Ranfòsman nan miskilè ak HIFN-Alpha 2b amelyore pwoteksyon BCGphipps-induit nan yon modèl murin nan lèp

Résumé:

Iminite lame a Mycobacterium leprae anglobe yon seri mekanis ki varye ant pwoteksyon iminite selilè ak domaj ki asosye ak iminite umoral tankou nan reyaksyon lèp tip-2. Malgre ke entèferon tip I (IFNs) patisipe nan elimine patojèn intraselilè, kontribisyon yo nan pwodiksyon an nan antikò ak CD3 plis FOXP3 plis selil T regilasyon (Tregs) nan pwoteksyon vaksen BCG medyatè nan lèp yo pa konnen. BCGphipps (BCGph) priming ki te swiv pa entramuscular hIFN- 2b ranfòse gwosè blesi siyifikativman redwi ak Mycobacterium lepraemurium kwasans nan po a. Selil regilasyon folikulèr T (TFR), yon pati nan Tregs pwovoke pa vaksinasyon oswa enfeksyon, abite nan sant jèminal yo (GCs) ak modile pwodiksyon antikò.

Nou te jwenn endiksyon Treg andikape ak amelyore GC nan drenaj gangliyon lenfatik sourit BCGph prime ak hIFN- 2b ranfòse. Anplis, sourit sa yo te pwovoke yon kantite enpòtan IL-4 ak IL-10 nan serom. Kidonk, rezilta nou yo sipòte pwopriyete adjuvant hIFN- 2b nan yon kontèks priming BCGph pou amelyore iminite pwoteksyon kont lèp po.

Pwoteksyon iminite refere a kapasite kò a pou defann kont patojèn ki bay enfeksyon pa pwodwi antikò, selil T, elatriye, epi li se youn nan mekanis enpòtan pou kò a reziste maladi. Iminite refere a kapasite kò a pou rekonèt ak reponn ak divès kalite sibstans etranje (ki gen ladan patojèn, kò etranje, selil timè, elatriye), ki gen ladan iminite selilè ak iminite umoral. Iminite pwoteksyon se yon pati nan iminite, ak de yo se pre relasyon. Bon iminite ka ankouraje amelyorasyon nan pwoteksyon iminite, pi byen anpeche ensidan an nan maladi. An menm tan an, amelyorasyon nan pwoteksyon pwoteksyon kapab tou amelyore iminite, sa ki pèmèt kò a pi byen fè fas ak divès kalite defi ekstèn. Se poutèt sa, kenbe yon sistèm iminitè ki an sante, ki gen ladan bon iminite pwoteksyon, trè enpòtan pou kenbe bon sante. Soti nan pwen de vi sa a, iminite a trè enpòtan tou. Si nou vle amelyore iminite nou an, Cistanche ka siyifikativman amelyore iminite nou an. Polisakarid yo nan Cistanche ka kontwole repons iminitè a nan sistèm iminitè imen an ak amelyore selil iminitè yo. Kapasite estrès, amelyore efè bakterisid selil iminitè yo.

Klike sou benefis sante nan cistanche

Mo kle:

Mycobacterium lepraemurium; lèp murin; entèferon alfa; BCGphipps; sant jèminal; selil T regilasyon.

1. Entwodiksyon

Mycobacterium leprae ak Mycobacterium lepromatosis, ajan yo etyolojik nan lèp imen [1,2], afekte po a ak nè periferik [3]. Malgre ke tretman plizyè dwòg (MDT) pou lalèp disponib, kantite nouvo ka rete estab (700,000 pa ane).

Anplis de sa, mank de yon pwosedi dyagnostik efikas fè swiv transmisyon M. leprae difisil [4-7]. Predispozisyon jenetik la lèp bonè [8] mete aksan sou nesesite pou yon dyagnostik apwopriye ak devlopman nan imunoterapi a pri ki ba pou diminye ensidans lèp nan peyi devlope yo [9,10]. Spectre nan manifestasyon klinik nan lèp korelasyon ak kalite a nan repons iminitè pwovoke. Pou egzanp, lèp tibèkiloid (TT), karakterize pa yon repons dominan Th1, mete restriksyon sou kwasans bacilli atravè deklanchman IFN-kondwi nan fonksyon mikrofaj nan makrofaj. Kontrèman, pwodiksyon Th2 cytokines klasik yo (IL-4 ak IL{-10) te asosye ak pèt pwoteksyon ak ogmante kwasans bacillary nan lèp lepromatous disséminé (LL) [10]. Genyen tou subtip entèmedyè ki reprezante yon melanj de repons Th1 ak Th2 [10].

Enfeksyon sourit ak M. lepraemurium (MLM) [11,12] yo te itilize pou etidye mekanis iminolojik lèp imen [11-13], menm si MLM pa montre tropism pou nè periferik [11,13] kòm M. leprae. fè [14]. Men, tou de mikobakteri yo pa ka kiltive epi yo grandi tou dousman nan lame a, double kantite yo nan 1-3 semèn.

Enfeksyon lar eksperimantal ak ti dòz bakteri imite byen natirèl maladi a ki anjeneral rive lè dezòd nan baryè fasilite kolonizasyon mikobakteri, deklanche yon reyaksyon iminitè nan yon nivo periferik [13,15-17]. Pandan ke selil-medyatè iminite (CMI) gen pwoblèm, iminite umoral pratikman pa afekte nan lèp imen ak murin [18]. Anplis de sa, selil Th1- oswa Th{2-, lòt lenfosit T, fòme iminite lame a kont enfeksyon M. leprae [18,19].

Li se curieux ki jan M. leprae enfliyanse iminite lame nan diferan subtip maladi mikobakteri. Yon ipotèz se ke patojèn nan diminye iminite umoral ak selilè lame pou enfekte po a ak nè periferik [3,14,15]. Genyen tou prèv ki montre bazil la afekte deklanchman macrophage. Li tou diminye ekspresyon TNF-alfa ak molekil tankou prostaglandin ki pwovoke pwodiksyon IL-1 ak oksijèn reyaktif ak entèmedyè nitwojèn (ROI ak RNI), kritik nan fonksyon mikobakterisid nan makrofaj [20-22].

Repons imoral ki pwodui nan tisi lenfoyid segondè ak siperyè yo patisipe nan iminite pwoteksyon kont patojèn [23-26]. Yon rapò resan sou lalèp mete aksan sou wòl kritik Tregs nan anpèchman repons selil Th1 ak Th17 [19]. Vreman vre, balans ki genyen ant selil T sa yo nan GC yo [27-29] dikte rezilta pwoteksyon oswa patolojik nan maladi enfeksyon ak otoiminitè [30,31] epi li enpòtan anpil pou devlopman terapi pou pwovoke iminite pwoteksyon [26,27]. ].

An patikilye, T helper follicular cellules (TFH) ak espesyalman T follicular selil regilasyon (TFR) modile repons GC pou pwovoke repons iminitè umoral ki dire lontan pandan y ap anpeche pwodiksyon otoantikò [32,33]. Etandone ke kalite I IFN ki asosye ak jenerasyon tou de TFH ak Tregs, li parèt kòm yon adjuvant pwomèt pou ankouraje repons TFH nan GC yo nan kontèks vaksen BCG [34].

Administrasyon mukozal nan IFNs tip I pwovoke spirasyon selil dendritik ak jenerasyon CXCR5 plis CD4 plis TFH, fasilite devlopman GC ak pwodiksyon antikò ki gen gwo afinite nan nœuds lenfatik [34]. Kontrèman, IFN tip I anile iminite lame nan tibèkiloz imen lè yo anpeche pwodiksyon sintaz oksid nitrique (iNOS), IL-12p40, IL-1A, ak IL-1 pandan y ap pwovoke. IL-10 ak IL-1R antagonis [35–38]. Kidonk, patisipasyon kalite I IFN yo depann de kontèks [38-42]. Kalite I IFN yo pwodui nan yon nivo fiks, men yon fwa yon patojèn entraselilè anvayi lame a, yo pwovoke plizyè repons eterojèn ak konplèks anti-viral oswa anti-bakteri [43-48], ki gen ladan chanjman klas antikò, ipèmitasyon somatik, ak amelyorasyon. disponiblite antijèn nan GC yo ki pral mennen nan repons antikò fò ak efikas [34,49].

Nou te deja rapòte pwoteksyon an konfere pa siksesif nan miskilè ranfòse IFN nan sourit pran vaksen ak Mycobacterium bovis BCG ak defye ak MLM [42] oswa kont aerosolize M. tuberculosis defi [41]. Nan sourit ki te defye ak MLM, pwoteksyon korelasyon ak pwodiksyon amelyore nan iNOS, oksid nitrique, ak antikò IgG3 [42]. Nan kontèks defi M. tibèkiloz la, sourit ki pwoteje yo te pwovoke yon repons Th1 [41].

Nan yon etid ki pi resan, kalite I IFN yo te module otofaji ak metabolis nan lèp [50]. Nan etid sa a, nou te deside plis envestige pwoteksyon kont lèp murin pwovoke pa vaksinasyon ak M. bovis BCGphipps (BCGph) ak yon prezantasyon pharmaceutique nan IFN - 2b imen [51]. Nan etid resan yo, yo te itilize yon BCG recombinant ki eksprime IFN- 2b imen pou trete kansè nan blad pipi avèk siksè [51–55]. Konfòm ak done sa yo, objektif nou nan etid sa a se te analize pwoteksyon an pwovoke pa priming BCGph ak ogmantasyon hIFN- 2b nan yon modèl murin nan lèp. Ansanm, rezilta nou yo anvizaje potansyèl BCGph priming lar ak nan miskilè hIFN- 2b ranfòse pou pwovoke iminite pwoteksyon kont lèp imen.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Bèt

Sourit Balb/c san patojèn espesifik yo te elve ak loje nan enstalasyon Animal nan Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional nan vil Meksik.

