Vaksen Viris Inaktive Otojèn Matènèl ogmante iminite kont PRRSV nan kochon Pati 1

Résumé:

Iminite ki sòti nan matènèl se yon eleman enpòtan pou siviv ak siksè pitit kochon yo pou pwoteje kont patojèn k ap sikile tankou viris sendwòm repwodiksyon ak respiratwa kochon tip 2 (PRRSV-2).

Objektif etid sa a se pou mennen ankèt sou transfè iminite anti-PRRSV bay porsele ki soti nan gilts ki te resevwa viris vivan modifye (MLV) pou kont yo (tretman (TRT) 0), oswa an konbinezon ak youn nan de otojèn inaktive. vaksen (AIVs, TRT 1 plis 2). Yo te defye kochon ki soti nan gilts sa yo ak souch PRRSV-2 otojèn a nan de semèn ki gen laj epi yo te evalye repons iminitè adaptatif yo (IR) jiska 4 semèn apre inokulasyon (dpi).

IR sistemik umoral ak selilè te analize nan gilts yo pre-farrow, nan porsele, pre-inokulasyon, ak nan 2 ak 4 wpi. Tou de AIV yo pasyèlman pwoteje porsele yo ak patoloji nan poumon redwi ak ogmante pwa; TRT 1 tou bese viremi porsele, pi byen eksplike pa pwodiksyon an AIV-induit nan netralize antikò nan gilts ak transfè yo nan porsele yo. Nan porsele, pre-inokulasyon, prensipal pwodiktè sistemik IFN yo te CD21 plis selil B. Soti nan 0 jiska 4 wpi, wòl selil B sa yo te diminye epi selil T CD4 te vin pwodiktè prensipal IFN sistemik yo.

Bon viris vivan refere a viris ki pa lakòz maladi, epi yo gen yon relasyon sèten ak iminite kò imen an. Viris vivan yo ka ankouraje sistèm iminitè imen an pou pwodwi yon repons iminitè, kidonk amelyore iminite imen an. Etid yo montre ke apre kò imen an enfekte ak yon viris vivan, li pral lage kèk medyatè ak sitokin, ki ka aktive selil iminitè, ankouraje fonksyon an nan sistèm iminitè a, ak amelyore kapasite kò a pou reziste viris.

Anplis de sa, viris benign ak solid kapab tou konpetitif okipe selil yo, sa ki fè li difisil pou patojèn anvayi ak repwodui, kidonk pwoteje kò imen an kont lòt enfeksyon. Se poutèt sa, enfeksyon viris ki apwopriye ak viris vivan ka amelyore iminite moun, men enfeksyon twòp ka mennen nan maladi. Se poutèt sa, nan lavi chak jou, moun ta dwe peye atansyon sou kontwole enfeksyon an nan viris vivan ak amelyore iminite atravè yon vi ki an sante. Soti nan pwen de vi, nou bezwen amelyore iminite. Cistanche ka siyifikativman amelyore iminite. Sann vyann gen yon varyete de engredyan biyolojik aktif, tankou polisakarid, de dyondyon, ak Huangli, elatriye engredyan sa yo ka estimile divès fonksyon nan sistèm iminitè a. selil ki sanble ak selil yo, ogmante aktivite iminitè yo.

Klike sou benefis sante nan cistanche

Nan poumon yo, selil T CD8 yo te prensipal ak selil T CD4 yo se pwodiktè IFN segondè yo, ki gen ladan yon nouvo sou-ansanm nan selil T kochon CD8 −CCR7− CD4 T, selil CD4 TEMRA ki kapab diferan nan tèminal. An rezime, etid sa a demontre ke vaksen AIV matènèl ka amelyore pwoteksyon porsele anvan sevraj kont PRRSV-2; li montre enpòtans ki genyen nan transfere antikò netralize nan porsele, epi li entwodui de nouvo sous-ansanm selil iminitè nan kochon-IFN-pwodwi CD21 plis selil B ak CD8 −CCR7− CD4 selil T.

