Long RNA ki pa kode KCNQ1OT1 kontwole pwoteyin kinaz CK2 atravè MiR-760 nan senesans ak restriksyon kalori Ⅱ

3. Diskisyon

Epigenetic regulation mechanisms, including microRNAs (miRNAs), nucleosome remodeling, DNA methylation, and histone modification, can change heritable phenotypes without changing the DNA sequence (26). There are two main classes of non-coding RNAs(ncRNAs): the larger long ncRNAs (IncRNAs; >200 nukleotid), ak pi piti miR.NA yo (21-25 nukleotid) [1-3]. KCNO10T1 te okòmansman idantifye kòm yon lncRNA, ki silans plizyè jèn ki nan locus kcng1 la atravè etabli yon estrikti ki pi wo nan kwomatin (4 61. Dènyèman, lòtfonksyon byolojik KCNO1OT1yo te rapòte ki gen ladan moun ki asosye akfibwoz,iskemi serebral,ateroskleroz konjesyon serebral, onkojenèz, diferansyasyon osteogenic, gerizon ka zo kase, epiipètrofi kadyak(7-13). Sepandan, mekanis detaye ki KCNO10T1 kontwole senesans selilè ak CR yo toujou enkoni. Se poutèt sa, nou te eseye klarifye si KCNO10T1 te enplike nan senesans ak CR. Etid sa a montre ke knockdown KCNO10T1 pwovoke plizyè makè senesans selilè, ki gen ladan endiksyon nan aktivite SA--gal, aktivasyon nan p53-21Cip1/WAF1pathway, ogmante trimethylation H3K9 ki nesesè pou fòmasyon SAHF ak faktè SASP (L{{ 13}}, IL-6, ak MMP3) ekspresyon, nan selil kansè imen HCT116 ak MCF-7 (Figi 1 ak 2A). Paske estrès oksidatif se yon kòz enpòtan nan senesans (14,15 efè KCNO10T1 sou jenerasyon ROS yo te envestige. Kòm espere, KCNO1OTknockdown ogmante ROS intraselilè nan selil HCT116 ak MCF-7 (Figi 2B). Anplis de sa, nivo a nan KCNO10T1). mRNA te redwi nan selil senesan LPS-induit, ak ekspresyon ektopik nan KCNQ10T1 siprime ekspresyon faktè SASP medyatè LPS nan selil kansè sa yo (Figi 3A, B). Anplis de sa, KCNO10T1 knockdown pwovoke aktivite SA-B-gal nan fibroblast nan poumon imen IMR { {39}} selil yo, ak ekspresyon KCNO10T1 yo te diminye pandan senesans repwodiksyon nan selil IMR-90 (Figi 6). Ansanm, rezilta sa yo endike ke KCNO10T1 aji kòm yonreyaktif anti-ajeepiantioksidannan selil kansè imen yo te kole ak fibroblast.

Klike La a Pou Konnen Plis Sipleman Cistanche Pou Anti-aje

Li te deja montre ke knockdown Ck2 pwovoke makè senesans tankou SA-gal tach [16], aktivasyon nan p53-p21Cip1/WAF1pathway (171ROS jenerasyon [18SAHF fòmasyon (19l, ak ekspresyon faktè SASP 20).] Se poutèt sa, yo te egzamine relasyon ki genyen ant KCNO10T1 ak CK2.Etid sa a montre ke CK2x twòp ekspresyon anile makè senesans sa yo ki te koze pa knockdown KCNO10T1 (Figi 1, 2 ak 6B) Anplis de sa, KCNO10T1 knockdown diminye nivo pwoteyin ak mRNA nan CK14B, (Figi 2A). ), ak KCNO10T1 (36,181-37,140) ekspresyon twòp ankouraje nivo mRNA nan CK2x (Figi 4A), ki endike ke KCNQ1OT1 fonksyone kòm yon regilatè pozitif nan CK2a nan selil yo. ekspresyon mRNA sib (1-3). Paske etid anvan yo te montre ke miR-760 reyaji avèk CK2a (21,22] ak KCNO10T1 [27], yon rezo siyal KCNO10T1, CK2x, ak miR{{ 47}} yo te egzamine. Etid sa a montre ke tretman adisyonèl ak yon miR-760 imite KCNQ10T1-medyatè regilasyon CK2x, ak tretman adisyonèl ak yon inibitè miR{-760 siprime KCNO10T1 knockdown-medyatè CK2. downregulation (Figi 4). Toujou, tretman ak LPS, ki diminye ekspresyon KCNO10T1, ogmante nivo miR -760 (Figi 3C). Pakonsekan, etid sa yo sijere ke kantite KCNQ1OT1 RNA ka titre miR-760 epi kidonk kontwole disponiblite miR{-760 pou lye ak mRNA CK2x. KCNO1OT1 ak CK2a ka fè diafonik atravè kapasite transkripsyon yo pou fè konpetisyon pou miR-760 obligatwa.

