Enfliyans nan simulation in vitro dijesyon imen sou kontni fenolik yo ak aktivite byolojik nan ekstrè akeuz ki soti nan espès Turkish Cistus Pati 2.

Tanpri kontakteoscar.xiao@wecistanche.compou plis enfòmasyon

3. Diskisyon

Radikal lib yo ka atake pwoteyin, lipid, oswa ADN pou pwokire yon elèktron, sa ki lakòz divès pwoblèm sante. Pou rezon sa a, li esansyèl pou balanse sistèm antioksidan kò a ak radikal gratis ki fòme pa oksidasyon. Nan ka deteryorasyon balans sa a, estrès oksidatif rive [29]. Estrès oksidatif se youn nan faktè prensipal ki lakòz divès maladi kwonik tankou kansè, dyabèt, maladi kadyovaskilè, maladi alzayme, elatriye. sistèm yo ka pèdi efikasite yo akòz diferan kondisyon tankou twòp konsomasyon alkòl, fimen, estrès, itilizasyon dwòg kwonik, ak radyasyon, elatriye [30]. Plizyè rapò syantifik te endike ke metabolit plant segondè jwe yon wòl enpòtan nan anpeche estrès oksidatif ak efè danjere li yo [13,14,31] Menmsi byodisponibilite se yon paramèt enpòtan ki afekte byoaktivite nan konpoze sa yo, li pa te pran an kont nan pifò etid yo. Sepandan, li se byen li te ye ke metabolit segondè yo sibi transfòmasyon estriktirèl akòz kondisyon pH diferan, aktivite anzimatik, ak tanperati kò nan sistèm gastwoentestinal la. Anplis de sa, karakteristik chimik yo nan metabolit segondè yo tankou pwa molekilè, polarite, ak degre nan lyezon ak makromolekil nan matris plant la se faktè enpòtan tou ki afekte byodisponibilite yo [13]. An konsekans, absòpsyon nan konpoze yo oswa metabolit yo nan san an yon fwa enjere se esansyèl nan lòd yo egzèse efè sistemik fizyolojik yo. Modèl simulation dijesyon an vitro ka bay prèv pou evalye karakteristik posib byodisponibilite sibstans yo. Pandan ke konfimasyon nan esè imen nesesè pou reklame nenpòt pwopriyete fonksyonèl, modèl simulation in vitro yo lajman itilize kòm altènativ nan etid in vivo oswa esè imen, ki souvan etikman diskite, resous-entansif, chè, ak tan konsome [32].

Tanpri klike la a pou w konnen plis

Plizyè chèchè yo te envestige tou potansyèl antioksidan nan ekstrè prepare nan ògàn diferan nan espès Cistus. Dapre sondaj literati a, sa a se premye etid sou espès Cistus konsènan byodisponibilite nan sibstans fenolik ak enpak yo sou aktivite antioksidan pa anplwaye yon modèl simulation dijesyon in vitro. Karas et al. [33] sijere ke 10 pousan nan konpozan polifenolik yo rete san dijere nan matris plant la ak 90 pousan nan yo sibi dijesyon nan faz nan gastric oswa entesten (apeprè 48 pousan ak 52 pousan, respektivman). Kòm mansyone pi bonè, tout kantite fenolik nan ekstrè akeuz yo te afekte negatif pa pwosedi simulation in vitro imen dijesyon. Kidonk, yo te detekte pèt enpòtan nan kontni fenolik echantiyon biodisponib yo nan tout ekstrè. Anplis, total proanthocyanidin konsantrasyon nan echantiyon IN yo te pi ba pase limit la nan deteksyon nan tout ekstrè akeuz. Plizyè etid tou te pouse enfliyans negatif nan pwosedi dijesyon sou konpoze fenolik nan ekstrè plant yo e konsa bioaktivite ki gen rapò. Pou egzanp, nou rapòte kontni total fenolik Salvia virgata Jacq. te tou yon move efè sou pwosedi dijesyon an nan etid anvan nou an Anplis de sa, kantite metabolit pi gwo nan ekstrè a, sa vle di, rutin ak asid rosmarinic, te gen tandans diminye [13]. Kontrèman, plizyè etid rapòte rezilta kontradiktwa. Nan etid Celeb et al. [34], yo te obsève ogmantasyon nan kantite total asid fenolik, flavonoid, ak fenolik nan echantiyon biodisponib ekstrè metanolik soti nan Hypericum perfoliatum L. An reyalite, metabolit prensipal yo, quercitrin, klorojèn ak asid galik, te gen rapò bioaksesiblite plis pase 100. pousan. Etid sa yo te montre ke efè pwosedi dijesyon an ka varye selon materyèl plant yo. Yo nan lòd yo klarifye diferans sa yo, li esansyèl pou konsidere mekanis nan aksyon nan sistèm dijesyon an sou sibstans fenolik. (benefis bioflavonoid) Serra et al.[35] Sigjere ke konpoze fenolik yo sitou jwenn nan glikozid, polymère, ak fòm ester nan matris plant la epi yo idrolize nan sistèm dijestif la anvan absòpsyon. Plizyè faktè ka enfliyanse transfòmasyon estriktirèl konpoze fenolik nan aparèy gastwoentestinal la. Pou egzanp, konpoze ki gen pi wo pwa molekilè, tankou proanthocyanidins oswa procyanidins, bezwen idrolize anvan absòpsyon nan zantray la. Estrikti nan matris plant la se tou yon faktè enpòtan nan byodisponibilite nan fenolik; (achte cistanche)konpoze fenolik ka mare ak makromolekil nan matris plant la, tankou fib, pwoteyin, ak molekil lipid. Kidonk, sèlman konpozan fenolik ki libere nan matris la ka vin absòbe nan aparèy gastwoentestinal la. Anplis, diferan valè pH ak aksyon anzimatik mikrobyota entesten yo se pami lòt faktè enpòtan ki afekte transfòmasyon nan estrikti chimik konpoze fenolik [36]. Nan limyè de done sa yo, nou ka ipotèz ke rezilta diferan yo jwenn nan menm kalite etid eksperimantal yo ka akòz konpleksite nan sistèm dijesyon an ak konpozisyon an nan matris plant la. Jan yo prezante nan Tablo 3, echantiyon biodisponib yo nan ekstrè Cistus montre yon aktivite antioksidan pi fèb pase tokay ki pa dijere ak post-gastric akòz pi ba kontni fenolik yo.

