Selil TH17 Imèn yo angaje Gasdermin E porositë pou libere IL-1 sou Aktivasyon Enflamasome NLRP3

Li te montre ke repons iminitè natirèl yo ka adopte pwopriyete adaptasyon tankou memwa. Si selil T yo itilize chemen siyal iminitè natirèl yo pou divèsifye repètwa fonksyon efèktè yo pa konnen. Gasdermin E (GSDME) se yon molekil manbràn ki fòme pò ki montre yo egzekite lanmò selil piroptotik e konsa sèvi kòm yon pòs potansyèl kansè. Nan etid sa a, nou montre ke selil T imen yo eksprime GSDME epi, etonanman, ekspresyon sa a asosye ak viabilite dirab ak repurpose pou liberasyon alarmin interleukin (IL)-1 . Pwopriyete sa a te limite nan yon ti gwoup moun k ap ede moun tip 17 selil T ki gen espesifik pou Candida albicans epi ki te reglemante pa yon enflamasome NLRP3 ki genyen ant selil T ki genyen ladan li, ak angajman li nan yon kaspas pwoteolitik siksesif kaspas-8, kaspas{{6. }}, ak GSDME klivaj apre eksitasyon reseptè selil T ak kalsyòm ki gen lisans spirasyon calpain nan fòm pro-IL-1 la. Rezilta nou yo endike ke fòmasyon pò GSDME nan selil T yo se yon mekanis nan liberasyon cytokine ki pa konvansyonèl yo. Konklizyon sa a divèsifye konpreyansyon nou sou repètwa fonksyonèl ak ekipman mekanik nan selil T epi li gen enplikasyon pou iminite antifonjik.

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

Selil T asistan yo (selil TH) yo se enactors enpòtan nan repons efèktè antijèn espesifik atravè sekresyon sitokin diferan yo. Selil Helper tip 17 T (selil TH17), an patikilye, yo rekonèt pou fonksyon antifonjik yo atravè sekresyon cytokine siyati IL-17A yo, ki reglemante pa faktè transkripsyon RAR ki gen rapò ak reseptè òfelen (ROR)- t1. Yo se tou koupab prensipal yo nan patojèn nan maladi otoiminitè2. TH17 selil yo te deja rekonèt yo montre eterojenite fonksyonèl3. Fonksyon pro- oswa anti-enflamatwa yo egzèse atravè ko-ekspresyon diferans IL-17 ak swa entèferon (IFN)- oswa IL-10, respektivman 4-7. An jeneral, sa a te fòme konsèp nan dualism selil TH17 e li te ankouraje envestigasyon sou siyal yo ak sib molekilè ki kontwole dikotomi ki genyen ant de rezilta selil fonksyonèl TH17 pou aplikasyon ki ka geri ou3,4,8,9. Sepandan, yon konpreyansyon pwofon sou idantite ak mekanistik baz patojèn kont destinasyon selil TH17 patojèn yo rete flotant. Lòt mekanis efèktè ki poko jwenn ki ale pi lwen pase pwodiksyon IL-17 ta ka opere tou nan selil TH17 ki gen espesifikasyon sib antifonjik oswa anti-bakteri. IL-1 sitokin, ki IL-1 ak IL{-1 reprezante manm ki pi enpòtan yo, gen yon gwo efè enflamatwa. Lè yo lage nan selil ki prezante antijèn yo (APCs), yo pa sèlman pwovoke repons enflamatwa natirèl yo rapid, men tou, yo òkestre iminite adaptasyon lè yo ankouraje polarizasyon selil TH17 ak patojèn selil T sou lyezon nan reseptè IL-1R1 pataje yo 4,10,11. . Priming selil TH17 endepandan IL-1-, ki te deja dekri tou, rezilta nan pwodiksyon selil anti-enflamatwa TH174. Se poutèt sa IL-1 ki soti nan sous selil natirèl yo sèvi kòm yon faktè switch pou dikotomi desten selil TH17 pro kont enflamatwa. Kontrèman ak pifò lòt sitokin, IL-1 sitokin manke yon peptide siyal epi se poutèt sa yo sekrete pa yon mekanis ki pa konvansyonèl, retikul andoplasmik (ER)-Golgi-endepandan.

Pro-IL-1 mande klivaj anzimatik anvan yo lage nan espas ekstraselilè ak angajman reseptè li yo. Enflamasome NLRP3 a se yon konplèks pwoteyin sitosol multimerik ki rasanble enfeksyon mikwòb ak domaj selilè epi li rekrite kaspas-1 pou klivaj pro-IL-1 ki vin apre12. Sòti IL-1 mande tou kaspas-1-gaz dermin D (GSDMD) klivaj ak fòmasyon pò nan yon pwosesis ki rele piroptoz, yon fòm enflamatwa lanmò selil13,14. IL-1 , nan lòt men an, yo panse ke yo trete poukont li nan enflamasome NLRP3 la atravè pòs regilasyon ki toujou mal konprann10. Malgre chemen sa yo konplètman diferan pou spirasyon ak liberasyon IL-1 ak IL{-1, tou de sitokin yo ansanm pwodui ansanm pa selil nan sistèm iminitè natirèl la, ki montre egzistans la ki poko idantifye. wout ko-regilasyon. Nan etid sa a, nou montre ke yon ti gwoup selil TH17 imen angaje yon kaskad siyal NLRP3-depandan pou pwovoke fòmasyon pò manbràn pa GSDME, ki sèvi ak liberasyon otokrin IL-1. Konklizyon sa a revele yon mòd ki pa konvansyonèl nan sekresyon cytokine pa selil T imen yo e konsa divèsifye repètwa fonksyonèl ak mekanis selil T yo.

benefis cistanche pou gason-ranfòse sistèm iminitè

Rezilta yo

Pwodiksyon IL-1 se yon karakteristik selil TH imen yo

Pou mennen ankèt sou etewojenite selil TH17 imen an ak revele fonksyon diferan ak kontwòl molekilè yo, nou te fè yon sèl selil RNA-sekans (scRNA-seq) nan selil aktive TH17 imen, ki te izole ansyen vivo nan san periferik. ekspresyon inik yo nan makè sifas reseptè chemokine15. Analiz eksplorasyon pa inifòm manifoul apwoksimasyon ak pwojeksyon (UMAP) ak Leiden clustering nan tout selil TH17 idantifye sis grap endividyèl (Fig. 1a). Yon popilasyon distenk ak ra (6%) nan IL1A-eksprime selil TH17 te selektivman rich nan gwoup 1 (Fig. 1a, b). Konparezon tout jèn nan gwoup 1 ak tout lòt grap yo te revele IL1A siyifikativman regilasyon (Tablo siplemantè 1). Sa a te inatandi paske IL-1 pa konsidere kòm ki fè pati repètwa cytokine efèktè kanonik selil T yo, men pito reprezante yon siyal danje natirèl16. IL1A pa t ', sepandan, nan mitan tèt yo diferan eksprime jèn (DEGs) nan gwoup 1, ki te nesesite yon estrateji rechèch pi fon demaske regilasyon enpòtan li yo nan yon subpopulation nan selil TH17 (figi siplemantè 1). Nan nivo pwoteyin, klonaj selil TH17 yo separe tou an diferan IL-1 + ak IL{-1 - klonaj selil T, kidonk sipòte etewojenite ekspresyon pwoteyin IL{-1 nan nivo selil sèl nan. popilasyon selil TH17 la (figi 1c). Pou konpare ekspresyon IL1A pa selil TH17 ak sa ki nan lòt kalite selil iminitè yo, patikilyèman deja rapòte pwodiktè bon fidèl IL-1, nou te entèwoje plizyè seri done scRNA-seq piblik nan selil mononikleyè san periferik moun (PBMCs). Etonan, sa a pa t revele okenn ekspresyon IL1A nan divès kalite selil iminitè nan PBMCs repoze, ki gen ladan selil T, selil B, selil asasen natirèl (NK), selil NKT, monosit, ak selil dendritik (figi siplemantè 2a, b). Menm monosit pa t 'montre okenn ekspresyon IL1A nan nivo selil sèl, sof si yon estimilis espesifik IL1A-pwovoke, espesyalman lipopolysaccharide (LPS), te aplike nan selil sa yo (Siplemantè Fig. 2c, d), ki demaske IL1A-pwodwi kapasite yo. ak asosyasyon ekspresyon IL1A ak yon repons iminitè natirèl enflamatwa kontinyèl (figi siplemantè 2e). Li enteresan ke yon konparezon transcriptomic yon sèl-selil nan DEG yo ant IL1A + ak IL1A- selil ki soti nan selil TH17 kont monosit te demontre diman okenn sipèpoze nan ko-ekspresyon jèn (IL1A ak CCL3), ki te trè sigjere nan yon mòd diferan nan règleman IL1A nan T. selil kont monosit (Fig. 1d). Ansanm, rezilta sa yo revele egzistans yon sou-popilasyon diferan nan selil ki eksprime IL-1 -nan sous-ansanm selil TH17 la.

