalite sovaj; KI, GSK3 Ser389 knockin; ip, intraperitoneal; C, machin; LPS, lipopolisakarid.

3. Diskisyon

Nan sèvo a, dysregulation nan aktivite GSK3 lye ak neropatoloji miltip nan ki enflamasyon kwonik se yon karakteristik komen [25]. Depi yon gwo literati sipòte ke anpèchman GSK3 pa fosforilasyon Ser9 ogmante medyatè anti-enflamatwa ak downregulates pro-enflamatwa cytokines [23,28,30], mekanis la souvan pwopoze pou eksplike defektye inaktivasyon GSK3 nan patoloji nero-enflamatwa se la. echèk nan fosforilasyon Ser9 [3]. Sepandan, yo te detekte nivo fosfo-Ser389 GSK3 trè wo nan sèvo [4], sa ki sijere ke chemen altènatif sa a pou inaktivasyon GSK3 ka jwe tou yon wòl enpòtan nan sèvo a. Eksperyans yo prezante isit la dekouvri enplikasyon fosforilasyon GSK3 Ser389 nan neroenflamasyon, ki ajoute nan prèv anvan yo sijere patisipasyon nan chemen sa a nan reparasyon ADN nan sèvo ak siviv newòn [6,7]. Youn nan konklizyon kle yo nan travay prezan an se ke sèvo a nan sourit GSK3 Ser389 KI montre gliyoz soutni ak ogmante enfiltrasyon selil iminitè, ki se ki konsistan avèk nosyon an ke anpeche inaktivasyon GSK3 nan fosforilasyon Ser389 mennen nan neroenflamasyon. Done ki soti nan eksperyans sikometri koule nou yo montre klèman yon ogmantasyon nero-enflamasyon nan bèt sa yo, kòm kantite aktive microglia/macrophages, ACSA 2+ astwosit, ak netrofil enfiltre nan sèvo sourit Ser389 GSK3 KI yo te siyifikativman pi wo. Sepandan, malgre mikwo-astrogliosis yo te obsève klèman pa sikometri koule, analiz de mikwograf ipokanp ki soti nan seksyon nan sèvo sourit Ser389 GSK3 KI revele ke ipètrofi microglia / makrofaj te sèlman twò grav. Rezilta menm jan an te obsève lè lòt zòn nan sèvo yo te analize pou evalye limit ak entansite gliosis (pa montre). Se poutèt sa, nou konkli ke, nan absans la nan stimuli pro-enflamatwa, mank nan fosforilasyon GSK3 Ser389 mennen nan yon degre nan neuroinflammation ki ta dwe klase kòm ba-klas. Anpil etid sipòte asosyasyon ki genyen ant ipèaktivite GSK3 ak neurodegeneration nan maladi newolojik [25]. Nan kontèks sa a, repons enflamatwa nou te obsève nan sourit Ser389 GSK3 KI ta ka konsekans neurodegeneration, kòm etid anvan yo te detekte lanmò newòn nan cortical a ak ipokanp bèt sa yo [6]. Sa a se an akò ak obsèvasyon ke domaj ADN inaktive GSK3 nan fosforilasyon Ser389 kòm yon mekanis pou anpeche lanmò selil ak ankouraje reparasyon DSB [7,8]. An konsekans, sèvo sourit KI, kote fosforilasyon Ser389 anpeche, pa pwoteje kont lanmò newòn DSB-induit. Lyen ki genyen ant ekspresyon fosfò-Ser389 GSK3 ak siviv selil yo te premye pwopoze nan lenfosit, kòm yon mekanis ki enplike nan repons iminitè adaptasyon an. Kidonk, yo te jwenn absans fosforilasyon GSK3 Ser389 nan sourit KI yo pwovoke necroptosis nan selil B yo pandan spirasyon an reta li yo, ki se yon kalite lanmò selil ki trè enflamatwa ki gen rapò ak plizyè patoloji [9]. Li se tou enteresan sonje ke pa sèlman fosforilasyon Ser389, men tou fosforilasyon Ser9 ka deklanche pou inaktive GSK3 an repons a domaj ADN. Sepandan, sourit Ser389 GSK3 KI prezante yon fenotip neurodegenerative [6] ki pa prezan nan sourit Ser9 GSK3 KI [49,50], ki endike ke fosforilasyon Ser389 jwe wòl espesifik nan kontwòl aktivite GSK3 e ke gen senaryo kote fosforilasyon Ser9 pa ka konpanse. pou pèt fosforilasyon Ser389. An konsekans, lyen curieux ant Ser389 GSK3 déréglementation, neuroinflammation, ak neurodegeneration revele isit la bezwen plis eksplore pou klarifye si chanje fosforilasyon GSK3 nan Ser389 ka yon faktè kle nan neropatoloji nan ki enflamasyon kwonik se diferan, tankou maladi alzayme a. Anplis de sa, deklanchman modere men ki pèsistan nan selil neroiminitè yo obsève nan sourit GSK3 Ser389 KI se ki konsistan avèk ipotèz la ke echèk nan fosforilasyon Ser389 ka asosye ak iminosenescence. Sa a se yon pwosesis ki gen rapò ak laj karakterize pa yon bès nan fonksyon iminitè ansanm ak yon ogmantasyon nan ekspresyon nan medyatè proinflammatory; ki mennen nan kwonik, enflamasyon ki ba-klas [1,51]. Plizyè otè te lonje dwèt sou patisipasyon GSK3 déréglementation nan enflamasyon ki gen rapò ak laj [1,52]. Li te pwopoze tou ke fonksyon an nòmal nan microglia obsève nan kontèks la nan iminosenescence nan sèvo ka evantyèlman lakòz neurodegeneration [53]. Kidonk, iminosenesans akselere nan sourit Ser389 GSK3 KI ta ka kontribye nan pèt newòn yo te rapòte deja nan bèt sa yo [6]. LPS te itilize anpil pou pwovoke enflamasyon nan tou de modèl "in vivo" ak "in vitro". Sepandan, gen prèv ki montre dòz la nan LPS administre lajman detèmine ki kalite repons enflamatwa pwovoke [54-56]. Gwo dòz LPS pwodui repons septik ki sanble ak chok; pandan y ap dòz modere LPS deklanche yon enflamasyon ki pèsistan ki ba-klas pi pre sa yo obsève nan anpil maladi kwonik [42]. Nan kontèks sa a, li enpòtan pou mete aksan sou dòz LPS yo chwazi pou eksperyans nou yo (0.5 mg/kg, ip) modere e li lwen LD50 ki rapòte pou LPS nan sourit (10-25 mg/kg) [57,58]. ]. An akò ak rapò anvan yo [40,59], nou te jwenn ke tankou yon dòz LPS pa letal epi li ase pou ogmante glioz ak enfiltrasyon nan sèvo nan netrofil nan bèt WT, pandan y ap enfiltrasyon lenfosit pa afekte. Remakab, repons LPS modere (men siyifikatif) sa yo te aboli nan sèvo sourit KI ak pwoblèm inaktivasyon GSK3 pa fosforilasyon Ser389. Dapre obsèvasyon sa a, pwolonje GSK3 hyperactivation nan sèvo a ka evantyèlman downregulate sansiblite nan joure pro-enflamatwa. Li enpòtan pou remake ke repons ki defo nan LPS nan sourit mutan yo konpatib ak mekanis imunotolerans oswa rezistans, yon pwosesis komen nan CNS ki vize a diminye deklanchman selil glial ak limite domaj nan sèvo ki soti nan enflamasyon twòp [60,61]. An akò ak lide sa a, yon etid anvan te montre ke aktivasyon GSK3 nan sourit ka pwovoke iminotolerans ak siprime repons LPS [62].