Cistanchekapabamelyore iminite

Anplis, tou de ekstrè nan C.saluifolius parèt pi bon aktivite antioksidan nan DPPH, CUPRAC, FRAP, ak tès TOAC lè yo konpare ak lòt espès. Anplis, tou de ekstrè nan C.paroifforus te montre pi wo DMPD radikal aktivite scavenging pase ekstrè yo nan lòt espès. Jan sa endike nan tablo 1, total fenolik, flavonoid, ak asid fenolik C. salviifolius te pi wo pase nan lòt echantiyon yo. Kidonk, potansyèl antioksidan ki pi wo nan ekstrè C. salviifolius yo ka gen rapò ak kontni fenolik li yo.

Anplis, rediksyon nan potansyèl antioksidan, aktivite inhibition sou anzim ki gen rapò ak idrat kabòn, ak AGEs nan echantiyon byodisponib yo ka gen rapò ak bès nan glikozid flavonoid makè. Sepandan, ekstrè Cistus tou te genyen lòt sibstans fenolik, jan sa endike nan Figi 1. Se poutèt sa, yon analiz chromatografik detaye nan ekstrè yo oblije kontwole enfliyans nan dijesyon sou aktivite byolojik.

Potansyèl la inhibition nan ekstrè plant sou anzim dijestif dènyèman te atire plis atansyon akòz enkyetid la sekirite nan inibitè sentetik. Se poutèt sa, efè a inhibition nan ekstrè plant yo te detèmine nan plizyè etid, ak efè sa a te jeneralman asosye ak sibstans ki sou fenolik tankou flavonoid, asid fenolik, proanthocyanidins, elatriye Sun et al. [37] sigjere ke konpoze polifenolik montre efè inhibition yo lè yo mare ak anzim yo mansyone pi wo a avèk èd nan fòs idrofob ak lyezon ki pa kovalan. Se poutèt sa, anpèchman nan o-amylase ak a-glucosidase aktivite anzim pa polifenol gen rapò ak estrikti molekilè yo. Pandan ke yo te etidye mekanis entèraksyon sa a lè l sèvi avèk diferan teknik tankou sinetik anpèchman, debakadè molekilè, asoupi fliyoresan, elatriye, pa gen okenn konklizyon sèten yo te akeri ankò [38]. Sepandan, anpil etid te rapòte ke anpèchman anzim dijestif ekstrè plant yo gen rapò dirèkteman ak kontni fenolik yo. Etid menm jan an sou aktivite inhibition anzim nan espès Cistus yo te deja rapòte tou. Sayah et al. [39] te envestige aktivite inhibition -amylase ak -glucosidase nan 8{{10}} pousan ekstrè metanolik ak akeuz soti nan C. monspeliensis ak C. saluifolius. Rezilta yo te an akò ak etid la prezan, revele ke C. salvifolius ekstrè akeuz demontre pi wo o-glucosidase (ICso ug/mL: 0.95±0.14) ak -amylase (IC5{ {55}} ug/mL:217.1±0.15) aktivite inhibition pase C. monspeliensis akeuz ekstrè （IC50 ug/mL∶ 14.58±1.26） ak （IC50 4g/mL:886.10±0.10), respektivman Pousantaj inhibition tou de ekstrè akeuz sou anzim sa yo te pi wo pase acarbose konpoze referans (ICso ug/mL: 18.01±2.00) Menm jan ak etid nou an, yo te jwenn yon korelasyon ak pousantaj inhibitor anzim yo ak total la. kantite fenolik ak flavonoid. Tou de kontni total fenolik ak flavonoid total nan ekstrè akeuz C. saloijfolius (408.43±1.09mg GAE ak 140.00±1.15 RE, respektivman) te pi wo pase ekstrè akeuz C.monspeliensis (261.76±1.9mg GAE ak 1.9mg). 