Sous-ansanm selil TH17 ki pwodui IL-1 -pro-enflamatwa

Pou eksplore enpòtans fizyolojik ekspresyon IL1A nan selil TH17 imen, nou te fè yon konparezon transcriptomic san patipri nan IL1A + ak IL1A-TH17 selil apre scRNA-seq. Gene set anrichment analysis (GSEA) pou jèn ki coexpressed ak IL1A nan selil TH17, osi byen ke analiz anrichisman lè l sèvi avèk DEG, revele yon asosyasyon frapan nan IL1A ak deklanchman selil T ak pwopagasyon apre yon entèwogasyon san patipri nan tout tèm ontoloji jèn ki disponib (GO). Figi 2a ak Figi siplemantè 3). Konklizyon sa a te defye wòl IL-1 ki te deja asiyen nan senesans ak lanmò selil nan nouvo kontèks selil T yo17. Analiz anrichisman an te revele tou yon surreprezantasyon fò pou plizyè tèm GO ki gen rapò ak 'enflamasyon', sijere ke ekspresyon IL1A pa selil TH17 kontribye nan yon idantite selil patojèn T ak wòl nan maladi enflamatwa (Fig. 2a). Lide sa a te sipòte pa upregulation nan jèn anote ak tèm GO 'repons selilè a interleukin-1', lè nou konsidere efè switch pro-enflamatwa IL-1 te rapòte deja sou fonksyonalite selil TH17 an jeneral4 ak efè sipresyon. nan IL-1 otokrin sou ekspresyon IL-10 (Done Pwolonje Fig. 1a–c). Yon konparezon dirèk IL1A + kont IL1A-TH17 selil atravè tout grap demontre ke IL1A + TH17 selil parèt siyifikativman amelyore proinflammatory, men redwi anti-enflamatwa, siyati (figi 2b) 7. Anplis de sa, gwoup 1, ki anrichi pou IL1A + TH17 selil, te siyifikativman plis pro-enflamatwa ak mwens anti-enflamatwa pase tout lòt senk grap, jan sa endike nan GSEA (Fig. 2b). Li se yon enterè ke yon konparezon transcriptomic esansyèl nan pro- kont anti-enflamatwa TH17 selil revele IL1A nan menm gen nan mitan tèt yo upregulated jèn yo nan proinflammatory TH17 selil subset (Fig. 2c, d ak Pwolonje Done Fig. 2). IL10, olye de sa, te trè downregulated, jan yo espere dapre rapò anvan yo4,7. Sa a korelasyon resipwòk nan ekspresyon IL{-1 ak IL{-10 pa selil TH17 yo te obsève tou nan nivo pwoteyin pa sikometri koule (figi 2e). Analiz anrichisman ak DEG yo te demontre twòp reprezantasyon KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) chemen pou maladi otoiminitè tankou 'atrit rimatoyid' ak 'maladi entesten enflamatwa' (Fig. 2f), ki sipòte nati pro-enflamatwa TH17 ki eksprime IL1A. sou-ansanm selilè. An reyalite, pasyan ki soufri atrit jivenil idyopatik (JIA), yon fòm trè enflamatwa nan atrit rimatoyid nan timoun ki gen patojèn yo te deja lye ak IL-1 natirèl ak IL-1 18,19, revele siyifikativman ak fòtman. ekspresyon IL-1 ki wo pa selil IL-17+ TH konpare ak selil IL-17+ TH ki soti nan san kontwòl ki an sante (figi 2g). Pa gen okenn ogmantasyon IFN-yo obsève nan selil IL-17+ TH ki soti nan san pasyan ki gen JIA konpare ak san donatè kontwòl, olye de sa, malgre asosyasyon an te rapòte deja nan IFN- ak patojèn selil TH17 (Fig. 2g, panèl adwat) 4. Anplis de sa, analiz de likid synovial san matche te demontre frekans trè wo nan selil IL-1 + TH, ki sijere ke selil T yo, pi lwen pase selil natirèl yo, ta ka reprezante tou yon sous selilè enpòtan IL{{74} ki asosye ak maladi a. } nan sit la nan enflamasyon.

Benefis cistanche tubulosa-ranfòse sistèm iminitè

Ekspresyon IL-1 kontwole pa yon pwogram TH17

Pou mennen ankèt sou si ekspresyon IL-1 se yon pwopriyete jeneral selil T yo, nou anrichi gwoup selil TH endividyèl yo ki soti nan PBMC yo dapre ekspresyon diferan yo nan reseptè chemokine yo (Done pwolonje Fig. 3) epi nou konpare IL-1 yo. sekresyon. IL-1 te espesyalman pwodwi pa sous-ansanm selil TH17 men se pa sou-ansanm selil TH1, TH2 selil, oswa selil T regilasyon (selil Treg) (figi 3a-c). Enpresyonan, nivo sekresyon li yo sou eksitasyon ak anti-CD3 ak anti-CD28 monoklonal antikò matche ak monosit imen ankouraje ak LPS ak nigericin, ki endike ke selil imen TH17, malgre idantite iminitè adaptatif yo, sèvi kòm yon sous prensipal nan siyal danje IL la. -1 (Fig. 3a). Ekspresyon pwoteyin intraselilè IL-1 te absan nan selil TH ki te fèk izole men yo te ka endwi nan deklanchman reseptè selil T (TCR), ak siyifikatif anrichisman nan selil TH17 konpare ak selil TH TH1, TH2 ak Treg ki anrichi selil (Fig. 3b). ,c). Konklizyon sa yo sanble yo espesifik pou sistèm iminitè imen an paske rapò anvan yo te eskli pwodiksyon IL-1 pa selil T sourit yo16. Asosyasyon inik IL-1 ak sous-ansanm selil TH17 te pouse nou diseke mekanikman règleman sitokin sa a. Li enteresan ke ekspresyon IL-1 te redwi sou anpèchman espesifik nan ROR-t, faktè a transkripsyon mèt nan selil TH17 (Fig. 3d, e) 1. Done sa yo an liy ak prezans nan sit obligatwa pou ROR- t ak ROR- nan rejyon pwomotè IL1A ak amelyore (Done pwolonje Fig. 4a, b). Sò a nan yon gwoup selil patikilye TH detèmine pa distenk mikwo-anviwònman sitokin polarize pandan eksitasyon selil T nayif. Nou te obsève pi wo ekspresyon intraselilè ak sekresyon IL-1 sou priming selil T nayif nan kondisyon ki polarize selil TH17 (IL-1 ak transfòmasyon faktè kwasans (TGF)-) (Fig. 3f, g). Tretman sèl ak IL-1 oswa TGF- pou kont li pa t ', sepandan, mennen nan ekspresyon IL-1 enpòtan nan selil T nayif, ensiste sou efè sinèrjik nan cytokin yo konbinatory TH17-priming selil yo sou endiksyon de novo nan IL-1 (figi siplemantè 4). Kontrèman, kondisyon priming selil TH1 (IL{-12) ak TH2 (IL{-4) pa t chanje siyifikativman sekresyon IL{-1 konpare ak sa ki anba eksitasyon nan absans sitokin polarize yo. Ansanm, rezilta sa yo demontre ke selil T nayif yo jwenn kapasite pou pwodui IL-1 atravè sitokin TH17 ki polarize selil yo. Selil TH memwa yo te montre tou yon siyifikatif plis regilasyon nan IL-1 sitokin efèktè yo nan IL-1 ak TGF-mikroenvironments (Fig. 3h).

