Kontakte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Klike la a pou enfòmasyon sou Pati I (Entwodiksyon, materyèl, ak metòd) nan atik sa a.

Ki jan medikaman Chinwa ki tonifye ren an anpeche apoptoz newòn dopaminergic?

Shaogang Lin,1 Shuifen Ye,2 Jinmu Huang,1 Yun Tian,3 Yihui Xu,2 Mengqi Wu,2 Jingxia Wang,2 Songying Wu,4 ak Jing Cai, MD, Ph.D.2

MATERYÈL AK METÒD

Design

In vitro obsèvasyon konparatif nan famasi serik.

Tan ak anviwònman

Eksperyans yo te fèt nan laboratwa sitobyoloji, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Lachin nan 2010 rive 2011.

Materyèl

Bèt

Yon total de 60 rat gason Wistar, ki gen 8 semèn, ki peze 200–220 g, te achte nan men SLAC Laboratory Animal Co., Ltd., Shanghai, Lachin (lisans No. SCXK (Hu) {{4} }). Yo te loje nan Sant Animal Laboratwa nan Fujian University of Traditional Chinese Medicine nan Lachin nan 20-22 degre ak yon imidite nan 40-60 pousan ak ekleraj soti nan 7:00 am jiska 7:00 pm Manje te bay pa. Sant Animal laboratwa nan Fujian University of Traditional Chinese Medicine. Tout pwosedi eksperimantal yo te an akò ak Sijesyon Gid pou Swen ak Itilizasyon Bèt Laboratwa, Ministè Syans ak Teknoloji Lachin te fòme [33].

Cistanche pou amelyore fonksyon ren

Dwòg

Herba Epimedii, pati ayeryen nan Epimedium sagittatum Maxim la te soti nan pwovens Sichuan, Lachin; Semen Cuscutae, grenn ki gen matirite sèk nan Cuscuta Chinensis Lam., te soti nan pwovens Shandong, Lachin; ak Herba Cistanches, chylocaulous nan fèy echèl nan Cistanche deserticola YCMa, te soti nan Xinjiang Uygur Otonòm Rejyon. Tout medikaman yo te bay Fujian Pharmaceutical Co, Ltd., Fujian Province, Lachin. Herba Epimedii, Semen Cuscutae, ak Herba Cistanches, 97.2 g chak, yo te benyen nan yon veso dekoksyon ki gen 1 500 mL dlo distile, rapidman chofe, bouyi, kenbe nan 100 degre. pèmèt eleman aktif dwòg yo fonn ak kondanse a 540 mL. Kantite lajan an brit nan dwòg nan solisyon an dwòg te 0.180 g / mL. Solisyon an te filtre, mete l nan yon boutèy, sele, esterilize, epi estoke nan 4 degre. Selegiline, 5 mg × 10 tablèt pou chak twous, te achte nan men Nanjing Sike Pharmaceutical Co, Ltd (Jiangsu Pwovens, Lachin). Selegiline, 21.6 mg, te fonn nan dlo distile doub pou prepare yon solisyon dlo 540 mL. Konsantrasyon an nan solisyon dwòg la te 0.04 mg / mL. Yo te mete solisyon dwòg la nan yon boutèy, sele, esterilize, epi estoke nan 4 degre.

Metòd

Preparasyon nan serom ki gen dwòg

Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Herba Cistanches, ak gwoup selegiline yo te perfuze intragastrik ak serom ki gen dwòg ki gen 0.180 g/mL Herba Epimedii, Semen Cuscutae, oswa Herba Cistanches, oswa {{ 5}}.04 mg/mL selegilin, de fwa pa jou, nan yon dòz 0.1 mL/kg, pandan 14 jou youn apre lòt. Gwoup serom vid la te administre yon volim egal dlo distile. Bèt yo te prive de manje ak dlo pou 12 èdtan apre administrasyon final la. Rat yo te anestezi pa piki intraperitoneal ak 0.3 mL / 100 g ketamin idroklorid. Yo te rekòlte san nan aorta nan vant epi santrifuje nan 1 000 r/min pou 15 minit. Sipènatant la te rekòlte, dezaktive nan yon beny dlo nan 56 degre pou 30 minit, filtre atravè yon manbràn mikwopore 0.22 μm, epi estoke nan -20 degre.

Preparasyon 50×Sato a solisyon

Yon melanj de 60 mL DMEM/F12 (Gibco, Carlsbad, CA, USA), 15 mg ensilin bovin (Sigma, St. Louis, MO, USA), 15 mg transferrin (Sigma), 145.8 mg piruvat sodyòm. (Biosharp, Kore di), 12 mg putrescine (Solarbio, Beijing, Lachin), 25 μL selenit sodyòm (1 mg/mL, 100 mg/100 mL H2O; Sigma), ak 100 μL pwojestewòn (0.315 mg). /mL, 15.75 mg/50 mL; Biosharp) te sibi ultrason nan yon beny glas pou 1.5 èdtan, filtre nan 0.22 μm filtre, aliquoted ak estoke nan -20 degre.

