Faktè iminomodulatwa nan Salsa Cistanche

Kontakte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Imèl:audrey.hu@wecistanche.com

Shinjiro MARUYAMA," Koji YAMADA, Hirofumi TACHIBANA

Cistanche salsa(CAMever) G.Beck, Orobanchaceae se yon plant parazit ki itilize kòm yon tonik oriental medsin nan Japon. Nan etid anvan nou an, nou te jwenn ke C, ekstrè salsa amelyore pwodiksyon tou de IgM ak IgG nan lenfosit ne Ivmph imen. Anplis de sa, C, salsa dyaliz (CSD) prepare lè l sèvi avèk yon manbràn dyaliz ak yon a3.500-Da molekilè pwa koupe pwodiksyon IgM amelyore nan liy selil B imen BALL-1; nplis de sa, li pwovoke ti tay pwopagasyon selilè. Sepandan, nan contrast, CSD pwovoke anpèchman kwasans akonpaye pa apoptoz nan liy selil lenfom Burkitt imen Namalwa. Rezilta sa yo endike prezans posib nan elektè aktif nan CSD ki espesifik nan lenfosit, Jiskaprezan, pwopriyete chimik yo nan elektè sa yo pa te elisid. Nan etid sa a, nou te envestige pwopriyete chimik eleman aktif yo nan CSD. Tou de aktivite yo mansyone anwo a nan liy selil B yo pa te inaktive pa tretman otoklav nan CSD. Sèvi ak kwomatografi kolòn filtraj jèl, nou te jwenn ke pik fraksyon yo aktif yo te konsantre nan fraksyon diferan. Rezilta nou yo sijere ke gen omwen 2 kalite konstitiyan aktif nan CSD, epi yo ka polisakarid paske yo idrosolubl segondè konstitiyan pwa molekilè ak tèmostab.

Mo kle: Cistanche salsa, gwo pwa molekilè, IgM, anpèchman kwasans.

Entwodiksyon

Cistanche salsa(CA Meyer) G.Beck, Orobanchaceae se yon plant parazit ki itilize kòm yon tonik oriental medsin nan Japon. Nan Lachin, plant sa a se yon medikaman tradisyonèl enpòtan yo itilize pou tretman defisyans ren ak neurasthenia. Atravè etid in vitro, nou te deja rapòte efè C. salsa sou sistèm iminitè a. Premye. nou demontre ke C. salsa ekstrè amelyore pwodiksyon an nan IgM ak IgG nan lenfosit lenfosit imen. Dezyèmman, nou te montre ke C. salsa dialysate (CSD) prepare lè l sèvi avèk yon 3,500-Da molekilè pwa koupe dyaliz mem-brane amelyore pwodiksyon IgM nan liy selil B imen BALL-1; nplis de sa, li pwovoke pwopagasyon selil nan yon ti limit.2Anplis de sa, CSD gen yon efè opoze kote li pwovoke anpèchman kwasans akonpaye pa apoptoz nan liy selil lenfom Burkitt imen an, Namalwa.3)Konklizyon sa yo sijere ke efè CSD sa a te gen rapò ak aktivasyon selil B yo, pandan y ap apoptoz la te soti nan mank de lòt siyal ki nesesè pou diferansyasyon selil B, tankou sitokin ak kontak selil-selil; sepandan, pwopriyete chimik yo nan CSD yo pa te elisid nan okenn nan etid anvan yo. Se poutèt sa, nan etid sa a, nou envestige pwopriyete chimik yo nan elektè aktif yo nan CSD.

Materyèl ak Metòd

CSD te prepare pa menm metòd la nan etid anvan nou an. CSD te fonn nan saline tampon fosfat (PBS) nan 20 mg/ml. Solisyon prepare a (0.8 ml) te pase nan yon filtè (0.22 um) anvan aplikasyon an epi answit eliye ak menm solisyon an atravè kolòn ki gen TOYOPEARL HW-40F. (1.0×96.5 cm; Tosoh Corp, Japon),TOYOPEARL HW-55F(1.0 × 98.0 cm; Tosoh Corp.,Japon) , ak Sephacryl S-400HR(1.0×98.0 cm; GE Healthcare UK Ltd.,.England); epi yo te kolekte 1 ml (30 gout) fraksyon. Pou detèmine volim anile nan jèl yo ak pwa molekilè apwoksimatif (MW) nan konstitiyan yo fraksyon, ble dextran (BD) (Sigma-Aldrich Japan KK, Japon); ak dèkstrans nan MW li te ye yo jwenn nan men Leuconostoc spp.(Sigma-Aldrich Japan KK,Japan), ieof MW2, 000kDa (D1), 500kDa (D2), 70 kDa (D3) ak 6 kDa (D4); ak cyanocobalamin (VB12, MW:1355.4)(Wako Pure Chemical Industries Ltd.,Japon) yo te itilize. Yo te detèmine kontni total sik ak pwoteyin nan chak fraksyon lè l sèvi avèk metòd asid fenol-sulfurik la ak metòd Lowry ak twous tès pwoteyin PIERCETM asid bicinchoninic (BCA) (Thermo Fisher Scientific Inc., USA), respektivman. Glikoz ak albumin serom bovin yo te itilize kòm estanda respektif. Anplis de sa, yo te mezire absorbans nan 320nm (A:2o) nan chak fraksyon. Pik yo elisyon nan dextran ble ak cyanocobalamin yo te detèmine pa valè absorbans yo nan 260 nm, ak pik yo nan dextran nan MW li te ye yo te detèmine lè l sèvi avèk metòd la asid fenol-sulfurik. Nan bioassays, kilti selil ak mezi IgM yo te fè pa menm metòd la nan etid anvan nou an.