Figi 1|Yon gwoup diferan nan selil TH17 imen yo ka eksprime IL-1.

Idantite sou-ansanm selil TH karakterize tou pa pwopriyete migrasyon diferan, ki asosye ak ekspresyon diferans reseptè chemokine20. Nou te obsève ke ekspresyon IL-1 te rich nan CCR6+ men se pa selil CCR6-T epi li te redwi nan selil CXCR3-T konpare ak selil T CXCR3+, byenke pa te gen okenn diferans nan IL-1 ekspresyon ant CCR4+ ak selil CCR4-T (figi 3i). Done sa yo demontre ke selil ki pwodui IL-1 -yo montre modèl migrasyon yo te deja asiyen nan selil ki pwodui IL-17-15. Ansanm, done sa yo toujou montre ke IL-1 se yon fonksyon inik nan selil TH17 imen yo.

Figi 2|IL-1 ki pwodui selil TH17 yo pro-enflamatwa

Figi 3|Pwodiksyon IL-1 selil T yo limite nan sò selil TH17 la

Calpain se yon kondisyon pou selil TH17 sekresyon IL-1

Pou eksplore mekanis sekresyon IL-1, nou te trete selil TH17 yo ak inibitè ekspòtasyon pwoteyin brefeldin A (BFA) epi nou te jwenn ke sekresyon IL-1 pa te afekte, kontrèman ak sitokin konvansyonèl yo, tankou. kòm IL-17A (Done Pwolonje Fig. 5a–c). Sa a sipòte egzistans la nan yon chemen ki pa konvansyonèl ER-Golgi-endepandan pou sekresyon IL-1 pa selil T epi li an liy ak rapò anvan yo pou kalite selil natirèl21,22. Yon pwopriyete inik ki te deja asiyen nan IL-1 se lokalizasyon similtane li nan sitoplasm nan ak manbràn plasma a23. Nou te jwenn, sepandan, ke selil TH17, kontrèman ak monosit, pa t 'montre manbràn IL-1 (Done pwolonje Fig. 5d). Malgre ke klivaj pro-IL-1 obligatwa pou jenere IL-1 ekstraselilè byoaktif, IL-1 yo konnen yo lage pasifman sou lanmò selil la epi li egzèse potansyèl bioaktif li apre li fin konekte ak IL{ {19}}RI nan fòm ki pa klivaj oswa klivaj li24. Pou detèmine si pro-IL-1 sibi pwosesis entraselilè pou lage kontwole pa selil T imen yo, nou evalye fòm plen longè ak matirite IL-1 nan supernatant selil TH17 aktive yo. Pou eskli nenpòt monosit ki kontamine kòm yon sous potansyèl sekrete IL-1, nou te pwodwi klon selil TH17 sou yon peryòd de 2 semèn epi restimule yo ak anti-CD3 ak anti-CD28 antikò monoklonal pou yon lòt 5 d anvan imunoblot. Nan tout sis klon selil TH17 yo te teste, nou te jwenn anrichisman preferansyèl nan fòm IL-1 klòch nan sipènatant kilti yo (Fig. 4a). Lysates selil TH17, nan kontras, te montre anrichisman preferansyèl nan fòm pro-IL -1 ki pa kliche a, jan yo espere (figi siplemantè 5a). Rezilta sa yo eskli lage pasif pro-IL-1 pandan nekwoz selilè kòm modalités defo IL-1 sòti nan selil T epi, olye de sa, sijere ke selil TH17 imen yo dwe posede machin molekilè pou pro-IL{{ 46}} klivaj pou pèmèt lage kontwole ekstraselilè molekil bioaktif sa a pa selil T solid, kontrèman ak selil natirèl yo (figi siplemantè 5b). Sa a pa, sepandan, eskli yon kontribisyon adisyonèl nan nekwoz selil T nan liberasyon an nan pro-fòm byoaktif nan IL -1 (figi siplemantè 5a). Pwosesis Pro-IL-1 nan sit klivaj diferan ka katalize pa plizyè proteaz17,25,26. Calpain se yon proteaz cysteine ​​ki depann de kalsyòm ki ka bay fragman IL-1 p17 ki gen matirite 26, ke nou idantifye sa a. Nou detekte aktivite calpain nan selil TH17. Li te ogmante sou aktivasyon ak anti-CD3 ak anti-CD28 monoklonal antikò (figi 4b). Sekresyon IL-1 selil TH17 te depann de aktivite calpain nan selil T paske anpèchman famasi calpain diminye sekresyon IL-1 pa selil TH17 aktive nan espas ekstraselilè a nan yon fason ki depann de dòz la (Fig. 4c) . An korespondan, anpèchman calpain te lakòz akimilasyon entraselilè pro-IL -1 (Fig. 4d). Pou konfime depandans sekresyon IL-1 sou calpain, nou menm tou nou te elimine jenetikman kalpain nan selil TH17 imen yo lè l sèvi avèk gwoup repetisyon palindromik ki entèpase regilyèman (CRISPR)–Cas9. Sa a te revele yon wòl pou CAPN2, men se pa CAPN1, nan sekresyon IL-1 pa selil imen TH17 (figi 4e). Kontrèman, LPS-/nigericin-induit IL -1 sekresyon pa monosit pa t 'depandan sou calpain (Fig. 4f). Done sa yo te konsistan avèk ekspresyon preferansyèl CAPN2 men se pa CAPN1 pa gwoup selil T imen kontrèman ak selil dendritik, ki te montre yon modèl ekspresyon jèn calpain ranvèse (figi siplemantè 6). Sekresyon IL-1 nan selil TH17 ogmante sou akimilasyon kalsyòm intraselilè ak anpèchman sarco-/ER Ca2+ ATPaz ak thapsigargin (Fig. 4g) epi diminye sou chelation kalsyòm ekstraselilè ak (ethylenebis(oxynitride) )tetra-acetate (EGTA) (Fig. 4h), ki konsistan avèk fonksyon kalsyòm ki depann de calpain ak sekresyon IL-1 ki depann de TCR26. Ansanm, done sa yo te demontre aktivite pwoteolitik kalsyòm ki depann de proteaz calpain la se yon kondisyon pou sekresyon IL-1 ki pa konvansyonèl pa selil TH17 imen aktive TCR yo.