Mo kle:

vaksen matènèl; vaksen otojèn inaktive; transfè iminite; repons iminitè umoral; repons iminitè medyatè selil; selil T; PRRSV; kochon; IFN-pwodwi selil B; Selil CD4 TEMRA.

1. Entwodiksyon

Iminite ki sòti nan matènèl (MDI) nan mamifè yo se yon senfoni awe-enspire ("konpleksite amoniy"-[1]). Nan sistèm sa a, oswa senfoni, yon manman transfere pwoteksyon iminitè (tanporè ak/oswa dirab) bay pitit li swa pandan jestasyon nan plasenta a, apre nesans atravè sekresyon mamè, oswa toude [2]: moun resevwa imunoglobulin pandan gwosès epi evantyèlman nan mamè. sekresyon [3]; chen ak wonjè yo resevwa imunoglobulin pandan gwosès ak nan sekresyon mamè, ak kochon ak lòt bèt sèlman resevwa imunoglobulin atravè sekresyon mamè.

Menm jan ak lòt espès, porsele resevwa MDI sa a nan fòm imunoglobulin, selil iminitè, ak lòt molekil ki gen rapò ak iminitè [4,5]. Pandan ke yo ka resevwa imunoglobulin nan men diferan simen (= kwaze), se sèlman manman byolojik ki ka transfere selil iminitè yo bay pitit yo [5], epi kantite konsomasyon kolostrom nan kochon diminye mòtalite anpil ak amelyore pèfòmans [6]. ]. Selil iminitè sa yo gen ladan selil B [7], osi byen ke diferan sous-selil T-CD4, CD8, ak sitou reseptè T-selil (TCR) - δ selil T [8].

Lè sa a, sous-selil T sa yo ka distenge pi lwen dapre etap diferansyasyon yo ak modèl homing. Nan kochon, yo itilize chèn CD8 pou diferansye CD8 - nayif ak CD8 plis selil T CD4 ki gen antijèn oswa memwa [9-11]. Ekspresyon reseptè chemokine (CCR) 7 la fè distenksyon ant CCR7 plis homing lenfatik ak selil T periferik CCR7-tisi-homing [12]. Avèk yon analiz konbine CD8 / CCR7, nou ka distenge plizyè sous-selil T diferan: CD8 −CCR7 plis selil T CD4 nayif, CD8 plis CCR7 plis selil T CD4 memwa santral (TCM), ak CD8 plis CCR7− memwa efèktè (TEM). ) CD4 selil T; periferik tisi-homing CCR7- ak lenfatik homing CCR7 plis selil T CD8, ak CD8 −CCR7−, CD8 plis CCR7−, ak CD8 plis CCR7 plis TCR-δ selil T.
Pandan ke nou te deja rapòte ke selil TCR- δ T kochon yo posede yon modèl omaj envès konpare ak tokay TCR- yo, wòl espesifik sa yo sou-ansanm diferan poko dekri [13]. Tou de, selil iminitè yo ak antikò yo transfere bay pitit yo pou pwoteje yo kont divès kalite patojèn [4,5].

Pandan plizyè dizèn ane, patojèn ki pi dezas pou kochon yo se viris sendwòm repwodiksyon ak respiratwa kochon (PRRSV, [14,15]). Gen de kalite prensipal PRRSV—tip 1 ak 2 (PRRSV-1 ak 2); gwo divèsite yo ak kapasite imunosuppressive fè PRRSV yon maladi pwoblèm, ki mennen nan pèt ekonomik fòmidab pou endistri kochon an [16] e byen lwen tèlman, pandan y ap vaksen yo bay yon pati nan pwoteksyon kont PRRSV, yo pa te kapab konplètman kontwole maladi sa a.

Gen de kalite prensipal vaksen ki disponib pou pwoteje kont PRRSV—vaksen ki modifye viris vivan (MLV) ak vaksen ki inaktive, sitou vaksen otojèn ki inaktive (AIVs); sepandan, tou de kalite fè fas ak defi yo.