Paske CR bay yonefè anti-aje(23], ki jan CR kontwole KCNQ1OT1 ak miR-760 yo te egzamine. Etid sa a montre ke kondisyon an CR ogmante ekspresyon KCNO10T1 ak CK2x ak diminye nivo miR-760 (Figi 5A, B). , tretman ak yon miR-760 imite siprime CR-medyatè CK2x upregulation (Figi 5C). Toujou, KCNO10T1 knockdown ogmante nivo yo nan miR-760, tandiske kondisyon adisyonèl siprime KCNQ10T1 knockdown-medyatè miR{{19} } endiksyon (Figi 5D). Finalman, kondisyon CR a sove ekspresyon diminye nan KCNO1OT1 ak CK2a, medyatè pa senesans repwodiksyon (Figi 6C). An jeneral, rezilta sa yo revele ke kondisyon CR la te desann miR-760 atravè upregulating KCNO10T1, sa ki lakòz CK2x regilasyon nan selil imen. Malgre ke lncRNA SNHG6 aji kòm yon eponj nan miR-760nan selil CRC [25], CR pa t chanje ekspresyon SNHG6 nan kondisyon eksperimantal (done yo pa montre). Ki jan CR kontwole KCNQ1OT1. ekspresyon?Lòt gwoup te deja demontre ke faktè transkripsyon NFY ak -catenin kontwole KCNO10T1 (28,29). Sepandan, CR pa t 'kapab kontwole ekspresyon NF-Y ak B-catenin pi piti nan kondisyon eksperimantal (done yo pa montre). Kidonk, etid adisyonèl yo oblije idantifye yon regilatè espesifik en nan KCNO10T1 nan kondisyon CR.

An konklizyon, sou baz rezilta etid sa a, yo te pwopoze yon modèl pou wòl KCNQ1OT1 nan senesans ak CR. KCNQ1OT1 kontwole CK2 lè li eponje miR-760. Chemen KCNQ1OT1–miR-760–CK2 ki enplike nan senesans ak CR. Tretman LPS ak divizyon selilè nan fibroblasts pwovoke senesans pa downregulating KCNQ1OT1. CR siprime senesans pa aktive chemen KCNQ1OT1–miR-760–CK2 (Figi 6D). Se poutèt sa, etid sa a sijere KCNQ1OT1 kòm yon nouvo sib terapetik nan aje ak maladi ki gen rapò ak laj, osi byen ke yon tretman altènatif ki imite efè CR.

4. Materyèl ak Metòd

4.1. Materyèl

4.2. Kilti Selil ak CR

Selil IMR-90 fibwoblast diploid imen yo te jwenn nan American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA) nan yon nivo double popilasyon (PDL) 24. Selil MCF-7 kansè nan tete imen, Selil kansè nan kolon HCT116 (ATCC), ak selil IMR-90 yo te kiltive nan mwayen Eagle's Dulbecco modifye ki gen 10 pousan (v/v) serom fetis bovin ak 1 pousan (v/v) penisilin-streptomycin, nan yon atmosfè imidite. nan 95 pousan (v/v) lè ak 5 pousan (v/v) CO2 nan 37 ◦C. PDL selil IMR-90 yo te kalkile lè l sèvi avèk fòmil PD=log(Nf/Ni)/log2, kote Nf se nimewo selil final la, epi Ni se nimewo premye selil ki simen yo. Pou grangou selil (restriksyon kalori), yo te lave selil yo ak saline tanpon fosfat de fwa epi yo te kiltive nan solisyon sèl ekilibre Earle a (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA), ak 5.5 mM glikoz, san asid amine, pandan sèt èdtan.