Benefis cistanche tubulosa-ranfòse sistèm iminitè

Li enteresan tou pou konsidere ke efè sèvo ki dekri nan etid sa a montre espesifik. Kidonk, kontrèman ak sèvo a, pifò popilasyon selil larat yo evalye nan bèt WT ak Ser389 GSK3 KI te prezante menm pwofil la nan kondisyon san stimulation, osi byen ke yon repons ki sanble ak LPS. Sa a sijere ke chemen an inaktivasyon GSK3 depann sou fosforilasyon Ser389 jwe wòl espesifik nan règleman an nan neroenflamasyon. An akò ak ipotèz sa a, selil nan sèvo yo montre yon ekspresyon segondè nan fosfo-Ser389 GSK3 konpare ak lòt tisi, epi ekspresyon sa a se byen reglemante pandan devlopman nan sèvo [5]. Finalman, dapre rezilta nou yo, règleman GSK3 pa fosforilasyon nan Ser389 espesyalman medyatè pa chemen siyal NF-kB la, depi deklanchman STAT3 pa te afekte nan Ser389 GSK3 KI. Anpil medyatè enflamatwa enflamatwa yo reglemante pa aktivasyon NF-kB, ki gen ladan sitokin, reseptè, faktè transcription, ak anzim. Idantifye kilès nan sib NF-kB sa yo ki enfliyanse pa fosforilasyon Ser389 GSK3 se pi lwen pase sijè ki abòde lan travay nou an, men li pral yon objektif enteresan pou etid nan lavni ki vize klarifye mekanis yo nan neroenflamasyon.

4. Materyèl ak Metòd

4.1. Bèt

Sourit C57BL/6J Wild-type (WT) yo te achte nan men Jackson Laboratories. C57BL / 6 GSK3 Ser389 KI sourit, nan ki rezidi Ser389 nan GSK3 te ranplase pa Ala pou anpeche fosforilasyon, yo te pwodwi jan sa dekri deja [8]. Tout sourit yo te loje nan etablisman bèt ki asosye ak Albacete Medical School anba yon 12-sik limyè/fè nwa. Yo te bay manje ak dlo ad libitum. Yo te itilize sourit granmoun kat a sis mwa pou eksperyans yo.

4.2. Administrasyon LPS

Pou pwovoke yon repons enflamatwa, sourit yo te resevwa yon sèl piki intraperitoneal (ip) nan {{0}}.5 mg/kg LPS. Salmonella enterica LPS (serotip typhimurium, L7261 Sigma Aldrich, Madrid, Espay) te fonn nan esteril, endotoxin-gratis 0.9% saline nan 10 mg/mL. Twa jou apre tretman an, sourit yo te elimine, epi sèvo a ak larat yo te retire pou analiz imunohistochimik oswa sikometri koule nan selil glial ak selil iminitè enfiltre yo. Pou analiz Western blotting, bèt yo te euthanized 4 èdtan apre piki ip nan 0.5 mg / kg LPS, kòm LPS te deja rapòte yo upregulate pwoteyin enflamatwa nan sèvo sourit ak rat 2-4 èdtan apre administrasyon ip [63,64].