Tan ki long pou devlope vaksen MLV trè iminojenik yo vle di yo anjeneral pi etewològ ak tansyon PRRSV nan fèm, epi pandan ke AIV yo dirije kont tansyon sa yo ki gen anpil moun nan fèm, nati inaktive yo fè yo jeneralman mwens iminojenik.

Defi sa yo mennen nan yon mank de pwoteksyon espesyalman nan jèn kochon ki ka atribiye a twa faktè: premye, to segondè mitasyon PRRSV limite pwoteksyon eterològ, kidonk li diminye efikasite vaksen MLV; dezyèmman, kapasite iminosuppressive li limite vaksen ki pi fèb (egzanp, AIVs) ak reta li nan endiksyon an nan yon repons iminitè pwoteksyon kite jèn kochon espesyalman sansib [17]; ak twazyèm, konpreyansyon nou sou repons iminitè a PRRSV, espesyalman nan porsele, limite. Loving and Lunney te pwodwi yon revizyon bèl konsènan konpreyansyon jeneral la nan repons iminitè a PRRSV [18,19].

Sitou baze sou tan pwolonje pou etabli iminite vaksen an pwovoke pou PRRSV, pwodiktè kochon yo souvan vaksinen gilts ak simen pou pèmèt transfè iminite a nan porsele. Rechèch sou vaksinasyon matènèl lè l sèvi avèk yon MLV komèsyal kont PRRSV-1 pa t anpeche vaksinasyon 2 oswa 3-semèn porsele epi li pasyèlman pwoteje porsele kont defi eterològ [20]. Estrateji vaksinasyon sa a te pwovoke tou PRRSV-1-IgG, IgA, ak entèferon (IFN) selil ki sekrete nan kolostrom ak lèt ​​pousye vaksen yo. Selil sa yo ki pwodui IFN yo trè enpòtan nan repons anti-viral, ki gen ladan nan PRRSV [19,21].
Vaksen sa a tou pwovoke serik anti-PRRSV IgG, ki te detekte apre sis semèn nan laj pou porsele ki pa vaksen epi ki te rete estab nan porsele vaksen anvan defi a; poutan, selil ki sekrete IFN yo pa t ka distenge ak nivo background nan porsele pre-sevre [22]. Pandan ke itilizasyon MLV yo se yon estanda endistri, yon rejim vaksinasyon konbine nan yon vaksen premye MLV ak vaksen ranfòsman AIV sanble pwomèt pou simonte chak dezavantaj yo nan sèvi ak MLVs ak AIVs poukont yo.

Se poutèt sa, objektif prensipal etid sa a se te detèmine non sèlman si, men tou, ki jan vaksen matènèl ak de AIV diferan (tretman (TRT) 1 plis 2) ka ranfòse yon vaksen MLV estanda endistri pou kont li (TRT 0 ), pou pi byen pwoteje pitit yo nan defi PRRSV2 bonè. Pou sa ka fèt, nou te etidye repons iminitè (CMI) ki te pwovoke pa vaksen an nan gilts sa yo epi nou te defye premye sevre ki soti nan gilts nan chak gwoup sa yo nan 2 semèn. Yo te swiv repons iminitè sistemik ak lokal nan porsele sa yo pou 2-4 semèn.

Nou montre ke vaksinasyon ranfòsman AIV ta ka amelyore pwoteksyon porsele kont defi PRRSV nan 2 semèn ki gen laj epi nou menm tou nou idantifye mekanis iminitè ki kache epi karakterize repons umoral ak CMI anti-PRRSV nan jèn kochon sa yo. Anplis de sa, nou te detekte de nouvo kalite selil nan kochon: (1) CD8 −CCR7− CD4 selil T ki fòtman kontribye nan pwodiksyon IFN nan lavaj bronchoalveolar (BAL) - potansyèl selil CD4 TEMRA, ak (2) yon gwo sous nan repons anti-PRRSV espesyalman nan porsele yo-IFN-pwodwi selil B yo.