Sekresyon IL-1 pa selil TH17 reglemante pa aktivasyon enflamasome NLRP3

Malgre wòl esansyèl calpain nan pro-IL-1 spirasyon, mekanis ki mennen ale nan sòti ekstraselilè IL-1 te rete enkoni epi se poutèt sa yo te adrese apre. Te deja lage IL-1 ekstraselilè pa selil myeloid ki asosye ak aktivasyon enflamasome NLRP3, aktivite ki pa anzimatik kaspas-1, ak liberasyon IL-1 16,27. Nou te teste si selil TH17 imen yo te posede echafodaj molekilè nan NLRP3 inflammasome a epi yo te jwenn ekspresyon pwoteyin nan NLRP3 ak molekil adaptè a, pwoteyin ki sanble ak apoptoz ki asosye ak speck ki gen yon CARD (ASC), nan selil TH17 imen (Done pwolonje Fig. 6a, b). Nou te obsève deklanchman inflammasome kontinyèl nan selil TH17 aktive TCR pa idantifikasyon tach ASC lè l sèvi avèk teknoloji ImageStream (Fig. 5a, b) 28,29. Sezisman, ogmante frekans specks ASC yo te inikman limite nan selil TH17 (figi 5b, agoch). Selil TH17 menm apwoksimatif fòmasyon ASC-speck nan macrophages LPS- ak ATP-stimile (figi 5b, adwat). Sou-ansanm selil TH1 ak TH2, nan kontras, parèt nivo ASC-speck background (figi 5b, agoch). Anplis, ASC-speck ak fòmasyon NLRP3-speck yo te konplètman anile nan prezans espesifik NLRP3 inflammasome inhibitor MCC950, pwouve egzistans lan nan deklanchman enflamasome NLRP3 kontinyèl nan selil TH17 (figi 5b, agoch ​​ak pwolonje done Fig. 6c). Angajman selektif NLRP3 inflammasome a pa selil TH17 te sipòte plis pa endiksyon an fò nan transkripsyon NLRP3 sou eksitasyon selil T nan prezans TH17 selil-polarize cytokines IL -1 ak TGF- (Fig. 5c). Sa ki enpòtan, sekresyon IL-1 pa selil TH17 yo te siyifikativman redwi pa anpèchman espesifik nan NLRP3 inflammasome a ak MCC950 (figi 5d), konsa demontre wòl nan kritik nan NLRP3 inflammasome nan sekresyon IL-1 pa selil TH17 imen yo. Caspase-1 se pwoteyin efèktè kanonik nan konplèks enflamasome NLRP330. Nou te obsève ekspresyon pro-caspase-1 nan selil TH17 imen aktive (figi 5e). Sepandan, kontrèman ak rezilta yo nan LPS- ak nigericin-stimile monosit, pa gen okenn kaspas cleaved -1 te detekte nan lisat selil imen TH17 (Fig. 5e). Obsèvasyon sa a te konfime pa absans kaspas-1 FLICA tach nan selil TH17 ki te ankouraje nan prezans oswa absans IL-1 ankouraje stimuli cytokine (Done pwolonje Fig. 7a-e). Nou te ekskli plis lage kaspase -1 pa ELISA apre eksitasyon selil TH17 ak anti-CD3 ak anti-CD28 monoklonal antikò pou 5 d (Fig. 5f). Menm nan prezans IL-1 estimilis IL-1 , sekresyon kaspas-1 pa t 'endwi e li te rete osi ba ke sa ki nan monosit repo (figi 5f). Anpèchman kaspase -1 ak Ac-YVAD-CMK pa redwi sekresyon IL-1 nan prezans oswa absans IL-1 endiksyon IL-1. Olye de sa, nou te obsève sekresyon IL -1 yon ti kras ki wo sou anpèchman kaspas -1 (figi siplemantè 7a, b). Sa ki enpòtan, selil TH17 yo pa t montre okenn chanjman nan sekresyon IL-1 sou CRISPR-Cas9-enjenieri rediksyon ekspresyon CASP1 (figi 5g). Nan liy ak absans kaspas bioaktif-1, nou pa t obsève okenn sekresyon IL-1 pa selil TH17 imen yo. Sa a te kontrèman ak ka a nan monosit, ki te demontre sekresyon IL-1-depandan kapasaz{-1 sou eksitasyon ak LPS ak ATP (Done pwolonje Fig. 7f). Anplis de sa, pa gen okenn IL intraselilè-1 ki te detekte oswa enduzib pa IL-1 -sitokin polarize nan selil TH17 oswa klonaj selil TH17 oswa detekte nan selil TH17 aktive pa analiz scRNA-seq (Done pwolonje Fig. 7g,h, mwen). Sa a te kontrèman ak konklizyon monosit yo, ki te ko-eksprime IL-1 ak IL{{-1 nan nivo sèl selil, ki konsistan avèk sekresyon yo sijere deja ak modèl koregulasyon sitatif tou de IL-1 cytokines (Done pwolonje Fig. 7g)16,27. An jeneral, done sa yo montre ke selil TH17 imen yo pwodui IL-1 poukont kaspas{-1 ak IL{-1, kontrèman ak monosit ak sipoze lòt selil iminitè natirèl yo, malgre patisipasyon klè nan enflamasome NLRP3 la.

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

Klike la a pou w wè pwodwi Cistanche Enhance Immunity

【Mande plis】 Imèl:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

IL-1a sòti selil TH17 atravè porositë GSDME

Gasdermins fè pati yon fanmi ki fèk idantifye molekil effector ki fòme pò ki pèmèt lage medyatè enflamatwa31. Analiz transcriptome nou an te revele yon regilasyon selektif nan ekspresyon GSDME nan proinflammatory IL-1 -stimile selil TH17, men pa gen okenn règleman sou nenpòt lòt manm nan fanmi an gastrin (Fig. 6a). Sa a te etone lè nou konsidere ke ekspresyon GSDME pa janm te rapòte nan selil T prensipal yo. Kontrèman, GSDMD, ki konnen yo dwe reglemante pa NLRP3 inflammasome a epi yo dwe yon sib nan caspase -1 (ref. 31), pa t 'upregulated, sipòte lide a nan siyal inflammasome NLRP3 non canonical. GSDME te deja montre yo fòme porositë manbràn nan selil iminitè natirèl ki ka sèvi kòm konduit pou liberasyon ekstraselilè alarmins ak kòmanse lanmò selil piroptotik menm jan ak GSDMD32. Pou teste asosyasyon GSDME ak sous-ansanm selil TH17 la, nou te evalye si TH17 selil polarize cytokins koregilasyon GSDME. Se sèlman konbinezon TGF- ak IL-1 (TH17), men se pa IL-12 (TH1) oswa IL-4 (TH2), ki ogmante nivo transkripsyon GSDME jan yo evalye transkripsyon ranvèse-kantitatif. PCR (RT-qPCR) (Fig. 6b). Sa a te sipòte pa egzistans la nan sit obligatwa putatif pou TH17 selil ki asosye faktè transkripsyon ROR- ak BATF (debaz leucine zip transkripsyon faktè, ATF-tankou) nan rejyon yo pwomotè nan GSDME (Done pwolonje Fig. 8a, b)33. Ekspresyon GSDMD, nan kontras, pa te reglemante pa cytokines selil T-polarizing (Siplemantè Fig. 8). Rezilta sa a te pouse nou evalye ekspresyon GSDME nan nivo pwoteyin nan selil TH17 imen yo. GSDME pro-fòm la te inducible sou aktivasyon TCR. GSDME pwoteyin endiksyon an repons a siyal iminitè adaptasyon sa a te inatandi, men plis sipòte pa egzistans la nan sit obligatwa sitatif nan faktè transkripsyon siyal TCR ki reponn tankou NFAT, FOS, JUN, ak RELA nan rejyon pwomotè GSDME (Done pwolonje Fig. 8a). ,b). GSDME te eksprime osi bonè ke lè 24 èdtan apre eksitasyon poliklonal. GSDME ki fòme pore N-tèminal clivé a te detekte nan pwen tan an reta, 3-4 d apre eksitasyon TCR nan selil TH17 (figi 6c). Tout longè GSDMD te pwovoke ansanm sou aktivasyon selil T. Kontrèman, pa gen okenn klivaj GSDMD yo te obsève, jan yo prevwa nan absans la nan sekresyon caspase-1 ak IL{-1, kite wòl nan GSDMD nan selil TH17 louvri pou plis analiz (Fig. 6c). Apre sa, nou te vize eksplore si wi ou non porositë GSDME yo sèvi kòm konduit pou liberasyon ekstraselilè IL-1 nan selil TH17 yo. Se poutèt sa, nou te elimine GSDME ak teknoloji CRISPR-Cas9 epi nou te kontwole lage IL-1 nan sipènatant la sou tan pa ELISA. Absans GSDME, men se pa GSDMD, siyifikativman anpeche selil TH17 lage IL -1 (figi 6d). Sa montre klèman ke fòmasyon pò GSDME sèvi kòm mekanis pou selil TH17 imen yo lage IL-1 pa konvansyonèl yo.