4.3. Sitometri koule

Pou analiz sikometri koule nan tisi nan sèvo ak selil larat, bèt yo te anestezi ak yon piki ip nan tribromoethanol, ki te rekòmande pou etid tèminal egi. Dòz ki ba nan tribromoethanol yo itilize (200 mg / kg) bay anestezi limyè san efè negatif grav oswa enfliyans sou ekspresyon cytokine enflamatwa [65]. Pwosedi bèt yo te fèt apre verifye absans la nan reflèks.

4.3.1. Disosyasyon tisi nan sèvo ak izolasyon gradyan Percoll nan selil neral

Sourit yo te perfuze intracardially ak 50 mL nan 0.9% NaCl anvan koleksyon tisi yo retire selil sikile nan veso sangen nan sèvo. Apre perfusion, sèvo yo te retire, meninges yo ak choroid plexus yo te ak anpil atansyon separe, serebellum yo ak anpoul olfactif yo te jete. Yo te mete tisi ki rete a nan Solisyon Sèl Balanse Hank frèt, ki se klori kalsyòm ak klori mayezyòm san (HBSS [-]CaCl2/[-]MgCl2: Gibco, Madrid, Espay, 14175). Lè sa a, echantiyon tisi yo te tise byen koupe ak yon bistouri anvan dijesyon. Lè sa a, tisi koupe yo te mete nan tib MACS C (Miltenyi Biotec, Pozuelo de Alarcón, Espay, 130-093-237) ​​nan yon volim total de 5 mL, epi trete ak yon dissociator mekanisyen nan 6 rpm pou 30 min. Disosyasyon anzimatik te fèt dapre pwòp pwotokòl nou an [31] lè l sèvi avèk papain (100 U; Worthington, LK003178) ak dispase II (6 U; Sigma-Aldrich, Madrid, Espay, D4963) nan Earle's Balanced Salt Solution (EBSS [+]CaCl2). /[+]MgSO4; Gibco, Madrid, Espay, 24010). DNAse I (100 U; Sigma-Aldrich, Madrid, Espay, DN25) te ajoute nan solisyon an pou retire larim ADN ki afekte viabilite selil yo yon fason negatif [66]. Anvan yo itilize, papain te aktive pou 30 min nan 37 ◦C nan 5% CO2. Pou sispann dijesyon, echantiyon yo te dilye ak HBSS frèt epi yo mete yo sou glas. Lè sa a, solisyon sa a te pipette 10 fwa lè l sèvi avèk 5 mL pipèt epi filtre nan yon filtre selil 70 µm (BD, 352350). Sispansyon sèl selil ki kapab lakòz yo te santrifuje nan 300 × g pou 10 min nan RT. Yo te itilize yon gradyan 30% PercollTM (GE Healthcare, Madrid, Espay, 17-0891-01) pou retire myelin ak anrichi omojene a nan selil glial solid. Pou rezon sa a, yo te prepare yon solisyon stock nan izotonik Percoll (SIP) (9:1 Percoll nan 10 × HBSS [-]CaCl2/[-]MgCl2; Gibco, 14185), ak granules selil yo te resuspende nan 30% (v/ v) SIP (nan 1× HBSS). Te gradyan 30% Percoll te pote soti nan ajoute 3 mL nan SIP a 7 mL nan 1 × HBSS ki gen sispansyon selil la nan yon tib polypropylène 14 mL. Chak gradyan te santrifuje san yon fren nan 300 × g pou 30 min nan 18 ◦C. Apre santrifujasyon, selil ki soti nan kouch anba a yo te kolekte, lave ak 1 × HBSS, santrifuge pou 10 min nan 300 × g, ak resuspend nan 10 mL nan 1 × tanpon liz globil wouj nan 4 ◦C. Apre lysis, yo te santrifuje sispansyon selilè nan 300 × g pou 10 min, epi finalman grenn selil ki kapab lakòz yo te resuspend nan 50 µL tanpon bloke anvan tach pou sitometri koule.

4.3.2. Disosyasyon selil larat

Yo te mete larat sou yon plat Petri ki gen RPMI 1640 epi yo te koupe an ti moso. Tisi ki te lakòz yo te pase nan yon filtre selil 70 µm (BD, 352350) epi yo te kraze nan yon mouvman sikilè ak tèt striye piston yon sereng. Lè sa a, RPMI 1640 te pase nan filtre a. Tisi dezentegre a te transfere nan tib 50 mL (Sarstedt, Barcelona, ​​Espay, 62.547.254) ak santrifuje nan 100 g pou 10 min. Lè sa a, sipènatant ki gen sispansyon selil la te kolekte epi santrifuje ankò nan 300 g pou 10 min. Yo te retire supernatant ki te lakòz la, epi yo te resuspend pelèt la nan 10 mL saline ki gen tanpon fosfat (PBS) ak 1% FBS pou konte kantite selil ki anba mikwoskòp la, apre sa li te re-santrifije nan 300 g pou 5 min. Se sèlman 500,000 selil pou chak echantiyon yo te itilize. Lè sa a, chak echantiyon yo te resispann nan 50 µL nan tanpon bloke anvan tach pou sitometri koule.