2. Materyèl ak Metòd

2.1. Etid konsepsyon, bèt, ak pwosesis echantiyon

Objektif etid sa a se te evalye efè diferan seri vaksen PRRSV2 matènèl sou iminite pwoteksyon nan porsele sevre kont PRRSV-2. Anvan etid la, yon souch PRRSV-2 k ap sikile (restriction fragment length polymorphism (RFLP), 1-7-4) ki soti nan yon konpayi vyann kochon Kawolin di Nò te izole ak pwopaje pa de konpayi syans byolojik endepandan; yo pwodui de vaksen otojèn diferan. Tou de vaksen yo te genyen diferan konpozan pwòp men yo te genyen menm souch inaktive 1-7-4 PRRSV-2 la. Konsepsyon etid sa a montre nan Figi 1.

Tou de vaksen yo te administre nan miskilè nan yon seri de kat dòz anvan akouchman: pa orè vaksinasyon antrepriz konpayi kochon North Carolina, 46 PRRSV-2 gilts negatif nan yon fèm simen komèsyal yo te pran vaksen ak vaksen Ingelvac PRRS MLV (Boehringer Ingelheim Vetmedica). GmbH, Almay) nèf semèn anvan elvaj. Pou kenbe tèminoloji ki konsistan pandan tout etid sa a, yo pral refere kochon fi ki gen matirite seksyèl ki enskri yo (isit la defini kòm gilts) yo pral refere yo kòm gilts menm apre yo te elve ak akouche (souvan refere yo kòm simen). Kat semèn anvan elvaj, yo te ranmase echantiyon san nan tout gilts pou serom epi answit gilts yo te asiyen nan twa tretman: TRT 0 (vaksen MLV sèlman); TRT 1 (vaksen MLV plis 4 dòz vaksen otojèn (1-7-4) inaktive 1); oswa TRT 2 (vaksen MLV plis 4 dòz vaksen otojèn (1-7-4) inaktive 2).

Gilts that did not breed were dropped from the study. 3 weeks before farrowing, blood was collected from pregnant gilts for the isolation of serum and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). At this point, five gilts remained in both TRT 0 and TRT 2; nine gilts remained in TRT 1. Within these gilts, we selected three gilts per group to provide the piglets for the challenge study. The selected gilts had an adequate litter size (>7) ak pi wo serik fluorescent focus netralizasyon (FFN) tit (kritè iminitè prensipal) ak pi wo CD4 T-selil IFN-repons (kritè iminitè segondè) kont souch defi AIV nan gwoup yo. Pou TRT 1 plis 2, tit FFN sa yo te varye ant 1:4 ak 1:128. Piske TRT {{10}} pa t gen okenn tit kont souch AIV la, nou te chwazi gilts ki gen pi gwo tit anti-MLV yo; tit sa yo te varye ant 1:16 ak 1:32. Repons IFN nan tout gilts chwazi yo te varye ant 0.09-0.21 pousan nan total selil T CD4 yo.

Chak nan gilts sa yo te bay kat porsele pou etid defi a. Nan laj 2 semèn (= 0 semèn apre enfeksyon, wpi), yo te chwazi kat porsele ki gen plis pwa fatra mwayèn pou etid defi a epi yo te transpòte yo nan lokal lojman Nivo 2 Biosekirite nan North Carolina State University ( NCSU) Laboratory Animal Resources (LAR) (Raleigh, Kawolin di Nò). Isit la, yo te plase owaza nan youn nan sis plim nan menm chanm nan; de kochon pou chak tretman yo te loje nan chak plim (youn pou chak dore). An rezime, te gen yon total de 36 porsele nan etid la ak 12 porsele pou chak gwoup tretman.