Tout eksperyans bèt yo te fèt apre apwobasyon (07 mas 2014) pa Komite Enstitisyonèl Swen Animal ak Jesyon (CIE-ENCB ZOO 016/2014).

2.2. Mikwo-òganis

Souch BCG Phipps (ATCC® 35744™) (BCGph) se yon varyant souch BCG ki pèdi rejyon RD1 ki kode ESAT-6 ak CFP10, ak pi ba kantite epitop selil T. , 316, kont BCG Tokyo, 359, ak BCG Pasteur, 331, (Zhang et al., 2013) [51] e Dr Hernández-Pando (INCMNSZ, Mexico City, MX) te bay. Lè sa a, sispansyon vaksen yo te estoke nan -80 ◦C jiskaske yo itilize yo. Mycobacterium lepraemurium (MLM) souch ki pa kiltivab te izole nan larat sourit ki pote yon enfeksyon kat mwa atravè yon pwosedi ki dekri pa Prabhakaran et al., 1976 [56], ki te swiv pa pirifikasyon lè l sèvi avèk pwosedi izolasyon pèsonèl ki dekri pa Draper P. , 1980 [57]. Yon ti tan, yo te sispann 4 g nan tisi larat nan 20 mL nan 0.2 M sikwoz ak tè nan yon vè Potter-Elvehjem-kalite homogenizer. Sispansyon ki kapab lakòz yo te santrifuje pou 20 min nan 150 × g pou retire debri selil yo (Sorvall RV5B, rotor HB4) (Sorvall Instruments, Wilmington, DE, USA). Lè sa a, 9 mL nan supernatant la te kouvri sou 12 mL nan 0.3 M sikwoz, ak tib yo te santrifuje nan 3500 × g pou 10 min nan 4-10 ◦C (Sorvall RC5B). Granules ki gen anpil bacilli ki te lakòz yo te resuspend nan 20 mL nan 0.2 M sikwoz, ak aliquot 9 mL yo te kouvri sou 12 mL nan 1.5 M KCl.

Lè sa a, yo te santrifuje tib la nan 4 ◦C pou 10 min nan 3500× g. Bacilli yo te kolekte, lave twa fwa ak phosphate-buffered-saline (PBS) (0.01 M Na/K fosfat, 0.15 M NaCl, pH 7.4), epi yo te resuspend nan 40 mL nan yon solisyon ki gen yon melanj de Percoll (3 pati) ak 0.1 pousan Tween 80 (7 pati). Sispansyon an te santrifuje nan 23,000× g. Yo te ranmase grenn bacillary a epi lave senk fwa ak PBS jiskaske elimine Percoll la. Pite preparasyon bacillary la te konfime pa tach Ziehl-Neelsen. Sispansyon bacillary pirifye a te prepare nan mwayen sentetik 7H9 Middlebrook brothOADC (DIFCO, Detroit, MI, USA) (7H9-OADC mwayen) epi yo te mezire atravè yon koub referans nefelometrik ki te prepare ak kantite bakteri li te ye. Sispansyon bacillary a te aliquot ak jele nan -20 ◦C, jiskaske pare pou itilize.

2.3. Vaksinasyon

Gwoup sourit Balb/c ki gen uit semèn (n=6) yo te vaksinen anba lar ak 8 × 103 inite ki fòme koloni (CFU) BCGphipps nan 200 µL PBS esteril. Yon mwa apre, chak gwoup sourit te ranfòse nan miskilè pandan twa jou youn apre lòt (30, 31, ak 32 jou apre vaksinasyon) avèk 100 µL PBS oswa avèk 100, 200, oswa 300 inite entènasyonal (IU) hIFN {{14} }b (Urifron, Probiomed, Azcapotzalco, Mexico City, Meksik).

2.4. M. lepraemurium defi

Pou eksperyans defi yo, sourit yo te vaksinen intradermally ak 2 × 106 MLM solid nan 20 µL PBS. Lè sa a, sourit yo te loje nan kondisyon estanda ak apwovizyone ak dlo pirifye ak Purina wonjè chow chips (Cuautitlan Izcalli, Meksik) ad libitum. Sourit ki enfekte yo te kontwole pou uit semèn, tan lè blesi yo te evidan nan po bèt ki enfekte yo. Pwogresyon maladi a te varyab nan sourit yo epi li te gen rapò ak terapi eksperimantal (PBS, BCGph, oswa hIFN- 2b).

2.5. Egzamen imunosorban ki lye ak anzim (ELISA)

Antikò nan sera sourit ki enfekte MLM yo te mezire pa endirèk anzim-lye immunosorbent assays (ELISA). Yon ti tan, 96-plak byen (Nunc, Rochester, NY, USA) yo te kouvwi lannwit lan nan 4 ◦C, ak 1.0 µg peptidoglycolipid ki fonn nan etanòl [38]. Apre evaporasyon etanòl nan tanperati chanm [37], yo te bloke lyezon ki pa espesifik ak 3 pousan lèt ki pa gen anpil grès nan PBS soti nan 2 a 3 èdtan. Apre yo fin jete solisyon an bloke, 0.1 mL nan sera a dilye (1:100) nan 1 pousan lèt ki pa gen anpil grès nan PBS yo te ajoute nan pwi yo ak enkube lannwit lan nan 4 ◦C.

Apre sa, yo te lave plak yo anpil ak PBS, epi yo te detekte antikò ki te mare yo ak {{0}}.1 mL IgG anti-sourit (1:4{000, BD 550487, BD Pharmingen, San). Diego, CA, USA), IgG1-HRP (1:2500, ab 97240, Abcam, Cambridge, MA, USA), IgG2a-HRP (1:2500, ab97245, Abcam), IgG2b-HRP (1: 2500, ab97250, Abcam), oswa IgG3-HRP (1:2500, ab97260, Abcam), oswa antikò monoklonal IgA rat anti-sourit ki konjige ak byotin (1:1000, BD 550487, BD Pharmingen), ki te swiv pa peroksidaz refor (HRP)-konjige rat anti-sourit antikò Ig (1:1000, BD 550487, BD Pharmingen) oswa avidin-HRP (ab 59653, abcam) Substra chromogenic la, tetramethyl-benzidine nan 0.05 M sitrat-H. 5.2), complétée ak 0.01 pousan oksijene idwojèn (H2O2), te ajoute nan pwi yo pou devlopman koulè. Reyaksyon an te sispann ak 1 M H3PO4. Dansite optik yo te mezire nan 450 nm nan yon lektè ELISA mikroplak (LabSystems Multiskan Plus, LabX, Midland, ON, Kanada). IFN-, IL-4, IL-17, IL{-6, TNF-, ak IL{-10 yo te mezire nan serik la ak twous ELISA sandwich espesifik (PEPROTEC Inc., Cranbury , NJ, USA). dapre enstriksyon manifakti a.

2.6. Mezi NO nan Sera sourit yo

Yon ti tan, yo te trete sera ak etanòl (1:1) pou presipite pwoteyin ak lòt faktè entèfere. Apre santrifijasyon a 3000 rpm pou 20 min, yo te mete 20 µL serom refè a nan pwi yon plak ELISA ansanm ak 100 µL reyaktif Griess, ak 80 µL dlo distile. Reyaktif Griess la se yon melanj volim-a-volim nan solisyon A (2 pousan sulfanilamid nan 5 pousan asid fosfò) ak solisyon B (0.1 pousan N-(1-naphthyl) etilendiamin, dihydrochloride. Apre yon enkubasyon 30 min nan 25 ◦ C, koulè woz devlope a te anrejistre nan yon lektè ELISA nan 595 nm. Yo te ekstrè valè yo nan yon koub estanda nitrit sodyòm nan ranje 1-100 µM.

2.7. Iminofluoresans

Antikò prensipal yo te jwenn nan konpayi sa yo: Goat anti-iNOS (klon M-19, Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA), Rabbit anti-nitrotyrosine (AB 5411, EMD, Millipore, Burlington, MA, USA). ), biotin rat Ly6C/Ly6G (klonaj RB6-8C5, BD Pharmingen), kabrit anti-CD3 epsilon (Klon M-20, Santa Cruz Biotechnology), rat antisorit FoxP3 (klonaj FJK{{12} }s, eBioscience, San Diego, CA, USA), kabrit anti-proliferasyon selil antijèn nikleyè (clon C-20, Santa Cruz Biotechnology), FITC-aglutinin pistach (L{7381- 1MG, SIGMA, St. . Louis, MO, USA), ak APC-rat anti-sourit CD45R (klonaj RA3-6B2, BD Pharmingen).

Antikò prensipal yo te revele ak antikò segondè sa yo: Alexa Fluor 568 bourik anti-kabri IgG (A11057, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), Alexa Fluor 488 bourik anti-lapen IgG (711-546, Jackson ImmunoResearch Laboratories , West Grove, PA, USA), ak Alexa Fluor 680 streptavidin (S32358, Thermo Fisher Scientific).