4.3.3. Ekstracellular Flow Cytometry Tach

Tablo 2. Antikò ak reyaktif yo itilize pou analiz sikometri koule.

4.4. Imunohistochimi

Sourit yo te pwofondman anestezi ak entrakadly perfused ak saline {{0}}.9% (w/v). Sèvo yo te kolekte epi apre yo te fikse ak 4% paraformaldehyde pou 24 èdtan. Apre apre fiksasyon yo, yo te kriyopwoteje ak 30% sikwoz epi yo te jele nan -20 ◦C jiskaske yo seksyone. Seksyon tisi yo (20 µm) yo te koupe lè l sèvi avèk yon kriostat (ThermoFisher, Microm™ HM550), dekonjle monte sou glisad Superfrost Plus (ThermoFisher, J1800AMNZ) epi finalman estoke nan -20 ◦C jiskaske tach. Yo te fè tach imunohistochimik nan seksyon tisi jan sa dekri anvan [67]. Solisyon antikò prensipal ak segondè yo te dilye nan 1 × PBS ak 1% BSA. Seksyon yo te enkube ak antikò prensipal anti-lapen Iba-1 (dilusyon 1:500; Wako Chemicals, Barcelona, ​​Espay, 019-19741). Alexa Fluor 488-konjige kabrit anti-lapen IgG (1:2000 dilution; ThermoFisher, Madrid, Espay, A11031) te itilize kòm antikò segondè. Yo te enkli tisi kontwòl pozitif apwopriye, osi byen ke kontwòl negatif prensipal ak segondè. Imaj fliyoresan etikèt yo te akeri avèk yon ZEISS Apotome. 2 mikwoskòp ak yon axiom 503 mono kamera dijital ak Zen Blue kontwòl lojisyèl vèsyon 2.3 (Carl Zeiss). Yo te itilize yon objektif 10× (Plan-APOCHROMAT, V10×, NA 0.45, AIR) pou visualiser ipokanp la. Dansite entegre nan rejyon enterè yo te kalkile ak lojisyèl ImageJ. Paramèt sa a koresponn ak sòm valè entansite yo pou chak pixel nan rejyon yo chwazi a. Se poutèt sa, li itilize pou kantite kantite selil ki tache an konbinezon ak entansite tach chak selil.

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

4.5. Analiz Western Blot

Sèvo sourit yo te retire byen vit, epi ipokanpi yo te imedyatman diseke ak jele. Tisi yo te prepare lè l sèvi avèk yon tanpon liz ipèrtonik ki gen inibitè pwoteaz jan yo dekri anvan [68]. Antikò prensipal yo te itilize yo te anti-lapen fosfò-IKK / (1:1000 dilution; Cell Signaling, Alcobendas, Espay, 2861), anti-lapen IKK / (1:1000 dilution; Santa Cruz Biotechnology, Heidelberg, Almay, sc{{ 9}}), antilapen fosfò-STAT3 (1:1000 dilution; Cell Signaling, 9145) ak anti-sourit STAT3 (1:1000 dilution; Santa Cruz Biotechnology, sc-8019). Anti-sourit -tubulin (1:2000 dilution; Santa Cruz Biotechnology, sc-32293) te itilize kòm yon kontwòl chajman. Anti-lapen HRP (dilution 1:5000; Jackson ImmunoResearch Laboratories, Baltimore, USA, 111-035-144) ak anti-sourit HRP (1:5000 dilution; Jackson ImmunoResearch Laboratories, 115-035-003) yo te itilize kòm antikò segondè. . Kantifikasyon bann pwoteyin te fèt pa analiz densitometri bann ak lojisyèl NIH ImageJ (Vèsyon 1.50i, https://imagej.nih.gov/ij/, jwenn aksè nan 1 mas 2022). Pou asire chaj egal, yo te eksprime dansite entegre ki te jwenn pou chak gwoup kòm yon valè relatif ki gen rapò ak kontwòl chaj apwopriye pou antretyen.

4.6. Analiz estatistik

Rezilta yo te analize estatistik ak lojisyèl GraphPad Prism (San Diego, CA, USA). Done yo prezante kòm mwayèn ± erè estanda nan mwayèn (SEM) nan jeneralman kat eksperyans endepandan (n {{0}}-9). Apre tès Shapiro-Wilk te konfime distribisyon nòmal done yo, yo te detèmine siyifikasyon estatistik ant de gwoup yo pa tès t Student pou done parametrik yo. Diferans yo te konsidere estatistik enpòtan lè valè pwobabilite (p) yo te mwens pase 0.05 (*), 0.01 (**), oswa 0.001 (***). Figi montre eksperyans reprezantatif.

5. Konklizyon

An rezime, rezilta nou yo endike ke echèk nan inaktive GSK3 pa fosforilasyon Ser389 mennen nan enflamasyon kwonik ak tolerans endotoxin e ke anpèchman nan GSK3 pa fosforilasyon Ser9 ak Ser389 jwe wòl konplemantè epi yo pa redondants nan repons neroiminitè a. Se poutèt sa, yo ta dwe envestige konsekans espesifik fosforilasyon GSK3 Ser389 pou neropatoloji ak aje nan sèvo.