Figi 4|Calpain se yon avantou pou liberasyon IL-1 clivé pa selil TH17 imen.

Figi 5|Aktivasyon enflamasome NLRP3 pa konvansyonèl kontwole pwodiksyon IL-1 pa selil TH17 imen.

Caspase-8/3 GSDME klivaj kaspas la pèmèt sekresyon IL3-depandan NLRP-1

Apre sa, nou te eksplore posiblite pou kwaze mekanistik ant aktivasyon NLRP3 inflammasome ak klivaj GSDME nan selil TH17 imen yo. Caspase -3 dènyèman yo te montre kwoke GSDME, ki an vire se yon sib nan NLRP3 inflammasome interactor caspase -8 (ref. 34,35). Vreman vre, tou de pro-caspase-8 ak pro-caspase-3 yo te detekte nan selil TH17 yo. Nou te jwenn ke klivaj tou de caspases te fèt sou eksitasyon TCR ak anvan klivaj GSDME (Fig. 6e). Kontrèman, pa gen okenn pwodwi klip nan kaspas -8 ak kaspas -3 yo te detekte nan nigericin- ak LPS-stimile monosit (Fig. 6e). Pou etabli yon wòl kozativ pou kaspas sa yo nan klivaj GSDME ak sekresyon IL-1 pa selil T yo, nou te bloke kaspase-3 oswa aktivite kaspas-8 ak inibitè Z-DEVD. -FMK oswa Z-IETD-FMK, respektivman. Anpèchman aktivite kaspas-8 ak Z-IETD-FMK te anile klivaj kaspas sib en a-3, nan liy ak rapò anvan yo sou lòt kalite selil36. Tou de tretman yo redwi klivaj GSDME pandan y ap anile sekresyon IL-1 (figi 6f-i ak done pwolonje fig. 9a, b). Anpèchman caspase -1, olye de sa, pa te afekte caspase -3 oswa GSDME klivaj (figi siplemantè 9). Done sa yo montre klèman ke aks kaspas-8-caspase-3-GSDME te opere nan selil TH17 imen sou aktivasyon TCR e ke li kontwole sekresyon IL-1 nan selil sa yo. Pou finalman etabli lyen ki genyen ant kaskad klivaj pwoteolitik sa a ak inflammasome NLRP3 la, nou te aplike MCC950 nan estimile selil TH17, ki, tout bon, te pwodui yon rediksyon enpòtan nan caspase -3 ak klivaj GSDME nan jou 5 (Fig. 6f, g). ak Done Pwolonje Fig. 9c). Men, yon rediksyon nan klivaj caspase-8 te mwens pwononse nan menm pwen analiz la, ki te nan liy ak fenèt tan deklanchman li yo pi bonè (figi 6e, f). An rezime, anpèchman vize chak jwè molekilè endividyèl etabli kaspas NLRP3 inflammasome-caspase-8-caspase{-3-GSDME kòm chemen pwoteolitik ki enplike nan liberasyon ekstraselilè IL-1 byoaktif pa imen. Selil TH17.

Figi 6|Kaskad klivaj NLRP3–casp8/3 mennen nan porositë GSDME pou lage IL-1

Selil TH17 yo rezistan nan piroptoz malgre porositë GSDME

Fòmasyon pò Gasdermin te deja asosye ak lanmò selil piroptotik nan yon varyete kalite selil13,14,37. Nou te jwenn ekspresyon inite N-GSDME ki fòme pò nan manbràn plasma a, men se pa cytosol la, ki sipòte fonksyon GSDME ki fòme pò nan selil T (Fig. 7a). Surprenante, yon konparezon transcriptomic nan GSDME-entak ak CRISPR-Cas9 jenetik modifye, GSDME-defisyan selil TH17 imen pa GSEA eskli diferans ki genyen nan divès fòm lanmò selil; sepandan, miyò, li revele ke pwosesis ki afekte yo ak chemen yo nan selil TH17 GSDME-defisyan yo te sitou ki gen rapò ak jèn kontwole transpò transmembrane, nan liy ak kondit yo ki fòme pa ki fòme pa N-GSDME (figi 7b ak Figi siplemantè 10). . Yon konparezon transcriptomic sèl selil selil TH17 endividyèl yo chwazi pou prezans kont absans ekspresyon GSDME sipòte viabilite selil TH17 ki eksprime GSDME pa anrichisman jèn yo pou pwopagasyon (figi 7c). Nou finalman valide detèminasyon selil TH17 imen GSDME-eksprime nan piroptoz lè nou demontre absans nenpòt diferans nan laktat dehydrogenase (LDH) atravè CRISPR-Cas9 jenetik modifye, GSDME-defisyan ak GSDME-entak selil TH17 sou eksitasyon TCR (figi). . 7d). Apre sa, nou te konpare IL-1 + ak IL{-1 - TH17 selil yo anrapò ak viabilite yo ak potansyèl pwopagasyon yo, paske selil TH17 yo pa t montre okenn ekspresyon sifas IL{-1 kontrèman ak IL{{36} }}pwodwi selil lòt liy selilè, tankou monosit (Done Pwolonje Fig. 5d). Konparezon IL-1 + ak IL-1 - TH17 selil yo te mande pou etabli yon tès sekresyon IL-1 -endijèn, ki te pèmèt izolasyon IL-1 + -selil TH17 solid pa kaptire sekresyon yo. otokrin IL-1 nan sifas selil la apre phorbol-12-miristat-13-acetate (PMA) ak eksitasyon ionomisin. Pa gen okenn diferans nan efikasite klonaj selil TH17 ki te depoze kòm selil sèl apre klasman pou prezans oswa absans sifas IL -1 yo te obsève (figi siplemantè 11). Konklizyon sa a ekskli diferans ki genyen nan rantabilite ak ekspansyon IL-1 + ak IL{-1 - TH17 selil nan nivo selil sèl. Nou te rklone plis klon TH17 ki te teste, ki baze sou divès degre ekspresyon IL-1 intraselilè, epi nou te kontwole efikasite klonaj respektif yo. Si GSDME-pèmèt IL-1 lage te asosye ak lanmò selil piroptotik, Lè sa a, yon korelasyon envès ant ekspresyon IL{-1 nan klonaj selil T ak frekans klon k ap grandi sou klonaj endividyèl yo (efikasite klonaj) te dwe dwe espere. Sepandan, efikasite reklonaj selil T a te endepandan de nivo ekspresyon IL-1 nan klon selil TH17 yo e li te pito menm jan ak klon selil T kontwòl, yo te chwazi sou baz diferan nivo ekspresyon IFN- nan absans la. IL-1 ko-ekspresyon (Fig. 7e). Sa ki enpòtan, klonaj selil IL-1 + TH17 kontinye re-eksprime IL-1 sou sik restimulasyon TCR repetitif (figi 7f). Kidonk, yon pèt selil ki asosye ak lanmò selil ki pwodui IL-1 -nan popilasyon selil T klonal respektif yo sou restimulasyon yo te eskli. Miyò, konklizyon sa a endike yon memwa cytokine selil T pou IL-1 endivizib. Nou te fè yon konparezon transcriptomic ant selil IL-1 + ak IL-1 - TH17 ak obsève menm pi gwo anrichisman pou seri jèn pwopagasyon nan IL-1 + konpare ak IL-1 - selil TH17. klon (figi 7g). Konparezon transcriptomic yon sèl selil IL1A + kont IL1A-TH17 selil yo konfime anrichisman transcriptomik la pou pwopagasyon. Sa a te ka a tou pou konparezon Leiden grap 1, ki te rich pou IL1A-eksprime selil TH17 ak siyati enflamatwa, ak tout lòt grap (figi 7h). Selil IL-1 + TH17 yo montre pi wo ekspresyon Ki67 dapre analiz sitometrik koule pase IL-1 - tokay yo apre 5 d eksitasyon poliklonal (figi 7i), ankò sipòte lide ke nan selil TH17 imen IL{ {96}} sòti pa asosye ak lanmò selil, kontrèman ak selil natirèl yo. Kimilatif, done sa yo eskli yon asosyasyon pwodiksyon IL-1 ak lanmò selil (piroptotik) menm nan nivo sèl selil epi demontre ke selil T imen yo gen yon memwa sitokin pou pwodiksyon IL-1 sou restimulasyon TCR repetitif. .