During the study, four piglets died before the end of the study: three piglets from one gilt (TRT 0) died within 30 h of arrival at LAR and were dropped from the study. Additionally, one pig (TRT 2) was euthanized between weeks three and four of the study due to high fever (>106◦ F) ak mank de repons a eksitasyon fizik. Kochon sa a te enkli nan tout analiz jiska semèn 3 epi yo te evalye poumon li yo pou patoloji. Pa gen okenn analiz sikometri koule (FCM) ki te fèt pou bèt sa a nan nekropsi.

Yon jou apre sevraj ak rive nan NCSU, tout porsele yo te vaksinen nan nasal ak 1 × 105.5 PRRSV-2 patikil viral (souch otojèn 1-7-4) nan 1 ml 1X fosfat saline tanpon (PBS, Corning, Corning, NY, USA) (500 µL/nen), kenbe yo nan yon pozisyon kouche pou 30 segonn epi retounen nan plim yo. Mwatye bèt yo te sakrifye nan 2 dpi ak bèt ki rete yo te sakrifye nan 4 dpi. Nan necropsy, BAL, poumon, ak gangliyon lenfatik tracheobronchial (TrBr LNs) yo te kolekte epi trete jan yo dekri deja [13].

Echantiyon te fèt anvan inokulasyon (0 wpi) epi apre sa chak semèn, jan yo montre nan Figi 1. Yo te kolekte serom nan tib Serum Separator Tubes (SST) (Becton Dickinson (BD) Biosciences, San Jose, CA, USA), epi san pou izòlman PBMC yo te kolekte nan tib eparin (BD Biosciences). Lojman bèt te pa Enstiti Nasyonal Sante gid pou bèt rechèch. Porsele yo te gen aksè san limit nan dlo, yo te manje yon rejim sevraj tranzisyonèl, answit yon rejim regilye de fwa pa jou, epi yo te kenbe nan 83 ◦F ak yon sik limyè/fè nwa 12-èdtan. Pwosedi eksperimantal yo te apwouve pa NC State University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ID# 17-166A (29 Novanm 2017).

2.2. Pwopagasyon viris, titrasyon, ak evalyasyon

Izola viral PRRSV-2 (souch, 1-7-4) te pwopaje sou macrophages alveolar pòsin negatif PRRSV (PAMs) nan RPMI-1640, 1× ak L-glutamin (Corning, Corning, NY). , USA) konplete ak 10 pousan serom fetal bovine (FBS) (VWR, Radnor, PA, USA) ak 1X antibyotik-antimycotic (Corning) (ki refere kòm RPMI-complete) pou apeprè 30 èdtan nan T-75 flakon. (Sarstedt, Nümbrecht, Almay) jiskaske yo te obsève yon efè cytopathic. Flakon yo te friz-degele yon sèl fwa epi yo te file supernatant a nan 2200 g nan 4 ◦C pou 10 min. Pou konsantre viris la, yo te transfere supernatant la nan tib santrifij Nalgene 36 mL (Thermo Fisher Scientific, Rochester, NY, USA) epi yo te vire nan yon Sorvall 100S Ultracentrifuge (Sorvall, Thermo Fisher Scientific), Newtown, CT, USA) nan 73. ,000 g nan 4 ◦C pou 2 h.

Sipènatant la te jete, epi granules la te resuspende nan medya (RPMI konplè) epi estoke nan aliquot 100 µL nan -80 ◦C. Titi kilti enfektye dòz 50 (TCID50) nan solisyon stock viral yo te detèmine lè l sèvi avèk PAMs jan yo dekri deja (metòd Spearman-Karber TCID50 dapre manyèl OIE pou tès dyagnostik [Òganizasyon Mondyal pou Sante Animal, ansyen Biwo Entènasyonal Epizooties (OIE). ), "Chapit 2.8.7 Sendwòm Repwodiksyon Porsin ak Respiratwa", Terr. Man., No Me 2015, 2015].