Yo te enkube seksyon parafinize senk µm ki fikse ak fòmalin nan 60 ◦C lannwit lan pou deparafinizasyon. Seksyon tisi yo te transfere byen vit nan xylenes (247642-2.5L, SIGMA) ak idrate pa sekans plonje glisad nan alkòl absoli, 96 pousan alkòl, 70 pousan alkòl, ak dlo. Glisad yo te benyen nan yon solisyon rekipere antijèn, bouyi pou 30 minit, epi yo refwadi pou 10 minit nan tanperati chanm (RT). Slides yo te rense plizyè fwa nan dlo epi transfere nan PBS. Liaison ki pa espesifik te bloke ak 5 pousan serom nòmal bourik nan PBS ki gen 0.1 pousan Tween 20 ak 0.1 pousan Triton-X-100, pou 30 min nan RT nan yon chanm imid. Antikò prensipal yo te ajoute nan glisad ak enkube lannwit lan nan yon chanm imid nan RT. Glisad yo te lave dousman nan PBS, ak antikò segondè ki gen etikèt fluorescent yo te enkube pou 2 èdtan, nan RT, oswa lannwit lan nan yon chanm imid.

Finalman, glisad yo te rense pou 1 èdtan nan PBS epi monte ak Vectashield antifade aliye medya ak DAPI (H-1200, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Yo te pran foto ak yon mikwoskòp Zeiss Axioplan. Tout sant jèminal (GCs) nan yon seksyon nœud lenfatik yo te mezire ak yon zouti otomatik nan mikwoskòp Carl Zeiss la, epi gwosè mwayèn GC yo te kalkile lè l sèvi avèk lojisyèl Prism la. CD3 plis FoxP3 plis Tregs yo te konte nan 5 o aza 200 × jaden pou chak tisi pou kalkile kantite mwayèn selil pozitif pou chak jaden.

2.8. Analiz estatistik

Diferans estatistik siyifikatif pami gwoup yo te kalkile pa yon sèl-fason ANOVA, Newman–Keuls konparezon miltip, unpaired/paireed two-tailed Student's t-test, ak valè P <0.05 yo te konsidere kòm estatistik enpòtan. Diferans estatistik yo te kalkile ak Graph Pad Prism.

3. Rezilta yo

3.1. BCGphipps (BCGph)-Priming ki te swiv pa siksesif Entramiskilè hIFN- 2b Ranfòse Pwoteje sourit Balb/c kont defi Entradermal ak M. lepraemurium.

Nou te deja devlope yon pwotokòl prime-boost ki baze sou siksesif nan miskilè ranfòse nan IFN apre vaksinasyon BCG nan sourit [42] ak rezilta pwoteksyon pwomèt. Dènye etid yo te itilize yon recombinant BCG ki eksprime IFN- 2b imen pou trete kansè nan blad pipi [51,53]. Se poutèt sa, nan etid sa a, objektif nou an se te analize pwoteksyon an pwovoke pa priming BCGph ki te swiv pa ogmantasyon hIFN- 2b nan yon modèl murin nan lèp, swiv konplo a montre nan Figi 1.

Figi 1. Pwotokòl Prime-Boost pou evalye pwoteksyon sourit kont defi entradermal ak M. lepraemurium. Gwoup sourit Balb/c (n=6) yo te pran vaksen anba lar ak yon dòz ki ba BCGph (8 × 103 CFU). Sourit nan chak gwoup yo te ranfòse nan miskilè nan jou youn apre lòt (30, 31, ak 32 jou apre vaksinasyon) ak PBS oswa hIFN- 2b. Sourit yo te defye ak 2 × 106 MLM solid uit semèn apre dènye ranfòse a. Apre sa, sourit yo te sakrifye, ak biospecimens yo te kolekte uit semèn apre defi. Devlopman blesi po yo te kontwole ak mezire jan sa dekri nan Materyèl ak Metòd.

Yon ti tan, sourit yo te defye intradermalman ak MLM, uit semèn apre twazyèm ogmantasyon ak 300 IU hIFN- 2b. Pwogresyon maladi a te kontwole pandan uit semèn kap vini yo. Nan fen peryòd sa a, nou kolekte nœuds lenfatik inguinal pou detekte GCs ak enumere Tregs ak lòt popilasyon selil pa imunofluoresans. Nou te itilize tou imunofluoresans pou visualize pwodiksyon iNOS pa makwofaj aktive, kote résidus nitrotyrosine (NT), ak akimilasyon Gr-1 plis selil myeloid nan po sourit eksperimantal nou yo. Anplis de sa, nou kolekte serik la pou mezire sitokin yo ak antikò nan glikolipid MLM pa ELISA (Figi 1).

Premyèman, pou evalye efè pwoteksyon priming BCGph ak ogmantasyon hIFN{{0}}b kont defi entradermal sourit ak MLM, nou te mezire blesi po yo ak visualize kolonizasyon bacilli po a pa tach Ziehl-Neelsen. (Figi 2A–E). Po sourit unprimed ki te resevwa sèlman machin (PBS), san defi MLM, pa te montre okenn bacilli (Figi 2A). Sourit yo vaksinen ak veyikil la ak defye ak MLM te montre anpil kantite bacilli MLM nan po a (Figi 2B) pandan y ap priming sourit ak BCGph te mennen nan yon rediksyon nan kwasans mikobakteri (Figi 2C). Administrasyon siksesif hIFN- 2b tou redwi kwasans mikobakteri nan po a konpare ak sourit ki te defye ak MLM (Figi 2D). Sourit yo prime ak BCGph ak ranfòse ak hIFN- 2b te gen pi ba kwasans mikobakteri (Figi 2E). Konfòm ak done sa yo, sourit ki an sante yo te defye ak MLM ki te resevwa sèlman machin (PBS) devlope blesi po ki pi vaste (35 ± 9.9 mm2), pandan y ap sourit yo ki te BCGph-prime te gen blesi po ki menm gwosè ak sa yo devlope nan. sourit yo vaksinen ak veyikil la ak defye ak MLM (13.5 ± 4.24 mm2) (Figi 2F). Sourit yo te enjekte anba lar ak hIFN- 2b te montre pi piti blesi po (20 ± 1.77 µm2). Nòt, sourit ki te BCGph prime ak ranfòse ak hIFN- 2b te montre yon rediksyon enpòtan nan gwosè blesi po (5 ± 7.07 mm2) (p <0.05) (Figi 2F).

\

Figi 2. Blesi po ak kwasans mikobakteri nan Balb/c defye ak M. lepraemurium. Pwoteksyon sourit yo te evalye pa devlopman blesi po ak vizyalize kwasans mikobakteri nan blesi po a nan uit semèn apre defi ak MLM. Blesi po yo te tache ak Ziehl-Neelsen. Reprezantan 400× foto agrandisman (A) sourit ki pa gen premye ak sourit ki pa konteste; (B) sourit vaksinen ak PBS ak defye ak MLM; (C) sourit prime ak BCGph ak defye ak MLM; (D) sourit yo te vaksinen nan miskilè ak hIFN- 2b epi yo te defye ak MLM; (E) sourit prime ak BCGph, ranfòse ak hIFN- 2b, ak defye ak MLM; (F) Pwoteksyon efikas ekivalan swa absans blesi po oswa yon rediksyon enpòtan nan gwosè blesi po, ki eksprime nan mm2, n=6 sourit/gwoup. * p < 0.05; ** p <0.005; *** p <0.0005 te konsidere kòm estatistik siyifikatif.

3.2. Patoloji Po Minim nan Sourit Prime ak BCGphipps ak Ranfòse ak hIFNa 2b Koreyèl ak Diminye Nitrotyrosine Akimilasyon ak Enfiltrasyon Neutrophil Defisi

Ksid nitrique enpòtan anpil pou touye patojèn intraselilè. Sepandan, pwodiksyon twòp nan oksid nitrique, sipèoksid radikal (O,-, ak oksijene idwojèn mennen nan jenerasyon peroxynitrite toksik ak enstab, yon molekil ki reyaji ak résidus tirozin sou pwoteyin yo fòme NT ki estab 56-601. Malgre ke peroxynitrite touye mikobakteri, li tou domaje selil iminitè yo [57-59].

Kidonk, nou te deside fè rechèch pou selil ki pwodui iNOS, ak netrofil nan po sourit eksperimantal nou yo pa imunofluoresans. Wesaw siyal background pou iNOS ak NT ak anpil kèk Gr-1 plis selil nan po sourit k ap resevwa sèlman PBS (Figi 3A). Ogmantasyon chaj mikobakteri ak blesi nekrotik elaji nan po a ki gen rapò ak akimilasyon nan résidus NT nan zòn nan po nekrotik (58,59 nan sourit san vaksen (Figi 3B) ak BCGph primed sourit defye ak MLM (Figi 3C) Ki konsistan avèk yon repons enflamatwa lokal ki pi ekilibre. ak amelyorasyon nan patoloji po, NT ak enfiltrasyon netrofil yo te diminye nan sourit k ap resevwa inokulasyon siksesif ak hIFN- 2b (Figi 3D) oswa sourit BCGph prime ak ranfòse ak hIFN 2b (Figi 3E). }} plis netrofil ak zòn NT redwi kowenside ak pi piti zòn enflamatwa nan seksyon po istolojik sourit ki prime ak BCGph ak ranfòse ak hIFN- 2b (Figi 3F).