IL-1 ki sòti nan selil T kontribye nan defans lame antifonjik

Konklizyon nou an ke selil TH17 imen yo pwodui siyal danje natirèl IL-1 ak repurpose machin siyal natirèl pou lage ekstraselilè li yo efase distenksyon repons iminitè adaptatif kont natirèl e konsa pwolonje repètwa fonksyonèl jeneral selil T yo. Yon karakteristik kritik ki rete karakteristik repons memwa adaptasyon se spesifik antijèn ki gen TCR. Se poutèt sa, nou te envestige si kapasite selil TH17 imen yo pou pwodui IL-1 limite a espesifik antijèn espesifik. Selil TH17 yo te deja montre yo trè rich nan selil espesifik pou C. albicans ak Staphylococcus aureus antigens15. Li enteresan ke nou te obsève siyifikativman pi gwo IL-1 ekspresyon ak sekresyon pa C. albicans-espesifik pase pa S. aureus-espesifik klon selil TH17 (Fig. 8a). Apre sa, nou te envestige si selil T nayif ki rekonèt C. albicans olye ke S. aureus ta dwe prepare pa antijèn parèy yo pou yo pwodwi IL-1 selektif. Selil TH nayif (CD45RA+ CCR7+) yo te kokilti ak monosit otològ enpulsyonèl ak chalè-inaktive C. albicans oswa S. aureus antijèn oswa stimulé poliklonalman ak anti-CD3 ak anti-CD28 antikò monoklonal, ak Lè sa a, klonaj nan 7 jou. ak selil alojenik feeder. Tout klon yo te restimulated nan jou 14 ak anti-CD3 ak anti-CD28 monoklonal antikò pou 5 d pou ELISA nan supernatant yo. Enpresyonan, nou te jwenn ke C. albicans, men se pa S. aureus oswa aktivasyon TCR poliklonal, pwovoke de novo IL-1 pwodiksyon nan selil TH17 moun diferansye (Fig. 8b). Se poutèt sa, nou konbine rapèl ex vivo ak apwòch priming in vitro etabli ke kapasite nan pwodwi IL-1 limite nan selil T ak espesifik TCR pou C. albicans. Nou finalman teste si kapasite diferan nan selil TH17 espesifik C. albicans yo pou pwodui IL-1 asosye ak yon wòl fizyolojik nan defans lame antifonjik. Pou sa, nou kokultur monosit imen ak supernatant nan selil imen TH17 apre restimulation poliklonal yo ak anti-CD3 ak anti-CD28 antikò monoklonal pou 5 d. Nou obsève siyifikativman ogmante fagositoz nan FITC ki make C. albicans pa monosit lè l sèvi avèk flow cytometry. Sa ki enpòtan, ogmante fagositoz C. albicans pa supernatant selil TH17 la te depann de IL-1 jan yo montre nan anilasyon siyifikatif fagositoz C. albicans si supernatant selil TH17 yo te san IL-1 apre imunoabsorpsyon oswa CRISPR-Cas{ {46}}vize IL-1 rediksyon nan selil TH17 (figi 8c). D 'selil vivan an vitro plis kowopere ogmante absorption ak eliminasyon nan C. albicans pa monosit nan prezans IL-1 -ki gen supernatant selil TH17 (figi 8d, done videyo). Ansanm, rezilta sa yo sijere ke selil TH17 yo elimine enfeksyon C. albicans pa sèlman atravè pwodiksyon IL-17, jan yo te panse deja38, men tou, nan yon limit enpòtan, atravè kapasite yon sous-ensemble selil inik TH17 pou pwodwi IL-1 . An jeneral, rezilta yo idantifye fòmasyon pò GSDME nan selil T kòm yon estrateji sòti pou IL-1 pro-enflamatwa ak règleman GSDME pa aks NLRP3 inflammasome-caspase-8-caspase-3 revele yon nouvo. mòd nan sekresyon cytokine selil T ki asosye ak yon sou-ansanm pro-enflamatwa nan selil TH17 ak espesifik antifonjik TCR. Sa a bay nouvo sib terapetik pou modulasyon selil TH17 imen ki enpòtan pou defans lame antifonjik epi ki ka patisipe tou nan patojenèz maladi enflamatwa kwonik.