4.3. Ekstraksyon RNA ak miRNA Quantitative Real-Time PCR

4.4. Transfè ADN ak entèferans RNA

4.5. SA- -gal Aktivite essai

Selil ki nan kilti sub-konfluyan yo te lave ak saline ki frèt ak fosfat tanpon (PBS), fikse ak 3 pousan (v/v) fòmaldeyid nan PBS pou 10 minit nan tanperati chanm, ak Lè sa a, enkube ak yon tach. solisyon ki gen 1 mg/mL 5-bromo-4-kloro{-3-indolil -D galaktozid, 40 mM asid asid-fosfat sodyòm (pH 6.0), 5 mM ferricyanide potasyòm, 5 mM ferosyanid potasyòm, 150 mM NaCl, ak 2 mM MgCl2 pou 24 èdtan nan 37 ◦C. Selil ki tache ble yo te konte nan omwen dis jaden nan 400 × agrandisman epi yo te eksprime kòm yon pousantaj nan selil pozitif.

4.6. Mezi Nivo ROS Entraselilè

Yo te itilize pwofonde flfluoresan oksidasyon-sansib CM-H2DCFDA pou evalye nivo ROS yo. Selil yo te trete ak 5 µM CM-H2DCFDA pou 20 min nan 37 ◦C nan fè nwa a,detache pa trypsinization, ak Lè sa a, lave ak PBS. Entansite fliyoresan te dekourajemin itilize yon Coulter Elite ESP Cell Sorter (Beckman Coulter Inc., Brea, CA, USA). LaYo te mete pòtay pi devan ak bò kote yo pou eskli nenpòt selil ki mouri nan analiz la; omwen10, 000 evènman ki nan pòtay la te akeri pou chak echantiyon.

4.7. Ranvèse transcription (RT)-PCR

4.8. Immunoblotting

4.9. Analiz estatistik

Yon sèl-fason analiz de tès divèjans nan done yo te fèt lè l sèvi avèk pwogram nan pake SPSS (IBM, Armonk, NY, USA). Rezilta yo te konsidere kòm siyifikatif si p-valè a te<0.05. Duncan's multiple range test was conducted if the differences between the groups were identified as α = 0.05. 

Materyèl siplemantè: Ou ka telechaje enfòmasyon sipò sa yo nan:

Kontribisyon otè: Y.-SB te vin ansent e li te fèt eksperyans yo, YL te fè eksperyans yo, epi Y.-SB te ekri papye a. Tout otè yo te li epi yo te dakò ak vèsyon ki te pibliye maniskri a.

Finansman: Rechèch sa a te sipòte pa Pwogram Rechèch Syans Debaz, atravè Fondasyon Nasyonal Rechèch Kore di (NRF) ki finanse pa Ministè Syans, ICT ak Planifikasyon Future (NRF-2019R1A2C1005219).

Deklarasyon Komisyon Konsèy Revizyon Enstitisyonèl: Pa aplikab.

Deklarasyon Konsantman Enfòme: Pa aplikab.

Deklarasyon Disponibilite Done: Pa aplikab.

Konfli enterè: Otè yo pa deklare okenn konfli enterè.

Referans

1. Ulitsky, I.; Bartel, DP lincRNAs: Genomics, evolisyon, ak mekanis. Cell 2013, 154, 26–46. [CrossRef] [PubMed]

2. Esteller, M. Non-coding RNAs in human disease. Nat. Rev Genet. 2011, 12, 861–874. [CrossRef] [PubMed]

3. Quinn, JJ; Chang, HY Karakteristik inik nan byogenesis long ki pa kodaj RNA ak fonksyon. Nat. Rev Genet. 2016, 17, 47–62. [CrossRef] [PubMed]