Figi 3. Pwoteksyon ki asosye ak akimilasyon nitrotyrosine diminye, akimilasyon neutrofil ki gen pwoblèm, ak enflamasyon po amelyore. Seksyon blesi po yo te tache ak yon konbinezon de antikò espesifik pou iNOs (wouj), NT (vèt), ak Gr-1 (blan). Reprezantan 200× foto ki soti nan (A) Po sourit san premye ak defye, (B) sourit vaksinen ak PBS epi defye ak MLM, (C) sourit prime ak BCGphipps ak defye ak MLM, ( D) sourit yo te vaksinen nan miskilè ak hIFN- 2b ak defye ak MLM ak (E) sourit prime ak BCGph, ranfòse ak hIFN- 2b ak defi ak MLM; (F, G) kantite nan zòn enflamatwa a ak zouti otomatik nan mikwoskòp Zeiss Axioplan, blesi po yo te kolekte nan uit semèn apre defi ak MLM, grafik montre zòn an mwayèn okipe pa selil enflamatwa nan blesi po lèp, eksprime nan µm2. Ba echèl=100 µm. n=6 sourit/gwoup * p < 0.05; ** p <0.005; *** p <0.0005 te konsidere kòm estatistik enpòtan.

Pwodiksyon NO pa te estatistik siyifikatif konpare ak lòt gwoup eksperimantal yo sepandan, nan gwoup sourit BCGph-prime ak ranfòse ak hIFN- 2b, konsantrasyon nan NO te pi wo (68.28 µM/L ± 0 .889) pase nan gwoup PBS ak MLM (62.79 µM/L ± 1.04), BCGph (63.37 µM/L ± 0.225), hIFN- 2b (62.57 µM/L ± 1.028). ) (Figi 3G).

3.3. Sitokin anti-enflamatwa yo ogmante nan sewòm sourit ki prepare ak BCGphipps ak ranfòse ak hIFN- 2b

Pro- ak anti-enflamatwa sitokin yo te mezire nan serom nan sourit Balb / c apre defi a ak MLM. Konfòm ak eta a imunosuppressive ki te koze pa MLM, konsantrasyon yo nan sitokin proenflamatwa yo te ba nan serom nan sourit Balb/c vaksinen ak PBS ak defye ak MLM (IFN-, 625 ± 442 pg/mL; TNF-, 697 ± 436 pg/). mL; IL-6, 68 ± 48 pg/mL; IL-17, 95 ± 67 pg/mL). Kontrèman, yo te gen nivo modere nan sitokin anti-enflamatwa nan serik la (IL-10, 1763 ± 124 pg/mL ak IL-4, 1250 ± 173 pg/mL). Malgre ke sourit yo te pwoteje pa BCGph priming ak ranfòsman siksesif ak hIFN- 2b, kantite sistemik nan sitokin proenflamatwa yo pa te estatistikman diferan de sa yo ki nan sourit vaksen ak PBS ak defye ak MLM. San atann, konsantrasyon pou IL-4 (1875 ± 352 pg/mL, p <0.05), ak IL-10 (4250 ± 271 pg/mL) te siyifikativman ogmante nan serom nan sourit sa yo konpare. ak sourit vaksinen ak PBS ak defye ak MLM (Tablo 1). Rezilta sa yo sijere ke pwotokòl vaksinasyon nou an ta ka aktive chemen anti-enflamatwa pou anpeche domaj tisi yo.

3.4. Akimilasyon Treg andikape nan nœuds lenfatik drenaj yo (DLNs) sourit ki prime ak BCGphipps oswa ranfòse ak hIFN- 2b

Lè nou konsidere ke Tregs pwodui IL-10 [61,62], nou deside kantite CD3 plis FOXP3 plis Tregs nan nœuds lenfatik drenaj yo (DLN), ki sitiye tou pre sit vaksinasyon an. Nan sourit ki pa enfekte yo (PBS), Tregs te toujou prezan (113 ± 9.8 CD3 plis FOXP3 plis Treg / 200 × jaden) (Figi 4A). Kòm espere, Tregs te ogmante anpil nan sourit ki te defye ak MLM ki pa t resevwa vaksen an (BCGph) oswa hIFN- 2b (214 ± 30 CD3 plis FOXP3 plis Tregs/200 × jaden) (Figi 4B). Kongriyanman, yo te obsève nivo ki pi ba nan Tregs nan sourit yo prime ak BCGph (160 ± 26 CD3 plis FOXP3 plis Tregs/200 × jaden) (Figi 4C) ak sourit yo ki te resevwa hIFN- 2b (162 ± 33 CD3 plis). FOXP3 plis Tregs/200 × jaden) (Figi 4D); sourit yo prime ak BCGph ak ranfòse ak hIFN- 2b (127 ± 16 CD3 plis FOXP3 plis Tregs/200 × jaden) (Figi 4E) te gen yon dansite Treg menm jan an pase sourit san vaksen san hIFN- 2b ranfòse. Sepandan, apre nou te fin konte CD3 plis FOXP3 plis Tregs nan DLN yo nan sourit eksperimantal nou yo, nou te jwenn ke Treg yo te siyifikativman redwi nan DLN yo nan sourit apre BCGph priming (p=0.0013), hIFN- 2 b inokulasyon (p=0.0074), oswa konbine BCGph priming ak hIFN - 2 b ranfòse (p=0.0013) an konparezon ak sourit defye ak MLM (Figi 4E).

Figi 4. Akimilasyon andikape selil T regilasyon (Tregs) nan nœuds lenfatik drenaj yo (DLNs) sourit prime ak BCGphipps ak ranfòse ak hIFN- 2b. Sourit yo te sakrifye, epi DLN yo te kolekte uit semèn apre defi ak MLM. DLN te tache ak antikò espesifik pou CD3 (wouj) ak FOXP3 (nwayo vèt) pou detekte CD3 plis FOXP3 plis Tregs pa imunofluoresans. (A) Akimilasyon Bazal Tregs nan DLN sourit ki pa vaksinen yo; (B) Tregs nan DLN yo te ogmante apre defi MLM ak konparativman redwi nan (C) BCGph-prime, (D) hIFN- 2b vaksinen, ak (E) BCGph-prime-hIFN- 2b sourit ranfòse; (F) analiz mòfometrik montre yon rediksyon enpòtan nan Tregs nan DLN yo nan sourit BCGph primed/hIFN- 2b ranfòse. Ba echèl=100 µm, n=6 sourit/gwoup * p < 0.05; ** p < 0.005; *** p <0.0005 te konsidere kòm estatistik enpòtan.

3.5. BCGphipps Priming ak hIFN- 2b Ogmante Enfliyans Repons GCs nan DLN sourit

Gen Tregs espesyal ki sitiye nan GC yo ke yo rekonèt kòm selil regilasyon T folikulèr yo (TFFRYo modile tou de repons GCs yo epi anpeche jenerasyon selil plasma autoreactive (28,33). Tregs yo diminye nan DLN yo sijere ke repons GCs yo ta ka deklannche nan sourit. prime ak BCGph ak ranfòse ak hlFN-a 2b. Ki konsistan avèk absans eksitasyon antijenik, nou pa t 'detekte GCs nan DLN yo nan sourit ki pa enfekte Figi 5A).Ti GC yo te prezan nan DLN yo nan sourit unprimed, defye ak MLMLigure 5B).

Figi 5. BCGphipps priming ak hFN-a 2b ranfòse enfliyans GC repons nan DLN apre defi MLM. Sourit yo te sakrifye nan uit semèn apre defi ak ML M. Drening nœuds lenfatik (DLNs) yo te tache ak antikò specifier proliferating selil nikleyè antijèn (PCNA, nwayo wouj), aglutinin pistach (PNA, vèt), ak CD45R (B22{{13). }}, blan) pou idantifye GC ki genyen grap kontra enfòmèl ant PCNA*PNA plis * B220selil GC B ki ba yo. Selil GC B nan DL N nan (A) sourit san premye ak san konteste; (B) sourit vaksinen ak PBS ak defye ak MLM; (C) sourit prime ak BCGph ak defi ak MLM; (D) sourit entramuscularly ranfòse ak hlFN-a 2b ak defye ak MLM; (E) sourit prime ak BCGphboosted ak hlFN-a 2b, ak defye ak ML M; (F) GC yo te mezire nan DL N endividyèl nan sourit eksperimantal kalkile gwosè mwayèn GC. Ba echèl=100 um.=6 sourit/gwoup. "p <0.05, * p < 0.005; *** y < 0.0005 te konsidere kòm estatistik enpòtan.

Figi 5. Priming BCGphipps ak hlFN-a 2b ranfòse enfliyans GC repons nan DLN apre defi ML M la. Sourit yo te sakrifye nan uit semèn apre defi ak ML M. Nœuds lenfatik drenaj (DLN) yo te tache ak antikò espesifik pou pwopagasyon antijèn nikleyè selil (PCNA, nwayo wouj), aglutinin pistach (PNA, vèt), ak CD45R (B22{{). 13}}, blan) pou idantifye GC ki genyen grap kontra enfòmèl ant PCNAPNA plis plis B220selil GC B ki ba yo. Selil GC B nan DL N nan (A) sourit san premye ak san konteste; (B) sourit vaksinen ak PBS ak defye ak MLM; (C) sourit prime ak BCGph ak defye ak MLM; (D) sourit entramuscularly ranfòse ak hlFN-a 2b ak defye ak MLM; (E) sourit prime ak BCGphboosted ak hlFN-a 2b, ak defye ak MLM; (F) Yo te mezire GC nan DLN endividyèl sourit eksperimantal pou kalkile gwosè mwayèn GC. Ba echèl=100 um. 1=6 sourit/gwoup. " y < 0.05. * y < 0.005, *** y < 0.0005 te konsidere kòm estatistik enpòtan.