2.3. Viremi

Serom izole te analize pa laboratwa dyagnostik konpayi kochon Kawolin di Nò a lè l sèvi avèk Reverse-transcription quantitative polymerase chain reaction (RT qPCR) ak yon twous 5X MagMAX patojèn RNA/DNA (Thermo Fisher Scientific) ak VetMAX PRRSV qPCR kit (Thermo Fisher Scientific). Serom dore ki te pran vaksen an te PRRSV-negatif (qPCR) nan farrowing jan laboratwa dyagnostik veterinè Iowa State University (ISU VDL, Ames, IA, USA) detèmine. Valè ∆Ct yo te kalkile lè w retire valè Ct yon echantiyon nan valè Ct konsidere kòm PRRSV-negatif (Ctneg=37) pou PRRSV: ∆Ct=37 − Ctx.

2.4. Validasyon antikò netralize ak detèminasyon echantiyon pozitif

Echantiyon serom ki soti nan gilts ak porsele yo te anbake nan laboratwa rechèch ak dyagnostik sou bèt nan South Dakota State University (Brookings, SD) ki te konplete PRRSV-2 detèminasyon antikò netralize (NA) lè l sèvi avèk FFN ak souch inokulasyon 1-7-4 la. Yon rezilta pozitif se pi gwo dilution serom ak yon rediksyon 90 pousan oswa pi wo nan kantite inite fluoresan ki fòme konsantre [23].

2.5. Pwosedi Necropsy, Nòt, ak Izolasyon selil tisi yo

Nan nekropsi (2 oswa 4 wpi), bèt yo te sakrifye lè l sèvi avèk piki letal nan venn Euthasol (Covetrus, MW, 390 mg / mL pentobarbital, 50 mg fenitoin / mL). Lè sa a, yo te rekòlte poumon yo, timis ak TrBr LN yo.

Pou poumon yo, yo te pran foto dorsal ak ventral; poumon yo te lave ak 1 × PBS pou kolekte lavaj alveolè bwonch (BAL) epi yo te pran senk echantiyon total pou istoloji: youn chak soti nan lòb kodal dwat ak gòch, lòb mwayen dwat ak gòch ak Lè sa a, youn nan lòb la akseswar. Echantiyon istoloji yo te fikse nan Fòmaldeyid / Zn fiksatif (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA) pou 24 èdtan, transfere nan 70 pousan etanòl, ak tache ak ematoksilin ak eosin (H & E). Tache glisad (istoloji) ak foto nan poumon (patoloji brit) yo te anbake nan ISU VDL ak nòt pa yon patolojis dyagnostik veterinè ki te avèg nan tretman ak dat nekropsi; blesi nan poumon ak nòt nemoni entèrstisyèl yo te fèt jan sa te dekri deja [24].

Yo te evalye opinyon dorsal ak ventral foto nan poumon pou pousantaj nan poumon ki afekte ak nemoni. Espesyalman, yo te estime pousantaj nemoni vizyèlman pou chak lòb nan poumon, epi yo te kalkile pousantaj total pou tout poumon an dapre pwopòsyon pondere chak lòb parapò ak volim total nan poumon. Chak nan kat lòb kranyoventral yo reprezante 10 pousan, lòb akseswar yo 5 pousan, ak chak nan de lob kodal yo reprezante 27.5 pousan nan poumon total.

Seksyon istopatoloji nan poumon yo te egzamine avèg pou blesi mikwoskopik epi yo te bay chak lòb yon nòt estime ki baze sou gravite nemoni entèrstisyèl jan sa a: 0=pa gen blesi mikwoskopik; 1=nemoni entèstisyèl minim; 2=ti nemoni entèstisyèl; 3=nemoni entèstisyèl modere; 4=abondan nemoni entèstisyèl; 5=nemoni entèstisyal ki grav, miltifokal; 6=nemoni entèstisyèl grav, difize. Pou tout tisi yo kolekte (poumon, timis, ak TrBr LNs), yo te koupe tisi a an ti moso epi yo te peze yo nan filè drenaj wonn asye pur (Grainger, Lake Forest, IL, USA) nan tib 50 ml ak PBS glas frèt pou elite. sispansyon sèl selil. Bouch fib yo te filtre ak filtè 40 µm (BD Biosciences, San Jose, CA, USA).