78.00±1.15 RE respektivman). Orhan et al. [40] te envestige tou potansyèl inhibitor anzim dijestif yo nan 80 pousan akeuz ak etanolik ekstrè soti nan fèy yo nan C.laurifolius. Dapre rezilta yo, 80 pousan ekstrè etanolik (71.7 pousan ± 0.6) te montre yon aktivite inhibitor fò -amylase konpare ak ekstrè akeuz (39.3 pousan ± 2.2) nan konsantrasyon 1mg / mL. Yo sigjere ke konpoze fenolik, espesyalman flavonoid, afekte dirèkteman sekresyon ensilin lè yo anpeche apoptoz beta-selil ak sipòte aktivite anti-dyabetik. Ipotèz sa a, ki gen rapò ak rezilta nou yo, make ke echantiyon ND nan ekstrè akeuz nan C. salviifolius egzèse pi wo total flavonoid ak fenolik kontni ak pi gwo -amylase ak o-glucosidase aktivite inhibition. Jan yo bay nan Tablo 4, ekstrè akeuz nan C. salviifolius ekspoze pi bon aktivite inhibition sou anzim dijestif pase ekstrè yo lòt. Anplis de sa, echantiyon IN nan ekstrè akeuz yo genyen pi ba kantite fenolik ak flavonoid pase echantiyon ND epi konsa revele aktivite inhibition anzim ki pi ba nan travay la prezan. Pandan ke kontni fenolik nan ekstrè yo te afekte negatif pa pwosedi dijesyon an, yo toujou montre siyifikatif aktivite inhibition anzim dijestif. Nan plizyè etid, glikozid flavonoid yo te rapòte kòm metabolit prensipal yo nan ekstrè plant ak gwo potansyèl inhibitor -amylase ak -glucosidase [{41-43]Pandan ke mekanis nan inhibition nan konpoze fenolik sou anzim dijestif yo pa te revele ankò, estrikti- syans relasyon aktivite yo te fèt sou kèk konpozan fenolik tankou flavonoid, asid fenolik, proanthocyanidins, ak tanen. Etid relasyon estrikti-aktivite sou flavonoid yo te montre ke C2=C3 doub kosyon nan C-bag la amelyore potansyèl la anpèchman anzim dijestif nan konpoze sa yo. Depi kosyon sa a ogmante dansite elèktron, fòs entèraksyon ant flavonoid la ak anzim ogmante [44]. Anplis de sa, gwoup idroksil sou C-5 ak C{-7 fasilite potansyèl inhibition -amylase nan flavonoid. Li te tou sijere ke idroksidasyon nan skelèt flavonoid pozitivman afekte a-amylase yo ak -glucosidase anzim inhibitor poten-tials [45]. Jan sa endike pi bonè, tout flavonoid makè nan etid prezan an se glikozid flavonol ki gen kondisyon estriktirèl sa yo ki dekri anwo a. Sepandan, apre pwosedi dijesyon vitro, aktivite ki gen rapò yo te refize anpil nan echantiyon byodisponib nan ekstrè akeuz yo.

Anjeneral, potansyèl inhibitor ekstrè plant yo sou AGE yo gen rapò ak plizyè faktè, sa vle di, kontni fenolik yo, potansyèl antioksidan, kapasite metal chelating, entèraksyon pwoteyin, ak aktivite bloke reseptè AGE [13]. Jan yo prezante nan Tablo 4, echantiyon byodisponib nan ekstrè akeuz yo parèt pi ba aktivite inhibition AGE konpare ak echantiyon ND depi pwosedi dijesyon an vitro yon move efè sou kontni an fenolik nan ekstrè yo. Dapre rezilta etid aktyèl yo, echantiyon ND nan ekstrè akeuz nan C. (cistanche ak tongkat ali reddit) saluifolius posede aktivite inhibition AGE ki pi wo a ansanm ak kontni total fenolik ak flavonoid. An konparezon, echantiyon IN nan ekstrè akeuz nan C. monspeliensis te montre potansyèl la anpèchman AGE ki pi fèb, ki ka atribiye a pi ba flavonoid total li yo ak kontni fenolik. Depi flavonoid gen yon distribisyon toupatou nan ekstrè plant, fwi, legim, ak bwason, plizyè etid yo te entansifye sou potansyèl la anpèchman nan flavonoid sou fòmasyon AGE. Menm flavonoid yo te plase kòm fenolik makè yo nan etid sa a te rapòte tou kòm konpoze makè yo nan lòt etid [46-48].