Referans

1. Souder, DC; Anderson, RM Yon rezo GSK3 agrandi: Enplikasyon pou rechèch aje. Geroscience 2019, 41, 369–382. [CrossRef] [PubMed]

2. Hoeflich, KP; Luo, J.; Rubie, EA; Tsao, M.; Jin, O.; Woodgett, JR Kondisyon pou glikojèn sintaz kinaz-3 nan siviv selil ak aktivasyon NF-κB. Nature 2000, 406, 86–90. [CrossRef] [PubMed]

3. Jope, RS; Johnson, GV Glamour ak tenèb nan glikojèn sintaz kinaz-3. Tandans Biochem. Sci. 2004, 29, 95–102. [CrossRef]

4. Thornton, TM; Pedraza-Alva, G.; Deng, B.; Wood, CD; Aronshtam, A.; Clements, JL; Sabio, G.; Davis, RJ; Matthews, DE; Doble, B.; et al. Fosforilasyon pa p38 MAPK kòm yon chemen altènatif pou inaktivasyon GSK3beta. Syans 2008, 320, 667–670. [CrossRef]

5. Calvo, B.; Thornton, TM; Rinkon, M.; Tranque, P.; Fernandez, M. Règleman nan GSK3 pa Ser 389 fosforilasyon pandan devlopman neral. Mol. Neurobiol. 2020, 58, 809–820. [CrossRef] [PubMed]

6. Thornton, TM; Hare, B.; Colié, S.; Pendlebury, WW; Nebreda, AR; Falls, W.; Jaworski, DM; Rincon, M. Echèk nan inaktive Nikleyè GSK3 pa Ser 389-Fosforilasyon mennen nan Lanmò Fokal Neuronal ak Pwolonje Laperèz Repons. Neuropsychopharmacology 2018, 43, 393-405. [CrossRef] [PubMed]

7. Lapen, BD; Thornton, TM; Rinkon, M.; Golijanin, B.; Wa, SB; Jaworski, DM; Falls, WA De semèn estrès varyab ogmante nivo gamma-H2AX nan nwayo kabann sourit tèminal stria a. Neurosyans 2018, 373, 137–144. [CrossRef]

8. Thornton, TM; Delgado, P.; Chen, L.; Salas, B.; Krementsov, D.; Fernandez, M.; Vernia, S.; Davis, RJ; Heimann, R.; Teuscher, C.; et al. Inaktivasyon nikleyè GSK3beta pa fosforilasyon Ser (389) fè pwomosyon kapasite lenfosit pandan repons ADN doub-strand kraze. Nat. Komin. 2016, 7, 10553. [CrossRef]

9. Pasparakis, M.; Vandenabeele, P. Necroptosis ak wòl li nan enflamasyon. Nature 2015, 517, 311–320. [CrossRef]

10. Jope, RS; Cheng, Y.; Lowell, JA; Worthen, RJ; Sitbon, YH; Beurel, E. Estrès ak anflame, Èske GSK3 ka blame? Tandans Biochem. Sci. 2017, 42, 180–192. [CrossRef]

11. Beutler, B.; Rietschel, ET Inate iminitè deteksyon, ak rasin li yo: Istwa a nan endotoxin. Nat. Rev Immunol. 2003, 3, 169–176. [CrossRef] [PubMed]

12. Morris, MC; Gilliam, EA; Bouton, J.; Li, L. Modilasyon dinamik repons iminitè natirèl pa varye dòz lipopolysaccharide (LPS) nan selil monositik imen. J. Biol. Chem. 2014, 289, 21584–21590. [CrossRef]

13. Lu, YC; Wi, WC; Ohashi, PS LPS/TLR4 siyal transduction chemen. Cytokine 2008, 42, 145-151. [CrossRef] [PubMed]

14. Ko, R.; Jang, HD; Lee, peptide inhibitor SY GSK3 pwoteje sourit kont chòk endotoxin LPS-induit. Iminitè Netw. 2010, 10, 99. [CrossRef] [PubMed]

15. Piazzi, M.; Bavelloni, A.; Cenni, V.; Faenza, I.; Blalock, WL revize wòl GSK3, yon modulateur nan iminite natirèl, nan myozit kò enklizyon idiopatik. Cells 2021, 10, 3255. [CrossRef] [PubMed]

16. Vines, A.; Cahoon, S.; Goldberg, I.; Saxena, U.; Pillarisetti, S. Nouvo wòl anti-enflamatwa pou glikojèn sintaz kinaz-3beta nan anpèchman nan faktè necrosis timè-alfa- ak interleukin-1 beta-induit ekspresyon jèn enflamatwa. J. Biol. Chem. 2006, 281, 16985–16990. [CrossRef]

17. Hoffmeister, L.; Diekmann, M.; Mak, K.; Huber, R. GSK3: Yon pwomosyon kinaz balanse ak rezolisyon nan enflamasyon. Cells 2020, 9, 820. [CrossRef]

18. Beurel, E.; Jope, RS Lipopolysaccharide-induit interleukin-6 pwodiksyon kontwole pa glikojèn sintaz kinaz-3 ak STAT3 nan sèvo a. J. Neuroinflamm. 2009, 6, 9. [CrossRef]