Enteresan, sourit prime ak BCGph te gen siyifikativman pi gwo GC pase sourit defye ak MLM (Figi 5C). Sourit yo vaksinen ak hlFN-a 2b (Figi 5D) te gen GCs ak yon gwosè ki konparab ak sa yo ki nan sourit defye ak MLM. Sourit yo prime ak BCGph ak ranfòse ak hlFN-a 2b te gen GC ak yon gwosè entèmedyè (Figi 5E). Pou gen yon evalyasyon plis quantitative nan repons GC yo nan DLN yo, nou kalkile gwosè mwayèn GC nan seksyon DLN endividyèl yo. Konfòm ak obsèvasyon nou yo, nou te jwenn yon rediksyon enpòtan nan gwosè mwayèn GC nan DLN yo apre piki hlFN-a 2b ak nan pwotokòl BCGph priming / hIFN-a 2b pou ranfòse (Figi 5E).

3.6. Nivo konparab nan antikò Glycolipid-espesifik nan sourit defye ak M. lepraemurium apre BCGphipps Priming ak hIFN- 2b Boosting

Dapre diferans yo obsève nan fòmasyon GC ak òganizasyon, nou mezire konsantrasyon nan antikò espesifik nan glikolipid ekstrè soti nan MLM. Globalman, rezilta nou yo montre ke kantite sistemik diferan klas ak izotip nan antikò glikolipid espesifik pa te afekte pa vaksinasyon, administrasyon siksesif hIFN- 2b, oswa pwotokòl BCGph priming/hIFN- 2b ( Tablo 2). Sourit ki te ranfòse sèlman ak hIFN- 2b te pwovoke yon pi gwo kantite antikò IgG ak IgG1 nan serik la. Sepandan, nivo antikò IgG ak Ig G1 pa te estatistik enpòtan an konparezon ak lòt gwoup eksperimantal yo (Tablo 2).

4. Diskisyon

Nan etid sa a, nou te montre ke pwotokòl premye ranfòsman nou an ki baze sou priming lar BCGphipps ak ranfòsman siksesif nan miskilè ak ogmantasyon kantite hIFN- 2b pwoteje sourit kont defi entradèrm ak MLM.

Pwotokòl pou ranfòse premye a te anpeche kwasans MLM nan po a ak amelyore patoloji lokal la pa diminye pwodiksyon NT ak enflamasyon netrofil (Figi 3E). Li te lakòz tou endiksyon anti-enflamatwa sitokin (IL-4 ak IL{-10) ki gen anpil chans kontrekare twòp enflamasyon nan po a ak manifeste sistemikman. San atann, byenke rejim terapetik la diminye CD3 plis FOXP3 plis Tregs nan DLN yo (Figi 4E), repons GC yo pa te ogmante drastikman (Figi 5E), ak konsantrasyon serik antikò espesifik glikolipid yo te menm jan an nan tout gwoup eksperimantal eksepte nan sourit vaksinen sèlman ak hIFN- 2b (Tablo 2). Men, done eksperimantal nou yo sipòte itilizasyon potansyèl BCG priming adjuvan ak ranfòse IFN 2b nan miskilè, kòm yon imunoterapi pwomèt ki merite eksplorasyon nan lèp imen.

Manifestasyon klinik la lèp korelasyon ak spectre iminolojik yo detekte nan pasyan yo epi yo varye ant LL ak TT [2,4,14,18]. An jeneral, iminite lame a M. leprae karakterize sitou pa yon repons asistan T polarize (Th1/Th2). Sou yon bò nan spectre a, byenke LL karakterize pa enèji, toujou gen kèk reyaksyon nan antijèn mikobakteri ak pwodiksyon IL-4 ak IL-10. Kontrèman, nan TT, yon repons Th1 dominant mennen nan deklanchman IFN-kondwi nan macrophages, ki akselere eliminasyon an nan bacilli yo. Sourit ki enfekte ak MLM tipikman devlope lèp tankou lepromatous san yon dominasyon klè pou iminite umoral oswa selilè [18-20].

Antikò pwoteksyon pwovoke pa enfeksyon oswa vaksinasyon [63] yo pwodui pa yon pwosesis ki rele spirasyon afinite, ki fèt nan sant jèminal ki fòme nan ògàn lenfoyid segondè (larat, nœuds lenfatik) oswa ògàn lenfoyid siperyè (TLO) ki te pwodwi nan tisi periferik [23,25] . Se jisteman nan GC yo kote pwodiksyon selil B memwa yo ak selil plasma ki sekrete antikò ki dire lontan kontribye nan jenerasyon iminite alontèm pou rankontre pwochen patojèn yo. Endiksyon efikas nan repons GC depann de kolaborasyon plizyè kalite selil, ki gen ladan selil B, selil T follicular helper (TFH), makrofaj kò tingible, ak selil dendritik folikulèr (FDC) [64]. Vreman vre, vaksen yo deklanche repons GC ki gen siksè, ak sant jèminal ektopik nan gangliyon lenfatik [24,25,31,49].

Anplis de sa, selil T folikulèr ak selil T folikilè regilasyon [27-30] kenbe balans delika ant endiksyon repons antikò efikas ak otoiminite. Malgre ke nou pa t eskli endiksyon otoiminite nan etid nou an, nou te toujou konsantre sou efè pwotokòl prime-boost la ak BCGph ak hIFN- 2b sou Tregs ki soti nan DLN yo. Sourit ki pwoteje yo te gen anpil mwens CD3 plis FOXP3 plis Tregs nan DLN yo. Sepandan, plis etid yo oblije detèmine si kèk nan Tregs sa yo se selil T follicular asistan ki kontwole reyaksyon GC [27-30]. Rezilta sa yo ta ka vle di ke endiksyon efikas nan iminite pwoteksyon konbine avèk yon ti diminisyon nan Tregs nan DLN yo oblije kontwole kwasans mikobakteri ak anpeche enflamasyon patolojik nan po a.

Etid anvan yo te rapòte efè sistemik ak mukozal tip I IFN sou selil T folikulèr asistan yo ak selil T folikulèr regilasyon [19,32,64]. Vreman vre, kalite I IFN endirèkteman ogmante TFH nan nœuds lenfatik pa ankouraje selil T selil dendritik [34]. Tip I IFN tou ankouraje switch izotip nan GCs. Anplis de sa, yon etid resan te montre ke IFN tip I deklanche fòmasyon TLO ki te baze sou CXCL13-nan poumon [49].

Kidonk, endiksyon an nan CXCL13 pa tip I IFN ta ka amelyore rekritman nan selil B nayif nan ògàn lenfoyid segondè epi ogmante pwodiksyon an nan selil plasma ki sekrete antikò, globalman amelyore memwa ki dire lontan ak repons iminolojik selil plasma [23-25,64]. ], patikilyèman nan prezans adjuvant tankou poly IC [65]. Anplis de sa, administrasyon tip I IFN pwovoke fòmasyon GC nan poumon pasyan ki soufri maladi otoiminitè [31] oswa tibèkiloz [66,67]. Kidonk, blokaj CXCL13 ta ka ede trete maladi enflamatwa kwonik sa yo [49]. Nan kontèks sa a, nou te obsève yon diminisyon trè modere nan gwosè GC nan DLN nan sourit ki pwoteje premye ranfòsman (Figi 5E). Sepandan, rechèch adisyonèl ki nesesè pou pi byen defini korelasyon ki genyen ant fòmasyon GC ak pwoteksyon an pwovoke nan sourit premye-ranfòse sa yo. Anba anviwònman eksperimantal priming ak BCGph ak ogmantasyon nan miskilè hIFN- 2b (51), sourit yo nan etid nou an te fè eksperyans pi wo pwoteksyon pa BCGph-hIFN- 2b (80 pousan) administrasyon pase pa BCGph pou kont li. (60 pousan), jan yo detèmine pa absans la oswa ti gwosè a nan blesi po yo (Figi 2) ak yon kantite konparab nan IgG ak IgG1 antikò espesifik pou glikolipid nan MLM (Tablo 2). Rezilta nou yo diferansye ak kantite lajan an ogmante nan IgG nan sourit ki pwoteje pa vaksinasyon ak yon souch diferan nan BCG (Pasteur) [41]. Done sa yo sijere ke kalite souch BCG yo itilize pou fòmile vaksen an ka enfliyanse rezilta repons iminitè umoral kont MLM oswa M. leprae [51].

Anplis de sa, plizyè etid nan tibèkiloz yo te montre efè potansyèl ak benefisye estrateji eterològ premye ranfòsman an nan endiksyon repons iminitè pwoteksyon [68-70]. Anplis, li se byen li te ye ke kalite a ak wout la nan vaksinasyon enfliyanse grandè a nan antikò a ak repons iminitè selilè yo. Etonan, sourit ki pwoteje yo montre IL-4 ak IL-10 siyifikativman pi wo nan serom nan konpare ak sourit yo trete sèlman ak PBS, BCGph, oswa hIFN- 2b pou kont li (Tablo 1). Ki jan anti-enflamatwa sitokin enfliyanse iminite pwoteksyon nan lèp kounye a anba envestigasyon nan laboratwa nou an. Sepandan, plizyè etid yo montre ke efikas iminite selilè nan mikobakteri depann sou yon balans delika ant pwoteksyon ak prevansyon nan patoloji [71]. Anplis de sa, gen prèv endiksyon tou de kalite sitokin nan lòt modèl eksperimantal [72-75].