Cistanche salsa ekstrè

Rezilta ak Diskisyon

Figi 1 montre kwomatogram kolòn filtraj jèl CSD sou HW-40F. Soti nan Figi la, MW nan konstitiyan aktif yo te estime yo dwe plis pase 6 kDa ki baze sou makè dextran D4 la. Anplis de sa, tou de aktivite CSD yo, sa vle di amelyore pwodiksyon IgM ak pwovoke anpèchman kwasans, pa te inaktive pa tretman otoklav (Figi 2), byenke kèk elektè yo te rasanble epi yo te pèdi apre CSD te pase nan 0 la.{{6} }um filtre. Modèl elisyon CSD ak CSD otoklav la te prèske idantik, sepandan, aktivite relatif amelyore pwodiksyon IgM nan CSD otoklav la te pi ba pase CSD ki pa trete. Gen kèk nan rezon ki sanble ke total yo te kenbe elektè aktif yo oswa kèk nan elektè aktif yo te inaktive. Rezilta kwomatografi sou HW-55F te montre prezans posib 2 kalite faktè iminomodulatwa: premye a, ki konsantre nan fr. non.32. se te yon gwo-molekilè-pwa aktif constituent (HCS) ki te kapab amelyore pwodiksyon IgM, pandan dezyèm lan, konsantre nan fr. no.50, se te yon konstitiyan aktif nan mitan-molekilè-pwa (MCS) ki ta ka anpeche pwopagasyon selil (Figi 3). Sepandan, pik yo te jwenn pou tou de HCS ak MCS (fr.no.32 ak 50 respektivman) pa t 'tan file tankou sa yo ki nan dextras yo nan MW li te ye (done yo pa montre). Obsèvasyon sa yo endike posiblite pou gen pwodwi atifisyèl ki te pwodwi pandan preparasyon CSD, polymère nan konstitiyan aktif ki fasil detwi epi ki genyen plizyè inite, oswa divès konstitiyan aktif ki gen diferan MW orijinal yo. Modèl elisyon yo sou chromatogram yo montre ke li pa fasil pou jwenn elektè pi bon kalite nan HCS ak MCS paske sanble gen divès kalite elektè ki gen MW yon ti kras diferan jan mansyone pi wo a. Malgre ke tou de se melanj de konstitiyan aktif, li parèt ke HCS gen ladan elektè nan MW depase 70 kDa, pandan y ap MCS konpoze de sa yo ki nan MW depase 6 kDa. HCS te eliye sou HW-55F nan yon fraksyon ki te depase seri separasyon an. Sou Sephacryl-S400.yon pati nan HCS(fr.no.36) te eliye nan menm fraksyon ak makè a D1, ki se nan MW 2,000 kDa (Figi 4). An jeneral, polisakarid ak pwoteyin yo pran an kont kòm konstitiyan MW segondè idrosolubl nan ekstrè plant yo. Depi prèske tout pwoteyin fonksyonèl yo inaktive pa tretman chalè, yo sanble yo polisakarid. Sepandan, Park et. al. te rapòte ti pwoteyin thermostable cytotoksik ki rele viscotoxin, ki prepare nan ekstrè gi (Viscum album L., Viscaceae) gen yon MW pi ba, li montre pi wo kontni pwoteyin. Lè nou konsidere reyalite sa yo, MCS a ka polysaccharide8 ki asosye ak pwoteyin oswa li ka yon pwoteyin tèmostab tankou viscotoxins yo. Rezilta sa yo montre ke 2 konstitiyan aktif yo ka polisakarid. Sinon, MCS a ta ka pwoteyin tèmostab.

Referans

1) Deng, M., Zhao, JY, Ju, XD, Tu, PF, Jiang, Y., Li, ZB: Efè pwoteksyon tubuloside B sou apoptoz TNF alfa-induit nan selil newòn.Acta Pharmacol. Sin.,25, 1276-1284,2004.

2) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H.:Cistanche salsa ekstrèpwodiksyon IgM amelyore nan liy selil B imen an, BALL-1.J. Trad. Med.,24,209-211,2007.

3) Maruyama, S., Yamada, K., Tachibana, H:Cistanche salsaekstrè pwovoke apoptoz nan liy selil lenfom imen Burkitt Namalwa. J.Trad. Med.,25,24-27,2008.

4) Park. JH,Hyun, CK,Shin HK: Efè sitotoksik nan eleman yo nan gi trete chalè (Viscum album).Cancer Let, 139, 207-213,1999.

5) Tabasco, J., Pont, F, Fournic, JJ, Vercellone, A.: Mistletoe viscotoxins ogmante natirèl asasen selil-medyatè cytotoxicity. Eur.J. Biochem.,269,2591-2600, 2002.

6) Fisher, M., Yang, LX: efè antikansè ak mekanis poly saccharide-K (PSK): enplikasyon imunoterapi kansè. Antikanse Res., 22, 1737-1754, 2002.

sipleman cistanche