4. Mancini-Dinardo, D.; Steele, SJ; Levorse, JM; Ingram, RS; Tilghman, SM Pwolonjman nan transkripsyon Kcnq1ot1 obligatwa pou anprent jenomik jèn vwazen yo. Genes Dev. 2006, 20, 1268–1282. [CrossRef] [PubMed]

5. Pandey, RR; Mondal, T.; Mohammad, F.; Enroth, S.; Redrup, L.; Komorowski, J.; Nagano, T.; Mancini-Dinardo, D.; Kanduri, C. Kcnq1ot1 antisense noncoding RNA medyatè liyaj-espesifik transcriptional silans nan règleman kwomatin-nivo. Mol. Cell 2008, 32, 232–246. [CrossRef]

6. Kanduri, C. Kcnq1ot1: Yon RNA regilasyon kwomatin. Semin. Selil. Dev. Biol. 2011, 22, 343–350. [CrossRef]

7. Yang, F.; Qin, Y.; Lv, J.; Wang, Y.; Che, H.; Chen, X.; Jiang, Y.; Li, A.; Solèy, X.; Yue, E.; et al. Silans lontan ki pa kodaj RNA Kcnq1ot1 soulaje piroptoz ak fibwoz nan kardyopati dyabetik. Lanmò selil Dis. 2018, 9, 1000. [CrossRef]

8. Yu, S.; Yu, M.; Li, X.; Wen, L.; Bou, Z.; Feng, J. KCNQ1OT1 ankouraje otofaji pa reglemante chemen miR-200a/FOXO3/ATG7 nan konjesyon serebral ischemik serebral. Aging Cell 2019, 18, e12940. [CrossRef]

9. Yu, XH; Deng, WY; Chen, JJ; Xu, XD; Liu, XX; Chen, L.; Shi, mw; Liu, QX; Tao, M.; Ren, K. LncRNA kcnq1ot1 ankouraje akimilasyon lipid ak akselere ateroskleroz atravè fonksyone kòm yon ceRNA atravè aks miR-452-3p/HDAC3/ABCA1. Lanmò selil Dis. 2020, 11, 1043. [CrossRef]

10. Cagle, P.; Qi, Q.; Niture, S.; Kumar, D. KCNQ1OT1: Yon onkogenic long noncoding RNA. Biomolekil 2021,

11, 1602. [CrossRef] 11. Wang, JL; Wei, X.; Wang, AG; Bai, Y.; Wu, XJ KCNQ1OT1 kontwole diferansyasyon osteogenic hBMSC pa aks miR-320a/Smad5. Lajan ewo. Rev Med. Pharmacol. Sci. 2020, 24, 2843–2854. [PubMed]

12. Chen, L.; Xiong, Y.; Yan, C.; Zhou, W.; Endo, Y.; Xue, H.; Hu, Y.; Hu, L.; Leng, X.; Liu, J.; et al. LncRNA KCNQ1OT1 akselere gerizon ka zo kase atravè modile miR-701-3p/FGFR3 aks. FASEB J. 2020, 34, 5208–5222. [CrossRef] [PubMed]

13. Chen, Y.; Zhang, Z.; Zhu, D.; Zhao, W.; Li, F. Knockdown nan KCNQ1OT1 atenue ipètrofi kadyak atravè modulasyon nan aks miR-2054/AKT3. J. Thorac. Dis. 2020, 12, 4771–4780. [CrossRef] [PubMed]

14. Childs, BG; Durik, M.; Baker, DJ; van Deursen, JM Senesans selilè nan aje ak maladi ki gen rapò ak laj: Soti nan mekanism nan terapi. Nat. Med. 2015, 21, 1424–1435. [CrossRef]

15. McHugh, D.; Gil, J. Senesans ak aje: Kòz, konsekans, ak avni terapetik. J. Cell Biol. 2018, 217, 65–77. [CrossRef]

16. Ryu, SW; Woo, JH; Kim, YH; Lee, YS; Park, JW; Bae, YS Downregulation nan pwoteyin kinaz CKII ki asosye ak senesans selilè. FEBS Lett. 2006, 580, 988–994. [CrossRef]

Mande plis:

Imèl:wallence.suen@wecistanche.com whatsapp: plis 86 15292862950