Rezilta kolektif nou yo sijere ke siksè pwotokòl prime-boost nou an depann de endiksyon yon repons iminitè balanse ki efikasman elimine MLM nan po a epi limite domaj tisi yo lè li pwovoke citokin anti-enflamatwa (IL-4 ak IL10) ki gen anpil chans pwoteje selil iminitè [76,77]. Vreman vre, IL-10 ki pwodui pa Tregs pwovoke modile enflamasyon nan sifas mukozal yo, espesyalman sa ki gen rapò ak maladi entesten enflamatwa [77,78]. Konklizyon sa yo jistifye yon etid sinetik detaye sou aktivasyon selil B, fòmasyon GC, ak règleman, jenerasyon selil T folikilè regilasyon, ak aktivasyon NF-κB nan sistèm prime-boost nou an ak BCGph ak hIFN- 2b ki te swiv pa enfeksyon MLM pou gen yon konpreyansyon plis mekanistik sou wòl selil iminitè yo ak chemen NF-κB nan endiksyon iminite pwoteksyon nan po a ak nœuds lenfatik apre defi MLM.

5. Konklizyon

Apati done sa yo, nou ka konkli ke ranfòsman siksesif nan miskilè ak hIFN- 2b amelyore vaksinasyon M. bovis BCG, pwoteje kont defi entradèrm ak MLM ak revele pwomèt pwopriyete adjuvant imen IFN-a 2b nan kontèks BCG. vaksinasyon pou anpeche enfeksyon lèp nan zòn endemi yo. Dapre sa nou konnen, sa a se premye rapò sou efikasite terapetik BCGphipps an konbinezon ak yon prezantasyon pharmaceutique hIFN- 2b nan yon modèl preklinik maladi ki sanble ak lèp.

Kontribisyon otè:

Etid konsepsyon, GGG, OR-E., SOI-T. ak JR-M.; etid kondwit, GGG, OR-E., SOI-T. ak JR-M.; analiz done: GGG, OR-E., SOI-T. ak JR-M.; entèpretasyon done, GGG, OR-E., SOI-T. ak JR-M.; redaksyon maniskri, GGG, OR-E., SOI-T. ak JR-M.;revize kontni maniskri, GGG, OR-E., SOI-T. ak JR-M.; GGG, OR-E., SOI-T. ak JR-M. pran responsablite pou entegrite analiz done yo. Tout otè yo te li epi yo te dakò ak vèsyon ki te pibliye maniskri a.

Finansman:

GGG ak OR-E. te sipòte pa SNI, CONACYT (Mexico City, Meksik). GGG te resevwa sipò nan men Perfil Prodep 2019–2022, ak JR-M. te sipòte pa fon entèn ki soti nan Depatman Medsin University of Rochester Medical Center ak RO1AI111914.

Deklarasyon Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl:

Tout eksperyans bèt yo te fèt apre apwobasyon pa Komite Enstitisyonèl Swen Animal ak Jesyon (ZOO-010-2020). CIE-ENCB ZOO 016/2014, 07 mas 2014.

Deklarasyon Konsantman Enfòme:

Pa aplikab.

Deklarasyon Disponibilite Done:

Done yo pral pataje swivan direktiv enstitisyonèl yo.

Rekonesans:

Nou rekonesan anvè Ricardo Villalobos pou èd ak IHC, ak Rogelio Hernandez Pando (INCMNSZ, Mexico City), ki te bay souch BCGphipps la.

Konfli enterè:

Otè yo pa deklare okenn konfli enterè.

Referans

1. KI MOUN. Òganizasyon Mondyal Lasante: Tibèkiloz—Global Facts 2011/2102. Jenèv: OMS Stop TB Dep. 2012. Disponib sou Entènèt: http://www.who.int/tb/publications/2011/factsheet_tb_2011.pdf (Ou jwenn aksè nan 1ye fevriye 2021).

2. Bon, PE Lep: Kisa y ap "elimine"? Toro. Ògan Sante Mondyal la. 2007, 85, 1–2. [CrossRef]

3. Rambukkana, A. Ki jan Mycobacterium leprae vize sistèm nève periferik la? Tandans Microbiol. 2000, 8, 23–28. [CrossRef]

4. Rodriguez, JIA; Triellato, GL; Meirelles, NML; Teixeira, CC; Lyon, S.; Esteves, ARM Metòd klasifikasyon lèp: Yon etid konparatif nan yon karaktè referans nan Brezil. Ent. J. Enfekte. Dis. 2016, 45, 118–122. [CrossRef] [PubMed]

5. Geluk, A.; van der Ploeg, J.; Teles, OBR; Kees, L.; Franken, MC; Prins, C.; Wouter, DJ; Sarno, NE; Sampaio, EP; Otenhoff, THM Konbinezon rasyonèl nan peptides ki sòti nan diferan pwoteyin Mycobacterium leprae amelyore sansiblite pou iminodyagnostik enfeksyon M. leprae. Clin. Vacc. Imunol. 2008, 15, 522–533. [CrossRef] [PubMed]

6. Geluk, A.; Bobosha, K.; Schip, JJVDP-V.; Spencer, JS; Banu, S.; Martins, MVSB; Cho, SN; Franken, KLMC; Kim, HJ; Bekele, Y.; et al. Nouvo byomarkè ki gen rapò ak dyagnostik lèp ki aplikab nan zòn iperendemi pou lèp. J. Immunol. 2012, 188, 4782–4791. [CrossRef]

7. Geluk, A. Biomarkers pou lèp: Èske ou ta prefere T (selil)? Lepr. Rev. 2013, 84, 3–12. [CrossRef] [PubMed]

8. Alcaïs, A.; Alter, A.; Antoni, G.; Orlova, M.; Nguyen, VT; Singh, M.; Vanderborght, PR; Katoch, K.; Mira, MT; Vu, HT; et al. Replikasyon pa etap idantifye yon limfotoksin-alèl ki pa pwodwi kòm yon gwo faktè risk pou lèp aparisyon bonè. Nat. Genet. 2007, 39, 517–522. [CrossRef] [PubMed]

9. Avanzi, C.; Singh, P.; Truman, RW; Suffys, PN Epidemyoloji molekilè nan lèp: yon aktyalizasyon. Enfekte. Genet. Evol. 2020, 86, 104581. [CrossRef]

10. Lastoria, JC; Abreu, MA Lep revizyon nan epidemyoloji klinik ak etnopatojèn aspè yo-pati 1. Bras. Dermatol. 2014, 89, 205–218. [CrossRef]

11. Rojas-Espinosa, O. Sijè aktyèl sou pwofil repons iminolojik lame a enfeksyon mikobakteri; Revizyon Liv; Tomioka, H., Ed.; Rechèch Signpost: Trivandrum, peyi Zend, 2009; paj 97–140.

12. Adams, LB; Pena, TM; Sharma, R.; Hagge, AD; Schurr, E.; Truman, RW Insights soti nan modèl bèt sou iminojenetik la lèp. Yon Revizyon. Mem. Inst. Oswaldo. Cruz. 2012, 107, 197–208. [CrossRef]

13. Rojas-Espinosa, O.; Becerril-Villanueva, E.; Wek-Rodriguez, K.; Arce-Paredes, P.; Reyes-Maldonado, E. Paralezi manm dèyè yo nan sourit ki enfekte Mycobacterium lepraemurium rezilta nan domaj nan zo epi yo pa nan patisipasyon nè. Clin. Eksp. Imunol. 2005, 140, 436–442. [CrossRef]

14. Modlin, LR Repons iminitè natirèl la nan lèp. Curr. Opinyon. Imunol. 2010, 22, 48–54. [CrossRef]

15. Oliveira, RB; Ochoa, MT; Sieling, PA; Rea, TH; Rambukkana, A.; Sarno, EN; Modlin, RL Ekspresyon Reseptè Toll-Like 2 sou Selil Schwann Imèn: Yon Mekanis Domaj Nè nan Lèp. Enfekte. Iminitè. 2003, 71, 1427–1433. [CrossRef] 16. MacMicking, J.; Xie, QW; Nathan, C. oksid nitrique ak fonksyon macrophage. Ann. Rev Immunol. 1997, 15, 323–350. [CrossRef]

17. Evans, T.; Buttery, L.; Carpenter, A.; Springall, DR; Polak, J.; Cohen, J. Cytokine-trete Imèn Neutrophils Gen Enduzibl Nitric Oxide Synthase Ki Pwodui Nitrasyon nan Bakteri Enjere. Pwosedi. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 9553–9554. [CrossRef] [PubMed]

18. Fonseca, AB; Simon, MD; Cazzaniga, RA; de Moura, TR; de Almeida, RP; Duthie, MS; Reed, SG; de Jesus, AR Enfliyans repons iminitè natirèl ak adaptatif sou rezilta klinik diferansye lèp. Enfekte. Dis. Poverty 2017, 6, 5–13. [CrossRef] [PubMed]

19. Sadhu, S.; Khaitan, BK; Joshi, B.; Sengupta, U.; Nautiyal, AK; Mitra, DK Reciprocity ant Selil T regilasyon ak Selil Th17: enpòtans pou iminite polarize nan lèp. PLoS Negl. Trop. Dis. 2016, 10, e0004338. [CrossRef] [PubMed]

20. Rojas-Espinosa, O.; Wek-Rodríguez, K.; Arce-Paredes, P. Efè peroksidaz ekzojèn sou evolisyon lèp murin. Ent. J. Lepr. Lòt Mycobact. Dis. 2002, 70, 191–200.