Cistanche pou trete fonksyon ren

Kilti selilè

Selil yo te simen nan DMEM/F12 complétée ak 5 pousan (v/v) fetal serom bovine (Gibco), 1 pousan (v/v) glutamin (Sigma), 2 pousan (v/v) 50×Sato a. solisyon, ak 2 pousan (v/v) penisilin/streptomycin. Lè sa a, selil yo te enkube nan 5 pousan (v/v) CO2 epi kenbe nan imidite satire nan 37 degre. Selil yo te trypsinized ak 0.25 pousan (w/v) trypsin ak pasaj. Selil yo nan faz logaritmik la te kolekte pou eksperyans ki vin apre yo.

Efè H2O2 sou kwasans selil MES23.5

Selil yo te simen nan 96-plak kilti byen (5 × 105 selil / pi), enkubasyon ak 50, 100, 150, 200, 300, ak 400 μmol / L solisyon kilti H2O2 (Shanghai Shiyi Chemicals Reagent Co., Ltd ., Shanghai, Lachin) apre 24 èdtan pou 1, 3, 6, 9, 12, 24 èdtan, ki te swiv pa MTT (Sigma) pou 4 èdtan. Solisyon an nan pwi yo te jete, epi yo te ajoute 150 μL dimethyl sulfoxide (Sigma). Plak kilti a te souke pou 10 minit, epi absòbe echantiyon yo genyen nan 570 nm yo te detèmine lè l sèvi avèk yon lektè microplate otomatik (EXL800; Biotek, Winooski, VT, USA). Yo te itilize solisyon kilti DMEM/F12 ki fèk prepare kòm yon kontwòl negatif. De pi paralèl yo te mete nan chak pwen tan. Eksperyans yo te fèt an triple.

Enfliyans serom ki gen dwòg nan diferan konsantrasyon sou kwasans selil MES23.5 trete H2O2-

Selil yo te simen epi ekspoze a serom ki gen dwòg ki gen 5, 10, 15, 20, 25, ak 30 pousan (v/v) Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Herba Cistanches, ak selegiline oswa serom vid pou 24 èdtan. Selil yo te kiltive plis ak solisyon kilti ki gen 100 μmol / L H2O2 pou 3 èdtan, ki te swiv pa MTT pou 4 èdtan. Twa pi paralèl yo te mete nan chak gwoup. Yo te itilize solisyon kilti DMEM/F12 ki fèk prepare kòm yon kontwòl negatif. Selil kiltive nan solisyon kilti ki gen 100 μmol / L H2O2 ak serom vid te sèvi kòm gwoup modèl la, ak selil ki kiltive nan serom vid pou kont li te sèvi kòm gwoup serom vid la. Eksperyans yo te fèt an triple. Valè absorpsyon an mwayèn nan chak gwoup yo te kalkile kòm pousantaj la siviv nan selil yo.

Sitometri koule pou ekspresyon FasL, Fas, kaspas-3, ak Bcl-2 nan selil MES23.5

Selil yo te simen epi trete tankou anvan. Selil kiltive nan 100 μmol / L H2O2 pou kont yo te konsidere kòm gwoup modèl la. Antikò FasL ki make phycoerythrin ak kontwòl izotip FasL (5 μL chak), yo te ajoute nan de tib (BD, San Jose, CA, USA), melanje respire ak selil yo, ki estoke nan tanperati chanm nan fè nwa a pou 15 minit, santrifuje nan 1 000 r/min pou 5 minit apre yo fin ajoute 2 mL PBS. Sipènatant la te jete, epi selil yo te resuspend lè l sèvi avèk 500 μL PBS. Longèdonn aparèy lazè a pou sikometri koule (Facscalibur; BD) te 488 nm. Yo te analize pousantaj ekspresyon selil FasL-pozitif ak kalkile pa lojisyèl Cell Quest (BD). Yo te detekte pousantaj ekspresyon Fas-, kaspas-3-, ak Bcl-2-selil pozitif lè l sèvi avèk menm metòd la.

ELISA pou kontni faktè kwasans nè, faktè nerotwofik ki sòti nan sèvo, ak faktè nerotwofik ki sòti nan liy selil glial nan selil yo.

Selil yo te simen epi trete jan sa dekri deja. Yo te rekòlte supernatant la, epi yo te mezire faktè kwasans nè, faktè nerotwofik ki sòti nan sèvo, ak kontni faktè nerotwofik ki sòti nan liy selil glial yo dapre enstriksyon manifakti a (BD). Yo te mezire absorpsyon an nan 450 nm lè l sèvi avèk yon lektè microplate otomatik (EXL800; Biotek, Winooski, VT, USA).