Menm jan ak anpèchman anzim dijestif yo, aktivite AGE inhibition flavonoid yo te ankouraje pa doub kosyon C2=C3 ak idroksidasyon nan bag A ak C. Sepandan, atachman sik nan skelèt flavonoid la mennen nan diminye aktivite inhibition [49]. Nan lòt men an, Cervantes-Lauren et al.[50] sigjere ke flavon-3- nan glikozid posede yon pi gwo potansyèl anpèchman AGE pase lòt glikozid flavonoid yo. Ipotèz sa a ka yon eksplikasyon pou diminye anpèchman AGE nan echantiyon biodisponib yo. Pou egzanp, quercitrin ak hyperoside pa te detekte nan echantiyon byodisponib nan ekstrè akeuz nan C.monspeliensis, ki se rezon ki fè aktivite ki pi ba nan echantiyon IN nan C. monspeliensis konpare ak ekstrè yo nan lòt espès yo. Menm si quercitrin pa te detekte nan ekstrè akeuz C. saloifolius, siyifikativman pi wo kantite hyperoside ak salidroside ka lakòz gwo aktivite anpèchman AGE li yo. An jeneral, yo te obsève yon korelasyon pozitif ant sa ki nan makè flavonoid echantiyon yo ak potansyèl inhibition yo sou AGEs.

4. Materyèl ak Metòd

4.1.pwodwi chimik yo

Tout referans, anzim, ak pwodwi chimik yo te anplwaye nan eksperyans yo te achte nan men Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Materyèl klas analyse yo te itilize nan eksperyans yo.

4.2.Echantiyon Plant yo

Pati ayeryen nan C.creticus ak C.saloifolius yo te rasanble nan kanpis Yeditepe University (Kayisdagi, Istanbul) pandan dènye semèn nan mwa avril 2018. Pati ayeryen nan C.mon-speliensis ak C. paroiflorus te rasanble nan toupre Alacant Kutlu Aktas. Balaji, Cesme, Izmir nan dezyèm semèn Me 2018. Pati ayeryen nan C. laurifolius yo te ranmase nan wout Kemer-Doganhisar, Konya, nan premye semèn nan mwa jen 2018. Pwofesè Dr Erdem Yesilada otantifye materyèl plant yo. Espesimèn bon pou C. creticus (YEF18013), C. Lauri folium (YEF18017), C.monspeliensis (YEF18015), C.paroiflorus (YEF18016) ak C.salvifolius (YEF18014) yo te estoke nan Herbarium nan Depatman Pharmacognosy. nan famasi, Yeditepe University, Istanbul, Turkey. 4.3. Pwosedi Ekstraksyon

Ekstraksyon akeuz te chwazi paske li se souvan itilize kòm yon teknik preparasyon nan medikaman tradisyonèl yo. Pati ayeryen ki seche ak an poud nan espès Cistus (100 g) yo te ekstrè ak dlo distile cho (80 degre, 1.5 L) lè l sèvi avèk yon aparèy souke pou 15 min. Lè sa a, ekstrè akeuz yo te filtre nan yon papye filtre ak evapore nan sechrès anba presyon redwi. Apre pwosedi lyofilizasyon an te fini, ekstrè yo te fonn nan dlo distile pou plis pwosesis (echantiyon ki pa dijere: ND) (sede a nan ekstrè: 13.04 pousan pou C.creticus, 15.7 pousan pou C.laurifolus, 12.8 pousan pou C.monspeliensis. ,14.94 pousan pou C.parviflorus, 14.74 pousan pou C.salvifolius). 4.4.In Vitro Metòd Simulation Dijesyon Imèn