21. Ischiropoulos, H. Byolojik Tyrosine Nitrasyon: Yon Fonksyon Fizyopatoloji nan oksid nitrique ak espès oksijèn reyaktif. Arch. Byochim. Biophys. 1998, 356, 1–11. [CrossRef]

22. Young, DB Leprosy lipid bay kle nan antre selil Schwann. Tandans Microbiol. 2001, 9, 52–54. [CrossRef]

23. Bannard, O.; Cyster, JG Sant Germinal: Pwograme pou spirasyon afinite ak divèsifikasyon antikò. Curr. Opinyon. Imunol. 2017, 45, 21–30. [CrossRef] [PubMed] 24. Victora, DG; Nussenweig, MC Sant Germinal. Ann. Rev Immunol. 2012, 30, 429–457. [CrossRef] [PubMed]

25. Cirelli, KM; Crotty, SH Amelyorasyon sant jèminal pa disponiblite pwolonje antijèn. Curr. Opinyon. Imunol. 2017, 47, 64–69. [CrossRef]

26. Bon-Jakobson, KL; Szumilas, CG; Chen, L.; Sharpe, AH; Tomayko, MM; Shlomchik, MJ PD-1 kontwole siviv selil B nan sant jèminal ak fòmasyon ak afinite selil plasma ki dire lontan. Nat. Imunol. 2010, 11, 535–542. [CrossRef]

27. Wollenberg, I.; Agua-Doce, A.; Hernández, A.; Almeida, C.; Oliveira, VG; Faro, J.; Graca, L. Règleman Reyaksyon Sant Germinal pa Foxp3 plis Follicular Regilasyon T Cells. J. Immunol. 2011, 187, 4553–4560. [CrossRef] [PubMed]

28. Litterman, MA; Pierson, W.; Lee, SK; Kallies, A.; Kawamoto, S.; Rayner, TF; Srivastava, M.; Divekar, DP; Beaton, L.; Hogan, JJ; et al. FOXP3 plis folikulèr selil T regilasyon kontwole repons nan sant jèminal. Nat. Med. 2011, 17, 975–982. [CrossRef]

29. Miles, B.; Connick, E. Kontwòl Sant jèminal la pa Follicular Regilasyon T Cells Pandan enfeksyon. Devan. Imunol. 2018, 9, 2704–3710. [CrossRef]

30. Fu, W.; Liu, X.; Lin, X.; Feng, H.; Solèy, L.; Li, S.; Chen, H.; Tang, H.; Lu, L.; Jin, W.; et al. Defisi nan selil T folikulèr regilasyon ankouraje otoiminite. J. Exp. Med. 2018, 215, 815–825. [CrossRef]

31. Pitzalis, C.; Jones, GW; Bombardieri, M.; Jones, SA Ektopik lenfoyid tankou estrikti nan enfeksyon, kansè, ak otoiminite. Nat. Rev Immunol. 2014, 14, 447–462. [CrossRef]

32. Aloulou, M.; Carr, EJ; Gador, M.; Bignon, A.; Liblau, RS; Fazileau, N.; Linterman, MA Selil T folikilè regilasyon yo ka espesifik pou antijèn vaksinasyon an epi sòti nan selil T nayif yo. Nat. Komin. 2016, 7, 10579–10589. [CrossRef]

33. Vinuesa, CG; Sanz, mwen .; Cook, MC Dysregulation nan sant jèminal nan maladi otoiminitè. Nat. Rev Immunol. 2009, 9, 845–857. [CrossRef]

34. Cucak, H.; Yrlid, U.; Reizis, B.; Kalinke, U.; Johansson-Lindborn, B. Kalite I entèferon siyal nan selil Dendritic stimul devlopman nan Lymph Node-Rezidan T follicular helper cellules. Iminite 2009, 31, 491–501. [CrossRef]

35. Desvignes, L.; Wolf, AJ; Ernst, JD wòl dinamik tip I ak tip II IFN nan enfeksyon bonè ak Mycobacterium tibèkiloz. J. Immunol. 2012, 188, 6205–6215. [CrossRef]

36. Teles, MBR; Graeber, GT; Krutzik, RS; Montoya, D.; Schenk, M.; Lee, JD; Komisopoulou, E.; Kelly-Scumpia, K.; Chun, R.; Iyer, SS; et al. Kalite I Interferon Supprime Tip II Interferon-Deklanche Repons Imèn Anti-Mikobakteri. Syans 2013, 339, 1448–1453. [CrossRef]

37. Ji, DX; Yamashiro, LH; Chen, KJ; Mukaida, N.; Kramnik, mwen ; Darwin, KH; Vance, RE Kalite I ki baze sou entèferon ak Mycobacterium tibèkiloz se medyatè IL-1Ra. Nat. Microbiol. 2019, 4, 2128–2135. [CrossRef]

38. Manca, C.; Tsenova, L.; Bergtold, A.; Freeman, SH; Tovey, M.; Musser, MJ; Barry, EC, 3yèm; Freedman, HV; Kaplan, G. Virulence nan yon izole klinik Mycobacterium tibèkiloz nan sourit detèmine pa echèk pou pwovoke iminite kalite Th1 epi li asosye ak endiksyon nan IFN-/. Pwosedi. Natl. Acad. Sci. USA 2007, 98, 5752–5757. [CrossRef] [PubMed]

39. Telesca, C.; Angelico, M.; Piccolo, P.; Nosotti, L.; Morrone, A.; Longhi, C.; Carbone, M.; Baiocchi, L. Tretman entèferon-alfa nan epatit D pwovoke tibèkiloz vin pi grav nan yon imigran. J. Enfekte. 2007, 54, e223–e226. [CrossRef] [PubMed]

40. Giacomini, E.; Remoli, ME; Gafa, V.; Pardini, M.; Fattorini, L.; Coccia, EM IFN- amelyore iminojenisite BCG pa aji sou spirasyon DC. J. Leukoc. Biol. 2008, 85, 462–468. [CrossRef] [PubMed]

41. Rivas-Santiago, CE; Guerrero, GG IFN- Ranfòse Mycobacterium bovis Bacillus Calmette Güerin-Vaksen Pwomosyon Repons Selilè Kalite Th1 ak Pwoteksyon kont enfeksyon M. tibèkiloz. BioMed Res. Ent. 2017, 2017, 6760. [CrossRef]

42. Guerrero, GG; Rangel-Moreno, J.; Islas-Trujillo, S.; Rojas-Espinosa, O. Ranfòsman siksesif nan miskilè ak IFN-Alpha Pwoteje sourit Mycobacterium bovis BCG-Vaksen kont enfeksyon M. lepraemurium. BioMed Med. Res. Ent. 2015, 2015, 414027.

43. McNab, F.; Mayer-Barber, K.; Sher, A.; Wack, A.; O'Garra, A. Kalite I interferon nan maladi enfeksyon. Nat. Rev Immunol. 2015, 15, 67–103. [CrossRef]

44. O'Shea, JJ; Visconti, R. Tip I IFN ak règleman nan repons TH1: Enigm tou de rezoud ak parèt. Nat. Imunol. 2000, 1, 17–19. [CrossRef]

45. González-Navajas, JM; Lee, J.; David, M.; Raz, E. Fonksyon imunomodulateur nan entèferon kalite I. Nat. Rev Immunol. 2012, 12, 125–135. [CrossRef]

46. ​​Le Bon, A.; Difisil, DF Kalite I interferon kòm yon estimilis pou kwa-priming. Cytokine Growth Fact Rev 2008, 19, 33–40. [CrossRef]

47. Bracci, L.; Canini, mwen; Puzelli, S.; Sestili, P.; Venditti, M.; Spada, M.; Donatelli, I.; Belardelli, F.; Proietti, E. Tip I IFN se yon adjuvant mukozal pwisan pou yon vaksen selektif nan nasal kont viris grip nan sourit ak afekte kaptire antijèn nan nivo mikoz. Vaksen 2005, 23, 2994–3004. [CrossRef]

48. Kanape, RB; Atmar, RL; Cate, TR; Quarles, JM; Keitel, WA; Arden, NH; Wells, J.; Niño, D.; Wyde, PR Kontrèman efè entèferon tip I kòm yon adjuvant mukozal pou vaksen grip nan sourit ak imen. Vaccine 2009, 27, 5344–5348. [CrossRef] [PubMed]

49. Denton, AE; Innocentin, S.; Carr, EJ; Bradford, BM; Lafouresse, F.; Mabbott, NA; Mörbe, U.; Ludewig, B.; Veterinè cheval, JR; Bon-Jacobson, KL; et al. Kalite I entèferon pwovoke CXCL13 pou sipòte fòmasyon sant jèminal ektopik. J. Exp. Med. 2019, 216, 621–637. [CrossRef]

50. Toledo, PTG; Batista-Silva, LR; Medeiros, RCA; Lara, FA; Moraes, MO Kalite I entèferon, otofaji ak metabolis lame nan lèp. Devan. Imunol. 2018, 23, 806–817. [CrossRef]