2.6. Izolasyon periferik san, eksitasyon viral, ak tach/analiz IFN-FCM

Yo te fè izòlman PBMC lè l sèvi avèk santrifijasyon dansite Ficoll-Paque (GE Healthcare, Uppsala, Syèd) ak tib SepMate-50 ml (STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Kanada) dapre pwotokòl manifakti a. PBMC ak sèl selil sispansyon konte selil yo te konplete sou yon sistèm konte selil CASY (Schärfe System, kounye a: Roche Innovatis AG, Bielefeld, Almay). Pou tès pwodiksyon IFN a, yo te plake 5 × 105 PBMC ak lenfosit ki soti nan poumon, ak TrBr LN yo an uit replike nan yon plak ki byen wonn (Corning) nan 100 µl RPMI-konplè epi repoze lannwit lan nan yon enkibatè a 37◦ C ak 5 pousan CO2. Nan denmen maten, 100 µL RPMI-complete ki gen souch PRRSV 1-7-4 (Multiplisite Enfeksyon, MOI=0.1) te ajoute nan chak pi; plak yo te retounen nan enkibatè a pou 24 èdtan nan eksitasyon viral.

Pou dènye 4 èdtan kilti yo, monensin (5 µg/mL, Alfa Aesar, Haverhill, MA, USA) te ajoute pou bloke IFN- lage nan selil yo. Lè yo te fini enkubasyon 24 èdtan yo, yo te mete replika yo ansanm ak tache jan sa endike nan Tablo 1; an mwayèn 276,756 sèl lenfosit vivan (SLLs) te anrejistre sou yon Cytoflex lè l sèvi avèk lojisyèl CytExpert la (Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Analiz done yo te fèt ak FlowJo vèsyon 10.6.1 (FLOWJO LLC). Yo montre yerachi gating pou analiz repons IFN a nan Figi 4 ak 5 pou PBMC ak nan Figi Siplemantè S1 ak Figi 7 pou BAL, tisi poumon, ak TrBr LNs.

2.7. Analiz estatistik

Analiz estatistik yo te fè lè l sèvi avèk Graphpad Prism 8 (Graphpad Software, San Diego, CA, USA). Done ak yon seri done konplè yo te analize pa swa de-fason (pandan etid la) oswa yon sèl-fason (nan nekropsi) ANOVA. Done ak pwen done ki manke yo (sitou akòz necropsy nan 50 pousan nan kochon yo nan 2 dpi) yo te analize pa yon modèl efè melanje (Restricted maksimòm chans, REML). Tout konparezon miltip yo te fèt ak tès konparezon miltip Dunnett la. Yo te fè ilistrasyon done yo lè l sèvi avèk trase violon ki montre distribisyon an, pwen endividyèl yo, medyàn (jan sa aplikab, liy nwa tirè), ak entèval 25yèm/75yèm (tankou yon liy ki gen koulè ki aplikab). Analiz korelasyon ant nivo nAb gilt ak piglet yo te fèt lè l sèvi avèk koyefisyan korelasyon Pearson ak yon entèval konfyans de 95 pousan.

3. Rezilta yo

3.1. Konsepsyon etid ak efikasite vaksen an—Siy klinik, viremi, pran pwa, ak patoloji nan poumon

Etid la te fèt jan sa montre nan Figi 1. Lè yo pran vaksinasyon PRRSV, kochon yo te montre sentòm PRRSV modere kòmanse nan 3-4 jou apre enfeksyon—lafyèv [sitou nan 1 wpi, dns], letaji, konsomasyon manje redwi, touse/etènye twò grav. Pa gen okenn diferans enpòtan yo te obsève pou sentòm sa yo epi yo pèsiste nan diferan degre jiskaske nekropsi. Figi 2 montre viremi, pwogrè pwa kò chak semèn ak nòt brit ak istopatoloji.