Modèl simulation dijesyon imen an te aplike nan echantiyon Cistus nan vitro, swiv metòd la detaye pi bonè pa Celeb et al.[34]. Premyèman, yo te fonn 1g NaCl ak 1.6g pepsin nan 500 mL dlo distile pou jwenn yon solisyon likid gastric simulation (SGF) Apre sa, pH solisyon SGF a te ranje a 2 ak HCl (5 M); 17.5 mL nan solisyon sa a. te melanje ak 2.5 mL echantiyon plant, epi melanj sa a te sitiye nan beny dlo a souke nan 37 degre pou 2 èdtan imite mouvman yo peristaltik nan sistèm dijesyon an. Apre 2 èdtan, echantiyon yo te mete nan yon beny glas pou inaktive reyaksyon anzimatik yo; 2 mL echantiyon yo te mete sou kote kòm yon echantiyon "post-gastric" (PG) pou plis eksperyans. Yon manbràn dyaliz seluloz ki chaje ak yon bon kantite NaHCO3 (1 M, pH7) te lokalize nan solisyon echantiyon frèt yo; konsa, absòpsyon gastwoentestinal te imite. Lè sa a, 4.5 mL nan asid kòlè/pankreatin solisyon yo te konbine avèk solisyon yo, epi yo te melanj lan enkube pou yon lòt 2 èdtan nan 37 degre. Finalman, likid ki andedan manbràn dyaliz la te akeri kòm echantiyon "biodisponib" (IN). Apre pwosedi a te fini, tout echantiyon yo te konsève nan -20 degre pou plis eksperyans. 4.5.In Vitro Estimasyon nan pwofil fenolik 4.5.1. Total Phenolic Content Assay Spectrophotometric detèminasyon nan kontni total fenolik echantiyon yo te fèt nan yon modèl plak byen dapre metòd Barak et al.【32】; 75 uL NagCO3（20 pousan nan H2O. ） te ajoute nan 20 μL echantiyon frèch prepare ak solisyon referans. Lè sa a, 100 μL reyaktif Folin-Ciocalteu te konbine avèk melanj lan. Apre yon peryòd enkubasyon 30 min nan tanperati chanm nan fè nwa a, yo te mezire absòbe a nan 690 nm. Asid galik yo te itilize kòm yon solisyon referans nan diferan konsantrasyon pou etabli yon koub kalibrasyon ak kontni fenolik total yo te eksprime kòm ekivalan asid galik (GAE). 4.5.2. Total Flavonoid Content Assay Spectrophotometric detèminasyon total flavonoid kontni echantiyon yo te jere nan yon 96-modèl plak byen an akò ak metòd la deja eksplike pa Bardakci et al. 【51】; 150 μL nan 75 pousan etanòl, 10 μL nan klori aliminyòm ak 10 uL nan 1M sodyòm acetate triidrat yo te konbine avèk 50 uL nan echantiyon ak solisyon referans, separeman. Lè sa a, melanj sa yo te enkube nan tanperati chanm nwa pou 30min. Apre peryòd enkubasyon an, yo te kalkile absorbans nan 405 nm. Quercetin te anplwaye kòm yon solisyon referans nan diferan konsantrasyon pou etabli yon koub kalibrasyon ak kontni total flavonoid yo te reprezante kòm ekivalan quercetin (QE).

4.5.3.Total Phenolic Acid Content Assay

Kontni total asid fenolik echantiyon yo te mezire spectrophotometrically swiv pwosedi ki te rapòte ansyen pa Barak et al. [52]. Premyerman, bon kantite nitrit sodyòm ak molibdat sodyòm yo fonn nan dlo distile pou jwenn reyaktif Arnow la. Lè sa a, 1 ml echantiyon yo te konbine avèk 1 ml reyaktif Arnow, 1 ml 0.1 M HCl, ak 1 ml 1 M NaOH, separeman. Apre sa, volim melanj lan te ajiste a 10 ml ak dlo distile, epi absòbe a te li imedyatman nan 490 nm. Asid kafeyik te anplwaye kòm yon solisyon referans nan diferan konsantrasyon pou jwenn yon koub kalibrasyon, ak total asid fenolik yo te bay kòm ekivalan asid kafeyik (CAE).

4.5.4.Total Proanthocyanidin Content Assay

Yo te fè detèminasyon espektwofotometrik kontni total proanthocyanidin echantiyon yo nan yon modèl plak 96-byen selon metòd Barak et al. [11]. Yon ti tan, 25 uL nan solisyon echantiyon yo te melanje ak 150 uL nan 4 pousan vanilin ak 75 uL nan solisyon HCl (32 pousan), respektivman. Apre 15 min tan enkubasyon nan tanperati chanm nwa, yo te ajiste absòbe a a 492 nm. Yo te itilize idrat katechin kòm yon solisyon referans nan diferan konsantrasyon pou jwenn yon koub kalibrasyon. Methanol te anplwaye kòm yon solisyon kontwòl. Kontni total proanthocyanidin nan echantiyon yo te deklare kòm ekivalan catechin (CE).

4.6.Free Radical Scavenging Activity Assays 4.6.1.DPPH Radical Scavenging Activity Assay

Yo te detèmine aktivite DPPH radikal scavenging echantiyon yo nan yon modèl plak byen 96-apre metòd Celeb et al.[53]. Nan premye, 150 uM nan solisyon DPPH te frèch prepare. Lè sa a, 200 μL nan solisyon DPPH te melanje ak 25 uL nan solisyon echantiyon. Lè sa a, melanj sa a te enkube nan tanperati chanm nwa pou 50 minit. Absorbans la te kalkile nan 540 nm. Butylated hydroxytoluene (BHT) te anplwaye kòm yon solisyon referans nan konsantrasyon diferan. Methanol te itilize kòm yon solisyon kontwòl. Aktivite echantiyon yo te prezante kòm EC50, ki koresponn ak konsantrasyon ki montre 50 pousan aktivite.