Analiz estatistik

Rezilta yo te eksprime kòm mwayen ± SD. Done yo te analize avèk lojisyèl SPSS 18.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Te analiz yon sèl-fason nan divèjans ki te fèt ki te swiv pa konparezon miltip tès diferans ki pi piti enpòtan. Yon valè P < 0.05="" te="" konsidere="" kòm="" estatistik="">

Cistanche pou fonksyon ren

Rekonesans

Nou remèsye Chen B, laboratwa nerobyoloji, Inivèsite Medikal Kapital, paske li bay MES23.5.dopaminèjikselil nève yo.

Nòt anba a

Finansman: Etid sa a te sipòte pa Devlopman Fon Chen Keji Integrative Medsin, No CKJ2010025 ak Fondasyon Kle nan Devlopman Sosyete nan Pwovens Fujian, No 2013Y0059.

Konfli enterè: Okenn deklare.

Apwobasyon etik: Etid sa a te resevwa pèmisyon nan Komite Etik bèt nan Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Lachin.

(Revizyon pa Diwakarla S, Norman C, Cheng HY, Wang JM)

(Edite pa Wang LM, Su LL, Li CH, Song LP, Liu WJ, Zhao M)

REFERANS

[1] Zhang ZX, Women GC, Hong Z, et al. Maladi Parkinson nan Lachin: prévalence nan Beijing, Xian, ak Shanghai. Lancet. 2005;365(9459):595–597. [PubMed] [Google Scholar]

[2] Li JC, Wang WW. Efè Tianma Gauteng Yin souapoptoznandopaminèjiknewòn nan rat modèl maladi Parkinson la. Zhongyi Zazhi. 2010;51(11):1024–1027. [Google Scholar]

[3] Perier C, Bové J, Vila M. Mitokondri ak lanmò selil pwograme nan maladi Parkinson la:apoptozak pi lwen. Antioksid Redox siyal. 2012;16(9):883–895. [PubMed] [Google Scholar]

[4] Gallagher DA, Schapira AH. Etyopatogenesis ak tretman maladi Parkinson la. Curr Top Med Chem. 2009;9(10):860–868. [PubMed] [Google Scholar]

[5] Rangasamy SB, Soderstrom K, Bakay RA, et al. Terapi faktè nerotwofik pou maladi Parkinson la. Pwog sèvo Res. 2010;184:237–264. [PubMed] [Google Scholar]

[6] Zuccato C, Cattaneo E. Faktè nerotwofik ki sòti nan sèvo nan maladi neurodegenerative. Nat Rev Neurol. 2009;5(6):311–322. [PubMed] [Google Scholar]

[7] Cai DF, Chen XQ, Gao Y. Efè resèt yangban touf sou fonksyon nigrostriatal nan rat modèl parkinsonyen apre tretman levodopa alontèm. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2002;22(1):43–46. [PubMed] [Google Scholar]

[8] Yang MH, Wang HM, Liu Y. Efè Bushen Huoxue dekoksyon sou reseptè a òfelen ak tirozin idroksilaz nan sèvo rat ki gen maladi Parkinson la. Chin J Integr Med. 2011;17(1):43–47. [PubMed] [Google Scholar]

[9] Li SD, Liu Y, Yang MH. Efè touf Huo Xue Yin sou sèvo NF-kB ak NO kontni nan sourit modèl maladi Parkinson la. J Tradit Chin Med. 2012;32(1):67–70. [PubMed] [Google Scholar]

[10] Tian Y, Cai J, Chen XZ, et al. Efè pwoteksyon Chinwa nourisanrenremèd fèy sou newòn nan newòn striatal nan sourit modèl maladi Parkinson la. Zhongguo Laonian Xue Zazhi. 2011;31(3):440–443. [Google Scholar]

[11] Yu H, Li YH, Feng XL, et al. Idantifikasyon ak aktivite tès idroksilaz tirozin nan selil MES23.5. Zhongguo Shengwu Huaxue yu Fenzi Shengwu Xuebao. 2004;20(1):95–100. [Google Scholar]

[12] Wang XR. Beijing: Piblikasyon Medikal Pèp la; 2007. Metòd eksperimantal toksikoloji ak Teknoloji. [Google Scholar]

[13] Lv SJ. Beijing: Lachin Medikal Syans Press; 2010. Tès klinik imunoloji. [Google Scholar]

[14] Eriksen JL, Wszolek Z, Petrucelli L. Patojèn molekilè maladi Parkinson la. Arch Neurol. 2005;62(3):353–357. [PubMed] [Google Scholar]

[15] Christen Y. Estrès oksidatif ak maladi alzayme a. Am J Clin Nutr. 2000;71(2):621S–629S. [PubMed] [Google Scholar]