Jan yo montre nan Figi 2A, tout kochon yo te PRRSV-2 negatif nan sevraj ak vaksinasyon nan nen ak PRRSV-2 pwovoke yon viremi ki te pik nan 2 wpi. Pandan ke pa te gen okenn diferans nan viremi ant TRT 0 ak TRT 2, TRT 1 te gen siyifikativman pi ba viremi nan de premye semèn yo pase gwoup kontwòl TRT 0. Pwogrè pwa kochon yo nan tout gwoup yo te sanble anpil pou twa premye semèn yo; ankò, nan fen etid la—epi konpare ak TRT 0—TRT 2 ak TRT 1 te gen anpil ogmantasyon pwa chak semèn—Figi 2B. Pi miyò, pandan ke patoloji nan poumon jeneralman rezoud nan enfeksyon PRRSV ak Se poutèt sa te menm jan an ant gwoup nan 4 dpi (dns), tou de vaksen AIV matènèl, se konsa TRT 1 plis 2, siyifikativman redwi patoloji nan poumon nan 2 wpi: tou de diminye nivo pousantaj yo. nan blesi makroskopik ak / oswa nemoni entèrstisyèl (Figi 2C, D). Prévalence de blesi nan poumon makwoskopik nan poumon ki soti nan TRT 0 te ant 20-70 pousan; nan kontras, pifò kochon nan TRT 1 plis 2 te gen yon prévalence blesi nan poumon pi ba pase 20 pousan -Figi 2C. Menm jan an tou, pandan ke medyàn nòt istopatoloji pou nemoni entèrstisyèl nan poumon nan TRT 0 kochon te twa, li te 1.8 pou TRT 1 ak 1.2 pou TRT 2, respektivman. Konpare ak TRT 0, sa montre yon tandans nan direksyon pou siyifikasyon (p=0.07) ak yon diminisyon enpòtan nan istopatoloji nan poumon nan kochon ki soti nan gilts AIV-vaksen-Figi 2D. Done sa yo montre ke vaksinasyon AIV ka siyifikativman redwi viremi ak patoloji nan poumon, anplis, yo montre tou ke vaksen AIV matènèl kont PRRSV-2 ka ranfòse iminite 2-porsele ki gen yon semèn.

3.2. Endiksyon nan Antikò netralize matènèl ak transfè yo nan porsele

Endiksyon an nan repons iminitè umoral nan gilts ak pitit yo te analize pa detèmine NA FFN tit (Figi 3).

Vaksinasyon nan tout gwoup ak MLV pwovoke NA tit nan gilts ant kat ak 64 ki pa gen okenn diferans enpòtan ant twa gwoup yo (dns). Kontrèman, pandan vaksen MLV pou kont li (TRT 0) pa t gen ladann NA kont souch eterològ 1-7-4, tou de vaksen ranfòsman AIV te pwovoke tit NA ki rive jiska 1:16 (pou TRT 2) e menm 1. :128 (pou TRT 1)—Figi 3A.

Yo te transfere NA nan serik sa yo nan matènèl nan porsele (Figi 3B): Pandan ke porsele TRT 0 pa te montre okenn tit NA nan 0 wpi, porsele TRT 1 ak TRT 2 te posede NA serik pou souch 1-7-4 anvan. enfeksyon ki dirèkteman gen rapò ak nivo matènèl NA (Figi 3C, r=0.886, p <0.0001). Tit NA sa yo diminye pandan de premye semèn yo, anvan yo estabilize pa 4 wpi. Men, konpare ak TRT 0, kochon ki soti nan gilts ki te pran vaksen kont AIV (TRT 1 plis 2) te gen tit NA nan serik siyifikativman pi wo deja anvan defi a epi ogmante tit sa yo te dire jiska 2-3 wpi, kidonk jiska 4-5 semèn ki gen laj—Figi. 3B.

For more information:1950477648nn@gmail.com