19. Wang, M.; Huang, H.; Chen, W.; Chang, H.; Kuo, J. Glycogen synthase kinase -3 inaktivasyon inibit timè necrosis faktè-pwodiksyon nan microglia pa modulation nikleyè faktè κB ak kaskad siyal MLK3/JNK. J. Neuroinflamm. 2010, 7, 99. [CrossRef]

20. Priego, N.; Valiente, M. Potansyèl la nan astwosit kòm modulateur iminitè nan timè nan sèvo. Devan. Imunol. 2019, 10, 1314. [CrossRef]

21. Vandenbark, AA; Offner, H.; Matejuk, S.; Matejuk, A. Microglia ak patisipasyon astrocyte nan neurodegeneration ak kansè nan sèvo. J. Neuroinflamm. 2021, 18, 298. [CrossRef] [PubMed]

22. Lucas, JJ; Hernandez, F.; Gomez-Ramos, P.; Moran, MA; Hen, R.; Avila, J. Diminye nikleyè beta-catenin, tau hyperphosphory lation, ak neurodegeneration nan GSK-3beta sourit transjenik kondisyonèl. EMBO J. 2001, 20, 27–39. [CrossRef] [PubMed]

23. Jorge-Torres, OC; Szczesna, K.; Roa, L.; Casal, C.; Gonzalez-Somermeyer, L.; Soler, M.; Velasco, CD; Martinez-San Segundo, P.; Petazzi, P.; Saez, MA; et al. Anpèchman Gsk3b diminye siyal Nfkb1 ak sove aktivite sinaptik pou amelyore fenotip Sendwòm Rett nan sourit Mecp2-Knockout. Selil. Rep. 2018, 23, 1665–1677. [CrossRef] [PubMed]

24. Martin, M.; Rehani, K.; Jope, RS; Michalek, SM Toll-like reseptè-medyatè pwodiksyon cytokine se diferan reglemante pa glikojèn synthase kinaz. Nat. Imunol. 2005, 6, 777–784. [CrossRef]

25. Rippin, mwen .; Eldar-Finkelman, H. Mekanis ak enplikasyon terapetik nan GSK-3 nan trete neurodegeneration. Cells 2021, 10, 262. [CrossRef]

26. Androulidaki, A.; Iliopoulos, D.; Arranz, A.; Doxaki, C.; Schworer, S.; Zacharioudaki, V.; Margioris, AN; Tsichlis, PN; Tsatsanis, C. Akt1 kinaz la kontwole repons makrofaj nan lipopolysaccharide pa reglemante microRNAs. Iminite 2009, 31, 220–231. [CrossRef]

27. Fichtner-Feigl, S.; Kesselring, R.; Martin, M.; Obermeier, F.; Ruemmele, P.; Kitani, A.; Brunner, SM; Haimerl, M.; Geissler, EK; Strober, W. IL-13 òganize rezolisyon enflamasyon kwonik entesten atravè fosforilasyon glikojèn sintaz kinaz-3. J. Immunol. 2014, 192, 3969–3980. [CrossRef]

28. Nagao, M.; Hayashi, H. Glycogen synthase kinase-3beta asosye ak maladi Parkinson la. Neurosci. Lett. 2009, 449, 103–107. [CrossRef]

29. Nadri, C.; Kozlovsky, N.; Agam, G.; Bersudsky, Y. GSK-3 paramèt nan lenfosit pasyan eskizofrenik. Sikyatri Res. 2002, 112, 51–57. [CrossRef]

30. Jope, RS; Yuskaitis, CJ; Beurel, E. Glycogen synthase kinase-3 (GSK3): Enflamasyon, maladi, ak terapi. Neurochem. Res. 2007, 32, 577–595. [CrossRef]

31. Calvo, B.; Rubio, F.; Fernández, M.; Tranque, P. Disosyasyon nan sèvo sourit neonatal ak granmoun pou analiz similtane nan microglia, astrocytes ak lenfosit enfiltre pa sikometri koule. Rep. IBRO 2020, 8, 36–47. [CrossRef] [PubMed]

32. Legroux, L.; Pittet, CL; Beauseigle, D.; Deblois, G.; Prat, A.; Arbour, N. Yon metòd optimize pou trete CNS sourit pou analize ansanm selil neral ak lekosit pa sikometri koule. J. Neurosci. Metòd 2015, 247, 23–31. [CrossRef] [PubMed]

33. Batiuk, MWEN; de Vin, F.; Duque, SI; Li, C.; Saito, T.; Saido, T.; Fiers, M.; Belgard, TG; Holt, MG Yon metòd ki baze sou iminoafinite pou izole astrosit adilt ultrapur ki baze sou vize ATP1B2 pa antikò ACSA-2. J. Biol. Chem. 2017, 292, 8874–8891. [CrossRef] [PubMed]

34. Stevens, SL; Bao, J.; Hollis, J.; Lessov, NS; Clark, WM; Stenzel-Poore, MP Itilizasyon sikometri koule pou evalye chanjman tanporèl nan selil enflamatwa apre iskemi serebral fokal nan sourit yo. Sèvo Res. 2002, 932, 110–119. [CrossRef] [PubMed]

35. Kantzer, CG; Boutin, C.; Herzig, ID; Wittwer, C.; Reiss, S.; Tiveron, MC; Drewes, J.; Rockel, TD; Ohlig, S.; Ninkovic, J.; et al. Anti-ACSA-2 defini yon nouvo antikò monoklonal pou izolasyon potansyèl de astrosit neonatal ak granmoun vivan. Glia 2017, 65, 990–1004. [CrossRef]