cistanche tubulosa-amelyore sistèm iminitè

Diskisyon

An rezime, konklizyon nou yo revele yon chemen byolojik ki te deja pa konnen ak yon mòd sekresyon cytokine nan selil T imen ki divèsifye fonksyonalite jeneral popilasyon selil T yo. Nou te jwenn ekspresyon IL-1 inikman limite nan sò selil TH17 la, jan sa pwouve pa ko-ekspresyon li yo ak IL-17A, règleman pa ROR-t, endiksyon pa sitokin TH17 IL{{. 6}} ak TGF- ak pa pwofil ekspresyon reseptè chemokine ki asosye ak selil TH17 li yo. Konklizyon sa yo konsistan avèk egzistans sit obligatwa pou ROR-t ak ROR- nan rejyon IL1Α enhancer ak pwomotè jan sa dekri nan etid prezan an ak sit yo te deja rapòte ROR-t-obligatwa nan rejyon pwomotè NLRP339. Nou te obsève plis ke TH17 selil-priming cytokines ogmante ekspresyon NLRP3 ak GSDME. An konsekans, regilatè mèt sò selil TH17, tankou ROR- ak BATF, osi byen ke plizyè faktè transkripsyon TCR-induzibl, parèt sit obligatwa sitatif nan rejyon yo GSDME enhancer. Se poutèt sa, polarizasyon selil TH17 ankouraje pa sèlman ekspresyon IL-1, men tou sòti ekstraselilè li yo (Done pwolonje Fig. 10, rezime grafik). San atann, nou te jwenn enflamasome NLRP3 a aktif ak reutilize pou liberasyon IL-1 olye de IL-1 nan selil TH17 aktive TCR yo. Kontrèman ak selil natirèl yo, selil T yo pa espesyalize pou deteksyon danje natirèl, ki se konnen yo deklanche asanble konpozan NLRP3 inflammasome. Sepandan, yo te deja montre elevasyon cytoplasmic Ca2+ kontourne siyal danje natirèl pou deklanchman NLRP3 inflammasome16,40. Sa a konsistan avèk konklizyon nou an ke aktivasyon TCR, ki akonpaye pa flux kalsyòm, se yon kondisyon pou IL-1 selil TH17 imen yo lage. Nou te obsève ke selil TH17 angaje yon altènatif NLRP3 en cascade siyal atravè angajman kaspase -8. Sa a te kapab fasilite pa absans kaspas-1 klivaj paske konpetitif kaspas-1 kont kaspas-8 rekritman enflamasome yo te demontre deja34,41. Nou te jwenn tou pro-caspase-1 ak GSDMD uncleaved nan selil TH17 imen yo, men pa gen okenn prèv pou klivaj NLRP3 enflamsòm reglemante yo oswa pou pwodiksyon IL-1. Ekspresyon précurseurs yo poze kesyon si siyal klasik NLRP3 enflamasome ak lage IL-1 ta ka opere tou nan selil TH17 imen si yo aplike estimilis altènatif ki poko idantifye yo. Sa vle di ke kaspas-8- kont kaspas-1-mekanis kontregilasyon depandan yo ta ka kontwole yon dikotomi IL-1 kont IL{-1 pwodiksyon selil T yo, konsolide wòl yo te sigjere deja pou enflamasome NLRP3 la. nan liberasyon IL-1 nan selil TH1 imen42 ak selil TH17 murin43. Yon obsèvasyon curieux nan etid nou an te idantifikasyon ekspresyon GSDME ak klivaj nan selil T. Sa a te revele ke sekresyon cytokine pa konvansyonèl atravè porositë manbràn ka rive nan selil T yo. Plizyè nan fonksyon yo dènyèman asiyen nan GSDME yo te asosye ak piroptoz ak amelyorasyon ki vin apre nan lanmò selil timè ak yon mikro-anviwònman enflamatwa 32,44. Etonan, nou te jwenn ke selil TH17 ki eksprime GSDME olye yo te montre viabilite konsève ak pwopagasyon kontinye sou eksitasyon TCR repetitif konpare ak selil T GSDME ki ensufizant. Yo te obsève menm rezilta yo pou IL-1 + konpare ak IL-1 - selil T. Konklizyon sa yo te inatandi, lè nou konsidere ke pwodiksyon IL-1 jiskaprezan te konsidere kòm yon mak nan senesans e konsa nan replikasyon-arete oswa mouri selil45. Sa evoke lide ke siyal danje IL-1 kapab fè pati yon memwa cytokine ki asosye ak selil T ki re-eksite sou rekonesans antijèn parèy46. Anplis de sa, porositë GSDME yo ta ka sèvi yon fonksyon fizyolojik pou pèmèt selil TH17 yo lage molekil adisyonèl ki poko idantifye pi lwen pase IL-1 ki defini pa gwosè yo oswa chaj yo47. Sa a ta konsistan avèk rezilta konparezon transcriptomic san patipri nou an nan GSDME-entak oswa CRISPR-Cas9-enjenyè, GSDME-defisi selil TH17, ki revele plizyè wòl pou GSDME nan transpò transmembrane men pa lanmò selil. Mekanis la, kote viabilite ak memwa sitokin IL-1 alontèm nan selil T ak porositë GSDME yo konsève, rete yo dwe eksplore nan tan kap vini an. Disponibilite IL-1 ki soti nan diferan sous selilè, patikilyèman nan APC natirèl yo, poze kesyon sou kontribisyon relatif IL-1 ki sòti nan selil T nan sante moun ak maladi. Malgre ke IL-1 + selil T yo konstitye sèlman yon ti sou-ansanm nan liy lan selil T, kapasite yo pou pwodwi IL-1 te quantitativement konparab ak sa yo ki nan LPS-stimile monosit, sipòte nouvo konsèp ke selil T yo ka sèvi. kòm yon sous enpòtan IL-1 enflamatwa. Rezilta nou yo nan analiz transcriptomic ak fonksyonèl yo revele IL-1 ki asosye ak sò pro-enflamatwa selil TH17 yo. Sou-popilasyon IL-1 + selil TH17 imen yo te montre siyati transcriptomik ki montre patojèn enflamatwa amelyore ak asosyasyon ak maladi enflamatwa kwonik. Ekspresyon IL-1 siyifikativman amelyore lè yo sikile selil TH17 ki soti nan pasyan ki gen JIA ak lokalizasyon abondan yo nan likid sinovyal anflame sipòte potansyèl patojèn IL-1 + selil TH17 yo. Yon relasyon kozatif solid ant IL-1 -pwodwi selil TH17 ak patojèn JIA toujou rete pou etabli epi enpak relatif selil IL{-1 + TH17 valide nan esè klinik lavni yo. Yon obsèvasyon frapan se te ke pwodiksyon IL-1 pa selil T yo byen fil elektrik atravè espesifik TCR yo. Malgre ke pwodiksyon IL-1 pa sous selil natirèl yo deklanche pa estimilis estrès ki pa espesifik16, nou te jwenn pwodiksyon IL{-1 pa selil TH17 imen yo asosye ak yon espesifik TCR pou C. albicans. S. aureus-espesifik selil TH17, olye de sa, parèt siyifikativman redwi IL-1 pwodiksyon. Konklizyon sa yo konsistan avèk diferan egzijans IL-1 pou jenerasyon selil TH17 C. albicans-men pa espesifik S. aureus, jan yo te rapòte deja4 epi, kòmsadwa, wòl enpòtan IL{{126} } pou endiksyon ekspresyon IL-1, jan yo rapòte la a. Anplis de sa, nou te jwenn sekresyon IL-1 depann sou eksitasyon TCR ak siyal kalsyòm, ensiste asosyasyon sere li yo ak siyal iminitè adaptab espesifik atravè TCR la. Selil TH17 yo konnen yo se protagonist yo nan clearance nan enfeksyon C. albicans atravè sekresyon IL-17, ki se egzanp pa C. albicans dysbiosis nan anviwònman defisyans IL-17 jenetik oswa terapetik38. Nou te jwenn pwodwi selil TH17 IL-1 ki enplike nan clearance C. albicans paske absans li nan supernatant selil TH17 te redwi siyifikativman fagositoz C. albicans pa monosit. Sa a sijere ke fonksyon efektè selil antifonjik TH17 yo egzèse pa sèlman atravè IL-17A/F, jan yo te sijere deja, men tou atravè IL-1 nan yon fason espesifik TCR. Si règleman aberan nan chemen molekilè ki mennen nan pwodiksyon IL-1 pa selil TH17 ta ka predispoze nan defans lame antifonjik konpwomèt, pral bezwen teste alavni. An jeneral, rezilta nou yo pave wout la pou yon ankèt sistematik sou kontribisyon IL-1 -pwodwi selil TH17 nan divès maladi enflamatwa ak defans lame antifonjik. TCR–NLRP3 inflammasome–caspase-8–caspase{-3–GSDME aks la non sèlman reprezante yon mòd siyal iminitè yo te deja neglije ak enstriksyon sò nan selil TH, men tou bay sib molekilè swa deranje yon selil patojèn TH17. idantite oswa itilize li pou defans lame.

Figi 7|Selil TH17 yo rezistan nan piroptoz malgre GSDME porositë manbràn plasma.

Figi 8|Espesifik TCR kontwole pwodiksyon IL-1 kontribye nan clearance C. albicans

Referans

1. Ivanov, II et al. Reseptè nikleyè òfelen RORgammat dirije pwogram diferansyasyon selil proenflamatwa IL-17+ T asistan yo. Selil 126, 1121–1133 (2006).

2. Zwicky, P., Unger, S. & Becher, B. Vize interleukin -17 nan maladi enflamatwa kwonik: yon pèspektiv klinik. J. Exp. Med. 217, e20191123 (2020).

3. Stockinger, B. & Omenetti, S. Dikotomi nati T helper 17 selil yo. Nat. Rev Immunol. 17, 535–544 (2017).

4. Zielinski, CE et al. Selil TH17 imen patojèn pwovoke pwodui IFN-gama oswa IL-10 epi yo reglemante pa IL-1beta. Nati 484, 514-518 (2012).

5. Ghoreschi, K. et al. Jenerasyon selil patojèn TH17 nan absans siyal TGF-beta. Nati 467, 967-971 (2010).

6. Noster, R. et al. Dysregulation nan proenflamatwa kont anti-enflamatwa fonksyon selil TH17 imen nan sendwòm Schnitzler otoenflamatwa. J. Alèji Clin. Imunol. 138, 1161–1169.e1166 (2016).

7. Aschenbrenner, D. et al. Yon pwogram imunoregulatwa ak rezidans tisi modil pa c-MAF nan selil TH17 imen. Nat. Imunol. 19, 1126–1136 (2018).

8. Wu, C. et al. Endiksyon nan selil patojèn TH17 pa inductible sèl-sensing kinase SGK1. Nature 496, 513-517 (2013).

9. Matthias, J. et al. Sèl jenere selil anti-enflamatwa Th17 men anplifye patojèn nan mikro-anviwònman sitokin pro-enflamatwa. J. Clin. Envesti. 130, 4587–4600 (2020).