[16] Blandini F, Armenteros MT, Fancellu R, et al. Efè neropwotektif rasagilin nan yon modèl rat nan maladi Parkinson la. Eksp Neurol. 2004;187(2):455–459. [PubMed] [Google Scholar]

[17] Zhang XN, Wang HH, Wang ZQ, et al. Efè pwoteksyon icariin souapoptoznan newòn rat prensipalman kiltive pwovoke pa Aâ25-35 peptide. Zhejiang Daxue Xuebao: Yixue entèdiksyon. 2007;36(3):224–228. [PubMed] [Google Scholar]

[18] Wang LH, Bu PC, Bao YM. Efè neropwotektif nan ekstrè Cuscuta Chinensis Lam sou domaj nan selil PC12 différenciés neuronal pwovoke pa espès oksijèn reyaktif. Xibao Shengwu Xue Zazhi. 2005;27:69–72. [Google Scholar]

[19] Solèy SL, Wang B, Peng HS. Anpèchman ekstrè Dodder nan myosit kadyakapoptoznan sourit ki aje. Zhongguo Laonian Xue Zazhi. 2011;31:642–644. [Google Scholar]

[20] Yang JH, Hu JP, Rena K, et al. Relasyon estrikti-aktivite nan glikozid phenylethanoid nan plant Cistanche salsa sou aktivite antioksidatif. Zhong Yao Cai. 2009;32(7):1067–1069. [PubMed] [Google Scholar]

[21] Wu Y, Li L, Wen T, et al. Efè pwoteksyon echinacoside sou epatotoksisite kabòn tetrachloride pwovoke nan rat. Toksikoloji. 2007;232(1-2):50–56. [PubMed] [Google Scholar]

[22] Cheng SD. Beijing: Piblikasyon Medikal Pèp la; 2006. Maladi Parkinson la. [Google Scholar]

[23] Yang T. Beijing: People's Medical Publishing House; 2010. Biyoloji selilè. [Google Scholar]

[24] Baba N, Koji T, Itoh M, et al. Chanjman resipwòk nan ekspresyon Bcl-2 ak Bax nan nwayo ipoglos la apre aksotomi nan rat adilt: patisipasyon posib nan endiksyon lanmò selil newòn. Sèvo Res. 1999;827(1-2):122–129. [PubMed] [Google Scholar]

[25] Zuccato C, Cattaneo E. Faktè nerotwofik ki sòti nan sèvo nan maladi neurodegenerative. Nat Rev Neurol. 2009;5(6):311–322. [PubMed] [Google Scholar]

[26] Peterziel H, Unsicker K, Krieglstein K. TGFbeta pwovoke GDNF reyaksyon nan newòn pa rekritman GFRalpha1 nan manbràn plasma a. J Cell Biol. 2002;159(1):157–167. [Atik PMC gratis] [PubMed] [Google Scholar]

[27] Hong M, Mukhida K, Mendez I. GDNF terapi pou maladi Parkinson la. Ekspè Rev Neurother. 2008;8(7):1125–1139. [PubMed] [Google Scholar]

[28] Chaturvedi RK, Shukla S, Seth K, et al. Faktè kwasans nè ogmante siviv nandopaminèjikgrèf, sove newòn dopaminergic nwal yo, epi retabli defisi fonksyonèl nan yon modèl rat nan maladi Parkinson la. Neurosci Lett. 2006;398(1-2):44–49. [PubMed] [Google Scholar]

[29] Kavanagh ET, Loughlin JP, Herbert KR, et al. Fonksyonalite selil PC12 ki pwoteje NGF apre ekspoze a 6-idoksidopamin. Biochem Biophys Res Commun. 2006;351(4):890–895. [PubMed] [Google Scholar]

[30] Baquet ZC, Bickford PC, Jones KR. Faktè neurotrophic ki sòti nan sèvo obligatwa pou etabli kantite apwopriyedopaminèjiknewòn nan substantia nigra pars compacta. J Neurosci. 2005;25(26):6251–6259. [Atik PMC gratis] [PubMed] [Google Scholar]

[31] Hung SY, Liou HC, Fu WM. Mekanis aksyon heme oksijenaz-1 enplike nan amelyorasyon ekspresyon faktè nerotwofik. Nerofarmakoloji. 2010;58(2):321–329. [PubMed] [Google Scholar]

[32] Duarte EP, Curcio M, Canzoniero LM, et al. Neuroprotection pa GDNF nan sèvo ischemic. Faktè kwasans. 2012;30(4):242–257. [PubMed] [Google Scholar]

[33] Ministè Syans ak Teknoloji nan Repiblik Pèp la nan Lachin. Sijesyon Gid pou Swen ak Itilizasyon Bèt Laboratwa yo. 2006 septanm 30; [Google Scholar]