4.6.2.DMPD Radical Scavenging Aktivite Assay

DMPD * (N, N-dimethyl-p-phenylenediamine) radikal aktivite scavenging nan echantiyon yo te pote soti nan yon modèl plak byen 96- dapre metòd ki dekri pi bonè pa Inan et al. [13]. Premyèman,10{{10}} mM DMPD plis solisyon,0.05 M FeCl; Yo te fèk prepare solisyon 6H2O ak tanpon acetate 0.01 M. Lè sa a, 1 mL solisyon DMPD, 100 mL tanpon acetate, ak 0.2mL solisyon FeCl 3-6H2O yo te melanje, epi pita 15 solisyon echantiyon uLof yo te konbine avèk 210 μL melanj sa a. Apre peryòd enkubasyon nan tanperati chanm nwa pou 50 min, yo te mezire absòbe a nan 492 nm. Trolox te itilize kòm yon solisyon referans nan diferan konsantrasyon pou jwenn yon koub kalibrasyon. Konsantrasyon solisyon echantiyon yo te 1 mg/mL. DMPD radikal aktivite scavenging nan echantiyon yo te deklare kòm ekivalan Trolox (TE). 4.7.Essay aktivite pou diminye metal

4.7.1.Essay Pouvwa Antioksidan Rediksyon Ferrik (FRAP)

Detèminasyon nan aktivite FRAP nan echantiyon yo te akonpli nan yon modèl 96 byen-plak swiv pwosedi a te rapòte pi bonè pa Bardakci et al.[54]. Nan kòmansman eksperyans la, yo te fòme reyaktif FRAP nan melanje tanpon acetate, ferrik-tripyridyltriazine, ak FeCl; 6H2O solisyon. Apre sa, yo te mete reyaktif FRAP la andedan fou a 37 degre pou 30 min. Lè sa a, 10 uL nan solisyon echantiyon yo te konbine avèk 30 μL nan dlo distile ak 260 uL nan reyaktif FRAP, respektivman. Apre tan enkubasyon nan 37 degre pou 30min, yo te ajiste absòbe a a 593 nm. Yo te konstwi yon koub estanda lè yo te itilize diferan molarite silfat fèr (0.25-2 mM) solisyon pou evalye rezilta yo. BHT te itilize kòm yon solisyon referans nan diferan konsantrasyon. Aktivite FRAP nan echantiyon yo te prezante kòm mM FeSO4 nan 1 g ekstrè sèk.

4.7.2.Essay Kapasite Antioksidan Redui Cuprik (CUPRAC)

Aktivite CUPRAC echantiyon yo te detèmine nan yon modèl plak 96-byen apre metòd Celeb et al. 【31】; 85 μL CuSO4 （10 mM）, neocupraine, ak solisyon acetate amonyòm ak 51 uL dlo distile yo te ajoute nan 43 uL solisyon echantiyon, separeman. Apre yon peryòd enkubasyon (20 min) nan 50 degre nan yon beny dlo, yo te mezire absorbans nan 450 nm. Asid ascorbic te itilize kòm yon solisyon referans nan diferan konsantrasyon pou jwenn yon koub kalibrasyon. Aktivite CUPRAC nan echantiyon yo te prezante kòm ekivalan asid ascorbic (AAE). 4.8.Assay total aktivite antioksidan (TOAC)

Yo te fè detèminasyon total aktivite antioksidan echantiyon yo nan yon modèl plak 96-byen apre pwosedi Celeb et al. [55]. Okòmansman, yo te melanje yon sèten kantite fosfat sodyòm monobazik, amonyòm molybdate tetrahydrate, ak asid silfirik pou jwenn solisyon TOAC la. Lè sa a, 300 μL nan solisyon TOAC te ajoute nan 30 uL nan solisyon echantiyon. Apre peryòd enkubasyon nan 95 degre nan yon beny dlo pou 90 min, yo te detèmine absorpsyon nan 690 nm. Asid ascorbic te itilize kòm yon solisyon referans nan diferan konsantrasyon pou jwenn yon koub kalibrasyon. Aktivite TOAC nan echantiyon yo te reprezante kòm ekivalan asid ascorbic (AAE). 4.9.Estimasyon Index Biodisponibilite

Endèks byodisponibilite (BAvI) te kalkile dapre ekwasyon teyorik ki dekri pa Inan et al.[13]:

BAVI=CIN/CND "Endèks biodisponibilite" (BAvI) te dekri kòm rapò kantite fenolik nan echantiyon biodisponib la (IN) ak sa ki nan echantiyon ki pa dijere (ND). 4.10. Quantification de Marker Flavonoids pa HPTLC