36. Moreno-García, Á.; Bernal-Chico, A.; Colomer, T.; Rodríguez-Antigüedad, A.; Matute, C.; Mato, S. Gene analiz ekspresyon de astrocyte ak microglia endocannabinoid siyal pandan demyelination otoiminitè. Biomolecules 2020, 10, 1228. [CrossRef] [PubMed]

37. Deniset, JF; Surewaard, BG; Lee, W.; Kubes, P. Splenic Ly6Ghigh matirite ak Ly6Gint netwofil frelikè kontribye nan eradikasyon S. pneumoniae. J. Exp. Med. 2017, 214, 1333–1350. [CrossRef]

38. Ng, HHM; Lee, RY; Goh, S.; Tay, ISY; Lim, X.; Lee, B.; moulen, V.; Li, H.; Tan, B.; Lim, S.; et al. Nòt imunohistochimik CD38 nan mikwo-anviwònman timè a predi repons pou imunoterapi anti-PD-1/PD-L1 nan karsinom epatoselilè. J. Immunother. Kansè 2020, 8, e000987. [CrossRef]

39. Okuyama, S.; Makihata, N.; Yoshimura, M.; Asakura, Y.; Yoshida, T.; Nakajima, M.; Furukawa, Y. Oenothein B supprime lipopolysaccharide (LPS)-pwovoke enflamasyon nan sèvo a sourit. Ent. J. Mol. Sci. 2013, 14, 9767–9778. [CrossRef]

40. Carnevale, D.; Mascio, G.; Ajmone-Cat, MA; D'Andrea, I.; Cifelli, G.; Madonna, M.; Cocozza, G.; Frati, A.; Carullo, P.; Carnevale, L.; et al. Wòl neroenflamasyon nan patoloji amiloid nan sèvo ki pwovoke tansyon wo. Neurobiol. Aging 2012, 33, e19–e205. [CrossRef]

41. Zhang, J.; Xue, B.; Jing, B.; Tian, ​​H.; Zhang, N.; Li, M.; Lu, L.; Chen, L.; Diao, H.; Chen, Y. LPS aktive wout neroenflamatwa pou pwovoke depresyon nan kondisyon ki sanble ak maladi Parkinson la. Devan. Pharmacol. 2022, 13, 961817. [CrossRef] [PubMed] 4

2. Tarr, AJ; Chen, Q.; Wang, Y.; Sheridan, JF; Quan, N. Repons neral ak konpòtman nan enflamasyon ki ba-klas. Konpòtman. Sèvo Res. 2012, 235, 334–341. [CrossRef] [PubMed]

43. Kang, J.; Park, D.; Shah, M.; Kim, M.; Koh, P. Lipopolysaccharide pwovoke deklanchman neuroglia ak aktivasyon NF-κB nan cortical serebral la nan sourit adilt. Laboratwa. Anim. Res. 2019, 35, 19. [CrossRef]

44. Khan, MS; Ali, T.; Abid, MN; Jo, MH; Khan, A.; Kim, mw; Yoon, GH; Cheon, EW; Rehman, SU; Kim, MO Lityòm amelyore nerotoksisite lipopolysaccharide nan cortical ak ipokanp nan sèvo rat granmoun. Neurochem. Ent. 2017, 108, 343–354. [CrossRef] [PubMed]

45. Paxinos, G.; Franklin, KB Sourit sèvo nan kowòdone estereyotaksik. 2001. Disponib sou Entènèt: https://books.google.es/books/ about/The_Mouse_Brain_in_Stereotaxic_Coordinat .html?id=tZdjQgAACAAJ&redir_esc=y (aksede sou 1 mas 2022).

46. ​​Bronte, V.; Pittet, MJ Larat nan règleman lokal ak sistemik nan iminite. Iminite 2013, 39, 806–818. [CrossRef]

47. Liu, T.; Zhang, L.; Joo, D.; Solèy, S. NF-κB siyal nan enflamasyon. Transduct siyal. Sib. La. 2017, 2, 17023. [CrossRef] [PubMed]

48. Balic, JJ; Albargy, H.; Luu, K.; Kirby, FJ; Jayasekara, WSN; Mansell, F.; Garama, DJ; De Nardo, D.; Baschuk, N.; Louis, C. STAT3 serin fosforilasyon obligatwa pou repwogram metabolik TLR4 ak ekspresyon IL-1. Nat. Komin. 2020, 11, 3816. [CrossRef]

49. Hongisto, V.; Vainio, JC; Thompson, R.; Courtney, MJ; Coffey, ET Pisin Wnt nan glikojèn sintaz kinaz 3beta enpòtan anpil pou lanmò newòn twofik-privasyon-induit. Mol. Selil. Biol. 2008, 28, 1515–1527. [CrossRef]

50. Eom, T.; Jope, RS Bloke inhibitor serin-fosforilasyon nan glikojèn sintaz kinaz -3 / afekte pwopagasyon selil précurseur neral in vivo. Biol. Sikyatri 2009, 66, 494–502. [CrossRef] 5