51. Zhang, W.; Zhang, Y.; Zheng, H.; Pan, Y.; Liu, H.; Du, P.; Wan, L.; Liu, J.; Zhu, B.; Zhag, G.; et al. Genome sekans ak analiz de tansyon vaksen BCG. PLoS ONE 2013, 8, e071243. [CrossRef]

52. Wek-Rodriguez, K.; Silva-Miranda, M.; Arce-Paredes, P.; Rojas-Espinosa, O. Efè entèmedyè oksijèn reyaktif sou viabilite ak enfeksyon Mycobacterium lepraemurium. Ent. J. Exp. Patòl. 2007, 88, 137–145. [CrossRef]

53. Kim, SH; Cohen, B.; Novick, D.; Rubinstein, M. Mamifè Tip I Interferon Receptors Konsiste de De Sou-Inite: IFN-R1 ak IFN-R2. Gene 1997, 196, 279–286. [CrossRef]

54. Luo, Y.; Chen, X.; Han, RA; O'Donnell, M. Recombinant bacillus Calmette-Guérin (BCG) ki eksprime moun entèferon-alfa 2B demontre iminojenisite amelyore. Clin. Eksp. Imunol. 2001, 123, 264–270. [CrossRef] [PubMed]

55. Solèy, E.; Nian, X.; Liu, C.; Fanatik, X.; Han, R. Konstriksyon IFN recombinant imen -2b BCG ak efè antitumoral li yo sou selil kansè nan blad pipi an vitro. Genet. Mol. Res. 2015, 14, 3436–3449. [CrossRef] [PubMed]

56. Prabhakaran, K.; Harris, EB; Kirchheimer, WF Liaison de 14C ki make dopa pa Mycobacterium leprae nan vitro. Ent. J. Lepr. Lòt Mycobact. Dis. 1976, 44, 58–64.

57. Draper, P. Pirifikasyon Mycobacterium leprae. Nan Pwosedi Anèks 4 nan Rapò senkyèm Reyinyon Gwoup Travay Syantifik sou Imunoloji lalèp (IMMLEP), Jenèv, Swis, 24–26 jen 1980; Òganizasyon Mondyal Lasante: Jenèv, Swis, 1980.

58. Ischiropoulos, H.; Nelson, J.; Duran, D.; Al-Mehdi, A. Reyaksyon oksid nitrique ak peroksinitrite ak molekil òganik ak ferrihorseradish peroksidaz: Entèferans ak detèminasyon oksijene idwojèn. Radik gratis. Biol. Med. 1996, 20, 373–381. [CrossRef]

59. Schön, T.; Hernandez-Pando, R.; Negesse, Y.; Leekassa, R.; Sundqvist, T.; Britton, S. Ekspresyon de synthase oksid nitrique inductible ak nitrotyrosine nan blesi limit lèp. Br. J. Dermatol. 2001, 145, 809–815. [CrossRef]

60. Silva-Miranda, M.; WeK-Rodriguez, K.; Martinez, CE; Rojas-Espinosa, O. Ekspresyon cyclooxygenase-2, alfa 1-glikoprotein asid ak sintaz oksid nitrique enduzib nan blesi yo devlope nan lèp murin. Ent. J. Exp. Chemen. 2006, 87, 485–494. [CrossRef]

61. Hernández-Pando, R.; Schön, T.; Orozco, EH; Serafín, T.; Estrada-Garcia, I. Ekspresyon de synthase oksid nitrique inductible ak nitrotyrosine pandan evolisyon nan tibèkiloz poumon eksperimantal. Eksp. Toksik. Patòl. 2001, 53, 257–265. [CrossRef]

62. Izcue, A.; Coombes, JL; Powrie, F. Lenfosit regilasyon, ak enflamasyon entesten. Ann. Rev Immunol. 2009, 27, 313–338. [CrossRef]

63. Sakaguchi, S.; Miyara, M.; Costantino, CM; Hafler, DA FOXP3 plis selil T regilasyon nan sistèm iminitè imen an. Nat. Rev Immunol. 2010, 10, 490–500. [CrossRef]

64. Plotkin, SA Korelate nan Pwoteksyon Enduit pa Vaksinasyon. Clin. Vaksen Imunol. 2010, 17, 1055–1065. [CrossRef] [PubMed]

65. Wu, H.; Chen, Y.; Liu, H.; Xu, L.-L.; Teuscher, P.; Wang, S.; Lu, S.; Dent, AL Follicular selil T regilasyon yo reprime pwodiksyon sitokin pa selil T asistan folikilè yo epi optimize repons IgG nan sourit yo. Lajan ewo. J. Immunol. 2016, 46, 1152–1161. [CrossRef] [PubMed]

66. Jeyanathan, M.; Damjanovic, D.; Shaler, CR; Lai, R.; Wortzman, M.; Yin, C.; Zganiacz, A.; Lichty, D.; Xing, Z. Diferans enpresyon iminite natirèl pa vaksen pou ranfòse mukozal detèmine rezilta pwoteksyon iminitè antituberkuloz, endepandan de iminite selil T. Imunol mukozal. 2013, 6, 612–625. [CrossRef] [PubMed]

67. Jeyanathan, M.; Shao, Z.; Yu, X.; Harkness, R.; Jiang, R.; Li, J.; Xing, Z.; Zhu, T. AdHu5Ag85A Vaksinasyon pou ranfòse mikoz respiratwa a amelyore pwoteksyon kont tibèkiloz poumon nan Primates ki pa imen BCG-Primed. PLoS ONE 2015, 10, e0135009. [CrossRef]

68. Afhami, S.; Drumond, VA; D'Agositnio, MR; Jeyanathan, M.; Gillgrass, A.; Xing, Z. Avanse estrateji vaksen imunoterapi kont tibèkiloz poumon. Devan. Imunol. 2020, 11, 557809. [CrossRef]

69. Torrado, E.; Robinson, RT; Cooper, AM Repons selilè a mikobakteri: Balanse pwoteksyon ak patoloji. Tandans Immunol. 2011, 32, 66–72. [CrossRef]

70. Xu, X.; Gao, W.; Cheng, S.; Yin, D.; Li, F.; Wu, Y.; Solèy, D.; Zhou, S.; Wang, D.; Zhang, Y.; et al. Mekanis anti-enflamatwa ak imunomodulatwa atorvastatin nan yon modèl murin nan blesi twomatik nan sèvo. J. Neuroinflamm. 2017, 14, 167–182. [CrossRef]

71. Azeem, W.; Maukon, BR; Appel, S.; Maegrete, AO; Kalland, KH Doub Pro- ak Anti-enflamatwa Karakteristik nan MonocyteDerived Selil Dendritik. Devan. Imunol. 2020, 11, 438–453. [CrossRef]

72. Sultana, S.; Bishay, B. Netralizasyon TNFR-1 ak TNFR-2 modil atrit septik S. aureus-induit pa reglemante nivo cytokin pro-enflamatwa ak anti-enflamatwa pandan pwogresyon maladi a. Imunol. Lett. 2018, 196, 33–51. [CrossRef]

73. Pònografi, D.; Gilligan, MM; Huang, S.; Gartung, A.; Cortes-Puch, I.; Sime, PJ; Phipps, RP; Serhan, CHN; Hammock, BD Rezolisyon enflamasyon: Yon apwòch doub pou evite tanpèt sitokin nan COVID-19 Metastaz Kansè Rev. 2020, 39, 337–340. [CrossRef]

74. Longhi, MP; Trumpfheller, C.; Idoyaga, J.; Caskey, M.; Matos, I.; Kluger, C.; Salazar, AM; Colonna, M.; Steinman, RM Selil dendritik mande pou yon repons entèferon sistemik tip I pou matirite ak pwovoke iminite CD4 plis Th1 ak poly IC kòm yon adjuvant. J. Exp. Med. 2009, 206, 1589–1602. [CrossRef]

75. Khader, SA; Guglani, L.; Rangel-Moreno, J.; Gopal, R.; Junecko, BAF; Fountain, JJ; Martino, C.; Pearl, JE; Tighe, M.; Lin, Y.-Y.; et al. IL-23 Egzije pou Kontwòl alontèm nan Mycobacterium tibèkiloz ak fòmasyon pileu selil B nan poumon ki enfekte a. J. Immunol. 2011, 187, 5402–5407. [CrossRef] [PubMed]

76. Choreño-Parra, JA; Bobba, S.; Rangel-Moreno, J.; Ahmed, M.; Mehra, S.; Rosa, B.; Martin, J.; Mitreva, M.; Kaushal, D.; Zúñiga, J.; et al. Mycobacterium tuberculosis HN878 Enfeksyon pwovoke folikul selil B ki sanble ak moun nan sourit. J. Enfekte. Dis. 2020, 221, 1636–1646. [CrossRef] [PubMed]

77. Schmidt, EG; Haribhai, D.; Williams, JB; Aggarwal, P.; Jia, S.; Charbonnier, LM; Yan, K.; Lorier, R.; Turner, A.; Ziegelbauer, J.; et al. IL-10 selil iTreg ki pwodui kontwole kolit ak patojèn eks. Selil Treg pandan imunoterapi. J. Immunol. 2012, 189, 5628–5648. [CrossRef]

78. Rubtsovo, YP; Rasmussen, JP; Chi, Y.; Fontenot, J.; Castelli, mwen; Wi, X.; Treuting, P.; Siewe, mwen .; Roers, A.; Henderson, WRJ; et al. Interleukin ki sòti nan selil T regilasyon -10 limite enflamasyon nan koòdone anviwònman an. Iminite 2018, 28, 546–558. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com