Detèminasyon quantitative salidroside, hyperoside, ak kercitrin konsantrasyon nan tout echantiyon simulation (ND, PG, IN) nan ekstrè akeuz ki soti nan espès Cistus te pote soti nan wo-pèfòmans chromatografi kouch mens (HPILC) (CAMAG, Muttenz, Swis) swiv metòd la valide pa Guzelmeric et al. [16]. Hyperoside, salidroside, ak quercitrin yo te prepare nan 25,50 ak 10{{3{0}} konsantrasyon ug/mL, epi konsantrasyon yo nan solisyon echantiyon frèch prepare yo te ajiste a 10 mg/mL. Solisyon sa yo te aplike nan faz nòmal plak glas silica jèl (20 cm × 10 cm, Merck, Darmstadt, Almay) ak sèten volim （1-5 μL solisyon estanda ak 5 μL solisyon echantiyon) lè l sèvi avèk 100 μL sereng （ Hamilton, Bonaduz, Swis）. Pwosedi aplikasyon an te fèt ak aplikatè echantiyon Linomat 5. Pwosesis devlopman an te fèt nan Automated Development Chamber (ADC 2) ak etil acetate: dichloromethane, asid acetic, asid fòmik: dlo (10:25:10). :10:10:10me) te chwazi kòm yon faz mobil. Lè sa a, plak yo te derivatize ak reyaktif pwodwi natirèl (NPR) (1 g asid diphenylboric 2- aminoethyl ester nan 200mLof acetate etil) nan aparèy la imèsyon (CAMAG) Pandan ke yo te analize hyperoside ak quercitrin spectrophotometrically nan 260 nm, kantite salidroside te mezire nan 330 nm pa yon eskanè UV. Valè Rf nan estanda yo te detèmine kòm hyperoside （≈0.35）, quercitrin （c0.45）, （c0.45）, 0.65）.Koefisyan korelasyon yo (r²) yo te jwenn dwe × 0.98 pou quantification nan makè flavonoid yo.

4.11.Aktif Inhibitory sou anzim ki gen rapò ak dyabèt 4.11.1. -Glukozidaz Inhibition Aktivite

-Glukozidaz aktivite inhibition nan echantiyon ki pa dijere ak byodisponib yo te jwenn nan ekstrè yo akeuz nan espès Cistus yo te egzamine apre metòd la eksplike pi bonè pa Balan et al. [56]. Premyèman, bon kantite fosfat monosodyòm ak fosfat disodyòm yo te melanje ak pwokire 1 00 mM tanpon fosfat (pH7). AC glucosidase anzim te fonn nan tanpon fosfat pou jwenn solisyon an -glucosidase （0.2U/mL）. Lè sa a, 170 uL nan tanpon fosfat, 20 μL nan solisyon an -glucosidase, ak 20 μL nan solisyon echantiyon yo te konbine ak enkube nan yon fou 37 degre pou 15 min. Apre sa, 20 uL nan 2.5 mM p-nitrophenyl - - D-glucopyranoside solisyon nan 100 mM tanpon fosfat potasyòm (pH7.0) te ajoute nan melanj lan, ak yon lòt peryòd enkubasyon te egzekite nan 37 degre pou 15 min. Lè sa a, 80 μL nan 0.2 M solisyon carbonate sodyòm yo te ajoute nan melanj la mete fen nan reyaksyon an. Absorbans te mezire nan 405 nm. Yo te itilize solisyon Quercetin nan diferan konsantrasyon kòm referans. Rezilta yo te estime kòm pousantaj aktivite inhibition nan 1 mg/mL ak 0.5 mg/mL konsantrasyon nan echantiyon ND ak IN nan ekstrè akeuz espès Cistus.

4.11.2. -Amylase Inhibitory Aktivite

-amylase inhibition aktivite ki pa dijere ak byodisponib echantiyon yo te jwenn nan ekstrè yo akeuz nan espès Cistus te detèmine pa swiv pwosedi a detaye deja pa Balan et al.[56]. Spectrophotometric detèminasyon aktivite inhibition a-amylase nan echantiyon yo te fè pa anplwaye DNS (3,5-dinitrosalicylic asid) reyaktif. Jan sa di nan metòd la, maltoz fòme nan konvèsyon lanmidon an, ak koulè jòn DNS alkalin tounen nan koulè zoranj-wouj akòz maltoz ki pwodui nan lanmidon. Se konsa, 96 mM solisyon DNS te prepare nan melanj lan nan solisyon tartrat sodyòm potasyòm (fonn nan 2 M NaOH) ak yon sèten kantite DNS (fonn nan dlo distile). Lè sa a, 20mM tanpon fosfat sodyòm ak 6.7 mM NaCl (ko-faktè nan anzim a-amylase) te prepare nan 20 degre (pH: 6.9). anzim a-amilaz (1U/mL) ak lanmidon (10 mg/mL) te fonn nan tanpon sa a. Apre sa, 50 μL nan tanpon fosfat sodyòm ak 10 μL nan solisyon anzim a-amylase yo te melanje ak 20 μL nan solisyon echantiyon yo. Melanj sa a te enkube a 37 degre pou 45min. Apre peryòd enkubasyon an, yo te ajoute 20 μL nan solisyon lanmidon nan melanj lan. Yon lòt peryòd enkubasyon te kòmanse nan 37 degre pou 45 min. Yo te aplike menm pwosedi a nan echantiyon yo san adisyon nan yon solisyon anzim o-amylase ki rele "echantiyon background".Gwoup kontwòl la te etidye ak menm pwosedi a nan absans solisyon echantiyon yo. Absorbans te mezire nan 540 nm. Acarbose te itilize kòm yon solisyon referans nan diferan konsantrasyon Rezilta yo te prezante kòm yon pousantaj nan aktivite inhibition nan 1mg / mL ak 0.5 mg / mL konsantrasyon nan echantiyon ND ak IN soti nan ekstrè akeuz nan espès Cistus. 4.11.3.AJ Aktivite Inhibitory