10. Cavalli, G. et al. Interleukin 1alpha: yon revizyon konplè sou wòl IL-1alfa nan patojèn ak tretman maladi otoiminitè ak enflamatwa. Otoiminitè. Rev. 20, 102763 (2021).

11. Acosta-Rodriguez, EV, Napolitani, G., Lanzavecchia, A. & Sallusto, F. Interleukins 1beta ak 6 men ki pa transfòme faktè kwasans-beta yo esansyèl pou diferansyasyon nan entèleukin 17-pwodwi selil T helper imen. . Nat. Imunol. 8, 942–949 (2007).

12. Latz, E., Xiao, TS & Stutz, A. Aktivasyon ak règleman inflammasomes yo. Nat. Rev Immunol. 13, 397–411 (2013).

13. Shi, J. et al. Klivaj GSDMD pa caspases enflamatwa detèmine lanmò selil piroptotik. Nature 526, 660-665 (2015).

14. Liu, X. et al. Enflammasome-aktive gaz dermin D lakòz piroptoz pa fòme porositë manbràn. Nature 535, 153-158 (2016).

15. Acosta-Rodriguez, EV et al. Fenotip andigman ak espesifik antijenik nan entèleukin imen 17-pwodwi selil memwa T asistan yo. Nat. Imunol. 8, 639–646 (2007).

16. Gross, O. et al. Aktivatè enflamasòm yo pwovoke sekresyon interleukin- 1alfa atravè chemen diferan ak diferan kondisyon pou fonksyon proteaz kaspase-1. Iminite 36, 388–400 (2012).

17. Malik, A. & Kanneganti, TD Fonksyon ak règleman IL-1alfa nan maladi enflamatwa ak kansè. Imunol. Rev. 281, 124–137 (2018).

18. Cimaz, R. Atrit idyopatik jivenil sistemik-aparisyon. Otoiminitè. Rev. 15, 931–934 (2016).

19. Fong, KY, Boey, ML, Koh, WH & Feng, PH konsantrasyon Cytokine nan likid sinovyal la ak plasma nan pasyan atrit rimatoyid: korelasyon ak ewozyon zo. Clin. Eksp. Rheumatol. 12, 55–58 (1994).

20. Eyerich, S. & Zielinski, CE Defini sou-selil Th nan yon fason klasik ak tisi espesifik: egzanp ki soti nan po a. Lajan ewo. J. Immunol. 44, 3475–3483 (2014).

21. Monteleone, M., Stow, JL & Schroder, K. Mechanisms of unconventional sekresyon nan IL -1 cytokines fanmi yo. Cytokine 74, 213-218 (2015).

22. Keller, M., Ruegg, A., Werner, S. & Beer, HD Caspase aktif-1 se yon regilatè sekresyon pwoteyin pa konvansyonèl yo. Selil 132, 818–831 (2008).

23. Kurt-Jones, EA, Beller, DI, Mizel, SB & Unanue, ER Idantifikasyon yon manbràn ki asosye interleukin 1 nan macrophages. Pwosedi. Natl Acad. Sci. USA 82, 1204–1208 (1985).

24. Mosley, B. et al. Reseptè entèleukin-1 la mare precurseur entèleukin-1 alfa imen an, men se pa prekursè entèleukin-1 beta a. J. Biol. Chem. 262, 2941–2944 (1987).

25. Carruth, LM, Demczuk, S. & Mizel, SB Patisipasyon yon proteaz ki sanble ak calpain nan pwosesis precurseur murine interleukin 1alpha. J. Biol. Chem. 266, 12162–12167 (1991).

26. Kobayashi, Y. et al. Idantifikasyon kalsyòm-aktive net proteaz kòm yon anzim pwosesis nan interleukin imen 1 alfa. Pwosedi. Natl Acad. Sci. USA 87, 5548–5552 (1990).

27. Fettelschoss, A. et al. Aktivasyon enflamasome ak IL-1beta sib IL-1alfa pou sekresyon kontrèman ak ekspresyon sifas yo. Pwosedi. Natl Acad. Sci. USA 108, 18055–18060 (2011).

28. Franklin, BS, Latz, E. & Schmidt, FI Fonksyon anndan ak ekstraselilè specks ASC. Imunol. Rev. 281, 74–87 (2018).

29. Nagar, A., DeMarco, RA & Harton, JA Karakterizasyon ak evalyasyon aktivite enflamasome ak kaspas-1: yon deteksyon D 'flow cytometer ki baze sou ak evalyasyon nan tach enflamasome ak kaspas-1 aktivasyon. J. Immunol. 202, 1003–1015 (2019).

30. Rathinam, VA & Fitzgerald, KA Enflamasome konplèks: mekanis émergentes ak fonksyon efèktè. Selil 165, 792–800 (2016).

31. Broz, P., Pelegrin, P. & Shao, F. Mastermind la se yon fanmi pwoteyin ki egzekite lanmò selil ak enflamasyon. Nat. Rev Immunol. 20, 143–157 (2020).

32. Zhang, Z. et al. Gasdermin E siprime kwasans timè pa aktive iminite anti-timè. Nature 579, 415–420 (2020).

33. Schraml, BU et al. Faktè transkripsyon AP-1 BATF kontwole diferansyasyon TH17. Nati 460, 405-409 (2009).

34. Antonopoulos, C. et al. Caspase-8 kòm yon efèktè ak regilatè nan siyal enflamasome NLRP3. J. Biol. Chem. 290, 20167–20184 (2015).

35. Vajjhala, PR et al. Adaptè inflammasome ASC pwovoke procaspase-8 lanmò efector domèn filaman. J. Biol. Chem. 290, 29217–29230 (2015).

36. Stennicke, HR et al. Pro-caspase-3 se yon gwo sib fizyolojik kaspase-8. J. Biol. Chem. 273, 27084–27090 (1998).

37. Deng, W. et al. Streptococcal pyrogenic exotoxin B fendo GSDMA ak deklannche piroptoz. Nature 602, 496–502 (2022).

38. Puel, A. et al. Kandidaz kwonik mucocutaneous nan imen ak erè ki fèt nan iminite interleukin-17. Syans 332, 65–68 (2011).

39. Billon, C., Murray, MH, Avdagic, A. & Burris, TP RORgamma kontwole NLRP3 inflammasome. J. Biol. Chem. 294, 10–19 (2019).

40. Lee, GS et al. Reseptè kalsyòm ki detekte kontwole enflamasome NLRP3 atravè Ca2+ ak cAMP. Nati 492, 123-127 (2012).

41. Gao, Y. et al. Profiling transkripsyonèl idantifye kapasaz-1 kòm yon regilatè selil T-intrinsèk nan diferansyasyon Th17. J. Exp. Med. 217, e20190476 (2020).

42. Arbore, G. et al. T helper 1 iminite egzije aktivite enflamasome NLRP3 ki baze sou konpleman nan selil T CD4+. Syans 352, aad1210 (2016).

43. Martin, BN et al. Selil T-intrinsèk ASC ankouraje ansefalomyelit otoiminitè eksperimantal TH17-medyatè. Nat. Imunol. 17, 583–592 (2016).

44. Wang, Y. et al. Medikaman chimyoterapi pwovoke piroptoz atravè klivaj caspase-3 nan yon lespri. Nature 547, 99-103 (2017).

45. Wiggins, KA et al. IL-1 klivaj pa kaspas enflamatwa nan enflamasome ki pa canonical la kontwole fenotip sekretè ki asosye ak senesans la. Aging Cell 18, e12946–e12946 (2019).

46. ​​Helmstetter, C. et al. Selil T helper endividyèl yo gen yon memwa cytokine quantitative. Iminite 42, 108–122 (2015).

47. Xia, S. et al. Gasdermin D estrikti pò revele lage preferansyèl nan interleukin ki gen matirite -1. Nature 593, 607–611 (2021).