1. Franceschi, C.; Campisi, J. Enflamasyon kwonik (enflamasyon) ak kontribisyon potansyèl li nan maladi ki asosye ak laj. J. Gerontol. Ser. Yon Biomed. Sci. Med. Sci. 2014, 69, S4–S9. [CrossRef]

52. Enioutina, EY; Bareyan, D.; Daynes, RA Yon wòl pou selil myeloid frelikè nan senesans iminitè. J. Immunol. 2011, 186, 697–707. [CrossRef] [PubMed]

53. Tang, Y.; Le, W. Diferans wòl nan M1 ak M2 microglia nan maladi neurodegenerative. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 1181–1194. [CrossRef] [PubMed]

54. Hoogland, IC; Houbolt, C.; van Westerloo, DJ; van Gool, WA; van de Beek, D. Enflamasyon sistemik ak aktivasyon microglial: revizyon sistematik nan eksperyans bèt. J. Neuroinflamm. 2015, 12, 114. [CrossRef] [PubMed]

55. Furube, E.; Kawai, S.; Inagaki, H.; Takagi, S.; Miyata, S. Brain Rejyon-depandan eterojeneite ak Dòz-depandan diferans nan Ogmantasyon Popilasyon Microglia Transient pandan Lipopolysaccharide-induit Enflamasyon. Sci. Rep. 2018, 8, 2203. [CrossRef]

56. Brandi, E.; Torres-Garcia, L.; Svanbergsson, A.; Haikal, C.; Liu, D.; Li, W.; Li, J. Brain rejyon-espesifik mikroglial ak astrocytic aktivasyon an repons a ekspoze lipopolysaccharides sistemik. Devan. Aje Neurosci. 2022, 14, 910988. [CrossRef]

57. Radulovic, K.; Mak'Anyengo, R.; Kaya, B.; Steinert, A.; Niess, JH Piki lipopolysaccharide nan sourit pou imite antre nan pwodwi ki sòti mikwòb apre vyolasyon baryè entesten. J. Vis. Eksp. 2018, 135, e57610. [CrossRef]

58. Fink, MP Modèl bèt nan sepsis. Virulence 2014, 5, 143–153. [CrossRef]

59. Zhou, H.; Andonegui, G.; Wong, CH; Kubes, P. Wòl endothelial TLR4 pou rekritman netrofil nan microvessels sistèm nève santral nan enflamasyon sistemik. J. Immunol. 2009, 183, 5244–5250. [CrossRef]

60. Beurel, E. HDAC6 kontwole tolerans LPS nan astwosit. PLoS ONE 2011, 6, e25804. [CrossRef]

61. Yao, L.; Li, P.; Chen, Q.; Hu, A.; Wu, Y.; Li, B. Efè pwoteksyon nan tolerans endotoxin sou periferik lipopolysaccharide-induit neuroinflammation ak dopaminergic blesi newòn. Imunopharmacol. Imunotoksikòl. 2022, 44, 326–337. [CrossRef] 62. Park, SH; Park-Min, KH; Chen, J.; Hu, X.; Ivashkiv, LB Faktè necrosis timè pwovoke GSK3 kinaz-medyatè kwa-tolerans nan endotoxin nan macrophages. Nat. Imunol. 2011, 12, 607–615. [CrossRef] [PubMed]

63. Yamawaki, Y.; Shirawachi, S.; Mizokami, A.; Nozaki, K.; Ito, H.; Asano, S.; Oue, K.; Aizawa, H.; Yamawaki, S.; Hirata, M. Phospholipase C ki gen rapò ak katalitik inaktif pwoteyin kontwole lipopolysaccharide-induit enflamasyon ipotalamik medyatè anoreksi nan sourit. Neurochem. Ent. 2019, 131, 104563. [CrossRef] [PubMed]

64. Shah, SA; Khan, M.; Jo, M.; Jo, MG; Amin, FU; Kim, MO Melatonin stimul chemen siyal SIRT 1/Nrf2 ki kontrekare estrès oksidatif lipopolysakarid (LPS) pou sove sèvo rat apre akouchman an. CNS Neurosci. La. 2017, 23, 33–44. [CrossRef] [PubMed]

65. Cho, YJ; Lee, YA; Lee, JW; Kim, JI; Han, JS Sinetik nan sitokin proinflammatory apre piki entraperitoneal nan tribromoethanol ak yon konbinezon tribromoethanol / xylazine nan sourit ICR. Laboratwa. Anim. Res. 2011, 27, 197–203. [CrossRef] [PubMed]

66. Posel, C.; Moller, K.; Boltze, J.; Wagner, DC; Weise, G. Izolasyon ak Flow Cytometric analiz de selil iminitè soti nan sèvo a sourit ischemic. J. Vis. Eksp. 2016, 108, 53658. [CrossRef] [PubMed]

67. Serrano-Perez, MC; Martin, ED; Vaquero, CF; Azcoitia, I.; Calvo, S.; Cano, E.; Tranque, P. Repons nan faktè transcription NFATc3 nan ensilte nan sèvo eksitotoksik ak twomatik: Idantifikasyon yon subpopulation nan astrosit reyaktif. Glia 2011, 59, 94–107. [CrossRef]

68. Fradejas, N.; Serrano-Perez Mdel, C.; Tranque, P.; Calvo, S. Selenoprotein S ekspresyon nan astwosit reyaktif apre aksidan nan sèvo. Glia 2011, 59, 959–972. [CrossRef]