Aktivite inhibition AGE nan echantiyon ki pa dijere ak byodisponib ki soti nan ekstrè akeuz nan espès Cistus te detèmine apre metòd ki dekri pa Starow-icz et al. [57]. Anvan nenpòt pwosesis, 1 mg/mL ak 0.5 mg/mL konsantrasyon nan echantiyon ND ak IN yo te frèch prepare. Lè sa a, 1 mL nan 10 mg/mL konsantrasyon nan albumin serik bovin (BSA) solisyon yo te ajoute nan 1 mL nan solisyon echantiyon ND ak IN. Echantiyon kontwòl yo te prepare san yo pa ajoute solisyon echantiyon ND ak IN, epi echantiyon vid yo te prepare san yo pa ajoute 0.5 M glikoz. Lè sa a, tout echantiyon prepare yo te enkube pou 40 èdtan nan yon beny dlo souke a 55 degre. Apre peryòd enkubasyon an te fini, yo te itilize lektè microplate Thermo ScientificTM VarioskanTMLUXmultimode nan ranje eksitasyon 370 nm/440 nm emisyon pou kalkile entansite fluoresans. Quercetin te itilize kòm yon solisyon referans nan konsantrasyon diferan.

5. Konklizyon

Nan etid la prezan, yo te envestige ekstrè akeuz nan tout espès Cistus ki anrejistre nan Flora Tik pou pwofil fenolik yo ak potansyèl antioksidan ak antidyabetik in vitro. Depi dekoksyon oswa perfusion se fòm komen nan medikaman tradisyonèl yo, lè l sèvi avèk ekstrè akeuz pou evalyasyon aktivite a nan syans eksperimantal se patikilyèman enpòtan. Nan lòt men an, konstitiyan idrofil nan ekstrè nan akeuz yo sibi yon seri de transfòmasyon metabolik nan sistèm nan gastwoentestinal yon fwa enjere. Se poutèt sa, pou evalyasyon aktivite kòrèk fòmilasyon tradisyonèl yo, aktivite metabolit yo biodisponib yo ta dwe envestige tou.

Sa a se premye etid pou egzamine konsekans metòd simulation in vitro moun dijesyon sou espès Turkish Cistus. Anplis de sa, potansyèl anpèchman nan espès Tik Cistus sou AGE yo te etidye nan etid sa a pou premye fwa. Anplis de sa, salidroside, hyperoside, ak quercitrin yo te asiyen flavonoid makè, ak chanjman nan konsantrasyon yo te kontwole nan pwosedi dijesyon an vitro. Pandan ke kontni fenolik ak aktivite antidyabetik ak antioksidan nan ekstrè yo te afekte negatif pa pwosedi dijesyon gastwoentestinal, yo toujou ekspoze byoaktivite enpòtan. Dapre rezilta yo, yo te detekte ekstrè C. salviifolius kòm plant ki pi pisan an tèm de kontni fenolik ak aktivite antioksidan ak anti-dyabetik. An konklizyon, pati ayeryen ki soti nan espès Tik Cistus gen yon kontni fenolik rich ak potansyèl antioksidan ak aktivite anti-dyabetik. Pandan ke yo te itilize metòd simulation dijesyon in vitro pou evalye byodisponibilite, li ta ka pa konplètman imite chemen metabolik ki fèt nan òganis lan. Se poutèt sa, plis etid nan vivo ak klinik yo oblije evalye byodisponibilite konpoze fenolik yo ak kontribisyon yo nan efè famasi yo rapòte an detay.

Kontribisyon otè:Konseptyalizasyon, YI, EC, EY; metodoloji, YI, SA, IK, analiz fòmèl EC, YI, IK.-C., SA; ankèt, YI, IK.-C, SA; resous, YI, IK.SA, EC ak EY; gerizon done, YI, IK-C., SA; ekri-—YI, ekri—revizyon ak koreksyon, YI, EC, EY; vizyalizasyon, YI; sipèvizyon, ECak EYTout otè yo te li epi dakò ak vèsyon maniskri a pibliye.

Finansman:Rechèch sa a pa te resevwa okenn finansman ekstèn. Deklarasyon Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl: Pa aplikab. Deklarasyon Konsantman Enfòme: Pa aplikab.

Deklarasyon Disponibilite Done:Done yo prezante nan etid sa a disponib sou demann nan men otè ki koresponn lan.

Konfli enterè:Otè yo pa deklare okenn konfli enterè.

Egzanp Disponibilite:Echantiyon konpoze yo pa disponib nan men otè yo.

Atik sa a soti nan Molecules 2021, 26, 5322. https://doi.org/10.3390/molecules26175322 https://www.mdpi.com/journal/molecules